Microbiologa general 2008 - 2009

Antonio G. Pisabarro Catedrtico de Microbiologa

Tema 2: Cultivo de microorganismos

Crecimiento microbiano. Cultivo de microorganismos. Medios de cultivo. Mtodos de aislamiento. Concepto de cultivo puro. Crecimiento microbiano en medio lquido. Crecimiento microbiano en medio slido. Concepto de muerte de un microorganismo. Medida del crecimiento y enumeracin de microorganismos. Crecimiento microbiano equilibrado. Cintica de crecimiento de un cultivo estanco. Factores fsicos y qumicos que influyen en el crecimiento. Rendimiento de los cultivos. Cintica de crecimiento en un cultivo continuo. Tipos de fermentadores.

Crecimiento microbiano
Ciclo celular Crecimiento

20-30 min E. coli a 37

Medios de cultivo
Soporte para el crecimiento de microorganismos Clasificacin

definidos y complejos lquidos y slidos En funcin de los microorganismos que pueden crecer en ellos, los medios pueden ser:
Generales Selectivos Diferenciales Selectivo-diferenciales Medios de enriquecimiento

Nutricin y cultivo de microorganismos

Varios tipos de metabolismo
Foto- / Quimio - lito - / - organo

Concentracin de nutrientes: oligotrofa La mayora de las especies microbianas no son cultivables

Cultivos puros y recuento de microorganismos

Tiene slo un tipo de microorganismo En medio slido forma una colonia aislada Cada colonia procede de un nico individuo inicial El nmero de colonias nos indica el nmero de clulas iniciales

Medios de cultivo
Soporte para el crecimiento de microorganismos Clasificacin
definidos y complejos lquidos y slidos En funcin de los microorganismos que pueden crecer en ellos, los medios pueden ser:
Generales Selectivos Diferenciales Selectivo-diferenciales Medios de enriquecimiento

Esterilizacin de medios de cultivo

Eliminacin de todo tipo de microorganismo Concepto de esterilidad y asepsia Autoclaves

Programa de prcticas
Prctica 1: Preparacin de medios de cultivo y siembra de bacterias en medios de cultivo. Esterilizacin. Prctica 2: Anlisis microbiolgico de la contaminacin ambiental y de manipuladores.

Prctica 3: Obtencin de cultivos puros. Prctica 4: Recuento del nmero de bacterias por mililitro de un cultivo lquido.
Prctica 5: Cultivo de bacterias anaerobias. Prctica 6: Observacin de bacterias teidas. Tincin Simple y Tincin de Gram. Prctica 7: Transformacin bacteriana por resistencia a ampicilina. Prctica 8: Antibiograma. Prctica 9: Efecto de las altas temperaturas sobre el crecimiento microbiano Prctica 10: Aislamiento y caracteristicas de un bacterifago (virus de bacterias). Prctica 11: Observacin de levaduras. Prctica 12: Tincin de esporas. Prctica 13: Tincin de cpsula.

Cultivos puros y recuento de microorganismos

Tiene slo un tipo de microorganismo En medio slido forma una colonia aislada Cada colonia procede de un nico individuo inicial El nmero de colonias nos indica el nmero de clulas iniciales

Medida del crecimiento

Nmero de clulas Masa celular Componentes celulares Pared celular DNA RNA protenas

Medida del crecimiento

Nmero de clulas

Medida del crecimiento

Biologa de los Microorganismos de Brock

Medida del crecimiento

Biologa de los Microorganismos de Brock

Medida del crecimiento

Masa celular

Cintica del crecimiento

N generaciones (g) 0 1 2 3 4 5 6 7 . g Nmero de clulas N 1 2 4 8 16 32 64 128 . 2g

N = N0 2g

Cintica del crecimiento

N = N0
g 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16

2g
N 1 2 4 8 16 32 64 128 256 512 1024 2048 4096 8192 16384 32768 65536

140000 120000 100000 80000 60000 40000 20000 0 0 5 10 15 20

6,00 5,00 4,00 3,00 2,00 1,00 0,00 0 5 10 15 20

Cintica del crecimiento

140000 120000

N = N0 2g Log N = Log N0 + g Log 2

N puede ser Biomasa Densidad ptica Nmero de clulas Conc protena Conc. DNA Conc. RNA etc ..

100000 80000 60000 40000 20000 0 0 5 10 15 20

6,00 5,00 4,00 3,00 2,00 1,00 0,00 0 5 10 15 20

Cintica del crecimiento

dN / dt = N dN / N = dt dN / N = dt Ln N Ln N0 = t LnN = Ln N0 + t N = N0et
El aumento del nmero de clulas es exponencial El logaritmo del nmero de clulas vara de forma lineal con el tiempo. La pendiente de la recta de proporcionalidad es la tasa de crecimiento La velocidad (tasa) de crecimiento es proporcional al nmero de clulas

Cintica del crecimiento

N = N0et N = N0 2g LnN = Ln N0 + t Log N = Log N0 + g Log 2

Cintica del crecimiento

N = N0et N = N0 2g 2g = et g Ln2 = t = g Ln2 / t = Ln2 / g=t/

Cintica del crecimiento

LnN = Ln N0 + t
LnN Pendiente = Ln N0 Tiempo (t)

Cintica del crecimiento

Log N = Log N0 + g Log 2 Log N = Log N0 + (t/) Log 2 Log N = Log N0 + t (Log 2 / )

Cintica del crecimiento

Log N = Log N0 + t (Log 2 / )
LogN Pendiente = Log2/ Log N0 Tiempo (t)

Cintica del crecimiento

Problema 1: Calcular la tasa de crecimiento y el tiempo de generacin de las bacterias de un cultivo que pasa de tener una DO550 de 0.1 a 0.78 en 120 min.

LnN = Ln N0 + t Ln0.78 = Ln 0.1 + 120 min = 1.03 h-1 = 0.67 h = 40.38 min

Cintica del crecimiento

Equivalencias entre la tasa de crecimiento y el tiempo de generacin

= Ln2 /
Cuando = 1 h-1 , entonces = 0.69 h = 41 min (aporx.) Cuando = 0.5 h, entonces = 1.4 h-1 Cuando = 1 h, entonces = 0.69 h-1

Tiempo de generacin de algunas bacterias en condiciones ptimas de cultivo.

Bacteria

Medio Escherichia coli Glucosa sales Bacillus megaterium Sacarosa sales Streptococcus lactis Leche Streptococcus lactis Caldo de lactosa Staphylococcus aureus BHI Lactobacillus acidophilus Leche Rhizobium japonicum Extr. Manitol levadura M. tuberculosis Sinttico Treponema pallidum Testculo ratn

Tiempo gen (min) 17 25 26 48 27-30 66-87 344-461 792-932 1980

Cintica del crecimiento

Efecto de la temperatura sobre la velocidad de crecimiento de los micoorganismos

Biologa de los Microorganismos de Brock

Clasificacin de los microorganismos segn la temperatura

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Efecto del ion Na+ sobre el crecimiento microbiano

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Efecto del pH sobre el crecimiento de microorganismos

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Efecto del oxgeno sobre el crecimiento de microorganismos

Biologa de los Microorganismos de Brock

Rendimiento del cultivo

Al valor Ys lo denominamos rendimiento de utilizacin del substrato, ya que mide la cantidad de biomasa que puede producirse por unidad de substrato consumido

Rendimiento del cultivo

Log Biomasa (N)

[S1] [S2] [S3]

[N1] [N2] [N3]

Tiempo (t)

m = Ys
[S]

Tasa especfica de consumo de substrato

Comparacin del Transporte Activo con la Difusin Simple

Transporte activo Concentracin Interna de solutos

Difusin Simple

Concentracin Externa de solutos

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Ecuacin de Monod
Tasa de crecimiento ()

max

max / 2

Ks

[substrato]

Fermentador

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Fermentador

Genentech, Corporate Communication New Brunswick Scientific Co., Inc.

Fermentador

ICI, Ltd. factory, Billingham, UK,

Fermentador

Novo Nordisk

Cultivo continuo
Tasa de dilucin D=/V

D=

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Cultivo continuo

Biologa de los Microorganismos de Brock

Cultivo continuo
Concentracin de substrato

Biomasa D max

Referencias
Una buena parte de las imgenes de esta presentacin proceden del libro Brock. Biologa de los Microorganismos