El estudio de los Fluidos Seminales en la Escena del Crimen se encuentra directamente ligado a los Crmenes de ndole Sexual y sern

de vital importancia al momento de realizar la reconstruccin del hecho y el establecimiento de identidad del agresor o agresores. El Semen es la sustancia que segregan los rganos reproductores masculinos y en la cual se encuentran los espermatozoides.

Donde puede ser encontrado: Manchas en vestimenta, sbanas, almohadas, camisones, muebles, alfombras, pisos, vehculos, tapizados de automviles, etc. El semen antes de secarse, posee un olor alcalino caracterstico, y contiene millones de espermatozoides. Al secarse, la mancha pierde su olor, los espermatozoides mueren, adquiere un color blanco grisceo, y a veces amarillento, e imparte a las telas un efecto almidonado.

Qu se estudia en el Semen: ( en este informe solo se desarrollar el primer punto)

Si de hecho es semen Si de serlo es o no humano Muchas veces el grupo sanguneo Si hubo eyaculacin interna o externa Si el agresor haba consumido drogas

Composicin del Semen: El semen es un lquido de aspecto lechoso, opalescente, ligeramente amarillo. Posee un ph de 7.2-7.3 y esta compuesto por el plasma seminal y los espermatozoides que pueden ser separados por centrigufacin .

Componentes no proteicos: Cloruro de Na Dixido de Carbono Fsforo inorgnico Fsforo cido soluble Fsforo de la espermina Calcio Glucosa Urea 200 mg% 50 ml% 40-50 mg% 95 mg% 15-30 mg% 24-25 mg% 200-300 mg% 72 mg%

cido Lctico Colesterol

90-100 mg% 80 mg%

Entre las sustancias fosforadas se encuentra el difosfato de espermita que responde a la formula general: C10-H26-N4-H3 2 PO4H3 6 H20 El semen humano contiene 112-268 mg% de fosfato de espermita y junto a esta, se encuentra otra base en el semen, la espermidina , que es producto parcial de la hidrlisis de la espermina . NH2-CH2-CH2-CH2-NH-CH2-CH2-CH2-CH2-NH-CH2-CH2-CH2-NH2 El plasma seminal esta compuesto tambin por protenas y enzimas. Pequeas cantidades de globulinas, albmina, nucleoprotena, proteasas no coagulables; y una amilasa de ph 6-7, una tromboquinasa , coagulasa , licuasa , fosfatasa cida (de gran valor pericial), fosfatasa alcalina, fibrinolisina y fibrinogenasa . NO contiene hormonas sexuales y si contiene colina. La Colina, presente en todas las clulas, es una base orgnica constitutiva de la lecitina. Interviene en el transporte de los lpidos y en su metabolismo formando los fosfolpidos .

CH2OH CH2 HO-- N CH3 CH3 ( hidroxido de trimetil - hidroxietil amonio) La fructosa es la responsable de la movilidad de los espermatozoides, ya que sin ella permanecen inmviles. La misma se forma a partir de la glucosa sangunea y para ello es necesaria la testosterona (hormona masculina). lo prueba el hecho que la fructosa desaparece por castracin de animales, y reaparece si se suministra a stos dicha hormonaMas an: dada la relacin existente entre la hipfisis y las glndulas sexuales y la recin mencionada, de las glndulas sexuales con la formacin de fructosa, la concentracin de este glcido en el semen depende del funcionamiento hipofisiario . La eyaculacin normal consta de 1.5 a 6 ml de fluido, y las anormalidades son la hipospermia (volumen inferior a 1.5ml) y aspermia (falta de semen). CH3

Es importante tener en cuenta que el esperma es producto de tres porciones distintas del sistema genital y sus composiciones son diferentes. La primera proviene de las glndulas de Cowper , de ph 8.4 que neutraliza la acidez de la uretra. La fraccin prosttica y por ltimo los espermatozoides junto con el lquido segregado por las vesculas seminales. Los espermatozoides: Son clulas mviles constituidas por una cabeza, cuello, cuerpo y cola con una longitud que vara de las 50 a 70 micras Se calcula que en el producto normal de una eyaculacin se encuentran alrededor de 60.000.000 de espermatozoides por ml de semen. Y sus acepciones son la oligozoospermia (menor cantidad) y azoospermia (falta de espermatozoides). La cabeza del espermatozoide es ovalalada piriforme y representa alrededor del 10% del total del largo. En la misma se distinguen una parte anterior ( acrosoma ) y otra posterior (ncleo) y se encuentra cubierta por una tenue membrana, la galea capitis . Transporte y Cuidado de las manchas como evidencia: Dado que los estudios de semen se realizan principalmente en base a la presencia de espermatozoides, es de cabal importancia el proteger las prendas que contengan a los mismos. Muchos expertos consideran que la presencia de un espermatozoide completo es la nica prueba irrefutable de la presencia de semen. Por esta razn, los artculos debern manejarse con mucho cuidado, no deber doblarse ni enrollarse la parte manchada y definitivamente no deber someterse a friccin.

Estudios que se realizan en el semen. Existen para la investigacin de las manchas seminales una cierta variedad de estudios que a continuacin sern desarrollados. Es importante destacar que para muchos laboratorios periciales, la nica prueba irrefutable de presencia de semen en la muestra es la observacin microscpica de un espermatozoide completo. Por esta razn se mencionaran una serie de anlisis recordando que en su mayora son nicamente de carcter Preliminar.

1. Mtodos Fsicos: Examen UV

Los mtodos fsicos consisten en la exposicin de la mancha ala radiacin ultravioleta, la cual inducir una fluorescencia caracterstica con una intensidad mxima de cerca de 4200mu. De todas formas, el gran problema que presenta la fluorescencia es que no es especfica del semen, sino que producir la misma reaccin con otros fluidos biolgicos.

Esta tcnica es de utilidad principalmente para el estudio de grandes superficies donde se sospecha que ha habido un delito de ndole sexual y no ha podido ser determinado el sitio donde presuntamente se encontraran las manchas. Estas ultimas fluorescern sobre fondos no fluorescentes, por lo que en algunos casos donde las prendas contienen fibras de blancos pticos, se obtiene el efecto inverso donde las manchas fluorescern con menor intensidad al resto de la tela. Los autores A. R. Calloway y sus colaboradores aconsejan la siguiente aplicacin de luces para el anlisis de las manchas:

Examen directo con luz ultravioleta de longitud de onda 254nm a temperatura ambiente. Aqu se deberan observar bien salvando sobre tejitos fluorescentes. Examen directo con luz de longitud de onda 365nm que en general es poco efectiva. Examen a lux UV previa refrigeracin (nitrgeno a temperatura de ebullicin, -195 C ) ,pero la observacin ser satisfactoria si el material es colocado dentro de un bloque de hielo seco. Las manchas de semen presentaran una fosforescencia qie persistir por 20 segundos luego de retirada la fuente UV.

2. Mtodos Cristalogrficos: La Reaccin de Florence Este mtodo se basa en la formacin de cristales de yoduro de colina, la cual se encuentra presente en el esperma en forma de fosforil -colina y lecitina. El reactivo de Florence se constituye de 2.54 gr. de Iodo metlico, 1.56 gr. de Ioduro de potasio y 30 mililitros de agua destilada. Si la mancha se encuentra en una superficie dura se proceder a rasparla y colocar los residuos en el portaobjetos. Si por el contrario la mancha est en una sup. Blanda, la misma se extraer con la ayuda de agua destila, colocandolo en un porta objetos y secando a Bao Maria. Se colocar un cubreobjetos y una o dos gotas del reactivo de florence , para que por capilaridad corra entre el porta y el cubre. Se lo deja en reposo por no mas de 20 minutos, para que los cristales no se disuelvan, y se observa al microscopio. Los cristales de Ioduro de Colina son lminas romboidales de color pardo. Deber recordarse que, como mencionado anteriormente, la colina no es exclusiva del semen, pero resultar de gran importancia en el anlisis de muestras de esperma asprmicas , principalmente porque no se conocen otros fluidos que registren simultneamente una alta presencia de colina junto con fosfatasa cida como en el esperma.

3. Mtodos Microscpicos Como fue destacado anteriormente, la presencia de un espermatozoide completa es la prueba innegable de semen como parte constitutiva de la mancha.

Si la mancha se encuentra todava hmeda, o por lo menos es de reciente data, por lo general esta determinacin no ser muy compleja, pero puede complicarse con el paso sucesivo del tiempo, la contaminacin adquirida y la superficie en la que se encuentra la muestra. Es muy comn que en las muestras puedan detectarse parciales de espermatozoides, ya sean cabeza o cola, pero debido a la contaminacin con la que generalmente se encuentran estos restos, muchas veces estas clulas pueden ser confundidas con esporas y bacterias. Y no debe olvidarse tambin el caso de los sujetos azoosprimicos , en los que no habr secrecin de espermatozoides en lo absoluto. Del libro Tratado de Criminalstica Tomo II de la Polica Federal Argentina citaremos las tcnicas recomendadas para la mejor observacin de estas clulas. En un tubo de colocar una pequea fraccin de la zona maculada cubierta con la menor cantidad posible de agua destilada y se colocar en una centrfuga. Se centrifugar por 5 minutos y a continuacin se retirar el trozo de genero soporte escurrindolo cono una varilla de extremo plano. Se centrifugar a 1200 rpm por 5 minutos Decantar el liquido sobrenadante y agitar enrgicamente el residuo slido del fondo del tubo Finalmente se tomara una gota del residuo y ponindolo en porta objetos y cubrindolo ose observar a l microscopio. Una alternativa a la centrifugacin es la colocacin de la tela con la mancha hacia abajo sobre un vidrio de reloj. Luego de agregar unas gotas de agua destilada, el vidrio se cubrir con un cristalizador con un tiempo dependiente de la antigedad de la mancha. Para un manchar de varias horas se recomiendan 30 minutos. Luego, se tomara el soporte con una pinza y transferir el contenido a un portaobjeto por contacto. Para los casos en lo que hay contaminacin sangunea, se recomienda utilizar una solucin de saponina en el preparado, la cual alisara los hemates. Un dato importante es la supervivencia que presentan los espermatozoides en fluido vaginal, en el que fueron encontrados inmviles hasta 100 das despus de ser eyaculados. Para la coloracin de los preparados se recomienda la tcnica de May- Grnwald , May- Grnwald Giemsa , azul de Loeffler , Hematoxilina-eosina, etc.

4. Mtodos Cromatograficos : TLC Los mtodos de cromatografa en capa delgada son utilizados principalmente cuando no es posible visualizar un espermatozoide completo. En este caso se tomara como determinante la negativa y como orientativa la reaccin positiva.

En la cromatografa se analizaran las bases nitrogenadas colina y espermita y la enzima fosfatasa cida. Aqu describiremos la tcnica desarrollada por D. Hessel y F. Medgalin : Para la toma de muestra se recomienda cortar 1cm2 del soporte y centrifugarlo con 0.5 ml de solucin 1 N de c clorhdrico. Si la muestra es producto de un raspado, se tomara la cantidad encontrada en 1 cm2 y se proceder de la misma manera. Agitar bien para la disolucin y salificacion de las bases y centrifugar. Sembrar 20ul del extracto y 10ul de semen testigo. De poseerlas, es recomendable sembrar 10ul de colina y 10 de espermita. La corrida se realizar en clorhdrico 1N. Cubrir adecuadamente el tercio superior de la zona de la corrida cromatogrfica y revelar el resto con el reactivo de Dragendorff : Solucin A: Subnitratote bismuto = 850 mg cido Actico = 10 ml Agua destilada = 40 ml

Solucion B Ioduro de postasio = 40 gr Agua destilada = 100 ml

Se mezclan 5 ml de la solucin A con 5 ml de la solucin B en 100 ml de agua en que se habrn disuelto 20 ml de cido actico glacial. Resultado positivo de colina: rosado de Rf :0.5 Cubrir la zona revelada y utilizar ahora Iodoplatinico , que en caso de espermita positiva dar color prpura con relacin de frentes 0.85 Yodo Platinico : Cloruro de platino al 10% p/v = 1 ml

Ioduro de potasio al 4% p/v = 25 ml Agua destilada c.s.p = 100ml Standards : Colina: 10 mg de clorhidrato de colina + 10 ml de agua destilada Espermita: 1 mg de tetraclorhidrato de espermita + 1 ml de agua destilada Semen: 1ml de semen humano fresco + 4 ml de ClH 1 N

5. Mtodos Electroforticos Este es un mtodo bidimensional que se realiza sobre papel combinando mtodos electroforticos con cromatogrficos que permite la separacin de la espermina de los aminocidos del semen. Primero se realiza la resolucin electrofortica en una solucin de piridina-cido actico-agua ph 3.9 (3:10:488) Luego se realiza la corrida cromatogrfica en papel con un lquido resolutivo compuesto der n butranol -cido actico-agua (12:3:5) y el revelado con una solucin acetnica de nihidrina al 0.25% con calentamiento a estufa de 80 C luego de la aspersin. La desventaja que presenta este mtodo es que no analizara simultneamente la colina, para lo que se debera realizar otra corrida electrofortica con igual solvente y testigos de colina y espermina . Revelando con el reactivo de Dragendorff como fue explicado anteriormente. El punto interesante en esta tcnica es la constancia numrica de 11 aminocidos entre los cuales esta la presencia cuantitativa de la ornitina , que debe provenir de la arginina , ya que la ornitina no es proteno -gentica. Un mtodo electrofortico para la identificacin de la fosfatasa cida consiste en la investigacin de esta banda con el fosfato de 4- metil umbeliferol que se agrega sobre la placa en un papel impregnado con el reactivo en solucin buffer de ph 3. La fosfatasa cida catalizar la hidrlisis liberando la metil umbeliferota, que es fuertemente fluorescente en azul plido. A diferencia de otras fosfatasas cidas, la prosttica presenta mayor movilidad y actividad, por lo que su fluorescencia ser muy superior a las dems. En el caso de la sangunea, gracias a la composicin de la archilamida se provoca la inhibicin de la fosfatasa eritrocitaria .

6. Mtodos Enzimticos sobre la Fosfatasa cida:

Fosfatasa cida es cualquier enzima capaz de hidrolizar un fosfato orgnico en medio cido. La proporcin de esta enzima encontrada en el esperma no es comparable con la encontrada en ninguna otro fluido biologico . La fosfatasa cida prosttica produce la hidrlisis de la fosforil colina en cido fosfrico y colina. Esta enzima acta entre un ph 4.5 5. El mtodo prctico para medir la cantidad de fosfatasa cida fue derivado del trabajo de King y Armstrong quienes encontraron que el clculo de la cantidad de fenol liberado por un subestrato de disodio - fenil -fosfato proporciona una medida fehaciente del grado de hidrlisis del subestrato producido por la fosfatasa . Los valores de esta enzima en fluido seminal se expresarn en valores King - Armstrong y debern ser superiores a 30 unidades.

Tratado de Criminalstica Tomo II La qumica Analtica en la Investigacin del Delito - cap V, pag 271.