Anne : 2005-2006

Universit Abou Bekr Belkad Tlemcen Enseignants : A.Bedrane& F.Lahfa

Techniques et Mthodes danalyses Biologiques

Exercice 1 : Exprimer en molarit les concentrations des solutions suivantes : a) Glucose (M=180 g.mol.-1) 18 % (p/v) b) NaCl (M= 58,5 g.mol.-1) 9 (p/v) c) Protine A (M = 60 000 g.mol.-1) 12 mg/mL Prparer 100 mL d'une solution de glucose 10,8 g.L-1 dans NaCl 1 % (p/v). - partir de glucose cristallis C6H12O6 - partir d'une solution de glucose 150 mM dans NaCl 1 % (p/v) . Comment doit-on procder ? Exprimer la concentration de la solution obtenue en mg.mL-1 et en molarit (MM =180 g.mol-1). Rponse : a) b) c) Prparation du solvant : Prparation des solutions de glucose : Exercice 2 : Le nicotinamide adnine dinuclotide rduit (NADH, H+), sous forme disodique (M = 709 g.mol-1), est le coenzyme de nombreuses dshydrognases et a un coefficient d'extinction molaire, 340 nm, de 6220 M-1.cm-1. La L-glycrol 3-phosphate dshydrognase catalyse la raction : Dihydroxyactone-phosphate + NADH, H+ L-glycrol 3-phosphate + NAD+ + Seul le NADH, H absorbe 340 nm. Le milieu ractionnel de 0,990 mL, contenant les deux substrats (la dihydroxyactonephosphate et le NADH, H+) et le tampon, est plac dans une cuve de spectrophotomtre de 1 cm de trajet optique. La raction est suivie 340 nm. Avant l'addition d'enzyme, l'absorbance est 0,5. On ajoute alors 10 L d'enzyme. Au bout de 10 min, l'absorbance est nulle. 1 Principe de la spectrophotomtrie dabsorption molculaire. 2 - Combien de nmoles de dihydroxyactone-phosphate ont t consommes ? 3 - Sachant que v0 = d[S] /dt et en admettant que la variation d'absorbance est linaire, quelle est la vitesse de disparition de la dihydroxyactone-phosphate en mol.L-1.min-1 ? 4 - Calculer le nombre de nanomoles de NADH, H+ transformes. Rponse : 1) principe :

2) ; 3) ; 4) Exercice 3 : Divers mlanges d'acides amins sont soumis sparment une chromatographie sur

papier dans un solvant contenant du n-butanol, de l'eau et de l'acide actique. Pour chacun des mlanges, quels sont les ordres de mobilit relative (Rf) dcroissants exacts ? a) Leu > Arg > Ser > Ile b) Val > Asp > Thr > Ala c) Asp > Lys > Phe > Ile d) Ile > Ala > Ser > Glu Rponse : A a--B -b-d C ab-D ---d E -bcExercice 4 : 1. Un rotor dultracentrifugeuse tourne 40 000 tours par minute. Calculer lacclration (en g) existant 10 cm de laxe du rotor.

5 Citez 04 avantages que lon trouve dans les techniques de chromatographie sur couches minces par rapport la chromatographie sur papier.