Enzime

Enzime- catalizatori ai rr biochimice

Structur proteic (excepie ribonucleaza P, care e ARN) 1) Strict proteine (rare): lizozim din lacrimi si mucu nazal (hidroliza heterozidelor din pereii bacterieni) 2) Heteroproteine (majoritatea) APOENZIMA(proteina) + COFACTOR (neproteic)
3) IONI METALICI

1)COENZIM 2) GR. PROSTETIC Legat slab de Enz Legat puternic de Enz (leg.de H, ionice, hidrofobe) (legturi covalente)

Vitamine hidrosolubile i coenzimele derivate

Caracteristici generale ale catalizatorilor Nu modific echilibrul reaciei (doar grbesc atingerea lui) Nu determin direcia reaciei chimice Nu se consum n timpul reaciei Nu inventeaz reacii noi (nu catalizeaz reacii imposibile dpdv termodinamic)

Caracteristici specifice enzimelor Creterea vitezei este mult mai mare (de ordinul 6-14) Necesit condiii blinde (temp < 50 C, 1atm, pH aproximativ 7) Au specificitate foarte mare (nu exist produi secundari) Posibilitatea reglrii (cantitative, calitative) Pot cataliza reacii endergonice (prin cuplarea cu reacii exergonice)

Comparatie enzime-catalizatori industriali

Necatalizata: Pt (catalizator industrial): catalaza (enzima):

Viteza relativa 1 10,000 300,000,000,000

Etapele reaciilor enzimatice

1) legarea substratului (S) de enzima (E) E+ S ES 2) conversia substratului n produs de reacie (P) ES EP 3) eliberarea P de pe E EP P+E

Cum acioneaz catalizatorii?

Energie de activare

Catalizatorii stabilizeaz complexul de tranziie, ceea ce reduce Ea.(Ea e E nec pt ca toate moleculele dintr-un mol de S s ating st. de tranziie)

Viteza de reacie este o funcie exponenial a Ea

Eact(G ) Fr catalizator 18 kcal/mol Pt 12 kcal/mol Catalaz 2 kcal/mol Viteza relativ 1 1X104 3X1011

O reducere mic n Ea determin o cretere urias a vitezei de reacie!!!

Catalizatorii NU modific starea de echilibru (concentraiile reactanilor i produilor de reacie la echilibru), ci doar GRBESC stabilirea echilibrului.

Specificitatea enzimatic
Specificitate de reacie (ex. dehidrogenaze, izomeraze, fosfataze, etc.) Specificitate de substrat - absolut (ex. acetilcolinesteraza) - de grup (ex. colinesteraze) - larg (ex. esteraze) Specificitate stereochimic - de substrat (ex. LDH) - de produs (ex. succinatdehidrogenaza) Specificitate de legtur (ex. chimotripsina: leg peptidice cu CO- provenit de la aa aromatici )

Complexe multienzimatice
(prin asocierea ntr-o ordine precis a enzimelor din aceeai cale metabolic)
- ex. acid gras sintazaCE AVANTAJ PREZINT?

Asigur v f. mare prin SINCRONIZARE

Izoenzime
Forme moleculare diferite ale enzimelor care prezint structur cuaternar Catalizeaz aceeai reacie Difer monomerii, gena codificatoare, viteza, localizarea Exemple LDH1, LDH2, LDH3, LDH4, LDH5 CK-MM, MB, BB

CENTRUL ACTIV AL ENZIMEI

ATP

Mg(2+)

MODELUL FISCHER (al centrului activ preformat/ lact-cheie)

Centru activ rigid

MODELUL KOSHLAND (al centrului activ indus/ mn-mnu)

Centru activ flexibil

Tipuri de cataliz

Cataliza covalenta

Cataliza acido-bazica (ex. RNA-aza)

Cataliza metalo-ionica

CINETICA ENZIMATICA

Influenta temperaturii asupra vitezei de reactie

Temperatura optim

Influena pH-ului asupra vitezei de reacie

Influena concentraiei enzimei asupra vitezei de reacie

Influenta [S] asupra vitezei

Ecuatia Michaelis Menten (respectat de enzime non-alosterice)

S E
k1 k-1
5 4 v, mol/min 3 2 1 0

k2

Vmax [S] v= Km + [S]

0.5Vmax

Km
0 10 20 30 [S], mM 40 50

Valorile Km

Km indica aproximativ [S] in vivo pentru multe enzime!

Ecuatia Lineawer-Burk

NTREBARE
Pentru o reacie S P, cu Kechilibru = 3, care dintre curbele urmtoare aproximeaz cel mai bine variaia concentraiei substratului cnd S este adugat la o soluie coninnd enzima specific:

EXPLICAII
Rspuns corect: C La echilibru concentraia lui S este 0.5, deci concentraia lui P este 2-0.5= 1.5. Ke se verific a fi 3: Kechilibru= conc. Pechilibru/conc.Sechilibru= 1.5/0.5=3

INHIBIIA ENZIMATIC - Inhibiie ireversibil: inhibitorul este legat covalent (deci puternic) de centrul activ al enzimei - Inhibiie reversibil: inhibitorul este legat necovalent (deci slab) de centrul activ al enzimei

Inhibiia ireversibil
Ex.1: diizopropil fluor fosfatul (DIPF) pentru Enz-OH (Ser)

DIPF are efect paralizant- gaz de lupt Mec. ac.- reacioneaz cu Ser din acetilcolinesteraz

Inhibitor competitiv folosit ntr-un atac terorist n metrou, n Japonia* (facultativ)

Inhibiie ireversibil
ex. 2: penicilina pentru glicopeptid transpeptidaza bacterian

Inhibiie ireversibil
Ex. 2: iodacetamida recaioneaz cu Enz-SH (Cys)

Ex.3: CO, CN leag ireversibil Fe3+ din Hb i citocromi

INHIBIIA ENZIMATIC REVERSIBIL

CE DIFERENE OBSERVAI NTRE CELE DOU TIPURI DE INHIBITORI?

UN INHIBITOR COMPETITIV prezint analogie structural cu substratul

Metotrexat
Un inhibitor competitiv al dihidrofolat reductazei - rol in sinteza purine i pirimidine, i implicit sinteza de acizi nucleici i multiplicare celular

Folosit in tratament cancer (e inhibata sinteza de acizi nucleici i multiplicarea celular)

Cinetica inhibitorului competitiv

Ki = constanta de disociere pentru inhibitor Creterea [S] nltur inhibiia Vmax este ct Km crete

Inhibitorul competitiv
Vmax nemodificat, Km crete, deci 1/Km scade

Cinetica inhibitorului ne-competitiv

(un inhibitor neconpetitiv nu prezint analogie structural cu substratul)

Creterea [S] nu determin depirea inhibiiei Vmax scade Km nu se modific (inhibitorul nu se leag de acelai loc ca S)

Inhibitorul necompetitiv
Km nemodificat, Vmax sczut

REGLAREA ACTIVITATII ENZIMELOR

I. REGLAREA CANTITATIVA
Functie de dinamica SINTEZA/DEGRADARE

Enzime inductibile Ks > Kd Enzime represibile Kd > Ks Enzime constitutive Ks = Kd

II. REGLAREA CALITATIVA II.1.Reglarea alosterica (necovalenta)

Caracteristicile enzimelor alosterice

Sunt oligomeri Reaciile catalizate sunt exergonice i ireversibile Frecvent sunt situate chiar la nceputul cilor metabolice (pt economie maxim prin controlul intensitii cii i imposibilitatea parcurgerii n sens invers) Activitatea lor este reglat alosteric homotrop (intercaiuni alosterice pozitive sau negative ntre monomeri) i heterotrop prin modulatori alosterici (pozitivi sau negativi) care se leag la un loc diferit de centrul activ al enzimei, numit situs alosteric Modulatorii lor alosterici exist permanent la locul de aciune al enzimelor, n timp variind doar concentraia lor Reglarea alosteric este multipl i cumulativ

II. REGLAREA CALITATIVA II.1.Reglarea alosterica de tip heterotrop

Cinetica enzimelor alosterice ( ne-Michaeliene")

Dependena sigmoidal a V0 n funcie de [S]

Enzimele alosterice, spre deosebire de enzimele Michaeliene au multiple subuniti i multiple centre active Legarea substratului poate fi cooperativ

Cinetica enzimelor alosterice

Reglare alosterica de tip retroinhibitie

II. REGLAREA CALITATIVA II.2. Reglarea covalenta

1. fosforilarea-defosforilare 2. adenililare 3. zimogen- enzima activa

Reglare covalent prin fosforilare-defosforilare

Reglare covalent prin adenililare-deadenililare

Reglare covalent de tipul zimogen-enzim activ

CLASIFICAREA ENZIMELOR

ADIIE ELIMINARE

CONDENSARE

1. Oxidoreductaze
Catalizeaza reactii redox:
Dehidrogenaze (S + coenzima) Reductaze (S + coenzima) Oxidaze (O nu intra in molecula S) Peroxidaze (S + H2O2) Dioxigenaze (S+ O2; ambii O din O2 intra in molecula S) Monooxigenaze (S + O2; doar un O din O2 intra in molecula S)

1. Oxidoreductaze
Catalizeaza reactii redox

Transferaze
transfera resturi amino-, acil, fosforil, metil, etc.

3. Hidrolaze
Catalizeaza ruperea legaturilor covalente cu participarea apei Ex. 1) Carboxi-, tiol-, fosfomono-, fosfodiesteraze

2) Glicozidaze

4. Liaze
- catalizeaza reactii de aditie sau eliminare - ex. dehidraze, decarboxilaze, fumaraza, anhidraza carbonica, sintazele

4.0 LIAZE : catalizeaza ruperea leg. C-X fara participarea apei!

CH2OPO3 CH2OPO3 C=O HO-C-H H-C-OH H-C-OH CH2OPO3 Fructozo 1,6-difosfat unire rupere C=O HO-C-H H O H H-C-OH C CH2OPO3 Dihidroxiacetonfosfat

Gliceraldehid-3-fosfate

Produsul sau unul dintre substrate ale reactiei inverse tb sa aibe o dubla legatura

5. Izomeraze
- catalizeaza rr de izomerizare - ex. racemaze, epimeraze, izomeraze cis-trans, mutaze

6. Ligaze
Catalizeaza reactii de condensare (legarea a 2 molecule) cuplate cu hidroliza reaciilor macroergice (ex. hidroliza ATP). Ex. Carboxilaze, sintetaze

Sintetaze Sintaze

Folosete ATP Nu folosete ATP

ATENTIE: Sintazele adesea sunt LIAZE in timp ce sintetazele sunt LIGAZE!!!

CLASIFICAREA I NOMENCLATURA ENZIMELOR EC Classification

Nomenclatura enzimelor, un exemplu

CLASA: indic tipul general de reacie SUBCLASA I SUB-SUBCLASELE: indic tipul gruprii sau legturii care se modific, natura coenzimei, etc.

Enzyme Commission Clasa 2 transferaze Grupa carboxil ca acceptor

EC 2.7.2.1
Numr individual Transfer groupe coninand P Nume sistematic : ATP: acetil fosfo transferaza

Nume nesistematic: Acetil kinaza (de asemenea numele recomandat)