In: Recent Advances in Small Animal Reproduction, P.W. Concannon, G. England, J. Verstegen and C. LindeForsberg (Eds.

) Publisher: International Veterinary Information Service (www.ivis.org), Ithaca, New York, USA.

Determinacin del momento de apareamiento ptimo en la perra: consideraciones bsicas (2-Jun-2002)

G. England1 and P. W. Concannon2 Department of Farm Animal and Equine Medicine and Surgery, Royal Veterinary College, University of London, Hatfield Herts, UK . 2Department of Biomedical Sciences, College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca, NY, USA.
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Traducido por: Y. Corrada y C. Gobello, Instituto de Teriogenologa, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de La Plata, La Plata, Argentina., (5-Jun-2003). Introduccin Hay una variacin considerable en el momento de la ovulacin en relacin al comienzo del edema vulvar y la descarga serosanguinolenta del proestro temprano. Esto no es entendido a menudo por los criadores de perros e imponen con frecuencia regmenes de apareamientos estndares para sus perras. Estos regmenes implican generalmente un plan para aparear en un nmero predeterminado definido de das despus del comienzo del "sangrado" vulvar, es decir, de la descarga serosanguinolenta. Como resultado de esto, muchas perras se aparean a menudo en un momento inadecuado, y sto constituye la causa ms comn de infertilidad aparente en las perras. Sin embargo, a menudo hay una necesidad de programar los momentos de apareamiento con varios das de anticipacin a fin de planificar el traslado de la perra al lugar donde se encuentra el macho reproductor. El manejo del apareamiento como un servicio veterinario a menudo se limita a aconsejar sobre cundo transportar la perra para aparearla, dadas las restricciones de los horarios personales y posiblemente la disponibilidad limitada de los machos reproductores elegidos. Hay varios mtodos de investigacin para identificar el momento de servicio ptimo, incluyendo la medicin de las concentraciones de hormonas en el plasma, el examen de las clulas vaginales exfoliadas, y la endoscopa vaginal. La falla en la deteccin del momento de la ovulacin y alcanzar la preez durante un ciclo ovrico particular puede ser un problema significativo en esta especie. Las perras son monostricas, y si bien el intervalo interestro promedio es aproximadamente de 7 meses (es decir, 31 semanas) puede ser muy variables, extendindose en perras con ciclos normales de 4,5 a 13 meses ms. La literatura sobre la cual se basa esta revisin se enumera en la seccin de Referencias [1-11]. Los siguientes tpicos se incluyen en la revisin. Fisiologa reproductiva El perodo de fertilizacin El perodo frtil Evaluacin del momento timo de servicio Evaluaciones clnicas Falta de confiabilidad del da predeterminado Comienzo variable y expresin del comportamiento estral (aceptacin del macho) Ablandamiento vulvar Medicin de LH progesterona plasmtica Pruebas de ELISA para medicin de progesterona en clnica Citologa vaginal Endoscopa vaginal Examen ovrico por ultrasonido Examen de la secrecin crvico-vaginal Revisin de la secuencia normal de eventos Advertencia: estro normal versus estro falso Conclusin

Fisiologa reproductiva Los oocitos de la perra son ovulados en un estado inmaduro, como oocitos primarios, y no pueden ser fertilizados inmediatamente. La fertilizacin puede ocurrir slo despus de la maduracin del oocito primario, es decir, extrusin del primer cuerpo polar y la culminacin de la primera divisin meitica para formar el oocito secundario. Mientras que estos eventos de maduracin ocurren previos a la ovulacin en la mayora de las otras especies, stos no se completan hasta por lo menos 48 horas despus de la ovulacin en la perra. Esto tambin es verdadero en la zorra. La ovulacin es causada por un pico de las concentraciones de hormona luteinizante en plasma (LH). En perras, la ovulacin ocurre dos das despus del pico de LH, y los oocitos permanecen viables dentro del tracto reproductivo durante cuatro cinco das ms antes de comenzar a experimentar degeneracin. Los perodos de comportamiento de proestro y de estro se definen basados en la aceptacin del macho, y uno le sigue al otro. La transicin del comportamiento de proestro al de estro puede ser rpida lenta, y puede ocurrir un poco antes, en coincidencia con, an algunos das despus del pico preovulatorio de LH. En la figura acompaante (Fig. 1), el comportamiento de proestro y estro (es decir., clnico) se indican como los componentes del perodo de "calor". Los perodos individuales de proestro y de estro han sido redefinidos en trminos endocrinolgicos, es decir, con el "proestro endocrino" terminando en el momento del pico de LH, y con el "estro endocrino" comenzando cerca del momento del pico de LH (Fig. 1). La transicin del comportamiento de proestro al comportamiento de estro ocurre generalmente en el momento del pico de LH; el tiempo medio es aproximadamente 1 da despus del pico de LH, y el rango normal va desde 3 das antes hasta 5 das despus del pico de LH.

Figura 1. Representacin esquemtica del proestro y del estro canino, mostrando los perodos de fertilidad, de mxima fertilidad y de fertilizacin para el servicio natural y su relacin con los momentos del pico preovulatorio de LH, de la ovulacin y de la maduracin del oocito. - Para ver esta imagen en su tamao completo, dirjase al sitio www.ivis.org . -

Una manera muy til de ver el ciclo durante el proestro tardo y el estro es considerar el "perodo de fertilizacin" y el "perodo frtil". La fertilizacin en la perra requiere alguna definicin. Aqu, consideramos que la fertilizacin significa la fusin del proncleo masculino (del espermatozoide) con el proncleo femenino del oocito secundario maduro para formar el cigote de 1 clula. Sin embargo, el espermatozoide puede penetrar el oocito primario inmaduro en cualquier momento luego de la ovulacin. En estos casos, el curso de tiempo de la formacin del proncleo masculino no se ha definido bien. Asimismo, en estos casos, el tiempo desde la subsiguiente maduracin del oocito (por la extrusin del primer cuerpo polar) hasta la culminacin de la meiosis (extrusin del segundo cuerpo polar) y la fusin los proncleos no se conoce. Cuando ocurre la maduracin del oocito (2 das despus de la ovulacin) sin la penetracin del espermatozoide, los oocitos permanecen en un segundo arresto meitico (metafase II); la culminacin de la meiosis y la extrusin del segundo cuerpo polar no se produce hasta que ocurre la penetracin del espermatozoide, como sucede en otras especies. El Perodo de fertilizacin El perodo de fertilizacin en la perra es el momento en el cual los oocitos viables se encuentran disponibles en los oviductos y estn suficientemente maduros como oocitos secundarios para ser fertilizados por los espermatozoides. Bajo circunstancias tpicas en la mayora de las perras se extiende desde cuatro das despus del pico preovulatorio de LH hasta cerca de siete das despus del pico de LH (es decir, desde dos das despus de la ovulacin hasta cerca de cinco das despus de la ovulacin). Como extremo (Fig. 1), se puede extender hasta el da 8 9 (y an hasta el da 10) despus del pico de LH, no obstante con fertilidad reducida. La fertilidad generalmente declina muy rpidamente a partir del da 7 despus del pico de LH, pues los oocitos experimentan degeneracin y la crvix se cierra en un perodo de 1 a 2 das. La terminacin del perodo de fertilizacin puede deberse primariamente a la degeneracin de los oocitos al cierre de la crvix y la prevencin de la entrada de espermatozoides al tracto reproductivo en nmeros suficientes. Ambos fenmenos contribuyen significativamente al rpido descenso en la fertilidad. Los servicios naturales solo raramente resultan en preez cuando ocurren en los das 8, 9 y 10 despus del pico de LH, y lo hacen con muy baja frecuencia, e involucran tamaos reducidos de camada. Pero, en grupos de perras que experimentaron inseminacin intrauterina en 8, 9 y 10 das despus del pico de LH [11,12], las tasas de preez fueron ms altas (60, 60 y 20% respectivamente), comparadas a los apareamientos naturales en esos das (todos del 0%). Por lo tanto, la optimizacin de la posibilidad para que una perra quede preada requiere que sea apareada inseminada durante el perodo de fertilizacin en el momento en que este se superpone con el perodo de mxima fertilidad (Fig. 1), preferiblemente los das 4 a 7 despus del pico de LH.

El Perodo frtil El perodo frtil es el tiempo durante el cual un servicio una inseminacin puede dar lugar una preez. Este perodo no incluye solamente al perodo de fertilizacin, sino tambin unos pocos das precedentes, debido al hecho de que los espermatozoides caninos pueden permanecer frtiles durante varios das dentro del tracto reproductivo de la hembra. Los espermatozoides pueden sobrevivir en el tracto por hasta 5 6 das antes de la ovulacin y tener la oportunidad de penetrar un oocito recientemente ovulado, y entonces formar un proncleo masculino viable y dar lugar a la fertilizacin 7 u 8 das despus de la deposicin del semen. El perodo frtil se puede considerar que se extiende desde tres das antes del pico preovulatorio de LH hasta 7 das despus del pico preovulatorio de LH, y puede ser incluso ms largo cuando se usan perros reproductores con una calidad de semen excepcional perras en las cuales los oocitos pueden sobrevivir uno dos das ms de lo normal. Es importante destacar que para muchos perros reproductores, sus espermatozoides no pueden sobrevivir ms de 1 2 das en el tracto femenino. Los apareamientos tempranos respecto del pico de LH tienen tasas de preez reducidas, sugiriendo que en la mayora de los casos los espermatozoides no son capaces de penetrar oocitos despus de 2 das en el tracto femenino. La sincronizacin del perodo de fertilidad y del perodo de fertilizacin se resume en la Tabla 1, abajo.
Tabla 1. Sincronizacin de los perodos de fertilidad, de la maduracin de los oocitos, y de la fertilizacin de los oocitos con espermatozoides previamente depositados en relacin al da del pico de LH y al da de la ovulacin en la perra domstica. Das desde el Pico Das desde la Perodo de LH Ovulacin Perodo de fertilidad potencial, el "Perodo Fertil" Perodo de fertilidad reducida con apareamientos tempranos Perodo de mxima fertilidad dentro del perodo frtil en perras con alta fertilidad (apareamiento natural) Momento preferido dentro del "Perodo Frtil" para apareamiento programado por servicio natural inseminacin artificial con semen fresco Momento de maduracin del oocito (estimado) El "Perodo de Fertilizacin" - perodo de fertilizacin potencial de oocitos maduros Momento dentro del "Perodo de Fertilizacin" para el manejo crtico del servicio inseminacin artificial con semen congelado Perodo de reducida fertilidad con servicios inseminaciones en estro tardo -3 a +7 ( ms) -3 a -1 0 a +6 -5 a +5 ( ms) -5 a -3 -2 a +4

+2 a +6 + 4 a +5 +4 a +6, ms

0 a +4 +2 a +3 +2 a +4, ms

+ 4 a +6 +7 a +9, y ms

+2 a +4 +5 a + 7, y ms

Valoracin del momento ptimo de servicio El perodo de mxima fertilidad para el servicio natural en animales experimentales altamente frtiles fue determinado empricamente, y se extiende desde el da del pico de LH hasta seis das despus del pico de LH. Es decir, desde 2 das antes de la ovulacin hasta 4 das despus de la ovulacin. No hubo diferencia en las tasas de preez tamaos de camada seguidos a un solo apareamiento en cualquiera de esos das. Los apareamientos anteriores tardos resultan en bajas tasas de preez, y los servicios tardos cuando son exitosos tpicamente resultan en camadas ms pequeas. El momento ptimo para el servicio en una perra individual es temprano en el perodo de fertilizacin, en los das 4 a 5 de la LH, an poco ms adelante de este momento, en el da 3 de LH, para permitir la capacitacin de los espermatozoides dentro del tracto reproductivo femenino. Cuando los servicios mltiples son posibles, el primero se debe hacer 1 2 das ms temprano, para compensar la posibilidad que el momento estimado del pico de LH y ovulacin estuviera errado y "tarde". Dos servicios, separados por dos das, pueden compensar un error de dos das en estimar el momento de los eventos. La determinacin del momento ptimo para servicio puede hacerse por determinacin del pico de LH, y por mtodos de examen clnico directo que pueden razonablemente estimar el momento de la ovulacin indicar el comienzo del perodo frtil del perodo de fertilizacin. Cuando se contempla el uso de semen criopreservado, la inseminacin se debe realizar slo durante el perodo de fertilizacin, para aumentar la posibilidad de xito. As, si el momento del pico preovulatorio de LH puede estimarse razonablemente, entonces el momento de los servicios inseminaciones puede ser optimizado a los perodos siguientes (Tabla 2).

Tabla 2. Das sugeridos del ciclo para inseminacin en la perra dependiendo del tipo de manejo de servicio que se lleva a cabo Tipo de Manejo del Servicio Servicio Natural IA con semen fresco Semen fresco enfriado Semen congelado-descongelado Das de Apareamiento Inseminacin 3 a 6 das despus del pico de LH (es decir, 1 a 4 das despus de la ovulacin) 4 a 6 despus del pico de LH (es decir, 2 a 4 das despus de la ovulacin) 5 a 6 despus del pico de LH (es decir, 3 a 4 das despus de la ovulacin)

Estos momentos para el servicio se pueden estimar con base en la evaluacin clnica incluyendo la palpacin vulvar seriada, la citologa vaginal, y la endoscopa vaginal, en base a mediciones de los cambios hormonales durante el proestro y el estro, especialmente el ascenso preovulatorio de las concentraciones de progesterona en muestras de suero plasma colectadas en forma seriada. El momento exacto de los eventos periovulatorios durante el manejo del servicio tambin permite la determinacin exacta de la mejor poca para diagnosticar una posible preez por ultrasonido por palpacin, y de la fecha probable de parto de 64 a 66 das despus del pico de LH. Valoracin clnica EL uso exitoso de las evaluaciones clnicas en el manejo de servicio requiere de una apreciacin de la transicin normal desde el proestro al estro, la mal informada visin del da del ciclo que tienen muchos propietarios y criadores, y los cambios normales en el comportamiento sexual. Tambin se necesita una comprensin de las limitaciones as como una buena valoracin de las tcnicas disponibles - citologa vaginal, grado de turgencia vulvar, y exmenes vaginoscpicos, e incluso de anlisis de progesterona srica - estimando el da la ovulacin y el perodo subsecuente en el cual la fertilizacin puede ocurrir. Las caractersticas principales en los parmetros de inters, divididas en cuatro momentos seleccionadas en la primera parte del ciclo se indican en la Tabla 3.

Tabla 3. Estado de varios parmetros clnicos en perras frtiles normales en tiempos seleccionados antes y despus del pico preovulatorio de LH Parmetro Indice de cornificacin de la citologa vaginal Leucocitos en frotis Turgencia vulvar Pliegues de la mucosa vaginal Progesterona srica Descarga serosanguinolenta eritrocitos en frotis vaginal Estado Reproductivo Da 7 antes del pico de LH 30% al 100% Pocos Incrementndose progresivamente Lisa, redondeada, blanca, edematosa < 0.5 ng/ml + Da del Pico de LH 80% al 100% (a) Ninguno pocos (b) Mxima apenas disminuyendo Blanca ligero encogimiento y arrugamiento 0.9 - 3.0 ng/ml + Comienzo del perodo de mxima fertilidad, 2 das antes de la ovulacin Da 4 - 5 despus del pico de LH, cuando los oocitos maduran 80% al 100% (a) Ninguno pocos (b) Evidentemente disminuida Blancos, notoriamente arrugados y angulados 3.5 - 12 ng/ml +/Comienzo del perodo de fertilizacin, 2 - 3 das despus de la ovulacin Das 8 - 11 despus del pico de LH 0 al 80% Muchos Vulva blanda pero todava agrandada Blancos y rosados rojos, manchados, casi planos 8 - 25 ng/ml +/Infrtil raramente frtil

Infrtil

(a) tpicamente 95 - 100% de cornificacin por 2 a 8 das antes del pico de LH (b) Tpicamente ninguno, los leucocitos se espera que estn ausentes en los frotis desde 4 - 10 das antes del pico hasta 7 - 10 das despus del pico de LH.

Falta de confiabilidad en el da predeterminado Muchos criadores confan en el conteo del nmero de das desde el inicio del proestro, y creen que las perras ovulan siempre en un nmero determinado de das desde el inicio de este evento. Este no es el caso, para ninguna raza. La duracin del proestro es variable entre perras. Mientras que la "perra media" puede ovular 12 das despus del inicio del proestro (y debe por lo tanto ser servida los das 14 y 16), algunas perras ovulan tan temprano como el da 5, y otras tan tarde como el da 30 despus del inicio del proestro. Por lo tanto, el apareamiento en el 12bo y 14to das, que es lo comn en la prctica reproductiva, a menudo no resulta en concepcin. El trmino "calor" no es particularmente til, pero es utilizado comnmente para referirse a los perodos combinados de proestro y estro. El "Da 0" fisiolgico y endocrinolgico del ciclo es el da del pico preovulatorio de LH, evento que desencadena la ovulacin de los folculos ovricos 2 das ms tarde. Puede no coincidir cercanamente con una transicin distintiva del comportamiento del proestro al estro. Comienzo variable y expresin del comportamiento estral (aceptacin del macho) En ciertas especies domsticas el inicio de los signos conductuales de estro se puede utilizar para determinar el momento ptimo del servicio. En la perra sin embargo hay a menudo una correlacin pobre entre los eventos endocrinos y los eventos conductuales. Estudios en perras de laboratorio sugirieron que el inicio del comportamiento de estro ocurri, en promedio, en el momento del pico de LH en algunos ensayos y al da siguiente del pico de LH en otros. Usando estos datos, 3 4 das despus del comienzo del comportamiento de estro podra ser conveniente para aparear a muchas perras. Sin embargo, en muchas perras los eventos de comportamiento han demostrado correlacionarse pobremente con los eventos hormonales subyacentes, y este mtodo por lo tanto tiene poco valor, a menos que los servicios se continen hasta el estro tardo y a menos que haya exmenes para determinar que de hecho la perra no necesita ser apareada con anterioridad a su primera exhibicin de comportamiento completo de estro. Otra complicacin es el hecho de que el inicio del comportamiento de estro puede ser rpido y muy obvio, y en otros casos puede ser lento, intermitente, y confuso por varios das. Incluso en perras en las cuales el momento del inicio del estro parece ser clara y bastante distintiva, esto puede ocurrir tan temprano como 3 das antes de la ovulacin y tan tarde como 5 das despus de la ovulacin, en el otro extremo, en perras frtiles normales. En una familia de Whippets, el comienzo del comportamiento de estro era rutinariamente 1 a 2 das antes del final del perodo frtil, basado en la citologa vaginal y vaginoscopa (F. Lindsay, comunicacin personal, 1990). Es tambin importante considerar que en la preparacin para ciertos apareamientos programados, un macho celador a menudo no est fcilmente disponible para probar a la perra para el estro. Y, cuando hay uno disponible, la prueba para el estro puede resultar en un servicio no deseado con el macho incorrecto. Finalmente, las perras pueden ser receptivas a algunos machos y no a otros en el mismo momento durante el estro, y una falla de la perra para "estar parada" ante un macho en particular puede estar relacionada con el macho y no con el estado reproductivo de la perra. Cuando el manejo del servicio se basa solamente en la receptividad de la perra, ella debe ser apareada desde el da ms temprano posible (para cubrir la posibilidad que el inicio del estro sea tardo en relacin a la ovulacin) y cada dos das hasta 3 apareamientos consecutivos (para cubrir la posibilidad que el inicio del estro sea temprano en relacin a la ovulacin). Ablandamiento vulvar Un asesoramiento clnico que puede ser til en el monitoreo de la perra es el momento del ablandamiento vulvar. Durante el proestro el tracto reproductivo se pone edematoso y la vulva y los tejidos perineales se agrandan y se ponen cada vez ms turgentes en respuesta al aumento de los estrgenos (Fig. 2 y Fig. 3). En el momento del pico de LH hay un cambio en el estrgeno srico desde muy altas concentraciones a concentraciones progresivamente bajas, combinadas con el ascenso concomitante de las concentraciones de progesterona. Con este cambio hormonal hay una reduccin en el edema del tracto reproductivo con la consecuencia del ablandamiento distintivo de la vulva. Esto puede ser monitoreado por la valoracin subjetiva del grado de turgencia vulvar una vez dos veces al da por la palpacin delicada de la vulva y del perineo. Figura 2. Fotografa de una perra en proestro que muestra agrandamiento edematoso del perineo y de la vulva. La descarga vaginal de fluido serosanguinolento que contiene clulas sanguneas de origen uterino no es evidente externamente, debido al lamido fastidioso de la vulva por la perra, pero es evidente en la inspeccin del vestbulo. - Para ver esta imagen en su tamao completo, dirjase al sitio www.ivis.org . -

Figura 3. Fotografa de una perra en proestro que muestra agrandamiento edematoso del perineo y de la vulva. La descarga vaginal de fluido serosanguinolento conteniendo clulas sanguneas de origen uterino es visible en la superficie ventro-caudal del labio vulvar. - Para ver esta imagen en su tamao completo, dirjase al sitio www.ivis.org . -

En casos donde solamente es posible el asesoramiento clnico para la determinacin del momento ptimo para aparear, se puede utilizar una combinacin del inicio del comportamiento de estro y el momento del ablandamiento vulvar. Cada uno de estos eventos ocurre en promedio 1 2 das antes de la ovulacin. Por lo tanto los servicios deben planearse para comenzar aproximadamente al da siguiente para servicio natural con semen fresco, y en tres a cuatro das despus de su deteccin si se usa semen enfriado si el nmero de los servicios que se proporcionarn es limitado. Donde los servicios pueden ser repetidos, se puede continuar da por medio hasta que la apariencia de la superficie de la mucosa vaginal y/o el frotis vaginal no sea ms del estro-tpico (vanse las secciones debajo de y Citologa Vaginal). Medicin de concentraciones de progesterona LH en plasma en suero Anlisis de LH - La medicin de la concentracin de LH en plasma perifrico es un mtodo confiable y exacto para determinar el momento ptimo del servicio. En la mayora de los pases no hay anlisis comercial fcilmente disponible para LH srica canina, y la medicin requiere actualmente de un radioinmunoensayo. Este mtodo consume tiempo, es costoso y frecuentemente hay un retraso en la obtencin de los resultados, porque las muestras son procesadas en tandas en los servicios de laboratorio. Si se mide la concentracin de LH, los apareamientos crticos inseminaciones se pueden planear entre cuatro y seis das despus del pico de LH. Por lo menos un kit de anlisis de ELISA para medir LH en suero canino esta disponible comercialmente para detectar el momento de ovulacin (Status-LH, Synbiotics), segn lo revisado por Root-Kustritz (2001), y se ha utilizado con xito. Una preocupacin es que debe ser utilizada diariamente para detectar el da del pico de LH. Progesterona plasmtica y ensayos de progesterona - En la perra hay una luteinizacin preovulatoria significativa durante y despus del pico de LH tal como ocurre en muchas especies de roedores y en primates. La concentracin de progesterona plasmtica comienza a incrementarse rpidamente desde el valor basal aproximadamente 2 das antes de la ovulacin, durante el pico de LH (Fig. 1). Este rpido incremento es distintivo y detectable, mientras que el ascenso muy lento y pequeo en progesterona que se informa que ocurre en la semana previa es ms sutil y tpicamente cerca debajo del lmite de deteccin para la mayora de los ensayos. El monitoreo seriado de las concentraciones de progesterona plasmtica por lo tanto permite la anticipacin de la ovulacin en aproximadamente 1 a 2 das, y si es continuada permite la confirmacin de la ovulacin y la deteccin del perodo de fertilizacin. Puesto que el ascenso inicial de la progesterona es progresivo, es solamente necesario colectar muestras sanguneas cada segundo an tercer da, a diferencia del rgimen diario requerido para detectar el pico de LH. Sin embargo, cuanto menos frecuente es la medicin, menos exacta la valoracin del momento del pico de LH, ovulacin, e inicio y terminacin del perodo de fertilizacin. Los ensayos diarios pueden determinar el da de la ovulacin dentro de 1 2 das en la mayora de los casos, y se deben utilizar para los apareamientos y las inseminaciones muy crticos. Asumiendo que ocurrirn los servicios dos veces, en dos das seguidos 2 das separados, se puede establecer los servicios planificados basados en las consideraciones siguientes. Los servicios las inseminaciones crticas se deben planear entre cuatro y seis das despus de que la concentracin de progesterona del plasma excede, probablemente exceda, 2,0 ng/ml (6,5 nmol/L) - concentracin observada tpicamente al momento del pico de LH en el da siguiente. Algunos informes sugieren que los servicios deben comenzar preferiblemente un da despus de que los valores excedan 8 a 10 ng/ml (25,0 a 32,0 nmol/L), que se ven tpicamente al principio del perodo de fertilizacin. La progesterona se puede medir lo ms exactamente posible por radioinmunoensayo (RIA), ensayo cuantitativo inmunoabsorbente enzima-ligado (ELISA), ensayo inmuno-quimioluminiscente. Muchos laboratorios de diagnstico veterinarios tienen un tiempo de procesamiento de 1 da para estos anlisis exactos. El RIA de LH en muestras sricas diarias puede establecer claramente el da del pico de LH en la mayora de las perras, y ser exacto en 1 da sobre el 90% de casos. Varios kits semi-cuantitativos de ensayos de ELISA para progesterona estn comercialmente disponibles para el uso en la clnica, y pueden identificar exactamente el da del pico de LH en el plazo de 1 2 das en la mayora de los casos. Kits de ELISA para medicin de progesterona para uso en clnica Estos kits permiten que las concentraciones de progesterona sean determinadas cualitativamente (usando mtodos de micropocillos microtazas) semi-cuantitativamente. Los resultados se obtenienen generalmente en el plazo de 45 a 60 minutos de la coleccin de la muestra. La medicin de la progesterona del plasma usando ELISAs ha tenido una amplia aceptacin clnica y ha producido un incremento significativo de la tasa de preez. Estos deben ser utilizados seguiendo las recomendaciones de los fabricantes. Varios kits comerciales de progesterona para uso en clnica para determinacin del momento de ovulacin en perras han estado disponibles en aos recientes, e incluyen los siguientes. La mayora son modificaciones de los kits fabricados para los ensayos de progesterona en la leche usados en la industria lechera. - Premate (Vetoquinol, Europa; Camelot Farms, College Station Texas, USA); - K9-Proges-Check (Endocrine Technologies, Inc., Newark CA, USA); - Status-Pro (Synbiotics, San Diego, CA USA);

- Target Canine Ovulation Test Kit (Biometallics, Princeton, NJ, USA). Se describen en otra parte los detalles sobre el uso de tales ensayos (Root-Kustritz, 2001). Citologa vaginal La coleccin seriada, tincin y examen microscpico de las clulas exfoliadas del epitelio vaginal es un mtodo simple para monitorear la etapa del ciclo estral. Las clulas vaginales se pueden colectar usando un hisopo de algodn humedecido con solucin salina deslizado suavemente sobre la superficie de la mucosa vaginal, por la aspiracin de la cavidad vaginal usando un catter plstico. Al usar el mtodo anterior es importante no permitir el contacto del hisopo con el vestbulo, puesto que la coleccin de estas clulas puede dar resultados variables sino errneos. Los hisopos se deben introducir utilizando un pequeo espculo protector [3]. Una vez colectadas, las clulas son puestas sobre un portaobjetos de vidrio haciendo girar ligeramente el hisopo de algodn, por aplicacin del lquido aspirado que entonces se esparce en una pelcula fina. El frotis puede ser teido usando una tincin modificada simple de Wrights-Giemsa stain, (Harlecos Diff Quik, EM Science, Gibbstown, NJ, USA; Merck, Darmstadt, Europa) una tincin tricrmica. La tincin modificada de Wright es fcilmente disponible y tiene la ventaja que la preparacin de las muestras requiere menos de un minuto (Fig. 4a). La tincin tricrmica tiene la ventaja de la identificacin de las clulas queratinizadas basadas en un ndice eosinfilo, pero la tcnica de tincin es laboriosa (Fig. 4b). Figura 4a. Transferencia del material del hisopado vaginal al portaobjetos en preparacin para la tincin de la citologa vaginal con un conjunto de tincin para hematologa de Wright Giemsa modificada (Harleco Dif-Quik). La secuencia incluye 5 a 10 inmersiones de un segundo cada una, en fijador, colorante naranja, colorante azul y aclaracin en agua. - Para ver esta imagen en su tamao completo, dirjase al sitio www.ivis.org . Figura 4b. Microfotografa en menor aumento de frotis vaginales obtenidos en proestro tardo estro temprano, teidos con la coloracin de hematologa de Wright Giemsa modificada (izquierda) con una tincin tricrmica (derecha). La coloracin roja de las clulas teidas con coloracin tricrmica indica que todas estas clulas se encuentran cornificadas, teniendo un ndice eosinfilo de 100%. - Para ver esta imagen en su tamao completo, dirjase al sitio www.ivis.org . Durante el proestro, las concentraciones perifricas de estrgeno plasmtico se incrementan y causan el engrosamiento de la mucosa vaginal, y un aumento en el nmero de capas celulares. La mucosa cambia de un epitelio bajo, cuboidal a un epitelio estratificado, queratinizado escamoso. Durante esta transicin, las clulas superficiales cambian de forma, tamao y caracteres de tincin, llegando a ser ms grandes, de forma irregular, y clulas (escamosas) nucleadas planas ("clulas intermedias"), y en ltima instancia llegan a ser clulas escamosas anucleadas cornificadas ("clulas superficiales") [3]. Las ltimas se caracterizan por no tener ningn ncleo visible, un remanente nuclear picntico dbil y/o pequeo. Las proporciones relativas de los diversos tipos de clulas epiteliales recogidos de la superficie y vistos en frotis vaginales durante el proestro se pueden utilizar como marcadores de los cambios en el ambiente endocrino, es decir, concentraciones crecientes de estrgenos (Fig. 5). Se han utilizado varios ndices de cornificacin y de queratinizacin; en general, el perodo frtil puede ser crudamente predecido calculando el porcentaje de clulas epiteliales que corresponde a clulas superficiales (con los ncleos ausentes, tenues picnticos) al usar tanto la tincin modificada de Wright-Giemsa como la Diff-Quik. El servicio se debe procurar realizarlo durante el perodo en que ms del 80% de las clulas epiteliales son clulas "superficiales" pues ste es tpicamente coincidente con el perodo frtil. Sin embargo, hay gran variacin, y el porcentaje de las clulas cornificadas puede sobrepasar el 80 a 90% y alcanzar casi el 100% (Fig. 6a y Fig. 6b) tan temprano como 9 das antes de la ovulacin tan tarde como 2 das despus de la ovulacin [4]. Por lo tanto, los cambios en la citologa vaginal no se pueden utilizar para predecir prospectivamente el momento exacto de la ovulacin. Sin embargo, la citologa vaginal permite la supervisin de la progresin normal del proestro, y esperar el valor de cornificacin del 80% permite evitar pruebas innecesarias, el transporte apareamientos hasta que el pico de estrgenos del proestro sea casi completo. Figura 5. Microfotografa de un frotis vaginal recogido durante el proestro, mostrando un nmero creciente de clulas epiteliales incluyendo clulas intermedias pequeas, intermedias grandes y superficiales. Hay algunos eritrocitos, que se presentan por diapdesis uterina estrgeno-dependiente y descargan en la vagina. No hay leucocitos porque los estrgenos han estimulado suficiente hiperplasia epitelial vaginal como para prevenir la migracin natural de los leucocitos a travs de la mucosa vaginal, lo que es visto normalmente en anestro, proestro temprano y metaestro. Coloracin: tincin para hematologa de Dif-Quik. -

Para ver esta imagen en su tamao completo, dirjase al sitio www.ivis.org . Figura 6a. Microfotografa de un frotis vaginal recogido durante el estro temprano, conteniendo un nmero incrementado de clulas epiteliales, que son clulas "superficiales" con ningn ncleo, ncleos tenues, ncleos densos pero picnticos y pequeos. Hay numerosos eritrocitos, que se presentan por diapdesis uterina estrgeno-dependiente de larga duracin y que descargan en la vagina. - Para ver esta imagen en su tamao completo, dirjase al sitio www.ivis.org . Figura 6b. Microfotografa de un frotis vaginal colectado durante el estro temprano, conteniendo solamente clulas epiteliales superficiales cornificadas y algunas bacterias. Tales bacterias se consideran flora normal de la vagina cuando se observadan en nmero pequeo a moderado. - Para ver esta imagen en su tamao completo, dirjase al sitio www.ivis.org . La citologa vaginal se debe supervisar durante y despus del perodo de cornificacin mxima, y despus de servicios de inseminaciones, como la manera de estimar retrospectivamente el momento de servicio en lo referente a la poca de la ovulacin y del perodo de fertilizacin, segn lo explicado abajo. En el final del perodo de fertilizacin, los estrgenos del plasma han descendido a niveles bajos en la semana previa, y las concentraciones de progesterona del plasma continan aumentando a altos valores. Como resultado mucho del epitelio vaginal se descama y se pierde. El nmero de capas celulares disminuye, se desprenden clulas ms profundas y el porcentaje de clulas grandes, irregulares y cornificadas y enucleadas decrece. Los leucocitos polimorfonucleares estn ausentes en el frotis vaginal durante el perodo frtil porque la mucosa engrosada es una barrera para su migracin a la superficie. Estas reaparecen, a menudo en nmeros grandes, en el final del perodo de la fertilizacin debido a la descamacin de la mucosa pues las concentraciones de la progesterona del plasma son altas y las de estrgeno son reducidas (Fig. 7). En este tiempo, el frotis vaginal muestra un aumento en las clulas epiteliales intermedias pequeas y grandes, clulas parabasales, y leucocitos polimorfonucleares. Este momento se ha referido como el "fin del estro vaginal", "inicio del metastro vaginal", "inicio del diestro" [3]. El servicio natural la inseminacin vaginal es raramente frtil cuando se realiza despus de que una perra alcanz esta etapa, tpicamente en 7 - 8 das despus del pico de LH (y 5 - 8 das despus de la ovulacin). Sin embargo se ha informado que tales apareamientos tardos han reportado que pueden dar lugar a preeces y a camadas pequeas en algunos casos. El conteo hacia atrs del final del estro vaginal a los das del servicio de inseminacin puede servir para estimar retrospectivamente si ocurrieron no durante el perodo de fertilizacin. Idealmente, las inseminaciones tendran que haber ocurrido 2 a 4 das antes del final del estro vaginal. En un estudio el mayor xito de la IA con semen congelado fue cuando la inseminacin se realiz 3 das antes del inicio del metaestro, es decir, en el diestro. El ndice de clulas superficiales con los ncleos tenues picnticos declina drsticamente durante los varios das siguientes, y las clulas parabasales se convierten en la clula epitelial predominante (Fig. 8). El frotis entonces progresivamente cambia rpidamente para convertirse en un frotis de una perra en anestro. Figura 7. Microfotografa de un frotis vaginal colectado 8 - 9 das despus del pico de LH, despus del final del estro vaginal, y en el comienzo del metaestro vaginal (diestro). El frotis contiene un gran nmero de distintos tipos de clulas epiteliales involucra una disminucin precipitada del porcentaje de clulas superficiales cornificadas, y un aumento en el porcentaje de clulas parabasales e intermedias. En esta vista, hay sobre todo clulas superficiales, algunas superficiales grandes, y lo que parece ser una clula parabasal oval una intermedia pequea. Obsrvese la gran afluencia de leucocitos, que es caracterstica pero no patognomnica. Esto ocurre debido al adelgazamiento de reas de la mucosa vaginal asociado a la descamacin del epitelio cornificado en este momento. - Para ver esta imagen en su tamao completo, dirjase al sitio www.ivis.org . -

Figura 8. Frotis vaginal obtenido de una perra 4 das despus del inicio del metaestro. Esta vista muestra clulas parabasales y leucocitos (incluyendo leucocitos intactos, remanentes nucleares, y estrias de remanente nucleares). - Para ver esta imagen en su tamao completo, dirjase al sitio www.ivis.org . La citologa vaginal es claramente una tcnica fcil y til, aunque en casos raros los leucocitos polimorfonucleares se pueden encontrar a travs del perodo frtil y se ha reportado en algunos casos valores mximos alcanzados de solamente 60% de clulas anucleares. En los ltimos casos, es importante reconocer cuando est ocurriendo la cornificacin mxima, aunque todas las clulas exfoliadas no sean anucleares.

Endoscopa vaginal La endoscopa vaginal (vaginoscopa) es el examen de la superficie de la mucosa vaginal, usando generalmente un endoscopio rgido de fibra ptica (Fig. 9). Los endoscopios flexibles tambin se pueden utilizar. La vaginoscopa se puede tambin realizar por la visualizacin directa sin la amplificacin, usando un proctoscopio peditrico humano, rgido. El procedimiento se tolera bien en la perra parada no sedada. El examen puede tomar tan poco como 2 minutos, y con experiencia la informacin valiosa se puede recoger rpidamente y con costo mnimo. El asesoramiento vaginoscpico para el manejo del servicio se basa en la observacin de los contornos y de los perfiles de la mucosa, el color de la mucosa y de cualquier fluido presente, y los cambios en stos durante el proestro y el estro. Durante el anestro la mucosa vaginal es relativamente plana, seca y roja en apariencia [4]. Esto representa una mucosa muy delgada, frgil y friable, y fcilmente traumatizable por la manipulacin la instrumentacin. Figura 9. Equipo de vaginoscopa canina incluyendo una fuente de luz y un cable de fibras pticas, un telescopio de 3 mm de dimetro, una seleccin de fundas histeroscpicas de 5 y 6 mm, y un bulbo de goma para insuflacin con aire. Tambin se muestran algo del equipo usado para las inseminaciones intrauterinas, incluyendo catteres de metal con las vainas plsticas, y un catter flexible que se puede introducir a travs del histeroscopio. - Para ver esta imagen en su tamao completo, dirjase al sitio www.ivis.org . En el comienzo del proestro los pliegues de la mucosa aumentan mucho, son edematosos, y color rosa rosa/blanco, con lquido serosanguinolento en los surcos formados por lo pliegues. Estos cambios son debidos al engrosamiento del epitelio de la mucosa, y a la acumulacin de edema dentro de la submucosa, efectos producidos por las concentraciones crecientes de estrgenos en este momento (Fig. 10). El fluido serosanguinolento es de origen uterino y escapa a travs de la cervix. La superficie de la mucosa se hace progresivamente menos rosada y tpicamente color blanco blanco-crema, porque el engrosamiento de la mucosa oculta de la vista los capilares subyacentes que haban sido visibles durante el anestro y el proestro temprano. En proestro muy tardo estro temprano, en aproximadamente el mismo momento del pico de LH, comienza una progresiva contraccin de los pliegues que se acopaa de palidez. Estos efectos son el resultado de un retiro abrupto del efecto edematoso de "retencin de agua" de los estrgenos. Las concentraciones de estrgenos descienden rpidamente durante y despus del pico de LH. Posteriormente, durante los das siguientes, ocurre el encogimiento de la mucosa que causa su arrugamiento leve y despus marcado de los pliegues de la mucosa que para el da 3 4 despus del pico LH se vuelve distintivamente angulada mientras que conserva un color crema denso a blanco (Fig. 11). El arrugamiento tambin se ha referido como crenulacin de los pliegues de la mucosa [4]. Figura 10. Vista cercana a de unos escasos centmetros cuadrados de mucosa vaginal canina obtenido durante el proestro usando un endoscopio de fibra ptica. La hiperplasia inducida por los estrgenos han engrosado la mucosa suficientemente para dar a la superficie un aspecto color crema debido a la obliteracin de los capilares visibles. El edema inducido por los estrgenos ha expandido "los pliegues" de la mucosa vaginal para darle un aspecto edematoso redondeado, liso. El fluido serosanguinolento del tero descargado en la vagina se ubica en los surcos las grietas entre los dobleces epiteliales. - Para ver esta imagen en su tamao completo, dirjase al sitio www.ivis.org . Figura 11. Vista cercana de unos escasos centmetros cuadrados de la mucosa vaginal canina obtenida con un endoscopio de fibra ptica durante el estro, cerca de 1 a 2 das despus de la ovulacin (es decir, cerca de 3 a 4 das despus del pico de LH). La hiperplasia inducida por los estrgenos ha engrosado la mucosa suficientemente para dar a la superficie un aspecto blanco debido a la obliteracin de capilares visibles. La declinacin reciente de los estrgenos ha reducido el edema de los "pliegues" de la mucosa vaginal para causar un arrugamiento obvio y marcado de la superficie. - Para ver esta imagen en su tamao completo, dirjase al sitio www.ivis.org . El comienzo del pico de perodo frtil puede ser detectado por el inicio de la contraccin de la mucosa sin formas angulares excesivas, mientras que la contraccin notoria de la totalidad de pliegues de la mucosa con obvia angulacin es caracterstica del perodo de fertilizacin. Los apareamientos las inseminaciones se deben planear para que coincidan con el perodo de fertilizacin, cerca de cuatro das despus de la primera deteccin de la contraccin de la mucosa, y en el inicio del perodo de angulacin obvia de los pliegues de la mucosa. La terminacin del perodo de la fertilizacin puede ser detectada observando una declinacin una cesacin de la contraccin de la mucosa, un aplanamiento y adelgazamiento de la mucosa y, relacionado con desprendimiento de muchas de las capas superficiales de clulas epiteliales, del desarrollo de una superficie mucosa que se ha descrito como manchada jaspeada [4]. Algunas reas son blancas y an gruesas, mientras que otras reas

llegan a ser rojizas y algo finas (Fig. 12). Esto ocurre simultneamente con el inicio del metaestro del diestro vaginal, segn lo definido por citologa vaginal. Figura 12. Vista cercana de unos escasos centmetros cuadrados de la mucosa vaginal canina obtenida con un endoscopio de fibra ptica durante el metaestro temprano, cerca de 9 das despus del pico de LH. El descenso continuo de los estrgenos que comienza 0 a 2 das antes del pico de LH ha dado lugar a un adelgazamiento de la mucosa tal que las reas de descamacin epitelial muestran parches rojos de "visibilidad capilar" entremezclados con reas blancas de mucosa moderadamente engrosada. Estos parches de mucosa fina son la base de la reaparicin simultnea de los leucocitos en el frotis vaginal. Para ver esta imagen en su tamao completo, dirjase al sitio www.ivis.org . Vaginoscpicamente los cambios observados en la mucosa son de utilidad en la prctica clnica porque son progresivos, y por lo tanto no se hace necesario examinar la perra todos los das. Examen ovrico por ultrasonido Se ha demostrado claramente que los ovarios de una perra se pueden identificar usando diagnstico por ultrasonido en tiempo real en modo B. Con el examen cuidadoso y repetido es posible supervisar el crecimiento folicular y detectar el momento de la ovulacin. En general sin embargo, la ovulacin es difcil de identificar porque los folculos no colapsan, los cambios de ecogenicidad no son siempre constantes, y los cuerpos lteos nuevos tienen tambin unas cavidades centrales llenas de fluido similares a las de los folculos. En los ultrasonogramas, los folculos antrales ovricos aparecen como esferas negras, anecoicas que aumentan de tamao durante el proestro [1]. Tienen cerca de 2 - 3 mm de dimetro en el principio y a la mitad del proestro, cerca de 5 mm de dimetro en el proestro tardo, y alcanzan el tamao mximo de 7 a 10 mm entre el da del pico de LH y el da de la ovulacin (Fig. 13). Para estudios experimentales de reproduccin canina, el momento de la ovulacin se puede determinar durante exmenes sonogrficos diarios por la deteccin de una disminucin aparente del nmero de folculos anecoicos grandes, su desaparicin completa, debido a un aumento en la ecogenicidad y/o una disminucin evidente relacionada al tamao del folculo (Fig. 14). Esta disminucin ausencia de estructuras anecoicas en el ovario persiste por 1 a 3 das alrededor del momento de la ovulacin [1]. Esto es seguido a menudo por la reaparicin de estructuras anecoicas en los ovarios. stos son los cuerpos lteos tempranos en desarrollo que contienen fluido central por varios das a 2 semanas. Sin embargo, la tcnica parece tener poca aplicacin clnica actualmente. Figura 13. Ultrasonograma trans-abdominal de una perra que muestra un ovario con tres folculos anecoicos, grandes 1 da antes de la ovulacin. Las flechas blancas indican el folculo de 6 mm de dimetro a la izquierda. - Para ver esta imagen en su tamao completo, dirjase al sitio www.ivis.org . -

Figura 14. Ultrasonograma trans-abdominal de una perra que muestra un ovario 1 da despus de la ovulacin, sin la evidencia de estructuras anecoicas esfricas distintivas presentes 1 a 2 das antes. - Para ver esta imagen en su tamao completo, dirjase al sitio www.ivis.org . -

Examen de la secrecin cervico-vaginal En un nmero pequeo de perras se ha demostrado que la resistencia elctrica de las secreciones vaginales, segn lo medido por una prueba comercial de resistencia vaginal, aumenta durante el proestro y el estro temprano, y disminuye durante mediados a fines del estro. Estos cambios pueden por lo tanto ser tiles para indicar el perodo frtil. La tcnica se ha investigado pobremente en la perra domstica, aunque se utiliza extensamente para detectar la poca ptima de inseminacin en la zorra. Algunos investigadores han examinado cambios en la concentracin de glucosa de la descarga vaginal de la perra, y este mtodo es utilizado a veces por los criadores de perros para la prediccin del momento del servicio. Sin embargo la tcnica no est amparada por investigacin cientfica, y parece ser casi intil. La cristalizacin la formacin de helechos del moco recogido de la vagina anterior y su observacin microscpica han sido descritas en la perra y ocurre despus del pico en la concentracin de estrgenos del plasma [6]. La evaluacin del moco, que se origina del tejido glandular cervical, puede ser til conjuntamente con la citologa vaginal para determinar el momento ptimo del servicio [6].

Revisin de la secuencia normal de eventos La Tabla 4 enlsita varios de los acontecimientos que se pueden identificar por exmenes clnicos en un cierto plazo y su relacin al perodo frtil, a la ovulacin y al perodo de fertilizacin.

Tabla 4. Secuencia tpica de eventos durante el proestro y estro canino, incluyendo los perodos de fertilidad para servicio natural, y reconociendo la considerable variacin en el momento del comienzo del comportamiento del estro. Cambios en el estado clnico, fisiolgico fertilidad Comienzo de las concentraciones de estrgenos sricos incrementadas Comienzo de signos obvios de proestro (agrandamiento vulvar, descarga serosanguinolenta) Incremento de hiperplasia vaginal, cornificacin y edema Incremento del agrandamiento y turgencia vulvar observada Indice de cornificacin mximo observado en frotis vaginal Mxima hiperplasia vaginal y cornificacin observada Mxima concentracin de estrgeno srico y turgencia vulvar Comienzo de fertilidad potencial y del "perodo frtil" Disminucin del estrgeno srico Ocurre el mayor componente del pico de LH. La progesterona del suero plasma se incrementa de 0.9 a 3 ng/ml. Comienzo del perodo de "mxima fertilidad" para servicio natural en perras de alta fertilidad Disminucin de la turgencia vulvar puede ser detectada. Disminucin del edema vaginal y comienzo del arrugamiento vulvar. Comienzo del comportamiento de estro (variable, rango de Da 3 a +7) Da 0 a 1 en promedio, y en muchas perras Ocurre ovulacin/es. La progesterona se incrementa de 2 a 8 ng/ml Mayor disminucin del edema vaginal, incrementado arrugamiento vaginal Maduracin de los oocitos en el oviducto Comienzo del perodo de fertilizacin Mximo arrugamiento vaginal y angulacin de los pliegues vaginales Mxima descamacin de las clulas epiteliales cornificadas de la mucosa vaginal Alisamiento de los pliegues de mucosa vaginal Progesterona aumentada de 8 - 20 ng/ml Fin del perodo de "mxima fertilidad" Indice de cornificacin disminuido, apariencia parcheada y desnuda de la mucosa vaginal, primero visto en muchas perras Fin del perodo de fertilizacin y perodo de fertilidad Afluencia de leucocitos en la vagina y reaparicin en frotis vaginales Fin del "estro vaginal citolgico", primer da del metaestro/diestro Cese de la descarga serosanguinolenta (muy variable) Terminacin del comportamiento de estro (aproximadamente el da 9 en promedio) Da -10 a -3 Da -3 a 0 Da -3 a -1 Da -3 Da -2 a 0 Da 0 Da 0 a 1 Variable Da 2 Da 3 a 6 Da 4 a 5 Da 4 a 5 Da 3 - 5 Da 4 a 6 Da 5 a 6 Da 6 Da 6 Da 7 a 10 Da 7 a 10 Da 7 a 10 Da 7 a 10 Variable Variable Da desde el pico de LH Da -40 a -6 Da -28 a -3

Implantacin Ultrasonido para preez a travs de latidos cardacos fetales Parto

Da 21 a 22 Da 25 a 28 Da 64 a 66

Advertencia: estro normal versus estro falso Segn lo repasado arriba, el manejo del servicio y los esfuerzos para estimar el momento de la ovulacin tpicamente implica: 1. El examen de frotis vaginales colectados cada 1 a 3 das para monitorear el grado, porcentaje ndice de cornificacin de las clulas del epitelio vaginal, y la presencia versus ausencia de leucocitos en el frotis. 2. La caracterizacin del grado de edema y turgencia vulvar inducida por estrgenos, y el momento de la disminucin de la turgencia asociado con la disminucin periovulatoria de los estrgenos; 3. En lo posible, las evaluaciones vaginoscpicas del edema y la hipertrofia causados por el ascenso de los estrgenos, y el momento y extensin del subsecuente arrugamiento y contraccin de la mucosa vaginal causado por la declinacin de los estrgenos poco antes y despus de la ovulacin; y, 4. Una consideracin de los cambios normalmente previstos en el comportamiento sexual de las perras, incluyendo el momento y el grado de receptividad sexual durante el perodo periovulatorio normal. 5. En lo posible, la medicin de las concentraciones de la progesterona del suero plasma, y estimacin del da del pico de LH como el momento en que la progesterona primero excedi muy probablemente 1 a 2 ng/ml. Sin embargo, es importante apreciar que todos los cambios fsicos, clnicos y de comportamiento esperados en ciclos ovulatorios normales se pueden observar en las perras que experimentan un "estro falso", es decir, una falla para tener el pico de LH y as una falla para ovular seguidamente a la mxima concentracin de estrgenos en el final del proestro. Esto pasa porque todo el cambio normal en los rganos genitales, vagina y el comportamiento reflejan principalmente el ascenso y descenso normal de los estrgenos. En el "estro falso" el inicio del comportamiento del estro puede ser lento e intermitente porque no hay un ascenso concomitante de la progesterona para facilitar el comportamiento del estro pero, no obstante, la receptividad sexual puede ser casi normal despus de que las concentraciones de estrgenos experimenten un descenso espontneo por varios das durante la atresia de los folculos no ovulados. La nica manera de distinguir el estro falso de un ciclo normal es determinando si hay no un aumento normal de la progesterona despus de la ovulacin. Y no es tan sencillo como se puede esperar. A menudo no hay aumento de la progesterona. Pero a veces, estos casos de "estro falso" exhiben un ascenso transitorio casi normal de la progesterona por 1 a 2 das. Esto es seguido por una disminucin de la progesterona en vez del aumento normal y continuo hasta a los mximos niveles en un perodo de alrededor de 2 a 3 semanas. As, el monitoreo de la progesterona hasta que las concentraciones alcancen 10 ng/ml ms deben ser considerado. Si tal aumento en la progesterona es abortado espontneamente, u ocurre en respuesta a una liberacin de LH en cantidades inadecuadas para causar la ovulacin, no se conoce. Alternativamente, la perra debe ser examinada para los niveles normalmente elevados de progesterona en el momento de diagnosticar la preez a las 3 - 4 semanas despus del servicio en los casos donde la perra no puede estar presente. El estro falso es seguido a menudo por un retorno al proestro en el plazo de 1 a 10 semanas. Conclusin La mayora de las perras presentadas para la investigacin de la fertilidad y el manejo del servicio son animales normales, sanos, frtiles cuya infertilidad aparente se relaciona con un desconocimiento de la fisiologa reproductiva de la perra. Muchas perras se aparean en momentos inadecuados. El monitoreo exacto de cada perra durante cada ciclo estral permite la estimacin del momento adecuado para el servicio la inseminacin. En la perra, los oocitos maduran 2 a 3 das despus de la ovulacin, y as 4 a 5 das despus del pico de LH. El o los servicios se deben planear para que ocurran durante el "perodo frtil", de 0 a 6 das despus del pico de LH, preferiblemente en el "perodo de fertilizacin" (4 a 6 das despus del pico de LH). Estos perodos se pueden detectar fcilmente con exactitud considerable usando la medicin de la progesterona en el plasma, asesoramiento por citologa vaginal y turgencia vulvar, endoscopa vaginal. Idealmente, todos estos mtodos se utilizan conjuntamente uno con otro. En la mayora de las perras, es suficiente comenzar a monitorear a partir de aproximadamente 7 das despus del inicio del proestro, si ste se detect suficientemente temprano en su curso. Sin embargo, algunos dueos pueden no notar signos de proestro hasta bastante tarde en el proestro y cerca del momento de la ovulacin, y la educacin del dueo sobre qu esperar y buscar puede ser importantes antes del comienzo inminente del ciclo. As, el monitoreo temprano para la aparicin de un ndice de cornificacin del 80% en el frotis vaginal puede evitar perder el perodo frtil en las perras que se presentan tarde en el curso del proestro a la primer consulta. Despus de esta estrategia para programar apareamientos naturales inseminaciones con semen fresco durante el "perodo frtil", preferiblemente dos veces

entre 2 y 6 das despus del pico de LH, dar lugar a un aumento significativo en la tasa de preez y tamao de camada. Cuando es necesario utilizar semen de una calidad subptima, por ejemplo donde hay un factor de infertilidad del macho, cuando el semen ha sido criopreservado, es esencial que el apareamiento la inseminacin ocurra durante el "perodo de fertilizacin", preferiblemente 5 - 6 das despus del pico de LH. La preez rara vez ocurre despus de los apareamientos las inseminaciones vaginales que ocurren despus del final del estro citolgico, aunque la inseminacin intrauterina ha tenido cierto xito durante los primeros 2 3 das del metaestro, es decir, en el diestro. El momento exacto de los acontecimientos periovulatorios durante el manejo del servicio tambin permite la determinacin exacta del mejor momento para diagnosticar preez y puede permitir la prediccin exacta del da de parto que ocurre 64 a 66 das despus del pico de LH.

Bibliografa
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