Universit Abou Bekr Belkad Tlemcen

Enseignants : A.Bedrane & F.Lahfa

Travaux Pratiques: Extraction et caractrisation du cholestrol et lcithines du jaune duf.

En premire analyse parmi les lipides on peut distinguer : -les lipides simples (exemple : les acylglycrols ou glycrolipides) dont la saponification donne naissance un alcool (glycrol) et un ou plusieurs acides gras. -les lipides complexes qui par hydrolyse librent en plus de lacide phosphorique, une base, un ose Les lipides complexes contenant de lacide phosphorique sont souvent appels phospholipides, ils comprennent les glycrophospholipides et les sphingomilines. 4 12% du jaune duf de poule sont constitus par des phospholipides qui reprsentent par ailleurs 30% des matires grasses totales de luf entier. Cette fraction phospholipidique renferme principalement des lcithines (phosphatidylcholines, 73%), des cphalines (phosphatidylthanolamines, 15%), des lysolcithines, des lysocphalines et des sphingomylines (2 6%). A ct de ces phospholipides on trouve des lipides neutres qui sont des glycrides, ainsi que des pigments et du cholestrol. Principe de lextraction : Les lipides neutres sont solubles dans lactone tandis que les phospholipides sont insolubles dans lactone mais solubles dans le chloroforme. 1- Extraction du cholestrol. Ajouter au jaune duf 20 ml dactone ; triturer et filtrer sur filtre Bchner. Recommencer deux fois cette extraction. Les lcithines prcipitent. Mettre le rsidu de filtration de ct ; vaporer le filtrat sur plaque chauffante sous la hotte (attention ne pas brler). Ajouter au rsidu dvaporation 20 ml de solution de potasse alcoolique et procder une saponification pendant 15 20 minutes au bain-marie. Aprs refroidissement ajouter 20 ml dther de ptrole, agiter puis aprs dcantation liminer la phase thanolique et recueillir la phase thre. Evaporer sur plaque chauffante sous hotte ; reprendre le rsidu par 2 ml de chloroforme. La solution obtenue est une solution de cholestrol extrait du jaune duf. 2- Extraction des lcithines. Essorer le rsidu de filtration prcdent entre deux feuilles de papiers filtre. Reprendre ce rsidu par 20 ml de chloroforme, agiter et filtrer en recueillant le filtrat dans un ballon saponifier. Recommencer 2 fois cette extraction. Evaporer totalement sur plaque chauffante sous hotte. On obtient alors un extrait brut de lcithines.

3- Caractrisation du cholestrol. Raction de Libermann. Dans un tube essais placer ; . 1 ml dextrait chloroformique de cholestrol . 4 gouttes dH2SO4 concentr . 2 gouttes danhydride actique. Agiter doucement et observer la coloration.

Raction de Salkowski. Dans un tube essais placer ; . 1 ml dextrait chloroformique de cholestrol . ajouter lentement, sans mlanger, 1 ml dH2SO4 concentr. Observer la coloration linterface. 4- Caractrisation des lcithines. Raction de Florence.( caractrisation de la choline ). A lextrait brut de lcithine ajouter 10 ml de solution de NaOH 10g/l et chauffer sous reflux au bain-marie pendant 20 minutes pour hydrolyser la choline. Aprs refroidissement neutraliser en prsence de phnolphtalne par un peu dacide actique 0.5 mol/l. Filtrer sur un filtre humect deau. Sur une lame porte objet placer : . 1 goutte dextrait de lcithines hydrolyses . 1 goutte de solution concentre diode. Il se forme un prcipit brun ; observer les cristaux caractristiques de ce prcipit au microscope. Ils disparaissent au bout quelques minutes. 5- Chromatographie des lipides actono-solubles : Voire TP CCM des lipides. Solvant de migration : hexane : ther ( 12/8 ). 6- Chromatographie des lcithines. Solvant : chloroforme/mthanol/eau ( 75/22/3 ).