UNIVERSIDADE DE CAXIAS DO SUL Centro de Cincias Biolgicas e da Sade Departamento de Cincias Biomdicas Cidade Universitria

Biologia Molecular

Replicao do DNA
Ana Paula Franco Lambert

Replicao de DNA
A replicao do DNA semiconservativa:
Watson e Crick (1953)
... no escapou a nossa ateno que esta estrutura sugere imediatamente um mecanismo de replicao para o material gentico

Bioquimicamente complexa mas de relativa simplicidade gentica

Replicao de DNA em Procariotos

Inicia em um ponto especfico do cromossomo circular
origem de replicao nica

Segue nos dois sentidos

Replicao de DNA em Eucariotos

A replicao tem incio simultneo em vrios pontos do cromossomo origens de replicao/replicons
forma forquilhas de replicao Ocorre durante a fase S do ciclo celular 6 a 8 horas

Replicao de DNA
Exige velocidade e preciso
E. coli1000 nucleotdeos/seg

A replicao de DNA feita por uma interao complexa e coordenada de mais de 20 protenas REPLISSOMO
Polimerases Helicase Primases: iniciam a sntese da cadeia em stios Primases preferenciais Protenas de iniciao: reconhecem a origem do iniciao ponto de replicao Protenas que reconstroem a dupla hlice

Replicao semiconservativa

HELICASE
Primeiramente a helicase catalisa o desenrolamento das fitas de DNA

DNA polimerase I
A DNA polimerase tem 3 stios ativos diferentes na sua cadeia polipeptdica:
1. Polimerizao 2. Exonuclease 3'-5' 3. Exonuclease 5'-3'

Tem um papel crtico na replicao e no reparo de DNA A polimerizao e a reviso podem ocorrer quase que simultaneamente sem que o DNA se separe da enzima

DNA polimerase I- Atividade polimersica

Catalisa a adio de desoxirribonucleotdeos ponta 3' de uma cadeia de DNA que est sendo alongada no sentido 5' para 3'. O dNTP que se ligar depende da base correspondente no filamento molde.
A probabilidade de fazer a ligao fosfodister muito baixa, a menos que o nucleotdeo que chega forme um pareamento de bases complementar ao molde

Domnio polimersico

 Nucleotdeos

DNA polimerase I - Atividade exonuclesica revisora 3'- 5'

Tem funo de reviso na polimerizao
catalisa a hidrlise de nucleotdeos no pareados

Aumenta acentuadamente a preciso da replicao do DNA A DNA polimerase I examina o resultado a cada polimerizao que ela catalisa antes de passar para a prxima.
A freqncia de erro da enzima de10-6 a 10 -9. O produto da freqncia de um mal pareamento inicial 10-4

DNA polimerase I - Atividade exonuclesica revisora 5'- 3'

A DNA Polimerase tambm tem atividade exonuclesica 5'- 3' corretora de erros. Essa atividade exonuclesica 5'-3' importante para reviso de erros como dmeros de pirimidinas (formados pela exposio aos raios UV). Remove blocos de Nucleotdeos

DNA polimerase II
Possui atividade de exonuclease 3'-5'. A DNA polimerase II participa no reparo do DNA, mas no necessria para a replicao do DNA.

DNA polimerase III

Sintetiza a maior parte do novo DNA Alta processividade Potncia cataltica Fidelidade ao pareamento de bases
Isso a diferencia da DNA polimerase I que tem como funo o reparo e preenchimento de espaos, alm de ter uma processividade muito menos eficiente

A DNA polimerase III no solta o molde enquanto no for totalmente replicado

Forquilha de Replicao
Na forquilha de replicao, ambos os filamentos do DNA parental servem como moldes para a sntese do novo DNA O sentido geral da reao para um filamento filho 5'-3 e para o outro 3'-5'

 Filamento 5 3 filamento de replicao contnua leading strand Filamento 3 5 filamento de replicao descontnua lagging strand

filamento de replicao descontnua

DNAs polimerases 5 3

fragmentos de Okazaki

 Bidirecional

forquilha de replicao

Tanto os fragmentos de Okazaki quanto os leading so sintetizados no sentido 5'-3'

A reunio dos filamentos descontnuos possibilita a polimerizao 5'-3' ao nvel de nucleotdeo, originando um crescimento geral no sentido 3'-5'.

forquilha de replicao

DNA polimerase III:

Sntese do filamento da fita lder

DNA polimerase I:
preenche os espaos entre os filamentos fita atrasada/descontnua Usa atividade de exonuclease 5'-3 para remover o primer de RNA

A DNA ligase une os fragmentos

Problemas de replicao nas extremidades do DNA

Em filamento descontnuo
8 a 12 pb so perdidos a cada ciclo nos telmeros -

Telomerase (clulas germinativas, protozorios e leveduras) X cncer