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HEMATOXILINA Y EOSINA

Nota: cuando haga preguntas o ponga imgenes, las respuestas correctas y referencias las pongo en blanco, asi primero lo piensan y despus se fijan si esta bien lo que pensaron

La tcnica de H y E, tambin llamada tcnica convencional, utiliza como fundamento la afinidad de las molculas cidas y bsicas para atraer a su opuesto. As, una molcula cida tendr afinidad por una molcula bsica, y viceversa. En esta tcnica el colorante bsico es la hematoxilina, mientras que el cido es la eosina. La hematoxilina, que es de color azulado violceo, tender a unirse a molculas cidas (por ser de naturaleza bsica). Qu molculas son cidas en una clula? Ncleo celular: por ser rico en ACIDO Desoxirribonucleico (ADN). El nucleolo tambien es basofilo ya que es rico en ARN. Ribosomas y polirribosomas: ricos en ACIDO Ribonucleico (ARN) Retculo Endoplasmtico Rugoso (REG): rico en RIBOSOMAS. CONCLUSIN: Toda molcula cida, se unir al colorante bsico hematoxilina. En este caso, la molcula se define como basfila (baso = bsico, filia = afinidad) Entonces, veamos imgenes

Clula del pncreas (clula productora de protenas). Flecha blanca: ncleo. Flecha amarilla: nucleolo. Flecha roja: REG (no veo el REG, se que est ah porque veo una regin basofila en el citoplasma Con lo expuesto podemos concluir que una clula productora de protenas tiene las siguientes caractersticas: - Ncleo con cromatina laxa (ya que debe tener sus hebras de ADN separadas para poder transcribirse) - Nucleolo evidente (acurdense que en el nucleolo se sintetizan los RIBOSOMAS

Citoplasma basfilo porque la organela que predomina es el REG tender a unirse a

La eosina, que es de color rojo plido o rosado, molculas bsicas (por ser de naturaleza cida).

Qu molculas son bsicas en una clula? Mitocondrias: por estar cargadas de enzimas (protenas) Protenas intracelulares: como la actina y la miosina del tejido muscular Protenas extracelulares: como el colgeno del tejido conectivo. CONCLUSIN: Toda molcula bsica, se unir al colorante cido eosina. En este caso, la molcula se define como acidfila (o eosinfila, por su afinidad al colorante eosina). Veamos una imagen: Clula parietal del estomago

Clula parietal del estomago. Flecha amarilla: ncleo. Flecha roja: citoplasma La funcin de la clula parietal es la de secretar protones y cloruro para formar el acido clorhdrico. Para poder secretarlas en contra de gradiente necesita energa y por lo tanto tener muchas mitocondrias. Por ende en este caso el citoplasma es acidfilo ya que la organela que predomina es la mitocondria. De lo dicho anteriormente podemos entonces sacar una conclusin: La coloracin final de un citoplasma depende SIEMPRE de la organela que predomine en su interior. As, una clula que sintetice protenas, tendr mayor cantidad de REG que de mitocondrias, y por ende se teir su citoplasma basfilo. Lo mismo ocurre con una clula encargada de la contraccin (tejido muscular). Si bien tiene polirribosomas para la sntesis de protenas endgenas (las protenas contrctiles), son estas ltimas las que predominan en su interior, y por ende muestran un citoplasma acidfilo. Una excepcin lo constituye el fibroblasto del tejido conectivo. Dicha clula est encargada de la sntesis de protenas (como lo es el colgeno). Por ende, presenta abundantes cantidades de REG en su interior. Las micrografas electrnicas demuestran que efectivamente es as. Sin embargo, al teirlas con H y E, su citoplasma se ve acidfilo. Esta aparente

paradoja histolgica se explica fcilmente cuando uno conoce la informacin terica de la clula. Si bien tiene abundante REG, en su interior almacena a los precursores de la protena colgena en vesculas de almacenamiento. Dichas vesculas enmascaran al REG, dndole al citoplasma una sutil acidofilia. ...Ahora, cuando una parte del preparado teido con la tcnica de H y E no se tie, debo inferir que ah se encuentra una molcula neutra? NO!!!!!!!!!!! Muchas veces ocurre que vemos una clula cuyo citoplasma no se ha teido. No necesariamente significa que haya estructuras neutras. Puede darse el caso, como lo representan los lpidos, que no soportan el pasaje de alcoholes de la tcnica de H y E. De esta manera, al perderse el contenido, no hay nada que teir. Entonces, que no se tie con H y E???? - aire o agua (por ejemplo las luces!) - lpidos: Los lpidos tienen una tcnica especfica que preserva su contenido, llamada Tcnica de Sudn. - hidratos de carbono: Las estructuras con alto contenido en glcidos, como el glucgeno, proteoglicanos y mucopolisacridos, tambin pueden dar una imagen negativa (no se tien) con la tcnica convencional. Las estructuras glucdicas presentan una tcnica selectiva para su tincin, llamada tcnica de PAS (Peryodic Acid - Schiff). SUDAN Qu estructuras son sudanfilas? Todas las estructuras ricas en lpidos Tejido adiposo blanco: presenta una gran vacuola lipdica que ocupa todo su citoplasma. Vainas de mielina de las neuronas Vesculas de almacenamiento de colesterol de las clulas productoras de hormonas esteroideas: como el espongiocito de la corteza suprarrenal. Retculo endoplasmtico Liso (REL). Hay dos colorantes: Sudan rojo: tie triglicridos (adipositos) Sudan negro: tie fosfolpidos (vainas de mielina) Imgenes:

Tcnica de PAS Qu estructuras dan positivas a la reaccin de PAS? Todas aquellas ricas en glcidos Vacuolas de clulas caliciformes Vesculas de almacenamiento de glndulas mucosas (como los acinos mucosos o mixtos) Vesculas de almacenamiento de glucgeno: como en el hepatocito o las clulas musculares Glucoclix Imgenes: 1) Acino mucoso: PAS + H y E

2) Mucus producido por celulas del estomago (lo que se ve rojo es PAS)

3) celula caliciforme

CONCEPTOS FINALES

Se torna imprescindible comprender las distintas afinidades tintoriales que tienen las estructuras intracelulares, para comprender la visin al microscopio, y poder sacar conclusiones veraces. A su vez, el ncleo de una clula SIEMPRE es basfilo. Podr ser intenso (si la cromatina est condensada) o leve (si la cromatina esta laxa). Pero siempre est en la gama de lo basfilo. Es el citoplasma de una clula el que tiene variaciones en la coloracin. Esto depende fundamentalmente de las organelas que se encuentren en su interior. Una clula que sintetice protenas de exportacin, tendr en su citoplasma grandes cantidades de REG. Esto no significa que UNICAMENTE tenga REG. Tambin tiene mitocondrias.
Nota: los contenidos desarrollados en este documento NO REEMPLAZAN bajo ningn aspecto la BIBLIOGRAFIA existente, ni son suficientes para cumplir los OBJETIVOS de la materia. El enfoque del mismo es prctico y NO se desarrollan contenidos puramente tericos.