DISEO DE BIOREACTORES TUBULARES PARA LA ABSORCIN Y ADSORCIN DE COMPUESTOS BIOACTIVOS DENTRO DE LECHOS EMPACADOS.

AMPLIACIN TERICO PRCTICA

Reinhardt Acua Torres
Introduccin
Existe un rea en el diseo de bioreactores que est en el limbo entre los reactores qumicos y los biolgicos. Se trata del diseo de bioreactores o reactores (pueden ser ambos) para la absorcin (separacin) y adsorcin (atraccin) de compuestos bioactivos (biocompuestos) obtenidos de extractos vegetales crudos. El tipo de bioreactor puede ser: 1. Como un hbrido entre un reactor tubular tipo flujo pistn (RFP) y una columna cromatogrfica de absorcin. 2. Como un hbrido entre un reactor tubular tipo lecho empacado (RLEP) y una columna cromatogrfica de afinidad. El proceso de separacin puede ser: 1. Por absorcin qumica; utilizando el mtodo de tamizado molecular por gradiente de elucin, en una columna cromatogrfica de absorcin. 2. Por adsorcin qumica; utilizando el mtodo de afinidad molecular o inica, en una columna cromatogrfica de afinidad. El propsito de utilizacin del sistema es separar los diferentes componentes activos de una mezcla de extractos crudos de origen vegetal en sus componentes individuales o metabolitos (secundarios) para su posterior purificacin y/o procesamiento. El cultivo biolgico es fitoplancton fotosinttico que son el conjunto de los microorganismos acuticos fotosintticos (que tienen capacidad fotosinttica), auttrofos del plancton y viven dispersos en el agua de mar, principalmente, o en el agua dulce.

El Cultivo
El nombre fitoplancton proviene de los trminos griegos, (phyton, "planta") y (plnktos, "vagabundo" o "el que va dando tumbos"). El fitoplancton obtiene energa a travs del proceso de la fotosntesis; por ser microorganismos acuticos, deben realizar su ciclo de vida en la zona donde la luz pueda penetrar la capa superficial del cuerpo de agua (un ocano , mar , lago) denominada zona euftica. El fitoplancton constituye cerca de la mitad de toda la biomasa con actividad fotosinttica de la Tierra; por tanto,
1- Fitoplancton

es responsable de gran parte de la produccin del oxgeno en la atmsfera de la Tierra ; esa produccin es igual a la mitad del importe total producido por todas las plantas vidas. Por eso, los ocanos son la base para la fijacin de la energa acumulada en los compuestos de carbono ( produccin primaria ). La algacultura es una forma de acuacultura en la que cultivan diferentes especies de algas. La mayora de las algas que se cultivan entran en la categora de microalgas (fitoplancton). Las macroalgas, conocidas comnmente como algas, tambin tienen usos industriales y comerciales; pero debido a su tamao y a los requisitos especficos del entorno que necesitan para crecer, que no se prestan fcilmente para cultivos. El cultivo de microalgas tiene numerosos usos entre los que destacan la produccin de: alimentos, fertilizantes, bioplsticos, tintes y colorantes, productos farmacuticos, combustible de algas y tambin pueden ser utilizadas como un medio de control de la contaminacin. El monocultivo es la opcin primaria por varias razones: No hay competencia entre las diferentes especies; La velocidad crecimiento es mayor al no haber competencia; La tasa de crecimiento es mayor al no haber competencia; Los requerimientos nutricionales son menores al no haber competencia; Se puede optimizar el medio de cultivo; Se pueden optimizar las condiciones de operacin del bioproceso; Se reduce el tiempo de operacin. El proceso de escalamiento del cultivo es el siguiente: Para obtener un cultivo puro se debe seguir el mtodo de dilucin en serie: el cultivador debe obtener de una muestra salvaje o una muestra de laboratorio, la especie deseada; diluir con agua filtrada; micropropagacin (introducir pequeas alcuotas en un gran nmero de pequeos contenedores de cultivo); seleccionar mediante un examen microscpico de cada cultivo de origen (contenedor de cultivo), el ms adecuado a los propsitos del cultivo en el bioreactor; despus de un perodo adecuado en una
3- Cepa de Chorella vulgaris (monocultivo) 2- Macrocultivo de microalgas (algacultura)

4- Cultivo de micro algas: distintas escalas de produccin

mesa de luz, el cultivador debe utilizar de nuevo el microscopio para identificar los contenedores ms adecuados para iniciar el inoculo; una vez seleccionado e iniciado el inoculo, se procede a escalar el cultivo pasando desde la pequea escala, en frascos de cultivo; hasta la gran escala, en foto-bioreactores del tipo columna de burbujeo; los cultivos contenidos en las columnas de burbujeo sirven de pre-inoculo a los cultivos industriales. Las condiciones de cultivo son las siguientes: Crecimiento: agua, dixido de carbono, minerales, luz y temperatura son los principales factores que determinan el crecimiento ptimo del cultivo. Recordemos cada especie de alga requiere de condiciones diferentes tienen diferentes requisitos Temperatura: El agua debe estar en un rango de temperatura que apoyar las especies de algas que se cultivan especfica. Luz: En la mayora de los sistemas de cultivo de algas, la luz slo penetra en el top 3 a 4 pulgadas (76-100 mm) de agua. Como las algas crecen y se multiplican, la cultura se vuelve tan densa que bloquea la luz llegue a ms en el agua. luz directa del sol es demasiado fuerte para la mayora de las algas, que necesita slo alrededor de un / 10 la cantidad de luz que reciben de la luz solar directa. Mi:

El Hibrido Tubular Tipo Flujo Pistn (Tamizado) de Componentes Bioactivos

Para

la

Absorcin

Molecular

Recordemos que, el flujo de pistn es un modelo simple del perfil de velocidades de un fluido que fluye dentro de una tubera . En el flujo de pistn, la velocidad del fluido se supone que es constante a travs de cualquier seccin transversal del tubo perpendicular al eje de la tubera. El modelo de flujo de pistn 5- Las lneas de corriente asociadas con asume que no hay capa lmite adyacente a la pared interna de la el flujo laminar se tubera. Para el diseo de reactores qumicos de tipo flujo pistn se asemejan a una baraja de cartas. Este es el deben hacer las siguientes consideraciones: esencialmente no hay perfil de flujo de un mezcla; se asume que los "tapones" de fluido pasan a travs del lquido que fluye dentro reactor en direccin axial; la solucin para calcular las ecuaciones de un tubo en rgimen laminar. diferenciales depende siempre de las condiciones de contorno conocidas, eso da lugar a que deban ser integradas para encontrar la conversin del reactor y la temperatura de salida; otras simplificaciones utilizadas

son: flujo axial perfecto y una mezcla homognea en la estructura de la cama (lecho). Modelado del Flujo Pistn en Discontnuo El lquido que fluye y pasa a travs de un PFR puede ser modelado como una serie de "tapones" o lminas cilndricas infinitamente delgadas; cada una, con una composicin uniforme, que viajan en la direccin axial del reactor; no obstante, cada tapn tiene una composicin diferente a la de los anteriores y a los que le siguen. La suposicin clave es que a medida que fluyen a travs del reactor, cada tapn es perfectamente mezclado en la direccin radial; pero no, en la 6- Diagrama esquemtico de un reactor de flujo en pistn (PFR). El tapn (color rojo) fluye a travs del direccin axial (hacia adelante o tubo, a velocidad constante, en direccin axial. El hacia atrs). De esta forma, cada tapn tiene una composicin y concentracin mdulo de volumen diferencial se homognea. plantea como una entidad separada con una eficacia infinitesimal de reactor discontinuo cuyo lmite tiende al volumen cero. Esto conlleva a que el tiempo de residencia () de cada tapn este en funcin de su posicin en el reactor; en un PFR ideal, la distribucin del tiempo de residencia sea una funcin delta de Dirac, con un valor igual a .

Calculo de la Concentracin del Componente A (C(A))

Balance General de Materia (Masa): [Acumulacin] = [Entradas] - [Salidas] + [Generacin] - [Consumo] Balance Individual Materia para el Componente i:

Fi

(x)

- Fi

(x+dx)

+ At dx i r = 0 . (1)
Donde C i (x) es la concentracin molar de la especie i en la posicin x, At es el rea de la seccin transversal del reactor tubular, dx el espesor diferencial del tapn de lquido y i es el coeficiente estequiomtrico. Cada balance debe realizarse para un diferencial de volumen del elemento lquido o tapn, para cada una de las especies i de la longitud axial dx entre x y x + dx. La velocidad de reaccin, r , puede ser calculado utilizando la dependencia de la temperatura de Arrhenius . Cuando las siguientes relaciones: para velocidad lineal (u)

y , para el caudal (F i), se aplican a la ecuacin 1; el balance de masa de i se convierte en: (2) Cuando los trminos como se cancelan y el lmite dx 0 se aplica a la ecuacin 2, el balance de masa de la especie i se convierte en

3. ,[1] En general, cuando la temperatura aumenta tambin lo hace la velocidad a la que se produce la reaccin. El tiempo de residencia, , es la cantidad promedio de tiempo que una discreta cantidad de reactivo pasa en el interior del tanque. Suponga que: isotrmico condiciones, o la temperatura constante (k es constante) nica e irreversible de reaccin ( A = -1) -Para la primera reaccin (r = kC A ) Despus de la integracin de la ecuacin 3 con los supuestos anteriores, la solucin de C A (L) obtenemos una ecuacin explcita para la salida de la concentracin de las especies A , 4. , donde C Ao es la concentracin de entrada de las especies A .

Modelado de la Columna Cromatogrfica de Absorcin en Discontinuo La cromatografa de exclusin por tamao es una cromatografa que separa las molculas en solucin por su tamao, no por su peso molecular; generalmente se aplica a grandes molculas o complejos macromoleculares como protenas y polmeros industriales; pero variando las condiciones del substrato o gel, puede aplicarse a diversos compuestos orgnicos; siempre y cuando, la mezcla permita el fraccionamiento. Cuando se utiliza una solucin acuosa para el transporte de la muestra a travs de la columna, la tcnica es conocida como cromatografa de filtracin en gel; para distinguirla de la cromatografa de permeacin en gel que se utiliza cuando un disolvente orgnico se utiliza como fase mvil. As entonces, la principal aplicacin de la cromatografa de filtracin en gel es el fraccionamiento de las protenas y otros polmeros solubles en agua; mientras que, la cromatografa de permeacin en gel, se utiliza para analizar la distribucin del peso molecular de polmeros orgnicos solubles. En el caso del diseo de absorcin, el bioreactor se comporta como una columna cromatogrfica de absorcin en donde: El flujo es descendente,

 El fraccionamiento se basa en la difusin diferencial de las molculas en los poros del gel, Las molculas eluyen de la columna en orden decreciente de peso molecular, Las molculas tambin eluirn de la columna segn su radio de Stokes (aproximacin de la esfericidad de la molcula). Para determinar el peso molecular en protenas se utiliza el ndice de Kovacks que es la razn existente entre la diferencia entre el volumen de elucin de la protena y el volumen de exclusin o volumen intersticial de la columna; y el volumen de poro de la matriz: Kd = Ve Vz / Vp Donde Kd: ndice de Kovacks, Ve: volumen de elucin de la protena problema, Vz: volumen intersticial, Vp: volumen del poro. Obviamente, los biocomponentes activos, no siempre sern protenas, pero la formula es valida para cualquier componente, sea protena o no. El volumen intersticial lo determina la matriz formada por la molcula de alto peso molecular utilizada para crear el lecho slido que inmovilizar a los componentes activos. Existen en el mercado compuestos cuyas matrices desarrollan volmenes intersticiales predeterminados; por ejemplo: Sephadex es un gel que forma perlas de un polmero polisacrido con diferentes tamaos de poro: G-10, G-25, G-50, G-75, G-100 y G-200. La notacin indica el tamao de poro; por ejemplo, la primera (G-10) se emplea para desalar muestras porque, el dimetro de sus poros solo permite el paso de molculas pequeas (1.000 kDa); en tanto que la ltima permite la separacin de molculas de masa molecular entre 500 y 5 kDa. Este tipo de matriz est disponible en dos formas: coarse y fine. La primera permite mayor flujo pero, la resolucin obtenida es menor. Con todo, la resolucin posible con este tipo de matriz es pobre. Para lograr mayor resolucin se utilizan matrices con propiedades de flujo superiores y/o con resistencia a la presin. sto se logra creando matrices de composicin mixta y mejorando la estructura de las perlas. Ejemplos de estos productos son: Sepharose (polisacrido),Sephacryl (polmero de polisacrido y bisacrilamida), Superose y Superdex (polisacridos). Como se indic, el volumen de poro es la diferencia entre el volumen total y el volumen de exclusin; para calcular el volumen total se aade a la muestra una molcula de bajo peso molecular; por ejemplo, cromato potsico (194,2 Da). El ndice de Kovacks (Kd) obtenido para el biocompuesto determinado se debe incluir en una recta de regresin, calculada a partir de protenas (biocompuestos) patrones, de peso molecular conocido, para obtener la curva (grfica) Kd versus Log masa molecular. La resolucin en una columna cromatogrfica es crtica ya que, una gran resolucin soporta un mayor nmero de platos tericos por metro de elevacin. Un plato terico es el volumen requerido por una molcula para establecer un equilibrio entre ella, la matriz y la fase mvil en el sistema. Actualmente, las columnas con mayor nmero de platos tericos son las de Superdex HR que pueden llegar a 30 000 40 000 platos tericos por metro lineal. Es muy importante dimensionarcorrectamente la columna cromatogrfica ya que, a mayor longitud, mayor nmero de platos tericos y por lo tanto, mayor resolucin; pero tambin, la muestra (el substrato crudo) puede quedar muy diluido, lo que disminuye la resolucin. Tome tambin en consideracin que, si la matriz puede soportar grandes presiones, los flujos obtenidos sern mayores, lo que aumenta la resolucin. En estos casos, se puede implementar una columna de elucin al vaco para

aumentar la resolucin y utilizar una columna de gran altura, llegando a un compromiso ptimo de productividad. En el caso del diseo de adsorcin, el bioreactor se comporta como una columna cromatogrfica de afinidad en donde: Qumicamente el bioreactor se comporta como un reactor enzimtico, La enzima equivale al biocompuesto o componente activo que se desea extraer. Para determinar la ecuacin de diseo, se debe encontrar: La cantidad de enzima (biocompuesto), El volumen de reactor necesario y El tiempo requerido para la formacin (adsorcin) de la cantidad de producto requerido. En un proceso enzimtico la determinacin cintica de la velocidad se realiza a partir del valor de Km y Vmax de la enzima (biocompuesto) inmovilizada. Dado que sta vara segn el proceso que se vaya a desarrollar; para efectos prcticos y de modelado se asume que la cintica es de primer orden. ; = concentracin de producto, asumiendo que la estequiometra de la reaccin es 1:1. La ecuacin de diseo y por lo tanto el tiempo de residencia (t) estn en funcin de la concentracin relativa del substrato limitante de la velocidad (S).

= ecuacin de diseo un bioreactor enzimtico discontnuo. En un proceso de absorcin la determinacin se realizar de acuerdo al gradiente molecular de los biocompuestos a separar y al coeficiente de afinidad de cada componente activo con la matriz del lecho empacado o columna cromatogrfica. Diseo en Flujo Pistn: (semicontnuo) Alternativamente, se puede disear un bioreactor tubular que funcione en flujo pistn: Aplicando una presin de vaco pequea (menor a 10psi de vaco), Alimentando un flujo fresco de substrato crudo, Buscando la solucin de compromiso ptima entre la altura de la columna (nmero de platos tericos) y la resolucin de la matriz de adsorcin. En este caso tambin debemos asumir que la cintica de la reaccin es de orden uno; con

lo que la ecuacin de la velocidad sera: Donde: V = volumen del reactor; F = caudal o velocidad de flujo. Para una resolucin ms prctica desde el punto de vista ingenierl: = tiempo de residencia = V/F; = eficiencia volumtrica = Vl /Vt; = Vl /F = Vt /F con lo que la ecuacin cintica de la velocidad se transforma en:

= ecuacin cintica de diseo de un bioreactor enzimtico de

flujo pistn. Y: = ecuacin de diseo de un bioreactor enzimtico de flujo pistn. Diseo en Quimioestto: (contnuo) Un sistema contnuo o quimioestto puede disearse si se toman en cuenta las siguientes consideraciones: Aplicar una presin de vaco moderada (-10psia presin de vaco -15psi), Alimentando un flujo fresco de substrato crudo, Alcanzando el Estado Estacionario (EE), Operando en Equilibrio Hidrodinmico, Buscando la solucin de compromiso ptima entre la altura de la columna (nmero de platos tericos) y la resolucin de la matriz de adsorcin. Dadas las condiciones, la ecuacin cintica de la velocidad para un

quimioestto es: = F/V.

Donde: D = velocidad o tasa de dilucin

= velocidad de reaccin o conversin.

= ecuacin de diseo de un quimioestto. El tiempo de residencia ya no se denomina as, sino tiempo espacial (t) porque ya no depende del volumen del bioreactor: t = 1/D. Nota tcnica: para poder operar un quimioestto diseado como bioreactor tubular y no como tanque agitado (condicin normal de operacin); se debe cambiar la condicin de mezcla perfecta lograda por la agitacin por una condicin de flujo pistn operando bajo una presin diferencial negativa; es decir, vaco. Eso, requiere lograr el equilibrio hidrosttico de la presiones para que en el lavado la velocidad de dilucin (D) sea la misma que la velocidad de arrastre por vaco; es decir, el flujo volumtrico debido a la succin por vaco. La velocidad de arrastre por vaco debe determinarse una vez alcanzado el estado estacionario (EE) por observacin y medicin directa (in situ) ya que depende de las condiciones reolgicas de mezcla de extractos crudos; as como de la constitucin del lecho empacado y de la matriz de adsorcin. Por tanto, debe regularse el flujo requerido, ajustando la presin de vaco o succin aplicada a la columna o bioreactor tubular.