Biologia

Imunohematologia Para os sistema ABO, os indivduos geralmente costumam ter anticorpos contra os antgenos estranhos mesmo no tendo sido expostos a esses antgenos (por exemplo, via transfuso). Isso ocorre devido a exposio de antgenos semelhantes aos antgenos A ou B presentes em alimentos. Os anticorpos formados dessa maneira so conhecidos como anticorpos naturais e os produzidos via contato, caso de outros sistemas sanguneos, so conhecidos como imunes. Os naturais so do tipo IgM e os imunes so IgG. Sistema ABO O sistema ABO composto pela ao dos genes H, h, A, B, e Rh. Os genes H, h so responsveis pela produo de um carboidrato complexo expresso na superfcie das hemcias caso o indivduo seja HH ou Hh. O indivduo hh no produz esse carboidrato complexo e conhecido como tipo O Bombay. Esse indivduo apresenta em um primeiro momento o fentipo O por causar aglutinao de sangues A e B, porm tambm apresenta reao contra sangue tipo O, ou seja, contra seu antgeno H e por isso no pode receber transfuses de sangue tipo O normais, somente O Bombay. uma situao difcil, pois a frequncia desse fentipo de 1:1.000.000. Os genes A e B determinam a adio de mais um acar ao antgeno H, Lfucose e D-galactose, respectivamente. Como no so todos os antgenos H que so alterados, os indivduos no apresentam anticorpos anti-H. O sistema Rh determinado pela presena ou no de antgenos Rh, sendo Rh+ o indivduo que apresenta esse antgeno e Rh- o que no apresenta. Atualmente, a determinao de tipos sanguneos no deve ser feita em lminas e sim em microplacas e deve ser realizada a prova direta (reao do sangue do paciente contra anti-soros) e a prova reversar (reao do soro do paciente contra hemcias conhecidas). Alm desses genes, h os genes Se e se envolvidos. Eles determinam a presena desses antgenos em secrees como em saliva e smen. O gentipo SeSe e Sese determina a secreo, e o sese a no secreo. um conhecimento que pode ser utilizado em anlises forenses de caso de estrupo, onde o smen pode ser analisado quanto a presena ou ausncia dos antgenos e os antgenos, quando presentes, podem ser investigados e serem determinados. Organizao gnica de procariotos: Haplides Dispersos no citoplasma Organizado em operons (segmentos com vrios genes organizados com um promotor e terminador comum e regulados da mesma maneira) No possuem introns e xons, so traduzidos sem processamento posterior duplicao

Presena de plasmdeos.

Organizao gnica de eucariotos: Presena de espcies diplides Organizados em cromossomos, forma de condensao do DNA Presena de ntrons e xons (a fita duplicada, recebe um cap na ponta 5 e um poli A na 3 , sofre vrios splicings que removem os ntrons)

Estrutura dos cidos nuclicos: Os cidos nuclicos so formados por unidades chamadas nucleotdeos. So compostos de uma base prica ou pirimdica, ligada a uma pentose (desoxirribose para DNA e ribose para RNA) e essa pentose ligada a um fostato na posio 5 . O conjunto base + pentose conhecido como nucleosdeo. As ligaes entre os nucleotdeos se d pela ligao entre o fosfato da posio 5 o carbono da pentose na posio 3 . Essa a estrutura que define uma fita de DNA. A sua fita complementar tem a mesma estrutura e pareada com a primeira atravs de ligaes de hidrognio existente entre uma base prica e uma pirimdica. A base prica possui dois anis e grande e a base pirimdica possui apenas um anel e pequena. A nica interao possvel espacialmente entre ambas. Uma interao purina + purina seria impossvel, pois no caberia dentro da estrutura de dupla hlice do DNA. J a pirimidina + pirimidina no ocorreria porque uma no alcanaria a outra. Por isso, a conta A + G = C + T vlida, pois a soma de purinas igual a soma de pirimidinas. O DNA humano possui cerca de 1.8 m quando esticado e no est compactado. Para passar pelo processo de diviso, deve ser compactado e nesse estado chega a ocupar um espao de 120 micrometros. O DNA se enrola entorno de histonas de ncleo para formar um octmero. Esses octmeros so unidos por histonas de ligao. Ao composto DNA + histonas se d o nome de cromatina. A cromatina pode ser classificada em eucromatina (cromatina que possui DNA ativo, ou seja, que efetivamente traduzido) e heterocromatina. A heterocromatina possui ainda uma subdiviso em heterocromatina constitutiva (no traduzida e fica prxima ao centrmero e nunca descompactada) e heterocromatina facultativa (cromatina que pode ser ativa, caso do cromossomo X das fmeas de mamferos que se compactam aleatoriamente). A informao contida na sequencia de nucleotdeos traduzida para produzir uma sequncia de aminocidos que formaro os polipeptdeos e protenas. Cada aminocido codificado por uma trinca de nucleotdeos, um cdon. Existem 20 aminocidos diferentes, mas so possveis 64 combinaes de cdons (4 elevado a terceira). 3 cdons codificam o final de um gene (UAA, UGA e UAG). Os outros 61 codificam aminocidos. Por existir mais de um cdon para um aminocido, o cdigo dito redundante ou degenerado. Transcrio: O DNA duplicado pela ao de muitas estruturas, entre elas a ao de um promotor e da polimerase II, que literalmente copia a fita molde.

A transcrio tem incio com o reconhecimento de regies promotoras (TATA-box) por fatores de transcrio. Quando h essas interaes, a polimerase consegue se ligar a esse complexo e com sua atividade helicase abre a dupla fita de DNA. Nesse momento se d incio da transcrio da fita molde. Porm, esse incio se d de forma abortiva, ou seja, a fita produzida no consegue ser alongada, pois se perde. Isso impedido pelo fator sigma, que ajuda a manter a fita de RNA ligada ao DNA at que atinga o tamanho de 23 pb. A fita molde lida no sentido 3 para 5 e produz uma fita 5 para 3 . Esse processo finalizado ao encontrar uma sequencia de finalizao, UGA, UAG ou UAA. A fita produzida ento processada e ganha uma 7-metilguanosina na ponta 5 e uma sequncia de 200 adeninas na ponta 3 . Essas duas adies tm a funo de proteger o mRNA de ataques de outras enzimas e facilitar o transporte do ncleo para o citoplasma. Aps essa etapa, a fita processada sofre splicing, ou seja, remoo de ntrons (trechos de RNA sem funo) para que fiquem apenas o xons (trecho de RNA funcional). Somente ento a fita chamada de mRNA e ser encaminhada para os ribossomos para haver traduo com a ajuda dos tRNAs. Traduo: processo de gerao do polipeptdeo a partir do mRNA. O mRNA lido pelo rRNA (duas unidades) da ponta 5 para a 3 . H uma srie de enzimas envolvidas no processo, mas a mais relevante a petidiltransferase, que faz a ligao peptdica se fechar entre os aminocidos. O cdon de iniciao o AUG, que traduz uma metionina. Geralmente essa metionina removida do polipeptdeo antes da finalizao da traduo. Aps a traduo desse primeiro aminocido pela interao tRNA (anticdon) e mRNA (cdon) dentro do rRNA, o rRNA avana 3 nucleotdeos e o prximo cdon pode ser combinado com o anticdon do tRNA correspondente e o prximo aminocido adicionado metionina na sua poro carboxi terminal. Isso finalizado quando uma das sequncias de finalizao so encontradas pelo rRNA e suas enzimas. A protena pode ser processada aps o processo de traduo atravs de vrios processos: clivagem em partes menores, adio de acares e fostatos, combinao com outros polipeptdeos, etc. Replicao: A replicao semelhante transcrio em alguns aspectos, mas tem incio com o reconhecimento de uma origem de replicao por vrias enzimas ao invs de ser feita por fatores de transcrio. Enzimas como helicases (que abrem o DNA), topoisomerases (que aliviam a toro das fitas) e SBBs (que estabilizam as duas fitas abertas na sua forma de fita simples) entram em ao para estabilizar o DNA aberto. Aps sua abertura, as primases sintetizam primers que tem a funo de se ligar ao DNA e facilitar a iniciao da ao da polimerase III, que por sua vez ir ler a fita me no sentido 3 para 5 e haver sntese da nova fita no sentido 5 para 3.

A abertura do DNA d incio sua duplicao em ambos os sentidos, ou seja, bidirecional. A sua duplicao na fita 3 para 5 (fita lder) se d de forma contnua at que se encontre uma estrutura de finalizao. J na fita 5 para 3 a duplicao descontnua e so necessrios vrios primers, pois a duplicao tambm feita no sentido 5 para 3 , mas a fita est no sentido inverso. Como a duplicao das duas fitas feita pela mesma polimerase III, a fita invertida (fita tardia) duplicada de forma descontnua, com produo de vrios pequenos segmentos (fragmentos de Okazaki) que sero unidos posteriormente. Todos os primers so removidos e substitudos por DNA e a duplicao se d com algumas pausas para que a polimerase I possa fazer reparos de pareamento incorreto. Mutaes: Causas espontneas: - Tautomerizao: a base prica ou pirimdica pode sofrer uma reao de tautomerizao em sua estrutura e alterar o posicionamento de seus hidrognios, levando a um pareamento incorreto durante a duplicao do DNA. - Depurinizao: a perda da purina da estrutura do DNA, o que deixa a ribose para trs. Enzimas de reparo podem usar a fita complementar para adicionar novamente a purina faltante. Porm, se isso ocorrer enquanto h replicao, as fitas ficam distantes e no h referencia para as enzimas de reparo atuarem corretamente, o que pode causar a troca do resduo de nucleotdeo. - Pareamento incorreto: o repareamento das fitas de DNA aps replicao pode se dar de forma incorreta, o que pode levar a inseres e delees de trechos de DNA. Classificao: - Troca simples: trocas entre purinas ou pirimidinas (transies) so comuns, mas trocas entre purinas e pirimidinas (transverso) tambm podem ocorrer. Essas trocas podem no alterar a traduo em protenas por ocorrer em ntrons ou por ocorrer em xons, mas que o novo cdon codifique o mesmo aminocido (mutao silenciosa). Se houver troca por um cdon de outro aminocido, houve uma mutao misense . Se houver a troca do cdon por um cdon de terminao h uma mutao sem sentido. - Insero: insero de uma base, ou um conjunto de bases em um local do DNA - Deleo: oposto da insero - Amplificao: repetio do mesmo trecho do DNA de forma sequencial, com aumento da cadeia - Inverso: troca do sentido de um trecho do DNA - Translocao: troca de trechos de DNA entre fitas diferentes PCR:

A tcnica serve para amplificar uma determinada sequncia de DNA. Os materiais necessrios incluem primers especficos para a regio a ser amplificada (2 tipos, cada um para anelar-se ponta 3 de cada fita de DNA), polimerase (geralmente a Taq polimerase que termoestvel), dNTPs (que so os nucleotdeos), soluo tampo e a amostra. O procedimento consiste em vrios ciclos (20-40) de termociclagem, ou seja, etapas sequenciais de altas e baixas temperaturas. A 95C as fitas de DNA se abrem. A temperatura reduzida para 50-65C para que ocorra o anelamento com os primers e ento elevada para 72C para que a polimerase alongue o segmento de DNA. Cada etapa dura de alguns segundos a poucos minutos. O final da etapa de alongamento determinado pelo tempo e a cada ciclo so gerados fragmentos mais curtos de DNA at que todos os novos segmentos gerados tenham o tamanho exato do trecho compreendido entre os primers. Assumindo uma reao eficiente, a cada ciclo a quantidade de DNA dobra. muito til para amplificar um determinado trecho de DNA para que seja analisado. Porm, se os primers se anelarem com algum segmento contaminante, a sequncia de DNA amplificada no ser a sequncia alvo. Aps o processo de amplificao o material pode ser detectado atravs de uma eletroforese em gel e ter o seu peso molecular comparado contra um padro. Uma variante dessa tcnica o PCR em tempo real. Essa tcnica possui duas subvariantes. A primeira feita com um composto que emite fluorescncia quando encontra uma dupla fita de DNA. medida que a amplificao prossegue, a quantidade de luz emitida aumenta, pois a quantidade de DNA aumenta. O problema que esse composto emite luz tambm para dmeros de primers, que podem acabar se formando durante a amplificao, fornecendo um resultado falso positivo. A segunda envolve uma fita de DNA marcado com um material que emite fluorescncia somente quando est separado da fita. Nesse tipo de reao so utilizadas duas fitas sintticas, os primers e a fita marcada. Durante a fase de anelamento dos primers, as fitas marcadas tambm se anelam uma sequncia especfica do DNA. Quando a polimerase chega nesta fita ela exerce uma atividade de exonuclease e acaba degradando a fita, liberando o material fluorescente para ser excitado por uma fonte de luz. muito til, pois permite a quantificao de DNA mesmo na presena de uma fita contaminante, pois provavelmente essa fita marcada no ir se combinar com a fita contaminante. Alm disso, permite a anlise multiplex, ou seja, uma reao de amplificao de vrios segmentos de DNA diferentes. Para isso necessrio utilizar uma fita marcada para cada trecho diferente, e a marcao deve emitir luz em comprimentos de onda diferentes. Deriva gentica: Processo que altera drasticamente a frequncia de alelos na populao, mas que no devido ao processo de seleo natural. O exemplo clssico o do impacto de um esteroide que pode ter eliminado os dinossauros milhes de anos

atrs. Outro exemplo o da desertificao de uma floresta, que acaba com a variabilidade gentica, podendo eliminar certos alelos de uma populao. Fluxo gnico: o processo de mistura de alelos que ocorre quando duas populaes separadas misturam seus genes devido a migrao de uma das partes. um processo que combate a especiao. Teorema de Hardy-Weinberg: De acordo com este teorema, se alguns critrios forem obedecidos, a frequncia de alelos em uma populao constante de gerao em gerao. Para um caso simples, dois alelos A e a que apresentam frequncias p e q, seus gentipos tero frequncia p2 + 2pq + q2 = 1 (AA, Aa e aa, respectivamente). Os critrios para tal comportamento so: a populao muito grande (no sujeita deriva gentica), os acasalamentos so aleatrios e no h evoluo (seleo natural, mutao ou fluxo gnico). Alm disso, para que a frequncia genotpica seja a demonstrada, necessrio que a espcie seja diploide, seno o gentipo ter apenas duas representaes, A e a, com frequncias p e q. Esse o caso do gene do daltonismo que est presente no cromossomo X. O comportamento desses alelos obedece equao de segundo grau para mulheres, que possuem dois cromossomos X. J para os homens, o comportamento desses alelos obedece a equao p + q = 1.