UNIVERSITE ABOUBEKR BELKAID TLEMCEN Facult des sciences Dpartement de Biologie Molculaire et Cellulaire Examen final de LMD Option

Biochimie Techniques prparatives danalyses en biochimie. Nom : Exercice n1 : Prnom :

ANNEE 2008

Rponses : 1:

2: 3: Exercice n2 :

Rponses : b) Asp : Exercice3 : Chromatographie par gel-filtration : On veut dterminer la masse molaire d'une protine X par chromatographie sur tamis molculaire (gel filtration). On choisit 3 gels ayant des domaines de fractionnement trs diffrents : le gel A spare les substances de masse molaire comprise entre 9.104 et 1,2.106 g; le gel B spare les substances de masse molaire comprises entre 4.104 g et 4.105 g ; le gel C spare les substances de masse molaires comprise entre 2.104 et 2,5.105 g. On talonne chaque gel avec les substances suivantes : Leu : Gln : Lys :

Substance Bleu Dextran Fibrinogne Catalase Lactoglobulin e Protine X

Masse molaire 2.10 3,4.10' 2,3.10' 1,9.10"

Volume d'lution (ml) 45 60 73 132 113

Titre :

Rponses : a) : b) :

Exercice n 4 : Le chromatogramme suivant reprsente le profil d'lution de trois acides amin (1, 2 et 3) :

Questions : 1 - Quel est le type de chromatographie utilis ? Exposer son principe. 2 - En vous aidant du tableau ci-dessous, dterminer quels peuvent tre les acides amins lus. Amino-acide : Glycine Alanine Valine Leucine Isoleucine Srine Thronine Cystine Mthionine Acide aspartique pHi : 5,97 6,02 5,97 5,98 6,02 5,68 6,53 5,02 5,75 2,87 Amino-acide : Asparagine Acide glutamique Glutamine Lysine Arginine Histidine Phnylalanine Tyrosine Tryptophane Proline pHi : 5,41 3,22 5,65 9,74 10,76 7,58 5,98 5,65 5,88 6,10

3 - Quelle technique chromatographique peut-on utiliser pour sparer deux acides amins de mme pHi ?

Rponses : 1:

2: 3: Exercice n 5 : Sparation des esters mthyliques d'acides gras. L'estrification des acides gras d'un corps gras naturel (un mlange de triglycrides) peut tre ralise en incubant le corps gras avec du trifluorure de bore (catalyseur de la raction) dans le mthanol (CH3-OH, donneur des groupements mthyls), 100C durant 15 min. Le chromatogramme ci-dessous reprsente le profil d'lution d'esters mthyliques d'acides gras saturs et insaturs repris dans l'hexane aprs injection en chromatographie en phase gazeuse. Le temps de rtention (tr) est indiqu en minutes, au-dessus de chaque pic :

tr : 8.98 17.16 19.00 22.90 29.32

aire (%) : 30.783 15.976 29.293 14.636 8.761

Questions : 1 - Quel est le principe de la chromatographie utilise ? 2 - Le standard interne est ici l'acide starique (C18:0) qui prsente un temps de rtention de 17,16 minutes. A l'aide du tableau ci-dessous, dterminer la nature des autres acides gras lus. Que reprsente le premier pic (tr : 1,7 min) ? Selon quel(s) critre(s) les acides gras sont-ils lus ? acide gras : ac. laurique (C12:0) ac. myristique (C14:0) ac. palmitique (C16:0) ac. starique (C18:0) ac. olique (C18:1 ; 9) ac. linolique (C18:2 ; 9, 12) ac. arachidique (C20:0) rapport tr / tr C18:0 : 0,12 0,25 0,53 1 1,11 1,33 1,88

ac. linolnique (C18:3 ; 9,12,15) 1,71 ac. arachidonique (C20:4 ; 5, 8, 3,24 11, 14) 3 - Calculer la masse des diffrents produits dans l'chantillon, sachant que l'on a inject 132 microgrammes d'esters mthyliques d'acides gras saturs et insaturs. Rponses : 1:

Pic1 : Pic6 : Critres : Masses : Pic1 Pic6 :

Pic2 :

Pic3 :

Pic4 :

Pic5 :

Pic2 :

Pic3 :

Pic4 :

Pic5 :