Thèse Etude Phytochimie Et Activités Bio

MINISTERE DE LEDUCATION REPUBLIQUE DU MALI
NATIONALE Un Peuple Un But Une Foi

UNIVERSITE DE BAMAKO

FACULTE DE MEDECINE DE PHARMACIE
ET DODONTO-STOMATOLOGIE

Anne universitaire : 2004 2005 N . . .

TITRE :

THESE
Prsente et soutenue publiquement le dcembre 2004 devant
la Facult de Mdecine, de Pharmacie et dOdonto-Stomatologie
Par
Monsieur Boubacar Souley AMADOU
Pour obtenir le grade de Docteur en Pharmacie
(Diplme dEtat)

JURY
Prsident : Professeur Moussa HARAMA
Assesseurs : Professeur Ynimgu Albert. DEMBELE
Docteur Ibrahim MAIGA
Directeur de thse : Professeur Drissa DIALLO

ETUDE DE LA PHYTOCHME ET DE8
ACTVTE8 BOLOGOUE8 DE
Combretum gutnosum Perr. ex DC
{COMBRETACEAE}

DEDCACES ET DEDCACES ET DEDCACES ET DEDCACES ET
REMERCEMENTS REMERCEMENTS REMERCEMENTS REMERCEMENTS

DEDICACES
Au nom dAllah, Le Clment, Le Misricordieux
Gloire Toi ! Nous navons de savoir que ce que tu nous as appris. Certes cest Toi
lOmniscient, le Sage : Sourate 2, Verset 32 (Saint Corant).
Louange et Gloire Dieu, le Tout Puissant, qui nous a permis de mener bien ce modeste travail.

Prire et bndictions dAllah sur le prophte Mohamed, Paix et Salut sur lui, le seau des
prophtes, ainsi que ses compagnons, pour nous avoir apport une religion comme lIslam

A mon pre El hadj Souley AMADOU :
Jai toujours trouv auprs de toi, comprhension et soutien. Tes prires et tes conseils ne mont
jamais fait dfaut tout au long de mes tudes. Trouve travers ce modeste travail, la rcompense
de ton affection, de tes sacrifices et de ta patience.

A ma mre Fatouma MOUMOUNI :
Si les parents doivent regretter quelque chose un jour, cest de navoir pas assez fait pour
lducation de leurs enfants ; les enfants de navoir pas assez aim leurs parents.
Maman, je noublierai jamais tes sages conseils prodigus mon endroit. Cest toi qui disais
quon ne remercie pas ses parents. Seulement, je ne trouve pas aujourdhui un moyen dviter de
te remercier pour tout ce que tu as fait pour nous. Ton souci primordial a toujours t la russite
de tes enfants. Que tes sacrifices, des peines et tes privations trouvent leur rcompense dans
laboutissement de ce modeste travail qui est aussi le fruit de ta persvrance, de ton courage et
surtout de ta patience. Ce travail est galement le fruit de ton amour, tes bndictions et surtout ta
bonne ducation. Je voudrais travers ce modeste travail, te rendre un hommage mrit et te dire
combien je suis fier de lducation que tu nous as donne. Puisse le Tout Puissant nous accorder
de tavoir encore longtemps auprs de nous pour que tu puisses bnficier de lombre de larbre
que tu as si jalousement protg et entretenu.

A mon oncle et mes tantes : Issa, Kadi et Haoua MOUMOUNI :
Vous mavez beaucoup soutenu travers vos conseils, vos encouragements et vos bndictions.
Trouvez travers ce modeste travail, lexpression de ma profonde reconnaissance et le
tmoignage de mon profond respect
A mes frres et surs : Soumana, Abdoulaye, Omar et Nafissa SOULEY AMADOU :
A force de courage et de persvrance, jachve aujourdhui un travail qui est aussi le vtre.
Puisse laffection, la confiance et la solidarit qui nous animent rester inbranlables.
Fraternellement !

A la mmoire de mes frre et sur : Feus Soumaila et Roukaila SOULEY AMADOU :
Vous nous avez quitts trs tt, mais votre souvenir toujours vivace dans mon cur ma soutenu
tout au long ce travail. Ce travail vous est ddi en tmoignage de mon profond respect pour vos
mes respectives. Dormez donc en paix.

A la mmoire de ma grand-mre : Feue Mariama ABDOU :
Les mots me manquent pour texprimer toute ma reconnaissance. Ta vie durant, tu nas mnag
aucun effort pour ma russite. Je noublierai jamais tes conseils, tes bndictions, tes privations et
surtout tes sacrifices consentis mon gard. Tu as su minculquer les vertus du travail bien fait,
lamour du prochain et lhumilit. Ce travail test ddi en tmoignage de mon profond respect
pour ton me et en reconnaissance de ton affection. Dors en paix Grand-mre et que le Tout
Puissant taccepte dans son paradis.

A mes oncles et tantes, pour vos conseils et vos encouragements. Recevez travers ce modeste
travail lexpression de ma profonde gratitude et de ma sincre reconnaissance.

A mes cousins et cousines : Reconnaissance infinie.

A mes neveux et nices .

A mes amis et frres : Papa Maga, Hamani Idrissa, Mourtala Assao : Plusque des voisins, nous
sommes des frres. Restons donc unis. Merci pour le soutien moral.

A mes amis denfance : Je garderai toujours en souvenir les moments que nous avons passs
ensemble. Que Le Tout Puissant nous garde aussi longtemps ensemble et quil guide nos pas sur
le droit chemin !

A mes camarades et amis : Adamou Saidou, Moustapha Tahirou, Souleymane Aouami,
Zibo Diawara, Zara Kala, Hamsatou Djermakoye, Ramatou Boubacar, Hadiza Gao, Hamani
Idrissa, Mohamed Maiga, Abdoul Sangar, Hamane Tour, Drissa Sidib, Pinda Thiam, Djamila
Bello, Halima Sombo, Aissa Ciss, Abdoulaye Dicko, Rokia Dembel. Continuons dans la voie
de la consolidation de nos liens damiti et de fraternit gardons toujours lesprit dquipe. Bonne
chance nous tous. Amicalement.

A mes camarades du club des amis: Garba Mamane Salissou, Oumarou Aboubacar, Mourtala
Assao, Ali Kalilou. Restons solidaires, nous gagnerons inch Allah.

A mes cadets : Dominique ARAMA, Mariam, Niar. Du courage et bonne chance. Soyez surtout
persvrants et patients.

A mes amis de linternat de la FMPOS : Toute ma gratitude.

A tous ceux qui se rappellent encore de mon nom.

MENTION SPECIALE
A lUniversit dOslo (Norvge) : pour le soutien matriel et financier travers le projet
CNRST/ NUFU Plantes mdicinales (Rpublique du Mali / Gouvernement Norgvien).

Au Professeur Berit Smestad PAULSEN de lUniversit dOslo, pour les conseils techniques
que vous nous avez prodigus lors de votre sjour au Mali. Veillez accepter ce travail comme le
fruit de votre apport inestimable tout au long de sa ralisation.

A lInstitut des Maladies Tropicales de Bles en Suisse pour son concours technique dans la
ralisation de ce travail

Au Professeur Drissa DIALLO
Votre souci majeur a t laboutissement de ce travail qui a ncessit votre concours sous toutes
les formes. Grce vous, nous avons appris la rigueur scientifique et lamour du travail bien fait.
Puisse le Tout Puissant vous aider raliser vos projets les plus chers et vous accorder longue
vie. Respectueusement.

Au Docteur Rokia SANOGO
Nous garderons de vous le souvenir dun matre disponible, toujours lcoute de ces lves.
Soyez en donc remercie.

Au Docteur Ababacar MAIGA
Nous avons eu le privilge de bnficier de votre aide tout au long de ce travail. Veillez recevoir
en retour nos sentiments de profonde reconnaissance.

Au Docteur Ibrahim MAIGA, chef du Service du Laboratoire de Biologie Mdicale de
LHpital National du Point G et tous les Techniciens de ce Service pour leur esprit de
collaboration et de courtoisie dont ils ont su faire montre tout au long de notre sjour.

A mon sauveur et grand frre : Docteur Abdoulaye Adamou : Je noublierai jamais ce que vous
avez fait pour moi tout au long de la ralisation de ce travail. Vos sages conseils techniques ont

beaucoup contribu la ralisation de ce travail. Que Dieu vous aide raliser vos projets les
plus chers !
A tout le personnel du laboratoire du Dpartement Mdecine traditionnel :
Mr Famolo DIARRA, Mr Kassim COULIBALY, Mme MAIGA, Mr Seydou DEMBELE,
Mr. Karim FOFANA, et lquipe de la production, pour leur disponibilit.

A tous les camarades finalistes en pharmacie de la promotion Professeur Boubacar Sidiki
CISSE pour le soutien moral.

A mes camarades internes du laboratoire du DMT : Judith MOGODE, Oumar SANGARE,
Sory DIALLO, Yaya TGOLA, Sandrine FOTSING, Aissata DIALLO, Fatim OUATTARA,
Aminata KEITA, Amadou DIALLO, Nouhoun KONATE, Arima OUSMANE, Grete HOPE,
Moussa DOUMBIA, Mme COULIBALY Mariam, pour les moments agrables et inoubliables
passs ensemble. Bonne carrire professionnelle tous. Amicalement !

REMERCIEMENTS
Au Mali et au peuple malien : Nous noublierons jamais les moments mmorables passs
dans ce pays, symbole dune tradition dhospitalit lgendaire. Puisse le Tout Puissant veiller
longtemps sur ce pays qui, nous devons beaucoup Trs cordialement!

Au Niger et son peuple : Pour avoir mis notre disposition les moyens ncessaires tout au
long de notre sjour en terre malienne, dans le cadre de nos tudes.

Au corps professoral de la Facult de Mdecine, de Pharmacie et dOdontostomatologie
pour la qualit de la formation reue.

A mes enseignants de lcole primaire, du collge et du lyce
.
A mon matre de lcole coranique .

A mon oncle Mr Mohamed KANTE et son pouse Mme KANTE Maimouna TOURE
Veillez accepter ce travail, comme le fruit de tous les efforts consentis mais aussi lexpression de
ma profonde gratitude et de ma reconnaissance infinie.

A tous les Etudiants nigriens au Mali pour le soutien moral. Que Dieu nous aide atteindre
nos objectifs dans ce pays ! Cordialement.

A toutes les Communauts africaines au Mali : pour lesprit de collaboration et de courtoisie.

A lassistance pour le soutien moral.

Que tous ceux qui, de prs ou de loin, ont contribu directement ou
indirectement la ralisation de ce modeste travail, trouvent ici nos
sentiments de profonde gratitude et de reconnaissance infinie.
Trs cordialement.

HOMMAGE A NOS HOMMAGE A NOS HOMMAGE A NOS HOMMAGE A NOS
MATRES ET JUGES MATRES ET JUGES MATRES ET JUGES MATRES ET JUGES

A notre matre et prsident du jury : Professeur Moussa HARAMA :
Professeur titulaire de chimie organique la facult de mdecine, de
pharmacie et dodontostomatologie
Honorable matre, cest un rel plaisir pour nous que vous ayez accept de prsider
notre jury de thse. Votre rigueur scientifique, votre humilit et vos qualits
humaines ne font lombre daucun doute.
Veillez accepter cher matre, nos sentiments de sincre reconnaissance.

A notre matre et juge : Professeur Ynimgu Albert DEMBELE:
Matre de confrences agrg en chimie organique la facult de mdecine, de
Secrtaire principal de la facult de mdecine, de pharmacie et
dodontostomatologie
Honorable matre, cest un immense plaisir que vous nous faites en acceptant de
participer lamlioration de la qualit de ce modeste travail.
Veillez accepter cher matre nos sincres remerciements et notre infinie
reconnaissance.

A notre matre et juge : Docteur Ibrahim MAIGA
Matre assistant de bactriologie -virologie la facult de mdecine, de
Chef de service du laboratoire de biologie mdicale et hygine hospitalire de
lhpital national du Point G
Honorable matre, nous sommes trs sensible lhonneur que vous nous faites en
acceptant de juger ce modeste travail. Votre simplicit et votre rigueur scientifique
font de vous un matre aim et respect de ses lves.
Soyez assur cher matre, de notre profonde reconnaissance.

A notre matre et directeur de thse : Professeur Drissa DIALLO :
Matre de confrences agrg de pharmacognosie la facult de mdecine, de
Chef de service du dpartement mdecine traditionnelle de linstitut national
de recherche en sant publique
Honorable matre, la spontanit avec laquelle vous avez accept de diriger ce
travail nous rconforte plus dun gard. Notre sjour dans votre service nous a
permis dapprcier en vous vos imminentes qualits humaines et scientifiques :
disponibilit, ponctualit, rigueur et amour du travail bien fait.
Veillez accepter cher matre, le tmoignage de notre profond respect et de notre
sincre reconnaissance.

Table des matires Pages
CHAPITRE 11
Introduction....2
Motivations...3
Objectifs....3
CHAPITRE 2 : TRAVAUX ANTERIEURS.... 4
2.1 : Monographie de Combretum glutinosum Perr. ex DC...5
2.2 : Les antioxydants...13
2.3 : Les antifongiques...23
2.4 : Les infections bactriennes....29
2.5 : Les inflammations..36
2.6 : Le paludisme..42
CHAPITRE 3 : TRAVAUX PERSONNELS.49
3.1 : Mthodologie..50
3.1.1 : Etudes phytochimiques.....50
3.1.1.1 : Matriel vgtal.50
3.1.1.2 : Identification de la matire premire....50
3.1.1.3 : Ractions de caractrisation.......51
3.1.1.4 : Extractions .60
3.1.1.4.1 : Matriels..60
3.1.1.4.2 : Extraction avec leau....................................................................................................60
Dcoction leau..60
Macration........60
3.1.1.4.3 : Macration avec lthanol 80%.................................................................................61
3.1.1.4.4 : Extraction avec les solvants polarit croissante.....62
3.1.1.5 : Chromatographe sur couche mince.........64
3.1.2 : Tests biologiques.....65
3.1.4.1 : Dtermination de lactivit antioxydante......65
SOMMARE SOMMARE SOMMARE SOMMARE

3.1.4.2 : Dtermination de lactivit antifongique66
3.1.4.3 : Dtermination de lactivit antibactrienne..............71
2.1.4.4 : Dtermination de lactivit anti-inflammatoire....73
2.1.4.5 : Dtermination de lactivit antiplasmodiale..76
3.2 : Rsultats... .78
3.2.1 : Etudes phytochimiques....78
3.2.1.1 : Ractions de caractrisation78
3.2.1.1.1 : Ractions en tubes sur la poudre des corces de tronc........78
3.2.1.1.2 : Dosage de certaines substances.......79
3.2.1.1.3 : Ractions en tubes sur la poudre des corces de racines..81
3.2.1.1.4 : Dosages de certaines substances...81
3.2.1.2: Extractions..84
3.2.1.3: Chromatographie sur couche mince....85
3.2.2: Tests biologiques.92
2.2.2.1: Dtermination de lactivit antioxydante.92
3.2.2.2: Dtermination de lactivit antifongique..95
3.2.2.3: Dtermination de lactivit antibactrienne..96
3.2.2.4 : Dtermination de lactivit anti-inflammatoire100
3.2.2.5 : Dtermination de lactivit antiplasmodiale.103
ANALYSES ET DISCUSSIONS.105
CONCLUSION......112
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES....115
ANNEXES.....122
RESUME....124

Lexique des abrviations et symboles chimiques
ADN : Acide dsoxyribonuclique
AINS : Anti-inflammatoire non strodien
AIS : Anti-inflammatoire strodien
Al : allis
ARN : Acide ribonuclique
ARNm : ARN messager
ARNt : ARN de transfert
: beta
<: Infrieur
> : suprieur
AUG : Augmentation
BAAR : Bacille acido alcoolo rsistant
B A W : Butanol acetic acid water
CCM : Chromatographie sur couche mince
Cm : centimtre
CNAM : Centre national dappui la lutte contre la maladie
CO
2
: Gaz carbonique
CuSO
4
: Sulfate cuivrique
DPPH : 1,1 diphnyl 2 picrylhydrazyle
DCM : Dichloromthane
DMSO : Dimthylsulfoxide
DMT : Dpartement Mdecine Traditionnelle
C : Degr Celcius
EtOH : Ethanol
FeCl
3
: Chlorure ferrique
FeSO
4
: Sulfate ferreux
FMPOS : Facult de mdecine, de pharmacie et dodontostomatologie
g : gramme
HHDP : Acide hexahydroxydiphnique

HCCl
3
: Chloroforme
HCl : Acide chlorhydrique
IC
50
: Concentration inhibitrice 50
INH : Inhibition
INRSP : Institut National de Recherche en Sant Publique
KOH : hydroxyde de potassium
kg : kilogramme
LDL : Low density lipoprotein
MeOH : Mthanol
mg : milligramme
MH : Mueller Hinton
ml : millilitre
mm : millimtre
mn : minute
MTA : Mdicament traditionnel amlior
MTT : Mthylthiozoylttrazolium
M/V : Masse par volume
N
2
: Azote molculaire
NaHCO
3
: Hydrognocarbonate de sodium
nm : nanomtre
O
2
: Oxygne molculaire
1
O
2
: Oxygne singulet
OMS : Organisation mondiale de la sant
PE : Prise dessai
% : pour cent
q s p : Quantit suffisante pour
Rf : Rapport frontal
RM : Raymond Marthoud
SD: Dviation standard
SDA : Sabouraud Dextrose Agar
SDB : Sabouraud Dextrose Broth

SIDA : Syndrome dimmunodficience acquise
T : Tare
g: microgramme
l : micro litre
Thse de pharmacie

Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC (Combretaceae)

1

CHAPTRE 1

Thse de pharmacie


2

Introduction
Lusage de la mdecine traditionnelle est trs rpandu en Afrique. Son accessibilit, sa
disponibilit et sa popularit ne font lombre daucun doute, dans la mesure o environ 80 %
dAfricains y ont recours pour leurs besoins de sant.
Par ailleurs, selon lOrganisation Mondiale de la Sant (OMS), prs de 6377 espces de
plantes sont utilises en Afrique, dont plus de 4000 sont des plantes mdicinales, ce qui constitue
90 % de la mdecine traditionnelle en Afrique (OMS, 2003).
Ces dernires annes, plusieurs molcules isoles des plantes sont devenues des mdicaments
efficaces: citons par exemple le taxol issu de Taxus baccata L. (Taxaceae) pour ses proprits
anticancreuses remarquables (cancer de lovaire et cancer du sein) et de lartmisinine isole de
Artemisia annua L. (Asteraceae) pour ses proprits antipaludiques (Hostettmann, 2001).
Au Mali, le Dpartement Mdecine Traditionnelle (DMT) de lInstitut National de Recherche
en Sant Publique (INRSP), centre collaborateur de lOMS, travaille avec les thrapeutes
traditionnels afin de mettre la disposition des populations, des mdicaments traditionnels
amliors (MTA) bases de plantes. Ainsi, sept MTA ont t dj mis sur le march
pharmaceutique (Diallo, 2000).
Combretum glutinosum Perr. Ex DC, est une plante rpute pour ses diverses vertus. Cette
plante, qui est au Sngal lespce la plus prescrite par les thrapeutes traditionnels est utilise
traditionnellement pour traiter diverses affections notamment le paludisme, lhypertension
artrielle, lanmie, la fivre bilieuse hmaturique, la blennorragie, la syphilis, les plaies, la toux,
lictre, les pneumonies, les spasmes (Traor, 1983 ; Malgras,1992).
Nos investigations ont concern la caractrisation des diffrents groupes chimiques et les
activits antioxydante, antifongique, antibactrienne, anti-inflammatoire et antiplasmodiale.

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Motivations
Notre travail a t motiv dune part, par le souci de valoriser et de promouvoir les plantes
mdicinales du Mali, en vue de faciliter laccs des populations des mdicaments traditionnels
amliors moindre cot, et dautre part, par la ncessit dobjectiver ou dinfirmer les
utilisations traditionnelles de Combretum glutinosum Perr. ex DC.

Objectifs
Objectif gnral
tudier la phytochimie et les activits biologiques de Combretum glutinosum Perr. ex DC .
Objectifs spcifiques
Identifier les principales utilisations traditionnelles de Combretum glutinosum;
Identifier les diffrents groupes chimiques prsents dans les poudres des corces de tronc et de
racines de Combretum glutinosum ;
Dterminer lactivit antioxydante des extraits aqueux, thanoliques, mthanoliques et
dichloromthaniques des poudres des corces de tronc et de racines de Combretum glutinosum ;
Dterminer lactivit antifongique des extraits aqueux, thanoliques, mthanoliques et
Dterminer lactivit antibactrienne des extraits aqueux, thanoliques, mthanoliques et
Dterminer lactivit anti-inflammatoire des extraits aqueux, thanoliques, mthanoliques et
Dterminer lactivit antiplasmodiale des extraits aqueux, thanoliques, mthanoliques et
dichloromthaniques des poudres des corces de tronc et de racines de Combretum glutinosum.

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CHAPTRE 2 CHAPTRE 2 CHAPTRE 2 CHAPTRE 2 : :: :
TRAVAUX ANTEREURS TRAVAUX ANTEREURS TRAVAUX ANTEREURS TRAVAUX ANTEREURS
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5

2.1 : Monographie de Combretum glutinosum Perr. ex DC
Combretunm glutinosum, couramment appel Kinkeliba coriace est une plante de la famille
des Combretaceae. Cette famille est constitue de 18 genres dont 370 espces de Combretum
(Malgras, 1992 ; Mc Gaw et al, 2001).
2.1.1: Position dans la systmatique (Cret, 1965)

Rgne : Vgtal
Sous rgne : Eucaryotes
Embranchement : Spermatophytes
Sous embranchement : Angiospermes
Classe : Dicotyldones
Srie : Dialyptales
Ordre : Myrtales
Famille : Combretaceae
Sous famille : Combretoideae
Genre : Combretum
Espce : glutinosum

2.1.2 : Synonymes (Maydell, 1980)
Combretum passargei Engl. Et Diels
Combretum leonense Engl. Et Diels
Combretum hypopilinum Diels

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2.1.3 : Noms locaux de Combretum glutinosum (Enda.sn, 2003 ; Kerharo et Adam, 1974)
Tableau I : NOMS LOCAUX DE Combretum glutinosum
Pays Ethnies/ Dialectes Appellations

Bnin Gbe- Fon Dosso
Gen Atissainsain
Vhe Atkipi
Burkina Faso Gourmantch Lifapelu
Mossi/ Moor Koagenga
Cte dIvoire Maninka Naiargbw
Ghana Grussi- Kassena Vakogu
Nabt Nkunga
Guine Mandingue Dbakat
Mali Bambara Tchyangara bl, Tgara
Bobo Intianon
Minyanka Kogolo-Kagala
Peulh Dooki, Buski
Sonink/ Marka Banamba
Sonrha Kokorba
Tamacheck Akalafa
Mauritanie Maure Tikfit
Niger Djerma Kokorbey
Haussa Taramnya
Tubu Kadagar
Nigeria Fula/ Fulfuld Boodi
Yoruba Dagudo
Sngal Diola Kalakudum
Srre Yaay
Toucouleur Dodji kewud
Wolof Ratt
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2.1.4: Description botanique
Combretum glutinosum se prsente sous forme darbre ou darbuste pouvant atteindre 12 m de
haut. La plante est facilement reconnaissable par ses grosses feuilles alternes, verticilles ou
opposes, et se distingue des autres espces de Combretum par ses sept dix nervures saillantes
(Maydell, 1980).
Le tronc est souvent tordu et recouvert dune corce rugueuse.
Les feuilles sont trs polymorphes sur le mme arbre. Elles sont collantes et poisseuses, trs
profondment rticules la face infrieure avec une pubescence blanchtre ou parfois presque
glabre. Le revtement tomenteux des rameaux, toujours visible la loupe, est un signe
caractristique typique de lespce.
Combretum glutinosum prsente des fleurs en pis axillaires de couleur jauntre, mesurant 6 10
cm de long.
Les fruits sont des aknes indhiscents, avec 4 ailes membraneuses, renfermant une graine
dpourvue dalbumen. Ils sont sans cailles, lgrement collants, mesurant 2,5 3 cm de long sur
2,8 cm de diamtre. Ils sont verts dans la jeunesse, maturit rouge-vif, et ficels
(Malgras, 1992 ; Kerharo et Adam, 1974).

Figure n 1: Combretum glutinosum Rameau feuill
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2.1.5 : Cycle vgtatif
Les feuilles de Combretum glutinosum apparaissent de novembre fvrier ; les fleurs de
dcembre avril ; et les fruits ds fin dcembre (Malgras, 1992).

2.1.6 : Distribution gographique
Combretum glutinosum est une plante originaire de lAfrique tropicale. Elle existe dans
les rgions soudano-guinennes, du Sngal jusquau Soudan. Cest une espce galement
retrouve dans les savanes boises lintrieur du Sngal et aux environs du lac des Guiers
(Kerharo et Adam, 1974).

2.1.7 : Station
Combretum glutinosum est rencontre au Sahel sur les dunes fixes, dans le Sahel soudanais,
sur les sols pierreux, ainsi que dans la zone soudanienne sur les latrites. Cest un arbre qui
colonise les jachres. Il est retrouv au bord des mares, ainsi quen Mauritanie o il existe avec
200 mm de pluie. Cest une espce qui rsiste la scheresse (Maydell, 1980 ; Kerharo et Adam,
1974).

2.1.8 : Utilisations en mdecine traditionnelle
Combretum glutinosum est lespce de Combretum la plus rpandue au Sngal et la plus
prescrite par les thrapeutes traditionnelles dans le traitement des affections courantes sur
lensemble du territoire. (Kerharo et Adam, 1974).
La grande considration dans laquelle elle est tenue se reflte mme dans certains de ses noms
vernaculaires. Ainsi, le nom Srre Yaye signifie la mre des mdicaments ; le nom Soc
Diambakatan signifie la feuille qui ne doit pas (N Gaba et al., 1980).
La plante est employe en mdecine populaire dans le traitement des affections hpato-biliaires,
les affections urinaires, les dmes, lhypertension artrielle, la toux, le paludisme, les gastrites
infantiles, la protinurie (Enda.sn, 2003).

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2.1.8.1 : Les feuilles
Les feuilles sont utilises pour leurs proprits diurtique, cholagogue, dpurative et fbrifuge,
sous forme de dcoct ou dinfus, raison de 5 feuilles pour un litre deau. Les bourgeons de
feuilles sont pils, mlangs la bouillie de mil rouge refroidie, puis administrs dans le
traitement de la dysenterie, (Enda.sn. 2003).
Les feuilles vertes, crases sont appliques sur les blessures que lon lave aussi avec une
infusion de feuilles. Elles sont galement administres en cas de bronchite, de malaria, danmie,
de migraine, dpanchement sanguins, ainsi quen cas de rhume (Maydell, 1980).
Les feuilles tendres en dcoction, sont utilises pour traiter la toux, la fivre des enfants et dans
les soins des plaies en bain et lotion. Le dcoct est aussi utilis en bain et fumigation comme
dfatiguant et dans les maux de poitrine. Les rameaux feuills en dcoction, sont utiliss dans le
traitement de lictre, le paludisme, la gastrite infantile et les conjonctivites (Malgras, 1992).
Le macr de 24 heures des feuilles pulvrises, ajout de sel gemme, pris par voie orale, traite la
fivre bilieuse hmoglobinurique. Les tendres feuilles mches et la salive avale (trois
bouffes), traitent lamibiase dysentrique. Le macr des feuilles piles, additionn dalun est
administr jeun en cas de constipation. Chez les femmes sujettes des avortements rpts,
linfus des feuilles est rgulirement pris en boisson et bain au cours de la grossesse et quelques
temps avant celle-ci. En cas de morsure de serpent, les tendres feuilles sont mches et le jus
aval, puis le rsidu est appliqu sur la blessure (Traor, 1983).
Au Sngal, les feuilles ont une haute rputation pour le traitement des maladies de la poitrine,
les coliques, les maladies de lestomac.
En Gambie et au Nigeria, le macr des feuilles est pris comme purgatif.
En Cte dIvoire, les Maninka prennent le dcoct des feuilles en bain et courant dair, contre la
fatigue gnrale. Les feuilles sches et concasses sont utilises dans les hmorragies post
circoncisionnelles (Burkill, 1985).
La dcoction des feuilles est aussi utilise comme diurtique hypotenseur la posologie de
30 g de feuilles dans un litre deau (Pousset, 2004).

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2.1.8.2 : Les corces
Les corces de tronc, de tige et de racines sont utilises comme antihelminthiques et
aphrodisiaque. Linfus des corces est utilis au Sngal pour arrter les vomissements et
comme revigorant sexuel (Enda.sn, 2003).
Les corces broyes donnent une sorte de peluche utilise avec succs sur les blessures. Les
Peuhls du Nigeria utilisent linfus des corces pour se baigner en cas de grippe et de rhumatisme
(Burkill, 1985).
2.1.8.3 : Les racines
Les extraits de racines sont utiliss contre les maladies de lestomac ainsi que la toux
(Maydell, 1980).
Le dcoct de racines est utilis contre les douleurs rnales dorigine diverse, ainsi que contre la
blennorragie (Burkill, 1985).
2.1.8.4 : Les fruits
Les fruits immatures schs et pils, sont actifs sur les chancres syphilitiques.
Les graines vertes crases sont utiles dans le traitement des blessures, la syphilis, ainsi que dans
lart vtrinaire (Maydell, 1980).
2.1.8.5 : la gomme
Combretum glutinosum fournit une gomme dite gomme de troisime choix. Cette gomme est
utilise en pharmacie comme laxatif et antidiarrhique. Son pouvoir adhsif permet son
utilisation dans lappareillage des colostomies et galement pour la fixation des prothses
dentaires (Sanogo, 1999).

2.1.8.6 : Autres utilisations
La plante est souvent aussi utilise en association avec dautres plantes vertus mdicinales
reconnues comme Ximenia americana L. (Olacaceae) dans le traitement de la fivre jaune,
Securinega virosa (Roxb) Baill (Euphorbiaceae) dans le traitement de la bilharziose, Strophantus
sarmentosus DC. (Apocynaceae) dans le traitement de la lpre, Guiera senegalensis J.F.Gmel.
(Combretaceae) dans le traitement de limpuissance sexuelle, Balanites aegyptiaca L. (Del)
(Balanitaceae) dans le traitement des maladies mentales (Maydell, 1980).
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11

Le tronc donne un bois jaune et dur. Ce bois est utilis dans la construction des huttes. Cest un
bois de feu et de charbonnage de bonne qualit. Les extraits des corces de tronc donnent un
colorant jaune excellent utilis dans lindigoterie.

2.1.9 : Donnes phytochimiques (Kerharo et Adam, 1974 ; Traor, 1999)
Dans les feuilles de lespce sngalaise, ont t dcels les constituants chimiques suivants :
quatre htrosides flavoniques ;
des composs poly phnoliques :
des tanins : tanins hydrosolubles et tanins condenss ou proanthocyanidols. La combreglutinine
est un tanin hydrolysable isol de lextrait mthanolique au soxhlet des feuilles de lespce
sngalaise. Trois autres tanins ont t isols de cet extrait. Il sagit du 2,3 (S)
hexahydroxydiphnoyl - D Glucose, de la punicaline et de la punicalgine. (Akino et al., 1994).
des flavonodes ;
des stilbenodes (combretastatines) ;
des alcalodes ;
des acides organiques : acide gallique, acide ellagique, acide frulique ;
des leucocyanidols et leucodelphinidols.

2.1.10 : Structures chimiques de quelques composs isols des feuilles de C. glutinosum
(Traor, 1999 ; Akino et al., 1994)

OCH
3
OH
OCH
3
OCH
3
H
3
CO

HO OH
OCH
3
OCH
3
OCH
3
H
3
CO

Combretastatine A Combretastatine B

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12

OH
H
O
HO
O
OH
OH
HO
O
O
HO
HO
HO CO
H
OH
HO
O
O
H
H
2
C
O
H
H
OR
1
R
2
O
H
H
OH
R
1
= R
2
=
HO
H
HO
CO
OH
OC
HO
H
OH
OH

R
1
= R
2
= H : Punicaline Punicalgine

OH
HD HO
O
C
OH
OH
O
HO
O
O
O
H
O
H
O
CO
O
O
H
O O
CO
OH
OH
OH
H
O
CO H
HO
OC
H
H
2
C
H
H
O
H
HO OH HO OH
OH
H

Combreglutine
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13

2.1.11 : Donnes pharmacologiques et toxicologiques
Une tude clinique portant sur les diffrentes indications thrapeutiques signales a t ralise
par le Blatt. Lexprimentation ralise avec le dcoct aqueux de feuilles (cinq feuilles pour un
litre deau) a mis en vidence une action intressante comme diurtique et hypotenseur dappoint
(Enda.sn, 2003) De plus, une observation a t faite dans un cas de lithiase rnale et une autre
dans un cas dictre par hpatite (Kerharo et Adam, 1974).
Par ailleurs, il a t rapport que les extraits chloroformiques et mthanoliques des feuilles et des
tiges ont inhib la croissance de Bacillus substilis, Staphylococcus aureus, Pseudomonas
aeruginosa, Escherichia coli. Par contre, lextrait aqueux a t inactif (Keita, 2002).
. Par ailleurs, une exprimentation ralise chez la souris a vrifi lactivit antitussive et
antispasmodique (Pousset, 2004).
Lespce Combretum glutinosum est peu toxique. Lexprimentation toxicologique ralise
Dakar par Daff (Enda.sn, 2003 a montr une toxicit quasi nulle (Enda.sn, 2003).

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2.2 : Les antioxydants
2.2.1 : Gnralits :
Prsent dans lair pour environ une partie sur cinq, loxygne est indispensable la vie de la
plupart des tres vivants et permet la respiration, plus gnralement les oxygnations. Il est utilis
en thrapeutique, en inhalation contre lanoxie globale ou cellulaire, les hmorragies, ainsi que
dans de nombreuses affections pulmonaires, les embolies gazeuses des plongeurs, etc.
Loxygne est llment gazeux de la seizime colonne dans le tableau de la classification
priodique des lments. Les organismes vivants anarobies utilisent le haut niveau nergtique
de loxygne molculaire (O
2
) pour oxyder les hydrates de carbone, les protines et les graisses
afin de produire du gaz carbonique, de leau et lnergie ncessaire au processus de la vie. En
plus de son rle dans la conversion de lnergie, loxygne est utilis par les enzymes telles que
les monoamines-oxydases pour mtaboliser des composs endognes et exognes (Cavin, 1999).
Indispensable la vie, loxygne est une source dagression laquelle sont soumis tous les tres
vivants. En effet, sous laction des rayons UV, des radiations ionisantes, de nombreux mtaux de
transition et au cours de diverses ractions enzymatiques, des formes hautement ractives de
loxygne apparaissent telles que loxygne singulet (
1
O
2
), le peroxyde dhydrogne H
2
O
2
, les
peroxydes alkyles ROOH et les radicaux hydroxyles OH, peroxyles ROO, et alkoyles RO. On les
dsigne souvent comme espces ractives de loxygne (ERO). Ces dernires sont utilises par
les cellules phagocytaires de lorganisme (les macrophages) pour combattre les agents infectieux
tels que les bactries et les virus. Toutefois, les bienfaits de ces composs hautement toxiques ne
restent pas sans consquence principalement pour les structures biologiques des cellules
(protines, lipides, ADN). De nombreuses pathologies parmi lesquelles lathrosclrose,
larthrite, lasthme, la maladie de Parkinson, le mongolisme et la neurodgnrescence sont en
partie, lies laction de ces formes ractives de loxygne (Bossokpi, 2002).
On appelle radical libre une molcule contenant un ou plusieurs lectrons non apparis. Bien que
le terme radical libre ait souvent t assimil une espce ractive ou un oxydant, il est
important de signaler que les radicaux libres ne sont pas forcment des oxydants. De mme, tous
les oxydants ne sont pas des radicaux libres. Les radicaux libres sont cependant une cible
privilgie pour amliorer les thrapeutiques diffrents stades pathologiques.
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15

2.2.2 : Dfinition dun antioxydant
Toute substance qui, lorsquelle est prsente en faible concentration compare celle du
substrat oxydable, retarde ou prvient de manire significative loxydation de ce substrat est
appele antioxydant. Le terme de substrat oxydable inclut toutes sortes de molcules in vivo.
Ainsi, lorsque des espces ractives de loxygne sont gnres in vivo, de nombreux
antioxydants interviennent. Il sagit principalement denzymes : la superoxydase dismutase, la
glutathion peroxydase, la catalase et aussi des molcules de faible masse molculaire comme le
tripeptide glutathion ou lacide urique.
En plus de ces substances propres lorganisme, les mdicaments et lalimentation peuvent tre
galement dautres sources dantioxydants.
En ce qui concerne les mdicaments, de nouveaux composs aux proprits antioxydantes sont en
cours de dveloppement.
Actuellement, plusieurs thrapeutiques comme les anti-inflammatoires non strodiens, les
antihyperlipoprotiniques, les antihypertenseurs, ont t valus pour leurs proprits
antioxydantes. Citons entre autres exemples :
- Le probucol (lurselle) : est un mdicament qui, en plus de ces effets connus dans la baisse du
taux de cholestrol sanguin, prvient lathrogense en agissant comme antioxydant et en
supprimant loxydation des lipoprotines de faible densit (LDL).
-Lacide ascorbique : Vitamine C : est un puissant rducteur et joue un rle important dans la
rgnration de la vitamine E. On retrouve la vitamine C principalement dans les aliments
suivants : les lgumes, le poivron, le persil, les agrumes et la kiwi (Bossokpi, 2002).
O
HO OH
CH
O
CH
2
O
OH

Acide ascorbique

- Le tocophrol : Vitamine E : prvient la peroxydation des lipides membranaires in vivo en
capturant les radicaux peroxyles. Elle est prsente dans les huiles vgtales telles que les
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16

huiles dArachis hypogeae L. (Fabaceae), ainsi que les noix, les amandes, les graines, le lait, les
ufs, et les lgumes feuilles vertes.

CH
3
H
3
C
HO
CH
2
(CH
2 CH
2 C
H
CH
2
)
3 H
H
3
C

Tocophrol ou Vitamine E

- La vitamine P (citrine, bioflavoridine et naringine, rutine, hespridine) : La vitamine P
intervient dans linsuffisance veineuse par une diminution de la permabilit et une augmentation
de la rsistance des capillaires. Elle agit par inhibition de la formation et de la libration de
lhistamine ; loxydation de ladrnaline serait galement empche. Lactivit antiradicalaire de
la vitamine P serait due lentit catchole qui est un trs bon capteur de radicaux libres
Elle est retrouve dans le foie, la viande (volaille), le poisson, les fruits et lgumes secs, les
crales (Chevaley, 2000).

O O
OH O
OCH
3
OH
Glc RhamO

Vitamine P

2.2.3 : Les antioxydants naturels
Lintrt port aux antioxydants naturels ne cesse de crotre ces dernires annes. En effet, on
trouve dans la littrature scientifique de plus en plus des publications sur des composs naturels
aux proprits antioxydantes (Potterat, 1997).
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17

Les antioxydants naturels sont prsents dans toutes les parties des plantes suprieures. Ce sont
pour la plupart des composs polyphnoliques. Un compos polyphnolique est tout compos
possdant un noyau aromatique contenant un ou plusieurs substituants hydroxyles, incluant
diffrents groupes fonctionnels drivs (esters, glycosides, etc.). Ils sont rpandus parmi les
plantes alimentaires et sont rgulirement consomms par un grand nombre de personnes. Parmi
ces composs, les flavonodes reprsentent la classe de substances la plus tudie (Bossokpi,
2002). Il faut galement mentionner dautres classes de substances antioxydantes telles que les
tanins, les xanthones, les coumarines, les carotnes, les lignanes.
2.2.3.1 : Les flavonodes
Ce sont des pigments quasi universels des vgtaux. Presque toujours hydrosolubles, ils sont
responsables de la coloration des fleurs, des fruits, et parfois des feuilles (Bruneton, 1993).
Les flavonodes jouent un rle important dans le systme de dfense. Ils sont largement prsents
dans les fruits, les lgumes, le th et le vin. Les flavonodes peuvent fonctionner soit comme
chlateurs de mtaux (querctine), soit capteurs de radicaux hydroxyles, superoxydes, alkoyles et
peroxydes (Madhavi et al, 1996).
Parmi les flavonodes, citons la morine qui prsente non seulement une activit antioxydante
envers les radicaux peroxyles, mais galement une activit hpato-protectrice. Elle contribue
aussi linhibition de loxydation des lipoprotines de faible densit (LDL) qui sont impliques
dans lathrogense.
O
O
HO
HO
OH
OH
HO OH

Morine
2.2.3.2 : Les xanthones
Les proprits pharmacologiques reconnues des xanthones sont linhibition de la
monoamine oxydase, leur activit antimicrobienne, et leur cytotoxicit (Hostettmann, 1989).
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18

La manguifrine est une xanthone qui possde la proprit dinhibition envers la peroxydation
des lipides, ainsi que des proprits de capteur de radicaux libres contre les anions superoxydes
(Anderson et al, 1996).
O
O
OH
O
HO
HO Glc

Manguifrine

2.2.3.3 : Les coumarines
Les coumarines sont capables de prvenir la peroxydation des lipides membranaires et de
capter les radicaux hydroxyles, superoxydes et peroxyles. Les conditions structurales requises
pour lactivit antioxydante des coumarines sont similaires celles signales pour les flavonodes
(Anderson et al., 1996).

O O

Coumarine
2.2.3.4 : Les carotnodes
Les carotnodes sont des constituants membranaires des chloroplastes et forment un groupe de
pigments liposolubles. Ils contribuent la coloration jaune, orange ou rouge des fruits et lgumes.
Ils sont souvent retrouvs dans les plantes alimentaires.
Les carotnodes ragissent avec loxygne singulet, les radicaux peroxyles et alkoyles, en
capturant les radicaux libres (Krinskey, 1989).

2.2.3.5 : Les lignanes
Les lignanes les plus tudis du point de vue de leur activit antioxydante sont les drivs
bifuranyles des graines de ssame (Sesamum indicum DC., Pedaliaceae). La forte rsistance la
dtrioration oxydative de lhuile de ssame a suscit depuis plusieurs annes de nombreuses
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19

recherches sur les graines de ssame. Les lignanes diarylfuranofuraniques tels que le ssaminol,
ont dmontr des proprits antioxydantes expliquant ainsi la stabilit de cette huile.

O
O
O
O
O
O
OH

Ssaminol
2.2.3.6 : Les tanins
Les tanins sont des composs poly phnoliques ayant la proprit de transformer la peau en
matriau imputrescible : le cuir. Les tanins sont des composs prsentant des proprits
antioxydantes significatives. On les classe en deux grands groupes chez les vgtaux :
Les tanins hydrosolubles : sont des esters dun sucre (ou dun polyol apparent) et dun nombre
variable de molcules dacide phnol. Le sucre est soit lacide gallique, soit lacide
hexahydroxydiphnique (HHDP) et ses drivs doxydation : dshydrohexadiphnique, acide
chbulique (tanins ellagiques ou ellagitanins) ;

OH
HO OH
COOH

HO
HO OH
OH
CO
2
H CO
2
H
OH HO

Acide gallique Acide (S) hexahydroxydiphnique

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20

O
O
OH
OH
CO
2
H
CO
2
H
HO
2
C

O
O
O
OH
OH
O
HO
HO

Acide chbulique Acide ellagique

Les tanins condenss ou proanthocyanidols sont des polymres flavoniques. Ils ont t isols ou
identifis de tous les groupes vgtaux, Gymnospermes et Fougres compris (Madhavi et al,
1996 : Traor, 1999).
O
OH
HO
OH
R
1
OH
R
2

O
OH

Srie 2-R, 3-S :
R1 = R2 = H : Afzelchol ; Flavon - ol
R1 = OH, R2 = H: Catchol ;
R1 = R2 = OH : Gallocatchol

2.2.3.7 : Les stilbenodes
Les stilbenodes sont des composs phnoliques qui possdent deux noyaux benzniques spars
par un pont thane ou thne, cest dire les dibenzyls et les stilbnes, ainsi que les produits qui
leur sont biosynthtiquement rattachs : phnanthrne ; 9,10- diphnanthrne ; phnyl
dihydroisocoumarines.
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21

Les stilbnes, gnralement E, peuvent tre libres ou htrosidiques, parfois polymriques. Ils
sont prsents dans de nombreuses familles de vgtaux suprieurs.
Ces composs sont prsents chez toutes les espces du genre Combretum (Traor, 1999).

O
O
OH
HO

OH
CO
2
H
HO

Hydrangnol Acide lunularique

2.2.4 : Mthodes de tests antioxydants
2.2.4.1 : Test mesurant lactivit antioxydante contre le lysosome
Principe :
Dtection de lactivit antioxydante dune substance par oxydation des lysosomes par le 2,2-
azobis, 2 amidinopropane (Salvi, 1998).
2.2.4.2 : Rduction du radical 1,1diphenyl-2 picrylhydrazyle (DPPH)
Test sur CCM :
Principe :
Il sagit de dposer des extraits, fractions ou produits purs tester sur des plaques CCM de gel
de silice GF
254
en aluminium et dveloppes dans des systmes de solvants appropris.
Aprs schage, rvler les plaques CCM avec une solution mthanolique 2 mg/ml. Des activits
antiradicalaires apparaissent sous forme de spots de couleur jaune-blanc sur un fond violet
(Cavin, 1999).
Nous avons utilis ce test dans notre mthodologie pour rechercher lactivit antioxydante de nos
extraits.

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22

2.2.4.3 : Test mesurant lactivit antioxydante au moyen des carotnodes
Test sur CCM :
Principe :
Les plaques CCM sont prpares de la mme manire que pour le test du DPPH, puis rvles
avec une solution chloroformique 0,5 mg/ml de - carotne. La plaque CCM est ensuite
expose sous une lampe UV 254 nm jusqu dcoloration de la plaque. Les substances
antioxydantes apparaissent en jaune sur fond blanc. Il faut faire particulirement attention aux
substances dj colores en jaune, car elles peuvent donner de faux positifs (Cavin, 1999).

2.2.5 : Quelques plantes activit antioxydante reconnue (Keita, 2002)
Tableau II : QUELQUES PLANTES A ACTIVITE ANTIOXYDANTE IDENTIFIEES AU MALI

Noms scientifiques Familles Parties utilises

Entada africana Guill. et Perr. Mimosaceae Racines
Diospyros abyssinica ( Hiern ) F. White Ebenaceae Feuilles
Psorospermum guineense Hochr Hypericaceae Feuilles
Burkea africana Hook Ceasalpinaceae Ecorces du tronc
Cussonia barteri Seenm Araliaceae Racines
Lannea velutina Rich Anacardiaceae Feuilles, corces de racines

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23

2.3 : Les antifongiques
2.3.1 : Gnralits
La pathologie fongique a connu une progression au cours de ces dernires annes, compte
tenu de laugmentation des localisations mycosiques profondes, viscrales et septicmiques. Les
premires sont dues des champignons trs rpandus dans la nature, habituellement saprophytes,
ne devenant pathognes que dans certaines conditions : usage croissant des antibiotiques large
spectre ; corticothrapie ; thrapeutiques immunosuppressives. Chez les sujets infects par le
SIDA, on parle de mycoses iatrognes. Elles sont causes par des champignons dits opportunistes
qui sont soit lvuriformes (Candida, Cryptococcus), soit filamenteux (Aspergillus,
Cephalosporum).
Les secondes sont dues des champignons pathognes se dveloppant dans les pays chauds et qui
sont imports la faveur de lextension du tourisme, et des brassages des populations. Ces
mycoses exotiques sont lhistoplasmose, les blastomycoses et les myctomes. Si le traitement des
mycoses superficielles cutanes ou muqueuses ne prsente plus de relles difficults, il en est tout
autrement pour les mycoses profondes : celles-ci prsentent toujours un caractre de gravit et
sont rapidement volutives, car elles surviennent sur un terrain affaibli ou immunodprim.
Le dveloppement des antifongiques se heurte ainsi deux obstacles majeurs : une faible activit
- fongicide in vivo en regard des rsultats in vitro ;
- une mauvaise diffusion travers la paroi trs paisse des champignons du fait de sa composition
(chitine, phospholipides et strols). Ces constituants sont absents chez les bactries, ce qui
explique que la plupart des antibiotiques antibactriens ne sont pas des antifongiques. Les
substances antifongiques doivent de ce fait prsenter une hydrophobie leve.

2.3.2 : Classification des mycoses
2.3.2.1 : Mycoses exclusivement superficielles
Ce sont les mycoses tropisme exclusivement cutan. On distingue les dermatophytoses :
de la peau glabre : herpes circin ;
des plis (intertrigos) : eczma margin de Hebra (face intrieure des cuisses) : pied dathlte
des zones pilieuses : sycosis (barbe) ;
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24

des ongles : onyxis ou onychomycoses.
2.3.2.2 : Mycoses cutanomuqueuses
Elles sont essentiellement causes par les espces du genre Candida. On distingue :
des candidoses oropharynges et digestives : les atteintes buccales sont les plus importantes ;
elles se traduisent par un muguet souvent associ une glossite ;
des candidoses gnitales : il sagit de balanite chez lhomme et de vulvo-vaginite chez la femme.
Les facteurs favorisants sont nombreux : diabte, grossesse, contraception orale ;
des candidoses cutanes : chaleur et macration sont les conditions favorables lextension
cutane de ces mycoses.
2.3.2.3 : Mycoses profondes
Trois grands groupes de mycoses profondes peuvent tre distingus :
- les candidoses dissmines : lagent responsable est Candida albicans. Les localisations sont
nombreuses : oculaire, ostoarticulaire, cardiaque, urinaire, crbrale ou septicmique ;
- les aspergilloses : le champignon responsable est Aspergillus fumigatus qui possde des spores
ariennes pouvant tre inhales ;
- les cryptococcoses : lagent causal est Cryptococcus neoformans. La dissmination se fait
partir du foyer pulmonaire, par voie hmatogne et aboutit un envahissement mning : la
cryptococcose neuromninge.

2.3.3 : Les mdicaments antifongiques conventionnels
2.3.3.1 : La nystatine et lamphotricine B
Ces deux molcules possdent le mme sucre amine : la nycosamine qui est lie un long cycle
lactone contenant des groupements polyniques.

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25

O
O
H
3
C
H
3
C
H
3
C
HO
OH OH
OH
OH OH O
OH
O
H
C
O
O
H
O
O
NH
2
OH
H
3
C

Amphotricine B (Fungizone )

O
O
H
3
C
H
3
C
H
3
C
HO
OH OH
OH
OH OH
O
H
C
O
O
H
O
O
NH
2
OH
H
3
C
O
HO

Nystatine (Mycostatine )
Mode daction
Les polynes ont la fois une activit fongicide et fongistastique.
A pH acide, la nystatine et lamphotricine B sont plus rapidement absorbes en grande quantit
par les levures qu pH neutre ou alcalin. Le mode daction relve de divers mcanismes dont la
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26

formation de complexes insolubles avec les strols de la membrane cellulaire aboutissant des
troubles de la permabilit cellulaire et entranant la mort des cellules.
2.3.3.2 : La grisofulvine (Grisofuline)
Mode daction
Elle inhibe des doses fongicides la synthse des acides nucliques. Elle affecte la mitose
cellulaire (arrt de la mtaphase).
Son action fongistastique est responsable de laltration de la paroi fongique saccompagnant
danomalies de dveloppement des hyphes terminaux qui slargissent, spaississent et
senroulent.
OCH
3
H
3
CO
Cl
C
O
O CH
3
OCH
3

Grisofulvine (Grisofuline )

2.3.3.3: La flucytosine
Mode daction
Cest un anti-mtabolique de la cystine. Certains champignons ont une cytosine permase
ncessaire la traverse de leur membrane cellulaire et dautres bases pyrimidiques et puriques.
Une cytosine dsaminase transforme la flucytosine en fluoro 5 uridine, puis phosphoryle en
flucytosine triphosphate. Cette dernire, incorpore lARN, bloque la synthse des protines
indispensables la vie cellulaire fongique.
N
NH
2
F
H
O

Flucytosine (Ancotil )

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27

2.3.3.4 : Les drivs imidazols
Mode daction
Ils altrent la structure de la paroi fongique avec blocage de strodes et inhibition de la
synthse des protines.

N
N
Cl
Cl
Cl
H
C
CH
2
O
H
2
C
N
N
Cl
Cl

Cotrimazole Miconazole

2.3.4 : Mthodes des tests antifongiques
2.3.4.1 : Mthodes de diffusion
Principe
Dtermination de lactivit antifongique dun extrait sur un milieu de culture travers des
cylindres ou des disques contenant les solutions titrer. Il se forme des zones circulaires sur le
fond opaque du milieu de culture (Chevaley, 2000).

2.3.4.2 : Mthode bio autographique
Principe
Dtection de lactivit antifongique dune substance par inhibition dun milieu de culture de
Candida albicans sur une plaque CCM (Diallo, 2000).
Cest cette mthode que nous avons utilise dans notre mthodologie pour dterminer lactivit
antifongique de nos extraits.

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28

2.3.5 : Quelques plantes activit antifongiques
Tableau III: PLANTES A ACTIVITE ANTIFONGIQUE (Diallo, 2000)


Diospyros abyssinica Hiern Ebenaceae Racines
Glinus oppositifolius L. ADC Aizoaceae Parties ariennes
Parkia biglobosa K. Mimosaceae Ecorce du tronc
Swartzia madagascariensis D. Leguminosae Racines
Ximenia americana Min. Oleraceae Racines

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29

2.4 : Les infections bactriennes
2.4.1 : Rappel sur les bactries
Une bactrie est un microbe form dune seule cellule, visible au microscope, appartenant
une zone de transition entre le rgne animal et le rgne vgtal.
Comme toute cellule, les bactries sont constitues dun noyau, isol ou diffus, un protoplasme
contenant des granulations et des vacuoles, une paroi parfois dune capsule.
Certaines bactries sont mobiles grce des cils vibratiles. Selon leur mode de nutrition et leur
comportement vis--vis de loxygne, les bactries sont classes en arobies et en anarobies.
Les bactries se reproduisent selon deux modes :
- la division simple ou scissiparit ;
- la sporulation, la spore reprsentant la forme de rsistance et de dissmination du germe.
Pour crotre, les bactries doivent trouver dans le milieu extrieur des conditions physico-
chimiques favorables qui leur sont ncessaires et les aliments couvrant leurs besoins nergtiques
lmentaires et spcifiques. Sur le plan pratique, ces besoins sont satisfaits dans des milieux
labors par lhomme en vue dtudier les bactries et sont appels de ce fait, milieux de culture.

2.4.2 : Exemple de classification des bactries dintrt mdical
2.4.2.1 : Bactries en forme de sphre : les coccies
2.4.2.1.1 : Coccies Gram positif
Nous avons les genres Staphylococcus, Streptococcus, Micrococcus, Pneumococcus.
Enterococcus.
2.4.2.1.2 : Coccies Gram ngatif
Nous avons le genre Neisseria.
2.4.2.2 : Bactries en forme de btonnet : les bacilles
2.4.2.2.1 : Bacilles Gram positif
Nous avons les genres Listeria, Erysipelothria, Bacillus, Cynetobacter, Actynomyces.

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30

2.4.2.2.2 : Bacilles Gram ngatif
Nous avons les genres Enterobacter, Pasteurella, Haemophilus, Bordetella, Brucella,
Francisella, Pseudomonas, Acinetobacter, Vibrion, Campylobacter, Moraxella, Aeromonas,
Escerichia, Klebsiella.
2.4.2.2.3 : Bacilles acido-alcoolo rsistants (BAAR)
Ici, nous retrouvons le bacille de la tuberculose (Mycobacterium tuberculosis) et celui de la lpre
(Mycobacterium leprae).
2.4.2.3 : Bactries en forme de spirale : les spirochtes
Nous avons les genres Treponema, Leptospira, Borrella, Spirilum.
2.4.2.4 : Flore bactrienne anarobie
2.4.2.4.1 : Gram positif
Nous avons les genres Clostridium, Peptococcus, Peptostreptococcus, Propionobacterium,
Bifidobacterium.
2.4.2.4.2 : Gram ngatif
Nous avons les genres Veillonella, Fusobacterium, Bacteroides.

2.4.3 : Les infections bactriennes
Une infection bactrienne est un ensemble de troubles qui rsultent de la pntration dune
bactrie pathogne dans un organisme.
Elle peut tre :
- locale, lorsquelle se manifeste uniquement au niveau o les germes ont pntr ;
- gnrale, lorsquun germe franchit les barrires opposes par lorganisme son entre
(peau, muqueuses) ou au niveau des ganglions, il pntre dans le sang et se dissmine par celui-
ci dans tout lorganisme ;
- focale : cest linfection en foyer dans les tissus ou organes o les germes sont apports par la
circulation sanguine.

2.4.4 : Traitement des infections bactriennes par les antibiotiques
Un antibiotique est un compos chimique labor par un organisme vivant ou produit par
synthse, coefficient chimiothrapeutique lev dont lactivit thrapeutique se manifeste
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31

faible dose, dune manire spcifique, par linhibition de certains processus vitaux, lgard des
virus, des micro-organismes ou mme de certains tres pluricellulaires.

2.4.4.1 : Mcanisme daction des antibiotiques
Les antibiotiques agissent sur les micro-organismes selon plusieurs mcanismes dont certains
sont connus :
- action sur la paroi bactrienne : la synthse des mucopeptides de la paroi bactrienne est
perturbe par linhibition de certains enzymes : peptido-glycane synthtase, transpeptidase.
Les -lactamines, la cyclosrine, la bacitracine, la vancomycine, la fosfomycine, agissent par ce
mcanisme, de prfrence sur les bactries jeunes dont la paroi est en cours ddification. Les
bactries Gram positif dont la paroi est riche en mucopeptides sont les plus sensibles ;
- action sur la membrane cytoplasmique et la membrane extrieure des bactries Gram ngatif :
certains antibiotiques se fixent sur les phospholipides de la membrane cytoplasmique, entranant
une altration de la permabilit de cette membrane. Ils oprent comme des agents tensioactifs
cationiques. Les constituants cellulaires schappent du cytoplasme bactrien, ce qui provoque la
mort cellulaire. La gramicidine et la tyrocidine agissent par ce mcanisme ;
- action sur la rplication de lADN : certains antibiotiques perturbent la rplication de lADN.
Il sagit des quinolines ;
- action sur la traduction de lARN m : lARN m et lARN t sont les cibles des antibiotiques et
les mcanismes de traduction de lARN m sont troubls. Certains antibiotiques se fixent sur la
sous unit ribosomale 30 S, dautres interviennent de diverses manires sur la sous unit
ribosomale 50 S. Nous retrouvons ici les aminosides, les macrolides, les lincosamides, les
streptogramines, les cyclines, les phnicols, lacide fusidique.

2.4.4.2 : Structure de quelques antibiotiques antibactriens
2.4.4.2.1. Les -lactamines
CH
2
CO NH
N
CH
3
CH
3
S
COOH O

Pnicilline G
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32

2.4.4.2.2 : Les fosfomycines
O
H
3
C P
O
OH
OH

Fosfomycine
2.4.4.2.3: Les aminosides
OH
NH
2
OH
NH
2
O
O
O
O
OH
OH
CH
3
NHCH
3
NH
2
OH
CH
2
NH
2

Gentamicine

2.4.4.2.4 : Les macrolides lincosamides Synergistines (MLS)
N
CH
3
C
3
H
7
C
O
HN CH
CHOH
CH
3
O
SCH
3
OH
OH
OH

Lincomycine
2.4.4.2.5: Les ttracyclines
OH
C
O
NH
2
O OH O OH
OH NH
2
OH

Ttracycline
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33

2.4.4.2.6 : Les phnicols

O
2
N
H
C C
H
OH
NH
C
O
CHCl
2
CH
2
OH

Chloramphnicol
2.4.4.2.7: Lacide fusidique
HO
CH
3
H
CH
3
HO
CH
3
COOH
H
3
C
CH
3
OCOCH
3
CH
3
H

Acide fusidique

2.4.4.2.8 : Les quinolones
N
F
N N
C
O
OH
C
2
H
5
H
3
C

Pfloxacine

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34

2.4.4.2.9 : Les inhibiteurs de la synthse des folates

H
3
CO
H
3
CO
OCH
3
N
N
NH
2
NH
2

Trimthoprime

2.4.5 : Sensibilit et rsistance aux antibiotiques
Il existe la sensibilit du germe in vitro et celle in vivo. Certains antibiotiques ont une
pharmacocintique ne leur permettant pas datteindre les germes dans les foyers infectieux de
certains organes ou tissus. Il est donc ncessaire de sinformer sur les mcanismes de rsorption,
de diffusion, de transformation et dlimination des antibiotiques dans lorganisme de lhte. Peu
dantibiotiques sont capables de traverser la barrire hmo-meninge et donc dtre utiles dans le
traitement des mningites.
En recherchant les germes sensibles, il est possible dtablir le spectre dactivit de lantibiotique.
La rsistance aux antibiotiques peut tre spontane ou acquise.
La rsistance acquise peut tre limite un seul antibiotique ou concerner plusieurs dentre eux
(rsistance croise). La rsistance est dite croise pour une famille dantibiotiques.
La rsistance acquise survient en gnral par mutation chromosomique ou par transfert extra-
chromosomique (rsistance plasmidique).
Notons enfin que les antibiotiques occupent en ville comme lhpital, une place prpondrante,
non seulement dans les dpenses en mdicaments, mais surtout dans larsenal thrapeutique.
De cet intrt dcoule une recherche scientifique importante qui conduit aujourdhui
lexprimentation et la commercialisation de nouvelles molcules.
Pour une conomie de sant et une bonne prise en charge des infections bactriennes, le
prescripteur et le pharmacien doivent veiller ce que les antibiotiques soient utiliss bon escient
afin dviter lapparition rapide de rsistances, ainsi que les maladies nosocomiales.

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35

2.4.6 : Quelques plantes activit antibactrienne
Tableau IV : QUELQUES PLANTES A ACTIVITE ANTIBACTERIENNE (Ekoumou, 2003)


Allium sativum (L). Gaertn Liliaceae Bulbes
Aloe vera (L). Burn. F Liliaceae Feuilles
Carica papaya L. Caricaceae Feuilles
Manguifera indica L. Anacardiaceae Feuilles
Tamarindus indica L. Leguminoseae Fruits
Psidium guajava L. Myrtaceae Feuilles

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36

2.5 : Les anti-inflammatoires
2.5.1 : Dfinition de linflammation
Linflammation est un ensemble de phnomnes ractionnels se produisant au point irrit par
un agent pathogne. Elle se traduit ordinairement par quatre symptmes cardinaux : chaleur,
rougeur, douleur et tumfaction (quadrilatre de Celse).
Linflammation peut tre aussi dfinie comme un processus gnral ractionnel de tout ou partie
de lorganisme une agression, quelle soit chimique, physique, bactrienne, virale ou
parasitaire.
Elle peut tre aigu ou chronique. Ce processus de dfense de lorganisme peut parfois voluer de
faon anormale et dclencher des maladies auxquelles sont opposes des mdicaments dits anti-
inflammatoires pouvant tre conventionnels ou traditionnels.
Linflammation ainsi dfinie se droule en trois phases :
une premire phase qui consiste en une augmentation de la permabilit capillaire entranant
dme et gonflement. Cest au cours de cette phase que les substances responsables de la douleur
sont libres ;
une deuxime phase caractrise par une prdominance des polynuclaires dans linfiltration
cellulaire puis il ya diminution de leur nombre pour faire place des cellules mononucles ;
une troisime phase dite de rparation dans laquelle le fibroblaste est la cellule dominante.
Les facteurs dclenchant une inflammation sont multiples et varis : chaleur, lumire,
traumatisme, toxique, etc.
Beaucoup dlments cellulaires interviennent dans linflammation :
- les polynuclaires neutrophiles ;
- les polynuclaires osinophiles ;
- les lymphocytes ;
- les plasmocytes.

2.5.2 : Effets locaux et gnraux de linflammation
Un foyer inflammatoire, mme localis, est susceptible davoir une rpercussion sur lensemble
de lorganisme. Lorsquil ya inflammation, surtout sil sagit dune raction lie un processus
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37

infectieux, le taux de leucocytes sanguins augmente. Ce phnomne est d au dversement dans
le sang des leucocytes jeunes de la moelle et une acclration de la maturation des mylocytes
mdullaires. Il en rsulte une augmentation du taux des polynuclaires jeunes aux noyaux peu
segments dans le sang.
Les mcanismes rglant les modifications des leucocytes sanguins ne sont que partiellement
connus. En effet, la majorit des infections saccompagnent dune augmentation du taux des
leucocytes ; il ya nanmoins des cas o le taux de leucocytes sanguins diminue (leucopnie) :
cest ce que lon observe dans la fivre typhode.

2.5.3 : Les anti-inflammatoires conventionnels
2.5.3.1 : Historique
Ds lpoque dHippocrate, il ya environ 2400 ans, les proprits analgsiques et anti-
inflammatoires de divers extraits vgtaux contenant des salicyls taient connues et mises
profit chez lhomme. En particulier, taient utilises des prparations partir de la saule
(Salix alba L.; Salicaceae). Lisolement de lacide salicylique et lapprofondissement des
connaissances pharmacologiques sur les salicyls datent du 19
me
sicle.
Le dveloppement commercial des salicyls devient important avec la synthse chimique, par
Felix Hoffmann en 1899, sous le nom de lacide actylsalycilique (Aspirine).
Il a fallu attendre les annes 1950 pour voir apparatre sur le march la phnylbutazone, suivi de
lindomtacine quelques annes plutard.
En effet, en 1949, les proprits anti-inflammatoires de la cortisone taient tablies, stimulant
ainsi la recherche dautres anti-inflammatoires non strodiens (AINS).
2.5.3.2 : Les anti-inflammatoires non strodiens (AINS)
Les AINS sont dfinis comme tant la classe de mdicaments qui possdent les mmes
proprits pharmacologiques que lacide actylsalicylique (Aspirine) : analgsique,
antipyrtique, anti-inflammatoire.
Les AINS ont une action symptomatique rapide. Ils permettent de rduire les signes locaux dune
raction inflammatoire : douleur, rougeur, chaleur, dme et impotence fonctionnelle qui
peuvent en rsulter.

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38

Mcanisme daction
Les AINS inhibent principalement le mtabolisme de lacide arachidonique par la voie de la
cyclo-oxygnase. Cependant dautres effets doivent tre voqus, en particulier la diminution, de
la migration cellulaire, du mtabolisme oxydatif, ainsi que des actions sur divers constituants du
tissu conjonctif (protoglycane, glycoprotine, collagne).
Interactions mdicamenteuses
Dplacement des anticoagulants de leurs liaisons protiques ; antagonisme des diurtiques et
antihypertenseurs ; augmentation de la toxicit sanguine du lithium et du mthotrxate ;
potentialisation des effets des sulfamides hypoglycmiants.
Effets secondaires
Toxicit gastro-intestinale ; effets rnaux ; action anti-agrgante plaquettaire ; retard
laccouchement ; asthme induit ; raction allergique.
Contre-indications
Allergie connue aux AINS ; traitement anticoagulant ; ulcre gastro-duodnal ; grossesse et
allaitement ; insuffisance rnale ou hpatique.

Structures de quelques AINS
Driv salicyl :
COOH
O C CH
3
O

Acide actylsalicylique (Aspirine)
Acide fnamique :
CH
2
COOH
NH
Cl Cl

N
COOH
NH
CF
3

Diclofenac (Voltarne) Acide niflumique (Nifluril )
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39

2.5.3.3 : Les anti-inflammatoires strodiens (AIS)
Les AIS ou glucocorticodes sont des mdicaments utiliss contre linflammation, drivs
dhormones naturelles scrtes par le cortex surrnale ou hmisynthtiss partir dextraits
animaux ou vgtaux
Lutilisation des glucocorticodes a dj une longue histoire depuis que Hench a administr la
cortisone 21 patients atteints de polyarthrite rhumatode en 1948.
Lon sait maintenant mieux apprcier les risques de cette thrapie et lon possde des composs
plus actifs et moins dangereux (Coyen, 1981).
Mcanisme daction des AIS
Les glucocorticodes sont utiliss soit titre substitutif pour suppler une dfense surrnalienne,
soit dose pharmacologique o les proprits anti-inflammatoires immunosuppressives sont
recherches. Les glucocorticodes sont des strodes et comme toutes les molcules de cette
famille, ils agissent en se liant des rcepteurs ou en partie lalbumine. La prsence dun
hydroxyle en fonction 11 est essentielle pour lactivit glucocorticode. Les glucocorticodes
sont peu solubles dans leau. Ils inhibent fortement la raction inflammatoire prcoce et ses
manifestations cliniques connues do leur grand succs en thrapeutique (Neuwinger, 1996).
Effets secondaires des AIS
Troubles mtaboliques (mtabolisme hydro-lectrolytique, mtabolisme des lipides, des glucides,
des protides) ; troubles digestifs : ulcre gastro-duodnal ; sensibilit aux infections.

Structures de quelques AIS :

O
HO
F
C O
CH
2
OH
OH
CH
3

O
HO
C
O
CH
2
OH

Dexamthasone Prednisone
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40

2.5.4: Mthodes de tests anti-inflammatoires
dme la carraghnine sur rats surrnalectomiss
Principe
Contrler si laction anti-inflammatoire des substances non strodiques est bien due une
activit propre et non une scrtion de corticodes partir des surrnales.
dme par traumatisme exprimental selon Riester et Jaques
Principe
Rduire un dme de patte par traumatisme exprimental, par les anti-inflammatoires comme
prcdemment indiqu.
Tourniquets poditifs
Principe
Rduire ldme provoqu chez le rat, par ligature de larticulation tibio-tarsienne, par les anti-
inflammatoires.
Abcs la carraghnine
Principe
Rduire un abcs provoqu chez la souris, par injection sous- cutane de la carraghnine, par
des substances anti-inflammatoires.
Cest cette technique que nous avons utilise dans notre mthodologie pour tester lactivit anti-
inflammatoire de nos extraits.
Arthrite de Freud
Principe
Rduire larthrite chronique provoque au niveau de la patte du rat, par injection de
Mycobacterium butyricum par certaines substances anti-inflammatoires.
Technique de leffusion pleurale
Principe
Rduire lpanchement pleural, provoqu par linjection intra-pritonale dun agent irritant,
laide de substances anti-inflammatoires.

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41

Linflammation locale de loreille du rat
Principe
Linflammation de loreille du rat, provoque par lapplication locale dhuile de croton peut
tre rduite par lapplication de substances anti-inflammatoires.

2.5.5 : Quelques plantes activit anti-inflammatoires (Bossokpi, 2002)
Tableau V: QUELQUES PLANTES A ACTIVITE ANTI-INFLAMMATOIRE


Annona senegalensis Pers. Annonaceae Racines et Feuilles
Cola nitida (Vent), Shlott. Sterculiaceae Coques
Biophytum petersianum Klotz Oxililidaceae Plante entire
Combretum nigricans Lepr. Combretaceae Feuilles
Datura inoxia Mill Solanaceae Feuilles
Securidaca longepedonculata Fres. Polygalaceae Racines
Tamarindus indica L. Ceasalpinaceae Rameaux feuills

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42

2.6 : Le paludisme
Encore appel malaria, le paludisme est une affection parasitaire due laction pathogne dun
protozoaire hmatozoaire du genre Plasmodium.
2.6.1 : Donnes statistiques et pidmiologiques (Institut Pasteur, 2004)
Le paludisme tue un enfant toutes les 30 secondes en Afrique et entre 1 et 3 millions de
personnes par an, selon les estimations de l'OMS. Deux milliards d'individus, soit 40% de la
population mondiale, sont exposs et on estime 500 millions le nombre de cas cliniques
survenant chaque anne. Les moyens de lutte existants sont les mdicaments antipaludens (dont
les plus connus sont la chloroquine ou la quinine, lartmisinine et ses drivs) et la lutte contre
les moustiques vecteurs du parasite Plasmodium. Mais la situation est d'autant plus proccupante
que depuis plusieurs annes, les parasites dveloppent de plus en plus de rsistances aux
mdicaments, et que les moustiques dveloppent des rsistances aux insecticides.
Le paludisme touche une centaine de pays dans le monde, particulirement les zones tropicales
dfavorises d'Afrique, d'Asie et d'Amrique Latine. L'Afrique est, de loin, le continent le plus
touch avec 90% des cas de paludisme recenss dans ses zones tropicales. Des pidmies peuvent
survenir lors de mouvements de populations peu exposes au paludisme vers des zones
hautement endmiques.
Quatre espces de parasites du genre Plasmodium sont responsables de la maladie chez l'homme :
- Plasmodium falciparum est l'espce la plus pathogne et responsable des cas mortels. Elle est
prsente dans les zones tropicales d'Afrique, d'Amrique Latine et d'Asie, et elle est dominante en
Afrique ;
- Plasmodium vivax co-existe avec P. falciparum dans de nombreuses parties du monde, et est
prsente dans certaines rgions tempres ;
- Plasmodium ovale, principalement trouve en Afrique de l'ouest, ne tue pas mais peut entraner
des rechutes 4 5 ans aprs la primo infection ;
- Plasmodium malariae a une distribution mondiale mais trs ingale. Elle n'est pas meurtrire
mais peut entraner des rechutes jusqu' 20 ans aprs la primo infection.

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43

2.6.2 : Transmission
Le paludisme est transmis l'homme par la piqre d'un moustique femelle, du genre Anopheles,
elle-mme infecte aprs avoir piqu un homme impalud: la femelle, en prenant le repas de sang
ncessaire sa ponte, injecte le parasite son hte.
La transmission de Plasmodium d'un homme un autre se fait donc par l'intermdiaire du
moustique, le principal en cause tant Anopheles gambiae. Il existe un seul cas de contamination
inter-humaine directe, lorsqu'une femme enceinte infecte contamine son enfant par voie
transplacentaire.

2.6.3 : Cycle du parasite
Le cycle de Plasmodium est complexe et comporte deux tapes essentielles : un cycle asexu
chez l'homme, et un cycle sexu chez le moustique.
L'anophle femelle injecte l'homme le parasite sous forme de "sporozote". Celui-ci migre
rapidement, via la circulation sanguine, vers le foie. Il pntre dans la cellule hpatique, o il se
divise trs activement pour donner naissance, en quelques jours, des dizaines de milliers de
nouveaux parasites : les "mrozotes". La cellule du foie clate en librant ces parasites dans le
sang: l, ils pntrent l'intrieur des globules rouges et se multiplient. Lorsque ces derniers
clatent leur tour, les mrozotes librs dans la circulation sanguine infectent de nouveaux
globules rouges.
A chaque cycle de rplication des mrozotes, des parasites sexus mles et femelles
(gamtocytes) sont forms l'intrieur des globules rouges. Lorsqu'un moustique pique une
personne infecte, il ingre ces gamtocytes, qui se transforment en gamtes. Leur fcondation
engendre un zygote, qui se diffrencie en oocyste dans le tube digestif du moustique. Les
oocystes produisent des sporozotes, qui migrent vers les glandes salivaires du moustique. Les
rechutes tardives de paludisme observes lors d'infections par P.vivax et P. ovale sont dues la
possibilit pour ces espces de subsister sous une forme latente ("hypnozote") dans la cellule
hpatique de l'homme.

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44

Figure n2: SCHEMA DU CYCLE PARASITIRE DE Plasmodium falciparum (Institut Pasteur, 2004)

2.6.4 : Symptomatologie
Les manifestations cliniques du paludisme sont trs diverses. Le paludisme dbute par une
fivre 8 30 jours aprs l'infection, qui peut s'accompagner - ou non - de maux de tte, de
douleurs musculaires, d'un affaiblissement, de vomissements, de diarrhes, de toux. Des cycles
typiques alternant fivre, tremblements avec sueurs froides et transpiration intense, peuvent alors
survenir : c'est " l'accs palustre". La priodicit de ces cycles dpend de l'espce de parasite en
cause, et concide avec la multiplication des parasites et l'clatement des globules rouges, qui
conduit galement l'anmie. Le paludisme P. falciparum peut tre fatal s'il n'est pas trait.
Dans certains cas, les globules rouges infects peuvent bloquer les vaisseaux sanguins irriguant le
cerveau : c'est le neuropaludisme, souvent mortel. Dans les rgions o le paludisme est hautement
endmique, les personnes sont tellement souvent infectes qu'elles finissent par tre
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45

naturellement immunises (" immunit acquise "), gnralement aprs de nombreuses annes
d'infection chronique, et sont alors des porteurs plus ou moins asymptomatiques du parasite.

2.6.5 : Diagnostic biologique
Il est tabli par lexamen microscopique dune goutte de sang aprs coloration au may graw
giemsa, qui colore le cytoplasme du parasite en bleu et son noyau en rouge.

2.6.6 : Prvention et traitements
Plusieurs molcules antipaludiques peuvent tre utilises en prophylaxie (prvention lors d'un
voyage en zone endmique) ou en thrapeutique. Les plus connues sont la chloroquine ou la
quinine. D'autres, comme la mfloquine, sont utilises dans les rgions o vivent des parasites
chloroquinorsistants.
Il est dangereux de partir en zone de transmission intense de paludisme sans prise rgulire d'un
traitement prventif, en particulier pour les enfants et les femmes enceintes qui ont un risque
accru d'accs grave. Le traitement prventif doit tre prescrit par un mdecin. Il tient compte des
zones visites (risque, existence ou non de rsistance), de la dure du voyage et aussi de la
personne : l'ge, les antcdents pathologiques, une intolrance aux antipaludens, une possible
interaction mdicamenteuse, une grossesse.
Mais les mdicaments anti-paludens ne garantissent pas une protection absolue contre l'infection
et il est aussi important de se protger des piqres de moustiques (moustiquaires, produits anti-
moustiques). Aucun moyen prventif n'assure lui seul une protection totale et, mme si un
traitement adapt a t bien pris, il est possible de faire une crise de paludisme, parfois
d'apparition tardive. Les premiers symptmes sont souvent peu alarmants mais le paludisme peut
tre mortel si son traitement est retard. Aussi, en cas de fivre mme lgre, de nauses, de
maux de tte, de courbatures ou de fatigue au cours du sjour ou dans les mois qui suivent le
retour, un mdecin doit tre consult en urgence. La prise d'un chantillon de sang est ncessaire
pour confirmer le diagnostic.
Une des difficults majeures dans la mise au point d'un vaccin contre Plasmodium est, qu'au
cours de sa vie, le parasite passe successivement par plusieurs stades avec des phases d'intense
multiplication asexue chez l'homme (dans les cellules du foie -phase hpatique - puis dans les
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46

globules rouges du sang - phase rythrocytaire) et une phase de reproduction sexue suivie de
multiplication, chez l'insecte. Chaque stade se termine par la libration d'un parasite d'une forme
diffrente, donc porteur d'antignes diffrents et induisant des rponses immunitaires diffrentes,
ce qui complique la recherche d'un vaccin.

2.6.7 : Mdicaments antipaludens (Togola, 2002)
2.6.7.1 : Quinine et drivs
La quinine est un alcalode obtenu partir des corces de Quinquina. Elle exerce une action
schizonticide sanguine rapide sur les diffrentes espces plasmodiales. Son administration
prolonge permet une gurison du paludisme Plasmodium falciparum mais rarement de
linfection Plasmodium vivax.
La quinidine est un diasteroisomre de la quinine avec des proprits antimalariques
similaires. Elle nest pas recommande pour le traitement de routine du paludisme simple, mais
plutt pour celui compliqu et par voie parentrale.
La chloroquine est une amino 4 quinoline trs active sur les formes asexues des quatre
espces de Plasmodium, sauf dans les rgions o existent des souches pharmacorsistantes.
Le chef de file des amino 9 quinolines est la primaquine qui est trs active sur les gamtocytes
de toutes les espces de Plasmodium, ainsi que sur les formes exo rythrocytaires latentes.

N
H
3
CO
CH
HO
N
CH
2
CH
2
CH CH
2

N
Cl
NH
H
C CH
2
CH
3
CH
2
CH
2 N
C
2
H
5
C
2
H
5

Quinine Chloroquine
N
NH
H
C CH
2
CH
3
CH
2
CH
2 NH
2
OCH
3

N
Cl
NH C
H
CH
3
CH
2 CH
2 CH
2 N
C
2
H
5
C
2
H
5

Primaquine Mpacrine
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47

2.6.7.2 : Artmisinine et drivs
Lartmisinine est obtenue partir des feuilles de Artemisia annua L. (Asteraceae).
Lartmether est un driv hmisynthtique de lartmisinine obtenu par rduction de loxygne
fix sur le carbone en position 12, ensuite une estrification du groupement OH form, pour
aboutir deux isomres : et .
Lartsunate est obtenu par rduction du groupement lactone de lartmisinine.
Lartmisinine et ses drivs sont des puissants schizonticides, notamment avec les souches de
Plasmodium falciparum chimiorsistantes.
O
O
O
O H
3
C
CH
3
CH
3
O

O
O
O
O H
3
C
CH
3
CH
3
O CO CH
2 CH
2 COONa

O
O
O
O H
3
C
CH
3
CH
3
OCH
3

Artmisinine Artsunate Artmether

2.6.7.3 : Le malarial
Le malarial est un mdicament traditionnel amlior prpar partir de trois plantes :
- 62% de feuilles de Cassia occidentalis L. (Ceasalpinaceae) ;
- 32% de feuilles de Lippia chevalieri Moldenke (Verbenaceae) ;
- 6% de capitules de Spilantes oleraceae Jacq (Asteraceae).
Lactivit antimalarique du malarial a t value sur la prolifration de Plasmodium
falciparum ligne FCC32 (chloroquinosensible) ; les activits du dcoct du malarial (CI
50
=
0,6mg/ml) et de Cassia occidentalis taient similaires, les deux autres cocts (Lippia chevalieri
et Spilantes oleraceae) ont t plus actifs avec respectivement 0,3 et 0,18 mg/ml.

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48

2.6.8 : Quelques plantes activit antipaludique reconnue (Togola,2002)
Tableau VI: QUELQUES PLANTES A ACTIVITE ANTIPALUDIQUES


Cassia occidentalis L. Ceasalpinaceae Feuilles
Lippia chevalieri Moldenke Verbenaceae Feuilles
Khaya senegalensis Desr. Meliaceae Ecorces de tronc
Spilantes oleraceae Jacq. Asteraceae Capitules
Nauclea latidifolia Sm. Rubiaceae Ecorces de tronc

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49

CHAPTRE 3 CHAPTRE 3 CHAPTRE 3 CHAPTRE 3
TRAVAUX PERSONNELS TRAVAUX PERSONNELS TRAVAUX PERSONNELS TRAVAUX PERSONNELS
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50

3.1 : Mthodologie
3.1.1 : Etudes phytochimiques
3.1.1.1 : Matriel vgtal
Le matriel vgtal a t constitu par les corces de racines et celles de tronc de Combretum
glutinosum, collectes respectivement le 03 et 04 janvier 2004, Siby (Rgion de Koulikoro,
Rpublique du Mali) par lherboriste Bakary Traor.
Le schage des drogues a t ralis sur une claie, lombre, et la temprature ambiante du
laboratoire du DMT pendant une semaine. Pour broyer les drogues sches, nous avons utilis un
broyeur Resch type SM2000 OSI / 1430 pm. Nous avons obtenu des poudres marron et jauntre
trs fines respectivement pour les corces de racines et celles de tronc. Nous avons utilis ces
poudres pour nos futures investigations phytochimiques et pharmacologiques. Un spcimen est
disponible lherbier du DMT.

3.1.1.2 : Identification de la matire premire
3.1.1.2.1 : Caractres morphologiques
Les racines de C. glutinosum sont droites, rugueuses et de couleur jaune-clair.
Le tronc de C. glutinosum est rugueux, de couleur jaune et recouvert dune corce rougetre.
3.1.1.2.2 : Caractres organoleptiques
La poudre des corces de racines de C. glutinosum est de couleur marron, dodeur faible et de
saveur astringente.
La poudre des corces de tronc de C. glutinosum est de couleur jauntre, dodeur faible et de
saveur astringente.

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3.1.1.3 Ractions de caractrisation
3.1.1.3.1 : Ractions en tubes
3.1.1.3.1.1 : Alcalodes
Solution analyser
Nous avons introduit 10 g de poudre vgtale sche dans un erlenmeyer de 250 ml, puis
nous avons ajout 50 ml de H
2
SO
4
10 %. Aprs agitation, nous avons laiss macrer 24 heures
la temprature du laboratoire du DMT puis filtr sur papier filtre. Ensuite, nous avons complt
le filtrat 50 ml avec de leau distille.
Caractrisation
Dans deux tubes essai nous avons introduit 1 ml de filtrat et ajout 5 gouttes de ractif de
Mayer dans le premier tube et 5 gouttes de ractif de Dragendorff dans le second. Sil apparat un
prcipit, la prsence dalcalodes est confirme par leur extraction.
3.1.1.3.1.2 : Substances poly phnoliques
Solution analyser : infus 5 %
Nous avons projet 5 g de poudre dans 100 ml deau bouillante contenue dans un erlenmeyer de
250 ml. Aprs infusion de 15 mn, nous avons filtr et complt le filtrat 100 ml avec de leau
distille.
Caractrisation
Tanins
Dans un tube essai, nous avons introduit 5 ml dinfus 5 % et ajout 1 ml de solution aqueuse
de FeCl
3
1 %. En prsence de tanin, il se dveloppe une coloration verdtre ou bleu-noirtre.
- tanins catchiques
A 5 ml dinfus 5%, nous avons ajout 5 ml dHCl concentr. Lensemble a t port
bullition pendant 15 mn puis filtr sur papier filtre. En prsence de tanins catchiques, il se
forme un prcipit rouge soluble dans lalcool iso amylique.
- tanins galliques : raction de Stiasny
A 30 ml dinfus 5 %, nous avons ajout 15 ml de ractif de Stiasny (10 ml de formol 40 % et
5 ml d HCl concentr), puis nous avons chauff au bain-marie 90 C pendant 15 mn environ.
Aprs filtration, le filtrat a t satur par 5 g dactate de sodium pulvris. Nous avons ensuite
Thse de pharmacie


52

ajout 1 ml goutte goutte dune solution de FeCl
3
1 %. Lobtention dun prcipit montre la
prsence de tanins galliques.
Filtrer et saturer 10 ml du filtrat dactate de sodium. Ajouter quelques gouttes de FeCl
3
1 %.
Le dveloppement dune teinte bleu-noir indique la prsence de tanins galliques non prcipits
par le ractif de Stiasny.
Flavonodes
A linfus 5 % prsentant une coloration plus ou moins fonce, nous avons ajout un acide (5
ml de H
2
SO
4
10 %) puis une base (NH
4
OH). Si la coloration saccentue par acidification, puis
vire au bleu-violac en milieu basique, cela permet de conclure la prsence danthocyanes.
- Raction la cyanidine : nous avons introduit dans un tube essai 5 ml dinfus 5 %, et
ajout 5 ml dalcool chlorhydrique (thanol 95 %, eau distille, HCl concentr parties gales
en volumes) ; puis quelques copeaux de magnsium et 1 ml dalcool iso amylique.
Lapparition dune coloration rose orange (flavones) ou rose violace (flavonones) ou rouge
(flavonols, flavononols) rassemble dans la couche surnageante dalcool iso amylique indique la
prsence dun flavonode libre (gnines). Les colorations sont moins intenses avec les htrosides
flavoniques.
La raction est ngative avec les chalcones, les dihydrochalcones, les aurones, les catchines et
les iso flavones.
- Leucoanthocyanes : nous avons effectu la raction la cyanidine sans ajouter les copeaux de
magnsium et chauff au bain-marie pendant 15 mn. En prsence de leucoanthocyanes, il se
dveloppe une coloration rouge cerise ou violace.
Les catchols donnent une teinte brun-rouge.
3.1.1.3.1.3. : Drivs anthracniques
Anthraquinones libres
A 1 g de poudre, nous avons ajout 10 ml de chloroforme et chauff pendant 3 mn au bain-marie.
Nous avons ensuite filtr chaud et complt 10 ml. A 1 ml de lextrait chloroformique obtenu,
nous avons ajout 1 ml de NH
4
OH dilu et agit. La coloration plus ou moins rouge indique la
prsence danthraquinones libres.

Thse de pharmacie


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Anthraquinones combines
- Les O-htrosides : A partir du rsidu de la drogue puise par le chloroforme, nous avons
prpar un hydrolysat auquel il a t ajout 10 ml deau, 1 ml d HCl concentr puis maintenu le
tube essai au bain-marie bouillant pendant 15 mn. 5 ml de lhydrolysat sont agits avec 5 ml de
chloroforme. A la phase organique, nous avons ajout 1 ml de NH
4
OH dilu. ; la prsence
danthraquinones est rvle par la coloration rouge plus ou moins fonce.
La raction peut tre plus pousse par addition 5 ml de lhydrolysat 3 4 gouttes de FeCl
3
10
%, puis agitation avec 5 ml de chloroforme. A la phase chloroformique, nous avons ajout 1 ml
de NH
4
OH dilu et agiter. En prsence de produits doydation des anthranols ou des anthrones, la
coloration rouge est plus intense que prcdemment.
- Les C-htrosides : Nous avons repris la phase chloroformique qui a t conserve par 10 ml
deau, puis ajout 1 ml de FeCl
3
10 %. Aprs bullition au bain-marie pendant 30 mn, nous
avons agit avec 5 ml de chloroforme et ajout la phase chloroformique 1 ml de NH
4
OH dilu.
Une coloration rouge plus ou moins intense indique la prsence de gnines C-htrosides.
Diffrenciation des quinones : Raction de Brissemoret et Combes
A 1 g de poudre humecte avec H
2
SO
4
10 %, nous avons ajout 20 ml dun mlange volume
gal dther et de chloroforme. Aprs macration de 24 heures, 5 ml du filtrat obtenu sont
vapors lair, puis le rsidu repris par quelques gouttes dthanol 95 %. Ensuite, nous avons
ajout goutte goutte une solution aqueuse dactate de nickel 5 %.
3.1.1.3.1.4 : Strols et triterpnes
Lextrait tester a t obtenu partir de 1 g de poudre et 20 ml dther laisss en macration
pendant 24 heures, puis filtrs et complts 20 ml avec de lther. Aprs avoir vapor sec 10
ml de lextrait, nous avons dissout le rsidu dans 1 ml danhydride actique puis 1 ml de
chloroforme. Nous avons ensuite partag dans deux tubes essai. Lun servant de tmoin, nous
avons mis dans le fond du second tube essai l aide dune pipette 1 2 ml de H
2
SO
4

concentr. A la zone de contact des deux liquides, il y a formation dun anneau rouge bruntre ou
violet, la couche surnageante devenant verte ou violette rvle la prsence de strols et
triterpnes.

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54

3.1.1.3.1.5 : Carotnodes
Aprs vaporation sec de 5 ml de lextrait, nous avons ajout 2 3 gouttes dune solution
sature de trichlorure dantimoine dans le chloroforme. Il se dveloppe en prsence de
carotnodes une coloration bleue devenant rouge par la suite.
3.1.1.3.1.6 : Htrosides cardiotoniques
Solution analyser
Nous avons introduit 1 g de poudre dans un tube essai puis ajout 10 ml dthanol 60 % et
5 ml dune solution dactate neutre de plomb 10 %. Lensemble a t port bullition
pendant 10 mn. Ensuite, nous avons filtr sur coton aprs avoir port au bain-marie bouillant
pendant 10 mn.
Caractrisation
Nous avons agit le filtrat obtenu avec 10 ml de CHCl
3
dans un tube essai en vitant la
formation dune mulsion (mettre dans une ampoule dcanter). Aprs dcantation, la phase
chloroformique a t soutire laide dune pipette puis partage entre trois tubes essai et
vapore au bain-marie jusqu sec. Les rsidus ont t repris avec 0.4 ml disopropanol et dans
les trois tubes, ont t ajouts respectivement 1 ml de ractif de Baljet, 1 ml de ractif de Kedde
et 1 ml de ractif de Raymond-Marthoud. Ensuite, nous avons introduit dans chaque tube 2
gouttes de KOH 2 % dans lthanol et observ aprs une dizaine de minutes. En prsence de
cardnolides, les colorations suivantes se dveloppent :
- tube 1 : orang ;
- tube 2 : rouge-violac ;
- tube 3 : violet fugace.
3.1.1.3.1.7 : Saponosides
Dcoct 1 %
Nous avons port bullition 100 ml deau distille dans un erlenmeyer de 250 ml et y ajout 1g
de poudre puis maintenir une bullition modre pendant 15 mn. Aprs filtration, nous avons
ajust le filtrat 100 ml.
Caractrisation
Dans une srie de 10 tubes essai numrots de 1 10, nous avons reparti successivement 1,
2,.10 ml du dcoct 1 % prpar et ajust le volume dans chaque tube 10 ml avec de leau
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distille. Ensuite, chaque tube a t agit dans le sens de la longueur pendant 15 secondes en
raison de 2 agitations par seconde. Aprs avoir laiss au repos pendant 15 minutes, nous avons
mesur la hauteur de la mousse dans chaque tube. Le tube dans lequel la hauteur de la mousse est
de 1 cm indique lindice de mousse :
1000
Indice de mousse

=
Numro du tube

3.1.1.3.1.8 : Composs rducteurs
Nous avons introduit 5 ml de dcoct aqueux 10 % dans un bcher de 100 ml et vapor sec
au bain-marie. Au rsidu, a t ajout 1 ml de ractif de Fehling (0,5 ml de ractif A et 0,5 ml de
ractif B, mlange extemporan). Lobtention dun prcipit rouge-brique indique la prsence de
composs rducteurs.
3.1.1.3.1.9 : Oses et holosides
Nous avons introduit 5 ml du dcoct 10 % dans un bcher de 100 ml et vapor au bain-marie
sec. Au rsidu, il a t ajout 2 3 gouttes de H
2
SO
4
concentr. Aprs 5 mn, nous avons ajout
3 4 gouttes dthanol satur avec du thymol. Le dveloppement dune coloration rouge rvle la
prsence doses et holosides.
3.1.1.3.1.10 : Mucilages
Nous avons introduit 1 ml du dcoct 10 % dans un tube essai et ajout 5 ml dthanol absolu.
Aprs une dizaine de minutes, lobtention dun prcipit floconneux par mlange, indique la
prsence de mucilages.
3.1.1.3.1.11 : Coumarines
5 ml dextrait thr obtenu aprs une macration de 24 heures sont vapors lair libre, puis
repris avec 2 ml deau chaude. La solution est partage entre 2 tubes essai. La prsence de
coumarines est rvle aprs ajout dans lun des tubes de 0,5 ml de NH
4
OH 25 % et observation
de la fluorescence sous une lampe UV 366 nm. Une fluorescence intense dans le tube o il a t
ajout lammoniaque indique la prsence de coumarines.

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56

3.1.1.3.1.12 : Htrosides cyanogntiques
Nous avons introduit dans un tube 1 g de poudre et ajout 5 ml de tolune et 5 ml deau. Aprs
agitation, nous avons nettoy la partie suprieure du tube essai. Le papier picrosod frachement
prpar a t fix laide dun bouchon la partie suprieure du tube. La prsence dhtrosides
cyanogntiques est rvle par la coloration rouge plus ou moins intense du papier picrosod.

3.1.1.3.2 : Dosages de certaines substances
3.1.1.3.2.1 : Substances extractibles par leau
Nous avons fait une dcoction pendant 15 mn avec 1 g de poudre dans 20 ml deau distille. Le
filtrat a t mis dans une capsule pralablement tare et vapor sec. La capsule a t ensuite
pese aprs refroidissement et la masse du rsidu dduite.
3.1.1.3.2.2: Substances extractibles par lthanol 80 %
Nous avons fait une macration de 24 heures la temprature ambiante du laboratoire du DMT.
Aprs filtration, le filtrat a t mis dans une capsule pralablement tare puis vapor sec. La
capsule a ensuite t pese aprs refroidissement et la masse du rsidu dduite.
3.1.1.3.2.3 : Dosage de leau
3.1.1.3.2.3.1 : Mthode gravimtrique
Principe : il consiste dterminer la perte en masse dune quantit connue de poudre par
dessiccation ltuve la temprature de 103 C 2 C pendant 24 heures.
Mode opratoire : nous avons ensuite introduit 5 prises dessai (1 2 g) respectivement dans
5 verres de montre pralablement tars (T
1
T
5
). Les masses des prises dessai plus les tares ont
t notes P
1
P
5.
Aprs 24 heures de sjour ltuve la temprature de 103 C 2 C, nous
les avons pess de nouveau et not P
1
P
5.
Les prises dessai ont t places ltuve jusqu
masse constante.

La masse deau contenue dans la poudre de chaque verre de montre note m est donne par la
formule :
M = P-P
La masse de la prise dessai est :
M PE = P - T

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57

Le pourcentage deau contenue dans la poudre est :
Masse eau
% eau =
M PE
M PE : Masse de la prise dessai.
Nous avons dtermin la moyenne des pourcentages deau des 5 verres de montre dans les
mmes conditions.
3.1.1.3.2.3.2 : Mthode de lentranement azotropique
Principe : il consiste entraner leau contenue dans une prise dessai de la poudre par
distillation avec un solvant non miscible.
Mode opratoire : dans un ballon de 500 ml, nous avons introduit 100 ml de tolune et 1 ml
deau distille et port lensemble bullition pendant une heure sous rfrigrant. Aprs 30 mn
de repos, nous avons lu le niveau deau (V
1)
. Ensuite, nous avons introduit 5 g de poudre dans le
contenu du ballon et engag une bullition dune heure. Aprs 30 mn de refroidissement, nous
avons lu le niveau deau (V
2)
. Le volume deau contenue dans la prise dessai est calcul selon la
formule :
V = V
2
- V
1

Le pourcentage deau est calcul selon la formule :
V
2
V
1

% eau = X 100
PE
PE : masse de la prise dessai.
3.1.1.3.2.4 : Dtermination de la teneur en cendres
3.1.1.3.2.4.1 : Cendres totales
Principe : il repose sur la dtermination des substances rsiduelles non volatiles contenues
dans une drogue lorsque cette dernire est calcine.
Mode opratoire : nous avons pes une prise dessai de la poudre (M) dans un creuset en
silice pralablement tar (T). Aprs incinration au four une temprature denviron 600 C
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58

pendant 6 heures puis refroidissement dans un dessiccateur, la masse du creuset contenant la prise
dessai a t dtermine et note M.
La masse des cendres totales (mCt) contenue dans le creuset est donne par la formule :
mCt = M M
La masse de la prise dessai (PE) est donne par la formule :
M PE = M T
Le pourcentage des cendres totales (% Ct) est donn par la formule :
m Ct
% Ct =

X 100
M PE
Nous avons ralis 5 essais de la mme manire afin de dterminer un pourcentage moyen.
3.1.1.3.2.4.1 : Cendres insolubles dans lacide chlorhydrique 10 %
La dtermination de ces cendres se fait sur les cendres totales.
Nous avons introduit les cendres totales des cinq essais dans un erlenmeyer et ajout 20 ml de
HCl 10 %. Lensemble est port bullition pendant 15 mn au bain-marie. Aprs
refroidissement, nous avons recueilli et lav la matire non soluble sur un papier filtre sans
cendre, et le filtre a t transfr dans un creuset sec pralablement tar (T). Le creuset contenant
le papier filtre a ensuite t sch ltuve pendant 24 heures (M) et calcin pendant 6 heures au
four la temprature de 600 C. Aprs refroidissement dans un dessiccateur, nous avons pes le
creuset contenant le papier filtre calcin (M).
La masse des cendres chlorhydriques (mCc) est donne par la formule :
mCc = M T

Le pourcentage des cendres chlorhydriques (% Cc) est donn par la formule :
mCc
% Cc = X 100
PE
PE tant la somme des masses de poudre utilises pour la dtermination des cendres totales.

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3.1.1.3.2.4.2 : Cendres sulfuriques
Ces cendres sont les substances rsiduelles non volatilises recueillies lorsque lchantillon de
drogue est calcin avec du H
2
SO
4.
Ces cendres dterminent la quantit de substances
inorganiques contenues dans la drogue.
Dans un creuset en quartz sec pralablement tar (T), nous avons introduit une prise dessai de la
poudre et pes lensemble (M). La poudre a ensuite t humecte avec H
2
SO
4
50 % et laisse
ltuve pendant 24 heures la temprature de 100 C, le creuset a t port calcination dans un
four la temprature de 600 C pendant 6 heures et pes ensuite aprs refroidissement (M). La
masse des cendres sulfuriques (M Cs) est donne par la formule :
M Cs = M T
La masse de la prise dessai : M PE = M T
Le pourcentage des cendres sulfuriques (% Cs) est donn par :
MCs
% Cs = X 100
M PE

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60

3.1.1.4: Extractions
3.1.1.4.1 Matriel utilis
Balance de prcision type Sartorius ; Eprouvette gradue de 1000 ml ; Rotavapor type 349/2. J
Bibby; Bain-marie Watherbath Bm 480; pompe vide de marque Edward ; Lyophilisateur
Drywinner type Heto; Conglateur marque Zanker ; Ballon de 3 litres ; Entonnoir en verre ;
Coton ; potence ; Spatule.
3.1.1.4.2 : Extraction avec leau
Dcoction 10 %
Nous avons introduit 300 g de poudre dcorces de tronc dans un ballon contenant 3 l deau
distille. Pour les corces de racines, nous avons fait la dcoction avec 150 g de poudre dans
1500 ml deau distille. Il sagit dune dcoction 10 %. Lensemble a t maintenu en bullition
au bain-marie pendant trois heures. Aprs refroidissement, nous avons filtr sur coton puis
concentr le filtrat laide du rotavapor sous vide la temprature de 55 C. Nous avons ensuite
lyophilis lextrait concentr aprs 48 heures de conglation. La lyophilisation nous a permis
dobtenir des poudres rouge et marron respectivement pour les corces de racines et celles de
tronc. Les poudres obtenues ont t conserves dans des flacons en verre, striles et
hermtiquement ferms.

Figure n3: SCHEMA DEXTRACTION PAR DECOCTION

Macration
50 g de poudre ont t introduits dans un erlenmeyer de 1000 ml et macrs dans 500 ml deau
distille, sous agitation magntique, pendant 24 heures. Aprs filtration sur papier filtre, le filtrat
a t concentr au rotavapor sous vide la temprature de 50 C. Cette opration a t rpte
Dcoct aqueux Marc
corces de tronc
300 g
Dcoct aqueux Marc
corces de racines
150 g
Dcoction 10 %
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61

trois fois successivement. Aprs concentration au rotavapor, les filtrats ont t lyophiliss. Nous
avons obtenu des poudres floconneuses de couleur jauntre et marron respectivement pour les
corces de racines et celles du tronc. Les poudres obtenues ont t conserves dans des flacons en
verre, propres, striles et hermtiquement ferms. Le marc de la filtration a t sch et conserv
dans un sachet en plastique.

Figure n 4: SCHEMA DEXTRACTION PAR MACERATION A LEAU

3.1.1.4.3. : Macration avec lthanol 80 %
50 g de poudre ont t introduits dans un erlenmeyer de 1000 ml et macrs dans 500 ml dans
lthanol 80 %, sous agitation magntique, pendant 24 heures. Aprs filtration sur papier filtre,
le filtrat a t concentr au rotavapor sous vide la temprature de 50 C. Nous avons rpt cette
opration trois fois successivement. Aprs concentration, les filtrats ont t repris avec un peu
deau distille puis lyophiliss aprs 48 heures de conglation. Nous avons obtenu des poudres
floconneuses de couleur marron et jauntre, respectivement pour les corces de racines et celles
de tronc. Les poudres obtenues ont t conserves dans des flacons en verre, propres, striles et
hermtiquement ferms. Quant au marc de la filtration, il a t sch la temprature du
laboratoire et conserv dans un sachet en plastique.

Macr aqueux
Marc
Poudre 50 g
Macration leau
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62

Figure n5: SCHEMA DEXTRACTION PAR MACERATION A LETHANOL A 80 %

3.1.1.4.4 : Extraction avec les solvants organiques polarit croissante
180 g de poudre repartis dans 3 cartouches ont t extraits avec 300 ml de dichloromthane
sous rfrigrant reflux jusqu puisement. Lextrait recueilli dans un ballon a t concentr
laide du rotavapor. Aprs concentration, lextrait a t recueilli dans un flacon propre laiss
ouvert pendant 24 heures afin dliminer toute trace de solvant.
La mme opration a t reprise avec le mthanol la diffrence quaprs concentration sec au
rotavapor, le rsidu a t rcupr avec un peu deau distille puis lyophilis aprs conglation.
Le lyophilisat a t conserv dans un flacon en verre, propre, strile et hermtiquement ferm.

Figure n6: SCHEMA DEXTRACTION PAR LES SOLVANTS ORGANIQUES
Macr thanolique
Marc
Poudre 50 g
Macration lthanol 80 %
Dichloromthane (DCM)
Extrait DCM Marc
Poudre 50 g
Marc Extrait mthanolique
Mthanol

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63

Figure n7: LYOPHILISATEUR UTILISE POUR SECHER LES EXTRAITS POLAIRES
DE Combretum. glutinosum

Figure n8: ROTAVAPOR UTILISE POUR CONCENTRER LES EXTRAITS DE Combretum glutinosum

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64

3.1.1.5 : Chromatographie sur couche mince (CCM)
3.1.1.5.1 : Matriel et ractifs
Balance analytique de prcision type Sartorius ; Plaque en aluminium avec comme support du
silicagel 60 F
254
Merck ; Cuves avec couvercles ; Crayon papier ; Eprouvette gradue de 20 ml ;
Micro pipette de 5l ; Pulvrisateur ; Rglette gradue ; Schoir type Solis ; . Lampe UV type
Desaga .
Solvants: Butanol, Mthanol, Chloroforme, Acide actique, Eau distille
3.1.1.5.2 : Technique
10 mg des extraits aqueux et thanoliques ont t dissous dans 1 ml dun mlange eau
mthanol (1 : 1). Les extraits mthnoliques ont t dissous dans 1 ml de mthanol. Quant aux
extraits DCM, ils ont t dissous dans 1 ml dactate dthyle.
A laide dune micro pipette de 5 l, nous avons dpos 10 l de chaque solution sur la plaque.
Les traces du solvant ont t compltement vapores des dpts laide du schoir.
Nous avons plac la plaque dans les cuves de dveloppement contenant les systmes de solvants :
Butanol Acide actique Eau (BAW) (60 : 15 : 25) pour les extraits aqueux, thanoliques et
mthanoliques ;
Ligrone Actate dthyle (1 : 1) pour les extraits DCM.
La migration du solvant dlution entrane les substances contenues dans les extraits de plante
des vitesses varies ; il se forme des tches caractrisant les substances prsentes dans lextrait.
Les plaques ont t retires des cuves ds que le front du solvant a atteint 8 cm environ. Elles ont
t sches et les substances rvles sous une lampe UV 254 nm, 366 nm, puis rvles avec
le ractif de Godin qui permet de caractriser plusieurs groupes de constituants chimiques.
Les plaques ont ensuite t sches laide du schoir jusqu rvlation des composs
(taches colores sur font blanc).
Chaque substance a t identifie par sa fluorescence sous UV, par son facteur de rtention (Rf)
dans un systme de solvant prcis, et par sa couleur aprs rvlation avec les ractifs chimiques.
Distance parcourue par la substance
Rf =

Distance parcourue par le front du solvant
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65

3.1.2 : Tests biologiques
3.1.2.1 : Dtermination de lactivit antioxydante
Dpistage de lactivit antioxydante sur CCM laide du DPPH : le test chimique que nous
avons utilis pour dceler la prsence de composs antioxydants dans les extraits de plante repose
sur le principe de la rduction des radicaux libres fournis par le 1, 1 diphnyl 2
picrylhydrazyle (DPPH). Pour raliser ce test, nous avons dpos 10 l dune solution de 10 mg /
ml (M / V) de chaque extrait sur la plaque de silicagel 60 F
254
(Merck) possdant un support en
aluminium.
Le dveloppement des plaques a t ralis dans les systmes de solvants suivants:
Butanol Actate dthyle Eau (65 : 15 : 25) pour les extraits polaires, tandis que les extraits
apolaires ont t dvelopps dans le systme de solvants ligrone actate dthyle (1 :1).
Aprs migration, les chromatogrammes ont t schs laide du schoir lectrique puis rvls
laide dune solution de DPPH la concentration de 2 mg / ml (M / V) dans le mthanol. En
prsence de substances antioxydantes, le DPPH est rduit et passe de la couleur pourpre au jaune.
Sur les plaques CCM, les zones dactivits antiradicalaires apparaissent en jaune clair sur fond
violet aprs un temps optimal de 30 mn (Takao et al, 1994).

HN N
NO
2
NO
2
O
2
N

1,1 diphnyl 2 picrylhydrazyle

Thse de pharmacie


66

3.1.2.2 : Dtermination de lactivit antifongique
Mthode bio autographique (Diallo, 2000)
3.1.2.2.1 : Prparation des chromatogrammes
Les solutions correspondent aux concentrations de 30 et 60 mg/ml (M/V) pour les extraits
aqueux et organiques de Combretum glutinosum et 10 et 20 mg/ml pour le tmoin constitu par
une solution de nystatine en solution chloroformique la concentration de 100 g /ml (M/V).
10l de chaque concentration ont t sur les plaques en verre et dveloppes dans le systme de
solvants suivants :
- Butanol-Acide actique -Eau (60 :15 :25) pour les extraits aqueux, hydro-alcooliques et
alcooliques ;
- Ligrone Actate dthyle (1 :1) pour les extraits DCM.
Les plaques en verre avec comme support du silicagel 60 F
254
Merck ont t ralises en double
dont lune sert de tmoin.
Chaque plaque en verre a t visualise lUV 254 nm, puis 366 nm. Les plaques ont t
sches la temprature ambiante du laboratoire du DMT avant le test, afin dliminer toute trace
de solvant.
Quant aux plaques tmoins, elles ont t rvles avec le ractif de Godin pour permettre
lidentification des substances aprs le test biologique.

3.1.2.2.2 : Matriel technique et extraits utiliss
Etuve rgle 37 C ; Rfrigrateur ; Milieux de cultures ; Botes de ptri ; Pipettes Pasteur
striles ; Eau physiologique ; Eau distille ; Tubes striles de 16 x 160 mm ; Disques blancs
striles non imprgns de 6mm de diamtre ; Produit pathologique : urines ; Micro pipettes de
5 l ; Balance de prcision ; Gaz butane.
Nous avons test les dcocts aqueux, les macrs queux et thanoliques, les extraits
dichloromthaniques et les extraits mthanoliques des poudres des corces de tronc et de racines
de C.glutinosum.
3.1.2.2.3 : Solution de rfrence
Elle a t constitue par la nystatine dissoute dans du chloroforme la concentration de
100 g/1ml.
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67

3.1.2.2.4 : Champignons utiliss pour le test
Nous avons utilis des souches de Candida albicans obtenues partir des prlvements vaginaux
au laboratoire de biologie mdicale de lhpital national du Point "G".
3.1.2.2.5 : Milieux de culture
Nous avons utilis les milieux de culture suivants :
- Sabouraud glose + choramphnicol + actidione
- Sabouraud glose liquide (SDA : Sabouraud Dextrose Agar)
- Malt agar.
3.1.2.2.5.1 : Prparation du milieu Sabouraud glose liquide
Dissoudre 15 g de poudre de Sabouraud glose dans 1litre deau distille. Attendre 5 mn puis
bien agiter afin dobtenir une suspension homogne. Chauffer en agitant jusqu dissolution
complte. Le milieu ainsi prpar sera strilis lautoclave la temprature de 121 C pendant
15 mn.
3.1.2.2.5.2 : Prparation du milieu Sabouraud glose + Chloramphnicol + Actidione
Nous avons utilis la mme mthode que prcdemment en ajoutant le chloramphnicol et
lactidione qui permettront lisolement de Candida albicans en liminant les germes
saprophytes.
3.1.2.2.5.3 : Prparation du milieu Malt Agar
Ajouter 48 g de Malt Agar 1 litre deau dminralise par chauffage dans un bain marie
bouillant ; passer avec prcaution lautoclave pendant 10 mn la temprature de 121 C sans
surchauffer.

3.1.2.2.6 : Identification et isolement des souches de C. albicans
Les travaux ont port uniquement sur les prlvements vaginaux. Lidentification de C. albicans
a t faite soit par examen microscopique, soit par culture, soit par culture suivie de coloration de
Gram.
Examen microscopique :
Faire des observations du prlvement entre lame et lamelle. Les caractres microscopiques
considrs ont trait laspect des cellules. C. albicans prsente un aspect de cellules
lvuriformes, rondes, ovalaires ou bourgeonnantes.
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68

Culture :
La culture a t ralise sur le milieu Sabouraud glose + chloramphnicol + actidione coul dans
la boite de ptri. Pour cela, nous avons procd au passage de lcouvillon de prlvement sur le
milieu de culture incorpor dans la bote de ptri et incub la temprature de 30 C pendant 24
heures.
Coloration de Gram
Prlever dans la bote de ptri ensemence une colonie de levures ;
Raliser un frottis sur lame, laisser quelques minutes puis fixer laide de lalcool 90 %.
Aprs prparation de la lame, raliser la coloration de Gram proprement dite.
Ensuite, observer laide dun microscope optique lobjectif 100 en immersion.
Test de filamentation
Cest un test pralable au test biologique qui atteste de lauthenticit de la souche de
C. albicans.
Ce test met en vidence la production de filaments caractristiques de C. albicans.
La souche est ensemence dans un tube contenant du srum humain.
Linoculum doit tre suffisant pour donner un trs lger trouble dans le milieu (0,5 ml de srum
pour une colonie). Lobservation des filaments se fait au microscope lobjectif 40 aprs 3
heures dincubation 37 C.
La conservation des souches se fait sur le milieu Sabouraud + chloramphnicol + actidione coul
en tube inclin.
Principe :
Prendre une jeune colonie de 24 heures et lensemencer sur la glose en tube. Incuber pendant 24
heures 37 C puis garder le tube en anarobiose (les tubes ne doivent pas tre hermtiquement
ferms).
NB : Les souches de Candida albicans doivent tre repiques tous les deux mois.
3.1.2.2.7 : Solutions tester et tmoin
Les extraits de Combretum glutinosum devant subir le test biologique ont t utiliss des
concentrations progressives de 30 mg/ml et 60 mg/ml. Les extraits aqueux ont t dissous dans de
leau distille tandis que les extraits organiques dans des solvants appropris.
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Le test antifongique sur C. albicans recommande la nystatine comme tmoin en solution
chloroformique la concentration de 1 mg/ 10 ml.

3.1.2.2.8 : Technique du test
Le test sest droul en trois jours :
Jour 1
(1) Repiquer une culture de C. albicans sur le milieu de culture Sabouraud glos +
chloramphnicol + actidione en boite de ptri et incuber 30 C pendant 24 heures ;
Jour 2
(2) Prparer deux erlen meyers contenant 50 ml de milieu de culture Sabouraud liquide et les
striliser lautoclave pendant 15 mn 121 C.
(3) Ajouter froid laide dune pointe de spatule une colonie issue de (2) dans lun des milieux
prpars en (2).
(4) Laisser sous agitation pendant une nuit.
Jour 3
(5) En dbut de matine, prendre 0,5 ml du milieu prcdent (trouble) et lajouter au second
milieu prpar en (2) , soit une dilution de 100 fois.
(6) Laisser reposer pendant environ 7 heures sous agitation. Ce temps est ncessaire pour
atteindre la phase de croissance exponentielle de C. albicans
(7) Pendant se temps, prparer les milieux de culture base de malt agar qui seront la base de
linoculum vers sur les plaques CCM, et les repartir en erlenmeyers de 50 ml. La quantit du
milieu de culture est fonction de la dimension de la plaque ; pour une plaque de 10 X 10 cm, la
quantit de malt agar sera de 10 ml.
(8) Maintenir le malt agar fondu au bain marie 48 C car au-dessus de cette temprature, les
levures ne survivent pas et en dessous de 43 C, le milieu se solidifie.
(9) Ajouter 0,5 ml de cette solution obtenue en (5) chaque fraction de 50 ml de malt agar
fondu, afin dobtenir un inoculum contenant 10
5
cellules / ml.
(10) Laisser nouveau se reposer 48 C ;
(11) Verser linoculum sur les plaques laide de pipettes striles raison de 10 ml par portion
de 10 X 10 cm ;
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70

(12) Incuber 30 C pendant une nuit en atmosphre humide en utilisant des botes en plastique
contenant un papier buvard tremp ;
(13) Rvler les plaques laide dune solution aqueuse de bromure de
mthylthiazoylttrazolium (MTT) 2,5 mg / ml. Les zones dinhibition de croissance
apparaissent sous forme de taches incolores sur fond violet, aprs une nouvelle incubation de 4
heures. Tous les extraits de C. glutinosum seront la mme technique et au mme test.
(14) Gicler de lthanol sur les plaques afin de tuer les microorganismes.
(15) Les plaques ont ensuite t ensuite recouvertes de feuilles de plastiques transparentes afin
de les conserver.

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3.1.2.3 : Dtermination de lactivit antibactrienne
3.1.2.3.1 : Bactries testes
Escherichia coli
Staphylococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa
Streptocoque bta hmolytique.
Ces germes ont t isols partir de prlvements durines du laboratoire de biologie mdicale
de lhpital national du Point "G".
3.1.2.3.2. Matriel technique et extraits utiliss
Il sagit des mmes que ceux utiliss pour la dtermination de lactivit antifongique.

3.1.2.3.3 : Mode opratoire
- Examen ltat frais ;
- Coloration de Gram ;
Mise en culture ;
- Identification ;
- Antibiogramme.

3.1.2.3.4: Isolement des colonies
Pour lisolement des colonies, nous avons utilis les milieux de culture suivants : la glose de
Drigalski pour les bacilles Gram ngatif et la glose au sang pour les cocci Gram positif.
Les germes ont t isols partir des prlvements durines provenant de sujets prsentant des
signes dinfection urinaire. Aprs identification, les germes ont t conservs au rfrigrateur
do ils ont t retirs pour le test.
Pour lidentification de Staphylococcus aureus, nous avons ralis dans un premier temps la
coloration de Gram afin dapprcier la morphologie et le test de la catalase permettant de le
diffrencier du Streptocoque. Staphylococcus aureus est catalase positif contrairement au
streptocoque qui est catalase ngatif. Staphylococcus aureus a t identifi par le ractif Pastorex
Staph de Bio-rex.

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Le test sest droul en deux jours :
Jour 1
- Prparation des solutions
Les macrs thanoliques et aqueux, les extraits mthanoliques et les dcoct aqueux ont t
dissous dans de leau distille, tandis que les extraits dichloromthaniques ont t dissous dans le
dimthylsulfoxide. 100 mg de lextrait ont t dissous dans 1 ml du solvant indiqu.
- Imprgnation des disques
Les disques blancs de 6 mm de diamtre ont t imprgns de 4 et 5l de la solution prpare et
placs dans des botes de ptri o ils sont schs, soit des dosages de 400 et 500g de lextrait par
disque.
- Prparation de la suspension bactrienne
Une colonie bien isole issue dune culture a t introduite dans 10 ml deau distille contenue
dans un tube essai pour les antibiogrammes de Staphylococcus aureus, Escherischia coli et
Pseudomonas aeruginosa. Pour lantibiogramme du streptocoque hmolytique, la suspension
bactrienne a t ralise avec de leau physiologique selon le mme procd que prcdemment.
- Mise en test
Jour1 :
La suspension bactrienne prpare a t coule sur la glose de Mueller Hinton (MH) pour les
bacilles et le Staphylocoque et la glose de Mueller Hinton au sang frais pour le Streptocoque.
Aprs linondation de toute la surface du milieu par la suspension bactrienne, le surnagent a t
jet par aspiration avec une pipette de transfert. Chaque bote a reu dix disques dposs sur un
numro didentification appos sur la face infrieure de la bote. Les milieux ont ensuite t
incubs ltuve pendant 24 heures environ. Les milieux de risolement seront conservs au
rfrigrateur.
Jour2 :
Nous avons procd la mesure du diamtre des zones dinhibition, dans le cas de sensibilit
autour des disques de 6 mm de diamtre.

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3.1.2.4 : Dtermination de lactivit anti-inflammatoire
Mthode de lOedme la carraghnine
3.1.2.4.1: Animaux utiliss
Nous avons travaill sur des souris mles et femelles de masse variant entre 20 et 30 g,
fournies par lanimalerie du Centre National dAppui la lutte contre la Maladie (CNAM). Ces
souris sont issues dune souche non consanguine slectionne partir dune ligne de souris
prsentant des caractristiques de vigueur et de productivit appele CF
1
(Carworth Farms
Souche 1) et qui a t introduite linstitut Marchoux en 1967 et pris le nom de OF
1
(Oncins
France Souche 1).
Nous avons travaill sur 30 souris reparties en 3 lots aussi homognes que possibles en
fonction de leur masse :
- le premier lot a t trait par le dcoct aqueux de Combretum glutinosum la dose de 200
mg/kg de masse corporelle ;
- le deuxime lot a t trait par lindomtacine la dose de 8 mg / kg de souris ;
- le troisime lot qui est le lot tmoin a reu uniquement de leau distille raison de
0,025 ml / 100 g de masse corporelle.

3.1.2.4.2 : Matriels et ractifs
- Solution de carraghnine 1% dissoute dans le srum physiologique ;
- Solution aqueuse de lextrait de C. glutinosum la dose de 200 mg / ml ;
- Solution aqueuse dindomtacine la dose de 8 mg/kg ;
- Balance analytique de prcision ;
- Sonde gastrique ; Seringues de 1 ml ;
- Plethysmomtre APALEX 7140 Ugo Basile ;
- Calculatrice ; Gants ; Cage.

3.1.2.4.3 : Le plthysmomtre APALEX 7140 Ugo Basile
Le plthysmomtre est un appareil de mesure de volume conu pour des mesures prcises
de grossissement de la patte traite de lanimal (souris, rat) par comparaison avec celle non
traite. Il est constitu dune cellule contenant de leau physiologique dans laquelle plonge la
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74

patte de lanimal. La diffrence du niveau deau aprs immersion de la patte est dtermine par
un transducteur reli un appareil numrique. La lecture numrique indique la valeur exacte du
grossissement en ml. Le zro de linstrument est fait avant chaque mesure.
Le plthysmomtre permet ainsi :
- une lecture numrique prcise ;
- une mise en vidence de petites variations de volumes ;
- et un screening rapide dun grand nombre danimaux.

3.1.2.4.4 : Mthode : principe de ldme de la patte la carraghnine :
Nous avons mis les souris jeun de 18 heures avant le test ; une heure avant de provoquer
linflammation, nous avons administr par voie orale, laide dune sonde gastrique, lextrait
aqueux de Combretum glutinosum au premier lot de souris ;
Les deuxime et troisime lots ont reu par la mme voie, respectivement, de lindomtacine et
de leau distille. Linflammation a t produite par injection, sous laponvrose plantaire de la
patte postrieure gauche de la souris, 50 l de la solution de carraghnine 1%, ce qui entrane la
formation dun dme de la rgion mtatarsienne. Les souris ont ensuite t ensuite remises en
cage avant les diffrentes mesures. Les volumes des pattes postrieures droites ont ensuite t
mesures au bout dune heure, 2 heures, 3 heures, 4 heures et 5 heures.

3.1.2.4.5 : Evaluation de lactivit anti-inflammatoire
Pour chaque lot trait, nous avons calcul le pourcentage dinhibition (% INH) de ldme
des pattes traites par rapport au lot tmoin, en utilisant la formule suivante :
% AUG tmoin % AUG trait
% INH =
% AUG tmoin
Ce % INH exprime le pouvoir dinhibition de ldme par une substance, donc lactivit anti-
inflammatoire de cette substance.

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Le pourcentage daugmentation de la patte (% AUG) est donn par la formule :
Vt Vo
% AUG =
Vo
Vo = volume de la patte sans traitement ;
Vt = volume de la patte aprs administration de la carraghnine et traitement

Figure n9: ADMINISTRATION ORALE DE LEXTRAIT DE Combretum. Glutinosum A LA SOURIS

Figure n10: MESURE DU VOLUME DE LA PATTE DE LA SOURIS AVEC LE PLETHYSMOMETRE

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3.1.2.5 : Dtermination de lactivit antiplasmodiale
sur Plasmodium falciparum in vitro
Les extraits tester ont t prpars au laboratoire du Dpartement Mdecine Traditionnelle
de lInstitut National de Recherche en Sant publique de Bamako (Mali). Le test proprement dit a
t ralis lInstitut des maladies tropicales de Bles en Suisse.
3.1.2.5.1 : Souche standard
Elle a t constitue par une souche de Plasmodium falciparum K1 rsistante la chloroquine et
la pyrimthamine.

3.1.2.5.2 : Antipaluden standard
Il a t constitu par la chloroquine Sigma la concentration maximale de 200 ng/ml.

3.1.2.5.3 : Conditions exprimentales
milieu de culture : RPMI 1640 avec hypoxanthine Hepes 5,94 g/l ; NaHCO
3
; Nomycine
100U/ml ; Albumax 5 g/l ;
plaques : Costar
TM
96 ;
incubation : chambre humide contenant 4 % de CO
2
, 3 % de O
2
et 93 % de N
2.

3.1.2.5.4 : Prparation des extraits
Les extraits tester ont t dissous dans le dimthylsulfoxide (DMSO) 10 mg/ml. Pour la
dissolution, le mlange a t chauff ou plac dans un bain-marie ultrason si ncessaire.
Ensuite, les mlanges ont t incubs la temprature de 4 C pendant deux semaines, puis
-20 C. Des dilutions rcentes sont prpares chaque fois pour le test.

prparer un milieu fluide avec le stock de culture ;
prparer une solution de cellules parasites ayant un taux dhmatocrite de 0,3 % ;
verser 100 l du milieu de culture dans chaque trou de la plaque ;
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77

verser 100 l du milieu de culture contenant la substance tester une concentration 4 fois
suprieure dans les trous de la ligne B ;
prlever 100 l des trous de la ligne B aprs mlange et les transfrer dans les trous de la ligne
C et ainsi de suite jusqu la ligne H. Une srie de dilutions facteur est ainsi obtenue. Les
concentrations de la substance tester vont de 5 g 78 ng/ml ;
ajouter 100 l de la solution de cellules parasites au contenu de chaque trou de la plaque
excepts les trous A
9
A
12
qui recevront une solution de cellules non parasites.
Ainsi, tous les trous ont un taux dhmatocrite gal 1,25 % et une parasitmie de 0,15 % au
dbut de lincubation.
La chloroquine a t utilise comme rfrence la concentration de maximale de 200 ng/ml.
La plaque a t incube pendant 48 heures ; ensuite ajouter 100 l dhypoxanthine dans chaque
trou et incuber de nouveau pendant 24 heures ; centrifuger et rcuprer les hmaties sur un filtre
o elles sont laves et observes au microscope afin de dterminer la parasitmie. Linhibition est
dtermine graphiquement et la concentration inhibitrice 50 (IC
50
) est calcule.

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78

3.2 : Rsultats
3.2.1 : Etudes phytochimiques
3.2.1.1 : Ractions de caractrisation
3.2.1.1.1: Ractions en tubes sur la poudre dcorces de tronc
Tableau VII : RESULTATS DES REACTIONS EN TUBES SUR LA POUDRE DECORCES DE TRONC DE
Combretum glutinosum

Recherches Rsultats
Tanins : FeCl3

10% + + +
Tanins : HCl concentr + + +
Tanins : ractions de Stiasny + + +
Leucoanthocyanes + +
Coumarines + +
Composs rducteurs + +
Strols et tri terpnes + +
Polyuronides (Mucilages) + +
Saponosides : Mousse + +
Saponosides : Indice de mousse 143,33

+ + + : Raction trs positive
+ + : Raction moyennement positive
+ : Raction faiblement positive
Sur lensemble de nos ractions en tubes, celle des tanins a t la plus franche avec une
prdominance des tanins galliques. Par contre, les alcalodes et les htrosides cardiotoniques ont
t absents dans lchantillon analys.

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79

3.2.1.1.2 : Dosages de certaines substances
La teneur des substances extractibles par leau a t de 45,40 %.
3.2.1.1.2.2 : Substances extractibles par lthanol 80 %
26,63 % des substances contenues dans la poudre ont t extraites par lthanol 80 % dans
leau.
Mthode gravimtrique
Tableau VIII : TENEUR EN EAU DE LA POUDRE DECORCES DE TRONC DE Combretum
glutinosum

Tare Masse avant Masse aprs Masse prise Masse Pourcentage
g tuve g tuve g dessai g eau g eau %
12,58 15,33 15,21 2,75 0,12 4,36
13,23 14,25 14,14 3,02 0,11 3,64
12,65 15,08 15,00 2,53 0,08 3,16
13,36 15,38 15,27 2,02 0,11 5,44
12,57 15,23 15,10 2,66 0,13 4,88

4,36 + 3,64 + 3,16 + 5,44 + 4,88
La teneur moyenne en eau = = 4,29 %
5
La teneur moyenne en eau est infrieure 10 %, ce qui veut dire que notre poudre peut tre
conserve sans altration des principes actifs.
Mthode azotropique
Par cette mthode, nous avons obtenu une teneur en eau de 7 %.

3.2.1.1.2.4 : Dosage des cendres

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80

Tableau IX : TENEUR EN CENDRES TOTALES DE LA POUDRE DECORCES DE TRONC DE

g calcination g calcination g dessai g cendres g cendres %
28,13 31,13 28,32 3,00 0,18 6,00
24,16 27,12 24,36 2,96 0,19 6,41
16,82 19,57 17,00 2,74 0,18 6,56

6,00 + 6,41 + 6,56
La teneur moyenne en cendres = = 6,32 %
3
3.2.1.1.2.4.2 : Cendres insolubles dans lacide chlorhydrique 10 %
3,20 % des cendres totales ont t insolubles dans lacide chlorhydrique 10 %.
3.2.1.1.2.4.3 : Cendres sulfuriques (H
2
SO
4
50 %)
La teneur en cendres sulfuriques a t de 5,62 %.

Tableau X : TENEUR DES SUBSTANCES DOSEES DANS LA POUDRE DECORCES DE TRONC DE
Substances Teneur en %

Substances extractibles par leau 45,40
Eau (mthode gravimtrique) 4,29
Eau (mthode azotropique) 7
Substances extractibles par lthanol 26,63
Cendres totales 6,32
Cendres insolubles dans HCl 10 % 3,20
Cendres sulfuriques (H
2
SO
4
50 %) 5,62

La teneur en eau a t infrieure 10 %, ce qui permet une bonne conservation de la drogue.
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81

3.2.1.1.3 : Ractions en tubes sur la poudre dcorces de racines
Tableau XI : RESULTATS DES REACTIONS EN TUBES DE LA POUDRE DECORCES DE RACINES
DE Combretum glutinosum

Recherches Rsultats

Tanins : FeCl
3
+ + +
Tanins : HCl + +
Tanins : Raction de Stiasny + +
Leucoanthocyanes + + +
Coumarines + + +
Strols et tri terpnes + + +
Polyuronides (mucilages) + +
Saponosides : Mousse + +
Saponosides : Indice de mousse 500

+ + + : Raction trs positive ;
+ + : Raction moyennement positive ;
+ : Raction faiblement positive
Les tanins ont donn les ractions les plus franches. Il sagit surtout de tanins galliques. Par
contre, les alcalodes et les htrosides cardiotoniques ont t absents dans lchantillon analys.

3.2.1.1.4 : Dosage de certaines substances
30,31 % des substances contenues dans la poudre ont t extractibles par leau.
3.2.1.1.4.2 : Substances extractibles par lthanol 80 %
La teneur des substances extractibles par lthanol 80 % a t de 21,72 %.

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Mthode gravimtrique
Tableau XII : TENEUR EN EAU DE LA POUDRE DECORCES DE RACINE DE Combretum
glutinosum

.Tare Masse avant Masse aprs Masse prise Masse Pourcentage
g tuve g tuve g dessai g eau g eau %

8,91 11,09 10,99 2,28 0,10 4,38
10,41 12,02 11,95 1,61 0,07 4,34
9,21 11,23 11,13 2,02 0,10 4,95
9,81 11,25 11,12 1,39 0,13 9,35
9,21 11,01 10,89 1,80 0,12 6,66

4,38 + 4,34 + 4,95 + 9,35 + 6,66
La teneur moyenne en eau = 5,93 %
5

La teneur en eau est infrieure 10 %, ce qui montre laptitude de notre poudre tre conserve
longtemps sans risque daltration.
Mthode azotropique
Par cette mthode, nous avons obtenu une teneur en eau de 6 %.

3.2.1.1.4.4 : Dosage des cendres

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83

Tableau XIII : TENEUR EN CENDRES TOTALES DE LA POUDRE DECORCES DE RACINES DE

g calcination g calcination g dessai g cendres g cendres %
15,33 17,87 15,60 2,54 0,27 10,62
14,64 17,23 14.91 2,59 0,27 10,42
14,96 17,09 15,18 2,13 0,22 10,32

10,62 + 10,42 + 10,32
Teneur moyenne en cendres totales = = 10,45 %
3
3.2.1.1.4.4.2 : Cendres insolubles dans lacide chlorhydrique 10%
La teneur des cendres insolubles dans HCl 10 % a t de 5,97 % des cendres totales.
3.2.1.1.4.4.3 : Cendres sulfuriques (H
2
SO
4
50 %)
La teneur des cendres insolubles dans H
2
SO
4
50 % a t de 6,21 %.

Tableau XIV : TENEUR DES SUBSTANCES DOSEES DANS LA POUDRE DECORCES DE RACINES
DE Combretum glutinsum
Substances Teneur %
Substances extractibles par leau 30,31
Substances extractibles par lthanol 80% 21,72
Teneur en eau (mthode gravimtrique) 5,93
Teneur en eau (mthode azotropique) 6
Cendres totales 10,45
Cendres sulfuriques (H
2
SO
4
50 %) 5,97
Cendres chlorhydriques (HCl 10 %) 6,21

La majorit des substances a t extractible par leau avec une teneur de 30,31 %.
La teneur en eau est infrieure 10 % par les deux mthodes.
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84

3.2.1.2: Extractions
La masse, le rendement, laspect et la couleur des extraits et fractions obtenus partir de
chaque organe de la plante sont reports dans le tableau XV.
Tableau XV : MASSE, RENDEMENT, ASPECT ET COULEUR DES EXTRAITS ET FRACTIONS
OBTENUS A PARTIR DE LA POUDRE DECORCES DE TRONC ET CELLE DECORCES DE RACINES DE

Extraits Masse g Rendement % Couleur Aspect

Ecorces de tronc
Dcoct 10% 52,01 17,33 Rouge Brillant
Macr aqueux 5,95 11,90 Jauntre Floconneux
Macr thanolique 16,54 33,08 Rouge Floconneux
Extrait dichloromthane 1,91 1,06 Verdtre Floconneux
Extrait mthanolique 13,85 7,69 Rouge Floconneux
Ecorces de racines
Dcoct 10 % 14,30 9,53 Marron Brillant
Macr aqueux 8,89 17,78 Marron Floconneux
Macr thanolique 10,48 20,09 Rouge Floconneux
Extrait dichloromthanique 2,87 1,59 Brune Floconneux
Extrait mthanolique 15,66 8,70 Brune Floconneux

Le rendement le plus lev a t obtenu avec le macr thanolique de la poudre des corces de
tronc, soit 33,08 % tandis que notre plus faible rendement a t obtenu avec lextrait
dichloromthane de la poudre du mme organe, soit 1,06 %.

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85

3.2.1.3 :Chromatographie sur couche mince (CCM)
3.2.1.3.1 : Rsultats de la CCM sur les extraits dcorces de tronc de Comretum glutinosum
Les rsultats de la CCM sur les extraits dcorces de tronc de Combretum glutinosum sont
consigns dans les tableaux XVI, XVII, XVIII, XIX, XX, XXI. Chaque substance a t
caractrise par sa fluorescence sous UV, son Rf et la couleur de la tache aprs rvlation par les
rvlateurs chimiques.

Tableau XVI : RESULTAT DE LA CCM DES EXTRAITS POLAIRES DECORCES DE TRONC DE
Combretum glutinosum DANS LE SYSTEME B A W (60 :15 :25) APRES OBSERVATION A LUV 254 nm

Rvlation Extraits Tache Rf
Dcoct aqueux 10 % Grise 0,13
" 0,25
" 0,45
" 0,68
" 0,80
UV 254 nm " 0,90
Macr aqueux " 0,16
" 0,45
" 0,88
Macr thanolique 80 % " 0,26
" 0,47
" 0,67
" 0,90
Epuis mthanolique Grise 0,26
" 0,47
" 0,91

Tous nos extraits ont donn des spots de couleur grise lUV 254 nm. Le dcoct aqueux a
montr le plus de taches cette longue donde.
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86

Tableau XVII : RESULTAT DE LA CCM SUR LES EXTRAITS POLAIRES DECORCES DE TRONC DE
Combretum glutinosum DANS LE SYSTEME BAW (60:15:25) APRES OBSERVATION A LUV 366 nm
Rvlation Extraits Taches Rf

Dcoct aqueux 10 % Blanche sur fond violet 0,47
Macr aqueux " 0,90
UV Macr thanolique 80 % " 0,23
366 nm " 0,92
Epuis mthanolique Blanche sur fond violet 0,46

Lextrait thanolique 80 % a montr le plus grand nombre de spots cette longueur donde
alors que les autres extraits ont montr chacun un seul spot de couleur blanche sur fond violet.

Tableau XVIII : RESULTAT DE LA CCM SUR LES EXTRAITS POLAIRES DECORCES DE TRONC DE
Combretum glutinosum DANS LE SYSTEME BAW (60 :15 :25) APRES REVELATION AVEC LE
REACTIF DE GODIN
Dcoct aqueux 10 % Marron 0,15
Jauntre 0,50
Ractif violette 0,87
De Godin Macr aqueux Marron 0,06
Jauntre 0,50
Macr thanolique 80 % Marron 0,13
Jauntre 0,47
Noirtre 0,87
Extrait mthanolique Marron 0,00
Jaune 0,47
Violette 0,97
Les taches violettes aux rf 0,87 et 0,97 pourraient tre des composs terpniques.
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87

Tableau XIX : RESULTAT DE LA CCM DE LEXTRAIT APOLAIRE DECORCES DE TRONC DE
Combretum glutinosum DANS LE SYSTEME LIGROINE -ACETATE DETHYLE (1 :1) APRES
OBSERVATION A LUV 254 nm.

Extrait dichloromthanique rouge 0,13
UV254nm rouge 0,80

Deux substances ont t visibles cette longueur donde.

Tableau XX : RESULTAT DE LA CCM DE LEXTRAIT APOLAIRE DECORCES DE TRONC DE
OBSERVATION A LUV 366nm

Epuis DCM Verdtre 0,13
UV366nm verdtre 0,80
Les mmes taches observes 254 nm ont t visibles 366 nm aux mmes Rf. Ce serait les
mmes substances.

Tableau XXI : RESULTAT DE LA CCM DE LEXTRAIT APOLAIRE DECORCES DE TRONC DE
Combretum glutinosum DANS LE SYSTEME LIGROINE -ACETATE DETHYLE (1 :1) AVEC
REVELATION AU REACTIF DE GODIN

Epuis DCM violette 0,14
UV366 violette 0,82

Les substances observes pourraient tre les mmes que celles observes aprs lUV 254 nm et
366 nm, vues leurs rf.
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88

3.2.1.3.2 : Rsultats de la CCM sur les extraits dcorces de racines de Combretum
glutinosum
Les rsultats de la CCM sur les extraits dcorces de racines de Combretum glutinosum sont
consigns dans les tableaux XXII, XXIII, XXIV, XXV, XXVI, XXVII. Chaque substance a t
caractrise par sa fluorescence sous UV, son Rf et la couleur de la tache aprs rvlation par les
rvlateurs chimiques.

Tableau XXII : RESULTAT DE LA CCM DES EXTRAITS POLAIRES DECORCES DE RACINES DE
Combretum glutinosum DANS LE SYSTEME BAW (60:15:25) APRES OBSERVATION A LUV 254 nm


Dcoct Grise 0,16
aqueux " 0,25
" 0,43
" 0,78
Macr " 0,17
aqueux " 0,28
" 0,66
UV " 0,88
254 nm Macr thanolique 80 % " 0,11
" 0,26
" 0,46
" 0,86
" 0,57
" 0,93

Tous nos extraits ont donn des spots de couleur grise lUV 254 nm sauf lextrait
mthanolique qui a donn des spots de couleur marron.
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89

Tableau XXIII : RESULTAT DE LA CCM SUR LES EXTRAITS POLAIRES DECORCES DE RACINES
DE Combretum glutinosum DANS LE SYSTEME BAW (60 :15 :25) AVEC REVELATION A UV 366 nm

Dcoct aqueux 10% Blanche 0,35
UV " 092
366 nm Macr aqueux " 0,93
Extrait mthanolique Noire 0,46
" 0,77
Le dcoct aqueux 10 % a montr le plus grand nombre de spots cette longueur donde.

Tableau XXIV : RESULTAT DE LA CCM SUR LES EXTRAITS POLAIRES DECORCES DE RACINES
DE Combretum glutinosum DANS LE SSTEME BAW (60 :15 :25) APRES REVELATION AVEC LE
REACTIF DE GODIN

Dcoct aqueux 10 % Marron 0,13
Jauntre 0,58
Noirtre 0,87
Macr aqueux Marron 0,48
Ractif Noirtre 0,93
de Godin Macr thanolique 80 % Marron 0,00
Jauntre 0,47
Noirtre 0,93
Violette 0,47
Noirtre 0,97

Les taches de couleur noirtre ont apparue dans tous nos extraits de faon franche.
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90

Tableau XXV : RESULTAT DE LA CCM DE LEXTRAIT APOLAIRE DECORCES DE RACINES DE
Combretum glutinosum DANS LE SYSTEME LIGROINE -ACETATE DETHYLE (1:1) APRES
OBSERVATION A LUV 254 nm
Rvlation Extrait Tache Rf
Extrait dichloromthanique bleue 0,10
UV254nm " 0,25
" 0,86

Trois substances de couleur bleue ont t dceles cette longueur donde.

Tableau XXVI : RESULTAT DE LA CCM DE LEXTRAIT APOLAIRE DECORCES DE RACINES DE
OBSERVATION A LUV 366 nm.
Extrait dichloromthanique blanche 0,0
UV366nm " 0,20
grise 0,50
" 0,76
A cette longueur donde, nous avons observ deux sortes de spots de couleurs bleue et noire.

Tableau XXVII : RESULTAT DE LA CCM DE LEXTRAIT APOLAIRE DECORCES DE RACINES DE
REVELATION AVEC LE REACTIF DE GODIN

Extrait dichloromthanique marron 0,0
Ractif de " 0,10
Godin blanche 0,96

Deux sortes de substances chimiques ont t rvles avec le ractif de Godin.
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91

Figure n11: RESULTAT DE LA CCM APRES REVELATION AVEC LE REACTIF DE GODIN

3.2.2 : Tests biologiques
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92

3.2.2.1 : Dtermination de lactivit antioxydante
Le chromatogramme des extraits des corces de tronc et de racines de Combretum glutinosum
dans le systme de solvants BAW (60 :15 :25) pour les extraits polaires et ligroine Actate
dthyle (1 :1) pour les extraits apolaires ont t rvls par une solution de DPPH 2 mg / ml
(M/V) dans de lalcool mthylique. Lapparition de taches de couleur jauneblanc sur fond violet
nous a permis de mettre en vidence la prsence de substances activit anti-radicalaire. Ces
substances ont t caractrises par leur Rf .
3.2.2.1.1 : Test antioxydant sur les extraits dcorces de tronc de Combretum glutinosum
Lextrait dichloromthane a montr deux taches jaunes sur fond violet aux Rf 0,73 et 0,93.

Tableau XXVIII : RESULTAT DU TEST ANTIOXYDANT SUR CCM REALISE SUR LES EXTRAITS
POLAIRES DECORCES DE TRONC DE Combretum glutinosum DANS LE SYSTEME BAW (60 :15 :25)
APRES REVELATION PAR LE DPPH

Dcoct aqueux 10 % Jaune sur fond violet 0,10
" 0,67
" 0,86
Macr aqueux " 0,13
DPPH " 0,65
" 0,78
" 0,68
Extrait mthanolique " 0,26
" 0,47
" 0,83
Tous nos extraits ont donn des rsultats positifs au test anti-radicalaire. Le dcoct aqueux
10 % a montr le plus de spots.
3.2.2.1.2 : Test antioxydant sur les extraits dcorces de racines de Combretum glutinosum
Lextrait dichloromthane a montr deux taches jaunes sur fond violet aux Rf 0,78 et 0,88.
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93

Tableau XXIX : RESULTAT DU TEST ANTIOXYDANT SUR CCM REALISE SUR LES EXTRAITS
DECORCES DE TRONC DE Combretum glutinosum DANS LE SYSTEME BAW (60 :15 :25) APRES
REVELATION PAR LE DPPH


Dcoct aqueux 10 % Jaune sur fond violet 0,30
" 0,45
DPPH " 0,97
Macr aqueux " 0,25
" 0,32
" 097
" 0, 43
" 0,97
Epuis mthanolique " 0,13
" 0,50
" 0,93
Tous nos extraits ont ragi positivement au test anti-radicalaire. La plus franche positivit a t
obtenue avec le dcoct aqueux 10 % des corces de racines.

Figure n12: RESULTAT DU TEST ANTIOXYDANT
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94

3.2.2.2: Dtermination de lactivit antifongique
Dans nos conditions exprimentales, les extraits aqueux, thanoliques, mthanoliques et
dichloromthaniques des poudres des corces de tronc et de racines nont prsent aucune activit
antifongique la dose de 600 g sur les souches cliniques de Candida albicans isoles partir
des prlvements vaginaux. La validit de la procdure a t confirme par lactivit antifongique
manifeste par la nystatine la dose de 1 g utilis comme antifongique de rfrence, au Rf 0,48.

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95

3.2.2.3 : Dtermination de lactivit antibactrienne
3.2.2.3.1 : Test antibactrien sur Staphylococcus aureus
Tableau XXX : RESULTATS DU TEST ANTIBACTERIEN DES EXTRAITS DES ECORCES DE TRONC
ET DE RACINES DE Combretum glutinosum sur Staphylococcus aureus

Extraits Diamtres des zones Antibiotiques Diamtres des zones
dinhibition (en mm) standard dinhibition (en mm)
400 g 500 g

Ecorces de tronc
Dcot aqueux 10% 14 15 Cfalotine 24
Macr aqueux 11 10 Oxacilline 26
Macr thanoliques 80 % 9 10 Chloramphnicol 18
Epuis dichloromthane 13 13 Sulfamides 13
Epuis mthanolique 8 7
Ecorces de racines
Dcot aqueux 10 % 0 0
Macr aqueux 7 8
Macr thanoliques 80 % 9 10
Extrait dichloromthane 13 12
Extrait mthanolique 8 7

Tous les extraits des corces de tronc ont inhib la croissance de Staphylococcus aureus la
dose 500 g. La plus forte activit a t obtenue avec le dcoct aqueux avec un diamtre de zone
dinhibition de croissance de 15 mm.
Les extraits des corces de racines, nous avons obtenu la plus forte activit avec lextrait
dichloromthane la dose de 400 g avec un diamtre de zone dinhibition de croissance de 13
mm.
Pour les antibiotiques standard utiliss dans les mmes conditions, la plus forte activit a t
obtenue avec la cfalotine avec un diamtre de zone dinhibition de croissance de 26 mm.
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96

3.2.2.3.2 : Test antibactrien sur Escherichia coli
Tableau XXXI : RESULTAT DU TEST ANTIBACTERIEN DES EXTRAITS DES ECORCES DE TRONC
ET DE RACINES DE Combretum glutinosum sur Escherichia coli

dinhibition (en mm) standard dinhibition (en mm)
400 g 500 g
Ecorces de tronc
Dcoct aqueux 10 % 8 8 Chloramphnicol 0
Macr aqueux 0 0 Cfoxitine 21
Macr thanolique 80 % 0 0 Ciprofloxacine 0
Extrait dichloromthanique 9 10 Ttracycline 0
Extrait mthanolique 7
Ecorces de racines
Dcot aqueux 10 % 0 0
Macr aqueux 0 0
Macr thanoliques 80 % 0 0
Extrait dichloromthanique 8 7

Pour les corces tronc, trois extraits sur les cinq tests ont manifest une activit sur
Escherichia coli. Lextrait dichloromthane a montr la plus forte activit avec un diamtre de
zone dinhibition de croissance de 10 mm la dose de 400 g.
Quant aux corces de racines, seul lextrait dichloromthane la dose de 400 g a manifest une
activit anti-bactrienne sur Escherichia coli avec un diamtre de zone dinhibition de croissance
de 8 mm.
Sur les quatre antibiotiques standard tests dans les mmes conditions, seule la cfoxitine a
manifest une activit avec un diamtre de zone dinhibition de croissance de 21 mm.

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97

3.2.2.3.3 : Test antibactrien sur Salmonella enterica
Tableau XXXII : RESULTAT DU TEST ANTIBACTERIEN DES EXTRAITS DES ECORCES DE TRONC
ET DE RACINES DE Combretum glutinosum sur Salmonella enterica

Dinhibition (en mm) standard dinhibition (en mm)
400 g 500 g
Ecorces de tronc
Dcoct aqueux 10 % 0 0 Ciprofloxacine 33
Macr aqueux 0 0 Amoxicilline 0
Macr thanolique 80 % 0 0 Sulfamide 0
Eextrait dichloromthanique 20 16
Ecorces des racines
Dcoct aqueux 10 % 0 0
Macr aqueux 0 0
Macr thanolique 80 % 0 0
Epuis dichloromthanique 11 12

Seuls les extraits dichloromthane des deux organes ont t actifs sur Salmonella enterica avec
un diamtre de zone dinhibition de 20 mm pour lextrait DCM des corces de tronc la dose de
400 g et 12 mm pour lextrait DCM des corces de racines la dose de 500 g. Pour les
antibiotiques tests, seul la ciprofloxacine a t actif avec un diamtre de zone dinhibition de 33
mm.

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98

3.2.2.3.4 : Test antibactrien sur le Streptocoque hmolytique
Tableau XXXIII : RESULTAT DU TEST ANTIBACTERIEN DES EXTRAITS DES ECORCES DE TRONC
ET DE RACINES DE Combretum glutinosum sur le Streptocoque hmolytique

dinhibition (en mm) de rfrence dinhibition ( en mm)
400 g 500 g

Ecorces de tronc
Dcoct aqueux 11 12 Lincomycine 32
Macr aqueux 10 10 Ttracycline 0
Macr thanolique 80% 10 11 Chloramphnicol 24
Extrait dichloromthanique 13 13 Pnicilline G 22
Extrait mthanolique 12 9 Erythromycine 33
Ecorces de racines
Dcoct aqueux 10 % 10 9
Macr aqueux 0 0
Macr thanolique 80 % 8 8
Extrait dichloromthanique 9 7

Tous les extraits des corces de tronc ont inhib la croissance du Streptocoque. Lextrait
dichloromthanique la dose de 400 et 500 g a montr la plus forte activit avec un diamtre de
zone dinhibition de croissance de 13 mm.
Quant aux extraits dcorces racines, seul le macr aqueux na t actif. Le dcoct aqueux la
dose de 400 g a t le plus actif avec un diamtre de zone dinhibition de 10 mm.
Les plus fortes zones dinhibition de croissance ont t obtenues avec les antibiotiques de
rfrence dont seule la ttracycline na pas t active.

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99

3.2.2.4 : Dtermination de lactivit anti-inflammatoire
Tableau XXXIV : VARIATIONS DES VOLUMES MOYENS DANS LE TEMPS DES PATTES DES
SOURIS TRAITEES AVEC LES EXTRAITS AQUEUX DE Combretum glutinosum, LINDOMETACINE ET
LEAU DISTILLEE

Traitements Doses Volumes moyens (ml) dans le temps SD, N = 10

To 1 h 2h 3h 4h 5h
Dc aq ET 200 mg/kg 0,123 0,144 0,163 0,135 0,126 0,119
SD ET - 0,026 0,029 0,040 0,035 0,042 0,032
Dc aq ER 200 mg/kg 0,137 0,194 0,234 0,180 0,166 0,153
SD ER - 0,021 0,035 0,037 0,034 0,030 0,032
Indom 8 mg/kg 0,124 0,185 0,172 0,152 0,155 0,153
SD Indo - 0,018 0,011 0,035 0,032 0,027 0,025
Eau dist 0.025 ml/100 g 0,092 0,187 0,186 0,196 0,186 0,165
SD Eau dist - 0,020 0,040 0,042 0,038 0,031 0,032

Dec aq ET : Dcoct aqueux corces de tronc ;
SD ET : Dviation standard du dcoct aqueux des corces de tronc ;
Dc aq ER : Dcoct aqueux corces de racines ;
SD ER : Dviation standard du dcoct aqueux des corces de racines ;
Indo : Indomtacine ;
SD Indo : Dviation standard de lindomtacine ;
Eau dist : Eau distille ;
SD Eau dist : Dviation standard de leau distille ;
N = nombre de souris par lot.

Le lot qui a reu de leau distille prsente une augmentation significative du volume des pattes
contrairement ceux ayant t traits par lindomtacine et par nos extraits.

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100

Tableau XXXV : POURCENTAGE DAUGMENTATION DE LOEDEME DES PATTES DES SOURIS
TRAITEES PAR LES EXTRAITS AQUEUX DE Combretum glutinosum, LINDOMETACINE ET LEAU
DISTILLEE DANS LE TEMPS

Traitements Doses Pourcentage daugmentation de ldme dans le temps (%)

1h 2h 3h 4h 5h
Dec aq ET 200 mg/kg 41,18 59.80 32,35 23,53 16,67
Dec aq ET 200 mg/kg 41,61 70,80 31,39 21,17 11,68
Indomtacine 200 mg/kg 49,19 38,71 22,58 25,00 23,39
Eau distille 0,025 ml/100g 103,26 102,17 113,04 102,17 79,35

Linflammation atteint son pic aux environs de la troisime heure, au bout de laquelle elle
commence diminuer mme en labsence de traitement. Laugmentation de ldme est plus
significative chez le lot ayant reu uniquement de leau distille par rapport ceux ayant reu les
extraits aqueux de Combretum glutinosum.

Tableau XXXVI : POURCENTAGE DINHIBITION DE LOEDEME DES PATTES DANS LE TEMPS DES
SOURIS TRAITEES PAR LES EXTRAITS AQUEUX DE Combretum glutinosum PAR RAPPORT A
CELLES TRAITEES PAR LINDOMETACINE

Traitements Doses Pourcentage dinhibition de ldme dans le temps (%)

1h 2h 3h 4h 5h
Dec aq ET* 200 mg/kg 60,12 41,47 71,38 76,97 79,00
Dec aq ET** 200 mg/kg 59,71 30,70 72,23 79,28 85,28
Indomtacine*** 8 mg/kg 52,36 63,11 80,02 75,53 70,53

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101

*: t student = 0,00014 < 0,01 : trs significatif ;
** : t student = 0,00943 < 0,01 : trs significatif ;
*** : t student = 0,00011 < 0,01 : trs significatif.

Laction anti-inflammatoire de nos extraits semble plus lente se manifester que celle de
lindomtacine. Mais les extraits semblent avoir un effet qui se maintient plus longtemps dans le
temps que celui de lindomtacine. Lanalyse statistique (test t student) ne montre pas de
diffrence significative entre nos extraits et lindomtacine.

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102

3.2.2.5 : Dtermination de lactivit antiplasmodiale
Les rsultats du test antiplasmodiale sont consigns dans le tableau Lactivit sur
Plasmodium falciparum est matrialise par la concentration inhibitrice 50 (IC
50
).
Tableau XXXVII : CONCENTRATION INHIBITRICE 50 DES EXTRAITS DECORCES DE TRONC ET
CEUX DECORCES DE RACINES DE Combretum glutinosum

Traitements Valeurs de lIC
50
g/ml

Ecorces de tronc
Dcoct aqueux 10 % > 20
Macr aqueux > 20
Macr thanolique 80 % > 20
Extrait dichloromthanique > 20
Extrait mthanolique > 20
Ecorces de racines
Dcoct aqueux 10 % 10,90
Macr aqueux 8,85
Macr thanolique 80 % 9,13
Epuis dichloromthanique > 20
Extrait mthanolique 7,47
Chloroquine 0,091

Lextrait mthanolique des corces de racines a t le plus actif avec une IC
50
de 7,47 g/ml,
mais demeure moins actif que la chloroquine qui a une IC
50
de 0,091 g/ml.

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103

ANALYSE ET ANALYSE ET ANALYSE ET ANALYSE ET
DSCUSSON DSCUSSON DSCUSSON DSCUSSON
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104

Analyse et discussion
Notre tude nous a permis didentifier les diffrents groupes chimiques prsents dans les
poudres des corces de tronc et de racines travers des ractions de caractrisation qui ont t
confirmes par la chromatographie sur couche mince, Nous avons galement valu les activits
antioxydante, antibactrienne, anti-inflammatoire et antiplasmodiale, cela, en nous basant sur les
donnes dj existantes sur les utilisations traditionnelles de la plante.

Le screening phytochimique des poudres des corces de tronc et de racines a montr la
prsence dans les deux organes des groupes chimiques suivants :
des tanins avec une prdominance des tanins galliques ; selon Traor, en 1999, les feuilles
renferment 7,002 % de tanins. Ces composs polyphnoliques sont des substances reconnues
pour leur proprit antioxydante (Traor, 1999). Les tanins sont galement reconnus pour leur
pouvoir de fixation aux protines avec une tendance limpermabilit des couches externes et la
protection des couches sous jacentes, leurs effets antiseptiques et leurs proprits de
renouvellement des tissus pourraient expliquer lutilisation traditionnelle des feuilles et des
corces de la plante dans le traitement des plaies, des furoncles et des abcs (Kerharo et Adam,
1974 ; Bruneton, 1993 ;);
des saponosides, avec un indice de mousse de 143,33 pour les corces de tronc et 500 pour les
corces de racines ; ces substances, comme les tanins, sont prsentes dans la plupart des espces
de Combretum et peuvent tre responsables de lactivit antibactrienne (Kerharo et Adam,
1974 ; Mc Gaw et al., 2001 ).
des leucoanthocyanes : ces substances qui sont des flavonodes peuvent justifier en partie
laction diurtique (Pousset, 2004).
des polyuronides (mucilages) : selon Hostettmann et al., 1996, les gommes, plusieurs espces
de Combretum ont des gommes dont la composition est similaire celle de la gomme arabique.
Les gommes qui sont des polysaccharides assurent la rigidit des parois cellulaires des vgtaux
suprieurs, et protgent les tissus contre la dshydratation. (Sanogo, 1999).
des strols et triterpnes ;
des coumarines.
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105

La prsence de coumarines peut confrer la plante des proprits anticoagulantes, les triterpnes
permettent de lutter contre les inflammations, les holosides peuvent avoir des effets
hmostatiques, ce qui justifie lutilisation traditionnelle du dcoct des feuilles de la plante dans
le traitement des plaies, des blessures, des anmies et des bronchites (Bruneton, 1993).
La teneur en eau tait infrieure 10 % aussi bien dans les corces de tronc que dans celles de
racines, ce qui justifie une bonne conservation de ces drogues.

Les substances extractibles par leau ont t de 45,40 % et 30,31 % respectivement pour les
corces de tronc et celles de racines. Ces substances reprsentent celles utilises par la Mdecine
Traditionnelle car cette dernire nutilise que leau comme solvant dextraction.
Les cendres totales ont t de 6,32 %et 10,45 % respectivement pour les corces de tronc et celles
de racines. Ces substances renseignent sur la charge minrale des matires vgtales.
Quant aux cendres chlorhydriques qui indiquent la contamination de la drogue par des lments
siliceux, elles ont t de 3,20 % et 5,97 % respectivement pour les corces de tronc et celles de
racines. Les cendres sufuriques qui rsultent de la conversion des sels organiques en sulfates ont,
quant elles, t de 5,62 % et 6,21 % respectivement pour les corces de tronc et celles de
racines.

Nous avons ralis cinq types dextractions : une macration leau trois fois 24 heures, une
macration lthanol 80 % trois fois 24 heures, une dcoction 10 %, une extraction par
puisement avec le dichloromthane et une extraction par puisement avec le mthanol sur les
deux organes de plante. Les extraits thanoliques ont donn les plus forts rendements dextraction
aussi bien pour les corces de tronc que celles de racines avec respectivement 33,08 % et 20,90
%. Nos plus faibles rendements dextraction ont t obtenus avec les extraits dichloromthanes
pour les deux organes de plante avec 1,06 % et 1,59 % respectivement pour les corces de tronc
et celles de racines.
Les chromatographies sur couche mince que nous avons effectues sur les extraits des deux
organes nous ont permis de confirmer la prsence des diffrents groupes chimiques identifis lors
des ractions de caractrisation.

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106

Le test antioxydant ralis sur des plaques CCM a donn de nombreuses taches
antiradicalaires. Tous les extraits ont t soumis ce test et tous y ont positivement ragi. La
plus forte activit a t obtenue avec les dcocts aqueux 10 % des deux organes de plante.
Cette activit peut tre explique par la prsence abondante de tanins, de coumarines aussi bien
dans les corces de tronc que celles de racines. En effet, ces substances antioxydantes naturelles
rencontres chez les vgtaux, rentrent dans larsenal thrapeutique en ce qui concerne la lutte
contre lathrosclrose, la polyarthrite chronique, lasthme et les cancers (Chevalley, 2000).

Pour lvaluation de lactivit antifongique, nous avons utilis la mthode bioautographique
sur plaque CCM (Diallo, 2000). Tous les extraits des deux organes de plante ont t soumis ce
test. Toutefois, dans nos conditions exprimentales, les extraits aqueux, thanoliques,
dichloromthanes et mthanoliques des deux organes de plante ne prsentent pas dactivit
antifongique contre les souches cliniques de Candida albicans la dose de 600 g. Seule la
nystatine, mdicament antifongique utilis comme tmoin la dose de 100 g, a prsent une
zone dinhibition de croissance de Candida albicans au Rf 0,48, ce qui confirme la validit de la
mthode utilise. En ce qui concerne les extraits dcorces de tronc, nos rsultats confirment ceux
obtenus par Keita, 2002. Cependant, selon le mme auteur, les feuilles et les corces de racines
de la plante ont faiblement inhib la croissance de Candida albicans la dose de 600 g. Cette
activit peut tre due la richesse de la famille des Combretaceae en tanins et substances
polyphnoliques qui possdent une activit antimicrobienne (Keita, 2002).

Pour lvaluation de lactivit antibactrienne de nos extraits, nous avons utilis la mthode
de diffusion en agar. Tous les extraits aqueux, thanoliques, dichloromthaniques et
mthanoliques des corces de tronc et de racines ont t soumis au test. Pour le choix des germes
tester, nous nous sommes rfrs aux donnes de la littrature pour choisir ceux qui sont les
plus rencontrs dans les affections courantes pour lesquelles la plante est utilise
traditionnellement.
Ainsi, sur Staphylococcus aureus, tous les extraits dcorces de tronc se sont montrs actifs. Le
dcoct aqueux la dose de 500 g a manifest la plus forte activit avec un diamtre de zone
dinhibition de croissance de 15 mm. Pour les extraits dcorces de racines, cest lextrait
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dichloromthanique la dose de 400 g qui a montr la plus forte activit avec un diamtre de
zone dinhibition de croissance de 13 mm.
Sur Escherichia coli, la dose de 400 et 500 g, le dcoct aqueux, les extraits
dichloromthanique et mthanolique des corces de tronc ont inhib la croissance du germe.
Lextrait dichloromthanique la dose de 500 g a montr la plus forte inhibition de croissance
avec un diamtre dinhibition de 9 mm. Le macr aqueux et le macr thanolique du mme
organe na pas t actif sur le germe. Par ailleurs, seul lextrait dichloromthanique des corces
de racines a t actif sur le germe avec un diamtre de zone dinhibition de croissance de 8 mm.
En ce qui concerne Salmonella enterica, seuls les extraits dichloromthaniques des deux organes
de plante ont t actifs aussi bien la dose de 400, qu 500 g. Lpuis dichloromthane des
corces de tronc la dose de 400 g et celui des corces de racines la dose de 500 g ont t les
plus actifs avec respectivement 20 mm et 12 mm de diamtre de zone dinhibition de croissance.
Le test antibactrien sur le Streptocoque hmolytique a montr une inhibition de croissance
pour tous les extraits des deux organes de plante. Les puiss dichloromthanes des deux organes
de plante se sont montrs les plus actifs avec des diamtres de zone dinhibition de croissance de
13 mm pour les corces de tronc la dose de 400 g et 9 mm pour les corces de racines la
dose de 500 g.
Nos rsultats confirment ceux dautres auteurs. Ainsi, selon Keita, 2002, Pousset, en 1989, a
signal la proprit antibactrienne des extraits dcorces de tronc, de tige, de racines, de
Combretum glutinosum sur le Streptocoque, le Staphylocoque et Escherichia coli. Comme nous
lavons dit ci haut, cette activit antibactrienne peut tre explique par la richesse de la famille
des Combretaceae en tanins et autres substances polyphnoliques qui confrent cette famille
une activit antimicrobienne. Les extraits chloroformiques et mthanoliques des feuilles et des
tiges ont inhib la croissance de Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Pseudomonas
aeruginosa et Escherichia coli, tandis que lextrait aqueux na pas t actif
(Hostettmann et al., 1996 ; Almogboul et al., 1998 in Keita, 2002).

Pour lvaluation de lactivit anti-inflammatoire de nos extraits, nous avons utilis la
technique de ldme de la patte de la souris provoqu par la carraghnine. Les dcocts aqueux
des deux organes de plante ont t soumis ce test la dose de 200 mg/kg. Dans nos conditions
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exprimentales, lactivit anti-inflammatoire de nos extraits a t significative partir de la
troisime heure avec un pourcentage dinhibition de ldme de 71,38 % et 72,23 %
respectivement pour le dcoct aqueux des corces de tronc et celui des corces de racines.
Lactivit a atteint son pic la cinquime heure pour les deux extraits avec un pourcentage
dinhibition de ldme de 97 % pour le dcoct aqueux des corces de tronc et 85,28 % pour le
dcoct aqueux des corces de racines. Lindomtacine, utilise comme anti-inflammatoire
standard la dose 8 mg/kg a montr sa plus significative activit la troisime heure, soit un
pourcentage dinhibition de ldme de 85,02 %.
Par ailleurs, nous avons utilis le test t student pour lanalyse statistique de nos rsultats. Ainsi,
nous avons compar les rsultats des lots de souris traites par nos extraits avec le lot de souris
traites par lindomtacine. Nous avons constat que nos rsultats ont t statistiquement
significatifs de la premire la cinquime heure de lexprimentation. Cela nous permet de dire
que nos extraits prsentent une relle activit anti-inflammatoire la dose utilise.
Au cours du screening phytochimique sur la poudre des corces de tronc et celle des corces de
racines, nous avons constat la prsence dans les deux organes, de saponosides, de strols et
triterpnes. selon Bruneton, ces composs sont dous dactivit anti-inflammatoire et anti-
dmateuse (Bruneton, 1993). Par ailleurs, nos rsultats sont en conformit avec ceux dautres
auteurs qui ont travaill sur lactivit anti-inflammatoire des espces de la famille des
Combretaceae. Ainsi, Mc Gaw et al., ont test avec succs une vingtaine despces de cette
famille pour cette activit (Mc Gaw et al., 2001).
Ces rsultats justifient les utilisations traditionnelles de Combretum glutinosum dans le traitement
des affections courantes telles que les plaies et blessures, les bronchites, les troubles urinaires, la
blennorragie, les pneumonies.

Lvaluation de lactivit antiplasmodiale de nos extraits a t faite sur une souche de
Plasmodium falciparum in vitro rsistante la chloroquine et la pyrimthamine. Le dcoct
aqueux, le macr aqueux, le macr thanolique 80 %, les extraits dichloromthaniques et
mthanoliques des deux organes de plante ont t soumis ce test. Les extraits des corces de
racines ont t plus actifs que ceux dcorces de tronc. Lextrait mthanolique a t le plus actif,
suivi du macr aqueux, du macr thanolique 80 %, du dcoct 10 % et enfin de lextrait
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109

dichloromthanique avec des concentrations inhibitrices 50 respectives de 7,47, 8,85, 9,13 10,90 ;
et > 20 g/ml.
La chloroquine, antipaluden standard, utilise la concentration maximale de 200 ng/ml a t
plus active que nos extraits avec une CI
50
de 0,091 g/ml. Le plus actif de nos extraits a t
lpuis mthanolique des corces de racines avec une CI
50
de 7,47 ng/ml.
Dans nos conditions exprimentales, le dcoct aqueux des corces de racines, avec une CI
50
de
10,90 g/ml, a t plus efficace que celui du malarial qui a une CI
50
de 600 g/ml, ainsi que ses
constituants. En effet, les dcocts aqueux de Cassia occidentali L., Lippia chevalieri Mold., et
Spilantes oleraceae Jacq ont des CI
50
respectives

de 660, 180 et 300 g/ml.
Lutilisation traditionnelle de Combretum glutinosum dans le traitement de la fivre, lictre,
lanmie (Malgras, 1992), qui sont des symptmes du paludisme, serait ainsi justifie.

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CONCLUSON CONCLUSON CONCLUSON CONCLUSON

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Conclusion
Notre tude ralise au Dpartement Mdecine Traditionnelle (DMT) de lInstitut National de
Recherche en Sant Publique (INRSP) de Bamako nous a permis de mettre en vidence la
prsence des diffrents groupes chimiques dans les poudres des corces de tronc et celle de
racines de Combretum glutinosum ainsi que lvaluation des activits biologiques de la plante.
Les tudes phytochimiques ont montr la prsence dans les deux organes de plante, de tanins,
de strols et triterpnes, des leucoanthocyanes, des mucilages, de saponosides, des coumarines, ce
qui a t confirm par la chromatographie sur couche mince.
Au cours des extractions, les plus forts rendements ont t obtenus avec les extraits thanoliques
aussi bien pour les corces de tronc que pour celles de racine avec respectivement 33,08 % et
20,90 %. Les dichloromthaniques ont donn les plus faibles rendements dextraction avec 1,06
% et 1,59 % respectivement pour les corces de tronc et celles de racines.
Tous les extraits des deux organes de plante se sont montrs actifs sur le DPPH. Les dcocts
aqueux 10 % ont t les plus actifs.
Lextrait dichloromthanique des corces de tronc, la dose de 400 g, a montr la plus grande
efficacit sur Salmonella enterica avec un diamtre dinhibition de croissance de 20 mm.
Lactivit anti-inflammatoire des dcocts aqueux des deux organes de plantes, la dose de 200
mg/kg de poids corporel, se manifeste de manire significative ds la troisime heure de
lexprimentation et atteint sont pic la cinquime heure, soit 79,00 % et 85,28 % dinhibition de
loedme respectivement pour le dcoct aqueux des corces de tronc et celui des corces de
racines.
Pour ce qui est de lactivit antiplasmodiale sur Plasmodium falciparum, cest lpuis
mthanolique des corces de racines qui a t le plus actif de nos extraits avec une CI
50
de 7,47
g/ml.
Ainsi donc, notre travail nous a permis de confirmer les utilisations traditionnelles de Combretum
glutinosum dans le traitement des affections courantes. Il serait toutefois intressant
dapprofondir les investigations phytochimiques et biologiques sur cette plante afin disoler les
molcules responsables des activits observes, ce qui permettra dlargir larsenal thrapeutique
des mdicaments base de plantes, moindre cot, pour une population africaine faible
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pouvoir conomique et qui, de surcrot, est trs sensible une valorisation de sa mdecine
traditionnelle.
Dores et dj, nous venons de prouver une fois de plus, que les plantes mdicinales africaines
regorgent dnormes potentialits thrapeutiques vrifiables par des mthodes simples et fiables
sur le plan scientifique.
Nous invitons enfin les populations une utilisation bon escient des plantes mdicinales, car
un usage abusif de ces plantes conduira sans doute une rarfaction, voire leur totale disparition.

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120

ANNEXES ANNEXES ANNEXES ANNEXES
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121

Annexes :
Annexe1 : Composition des ractifs
Ractif de MAYER
Iodure de potassium.25 g
Chlorure mercurique.6,77 g
Eau distille q s p.50 ml
Ractif de DRAGENDORFF
Nitrate de bismuth pulvris20,80 g
Iode..38,10 g
Iodure de sodium anhydre200 g
Agiter pendant 30 mn
Ractif de GUIGNARD (Papier picrosod)
Acide picrique..1 g
Carbonate de sodium10 g
Ractif de KEEDE
Acide dinitro 3,5 benzoique..1 g
Ethanol 95 alcoolique q s p100 ml
Ractif de RAYMOND MARTHOUD
1,3 dinitrobenzne1 g
Ethanol 96 alcoolique q s p..100 ml
Ractif de BALJET
Acide picrique1 g
Ethanol 50 alcoolique q s p100 ml
Ractif de FEHLING
Solution A :
CuSO
4
35 g
Eau distille500 ml
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122

H
2
SO
4
..5 ml
Laisser refroidir et complter 1 litre avec de leau distille.
Solution B :
Sel de Seignette.150 g
Eau distille...500 ml
Refroidir et ajouter 300 ml de lessive non carbonate 1 litre avec de leau distille.
NB : Mlanger les deux solutions volume gal au moment de lemploi.
Ractif de GODIN
Solution A :
Vanilline..1 g
Ethanol 95 alcoolique1000 ml
Solution B
Acide perchlorique..3 ml
Eau distille.100 ml
Mlanger les deux solutions au moment de lemploi, ensuite pulvriser sur les plaques CCM avec
une solution de H
2
SO
4
4 %.
Ractif du DPPH
1,1 diphnyl 2 picrylhydrazyle en solution mthanolique 2 mg / ml ( M / V ).

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Annexe2 : Formule pour la nutrition des souris
Pour des raisons pratiques, la formule est calcule 100 kg daliments, ce qui permet
dexprimer les composants et les apports nutritifs en pourcentage :
Farine de mas...50 kg
Pte darachide..20 kg
Son de mil..17,5 kg
Lait en poudre.3 kg
Farine de poisson7 kg
Feuilles de salade piles..2 kg
Sel gemme0,5 kg
Eau q s p 100 kg...38 l.

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Fiche signaltique
Auteur: Boubacar Souley AMADOU
Titre : Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum
glutinosum Perr. ex DC. (Combretaceae)
Anne universitaire : 2004 - 2005
Pays dorigine : Rpublique du Niger
Ville de soutenance : Bamako (Rpublique du Mali)
Lieu de dpt : Bibliothque de la Facult de Mdecine, de Pharmacie et
DOdonto-Stomatologie de lUniversit de Bamako
Secteurs dintrt : Pharmacognosie, Mdecine traditionnelle.

Rsum
Notre travail a port sur ltude de la phytochimie et des activits biologiques de Combretum
glutinosum, plante utilise en Afrique dans le traitement des affections courantes.
Le screening phytochimique ralis sur les poudres des corces de tronc et de racines a permis
de mettre en vidence des groupes chimiques susceptibles de justifier les utilisations
traditionnelles de la plante.
Tous les extraits des deux organes de plante ont ragi positivement au test antiradicalaire
contre le 1, 1 diphnyl 2 picryl hydrazyle.
Lextrait dichloromthanique des corces de tronc, la dose de 400 g, a montr une action
antibactrienne intressante sur Salmonella enterica avec un diamtre de zone dinhibition de
croissance de 20 mm.
Lactivit anti-inflammatoire des dcocts aqueux des deux organes de plante, la dose de 200
mg/kg de poids corporel, est comparable celle de lindomtacine la dose de 8 mg/kg.
Lextrait mthanolique des corces de racines a montr la plus forte activit antiplasmodiale sur
Plasmodium falciparum avec une concentration inhibitrice 50 de 7,47 g/ml.

Mots cls : pharmacognosie, mdecine traditionnelle, Combretum glutinosum, screening
phytochimique, antioxydante, antifongique, antibactrienne, anti-inflammatoire, antiplasmodiale.
Thse de pharmacie


1

Je jure, en prsence des matres de la Facult, des conseillers de
lOrdre des Pharmaciens, et de mes condisciples :
Dhonorer ceux qui mont instruit dans les prceptes de mon art et
de leur tmoigner ma reconnaissance en restant fidle leur
enseignement ;
Dexercer dans lintrt de la Sant Publique ma profession avec
conscience et de respecter non seulement la lgislation en vigueur,
mai aussi les rgles de lhonneur, de la probit et du
dsintressement ;
De ne jamais oublier ma responsabilit et mes devoirs envers le
malade et sa dignit humaine ;
En aucun cas, je ne consentirai utiliser mes connaissances et
mon tat pour corrompre les murs et favoriser les actes criminels ;
Que les hommes maccordent leur estime si je suis fidle mes
promesses ;
Que je sois couvert dopprobre et mpris de mes confrres si jy
manque !

Je le jure!

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