Biodegradabilidade dos comerciais e resistiu leo diesel

Biodegradabilidade de leos diesel comercial e intemperizado

Adriano Pinto Mariano I, II * ; Daniel Marcos Bonotto I ; Dejanira Franceschi de Angelis de II ; Maria Paula Santos Pirllo II ; Jonas Contiero II
I

Instituto de Geocincias e Cincias Exatas, Universidade Estadual Paulista, Rio Claro, SP, Brasil II Departamento de Bioqumica e Microbiologia, Instituto de Biocincias, Universidade Estadual Paulista, Rio Claro, SP, Brasil

RESUMO Este trabalho teve como objetivo avaliar a capacidade de diferentes microrganismos para degradar leo diesel comercial em comparao com um leo diesel intemperizado coletado da gua subterrnea em um posto de gasolina. Dois mtodos microbiolgicos foram utilizados para a avaliao de biodegradabilidade: a tcnica baseada no indicador redox 2,6 - diclorofenol indofenol (DCPIP) e experimentos utilizando frascos de solo respiromtrico bimetro. No primeiro ns testamos as culturas bacterianas Staphylococcus hominis , Kocuria palustris, Pseudomonas aeruginosa LBI, Ochrobactrum anthropi e Bacillus cereus , um inculo comercial, consrcios obtidos do solo e guas subterrneas contaminadas com hidrocarbonetos e um consrcio de uma rea no contaminada.Nos experimentos respiromtrico foi avaliada a capacidade de os microrganismos nativos presentes no solo a partir de um posto de gasolina para biodegradar os leos diesel. Os experimentos indicador redox mostraram que apenas os consrcios, mesmo que a partir de uma rea contaminada, foram capazes para biodegradar o diesel intemperizado. Em 48 dias, a remoo de hidrocarbonetos totais de petrleo (TPH) nos experimentos respiromtrico foi de aproximadamente 2,5 vezes maior quando o leo diesel comercial foi usado. Essa diferena foi causada pelo consumo de hidrocarbonetos lbil, presentes em maior quantidade no leo diesel comercial, como demonstrado por anlises cromatogrficas de gs. Assim, os resultados indicam que os estudos de biodegradabilidade que no consideram o efeito dos poluentes atmosfricos podem superestimar as taxas de biodegradao e quando o bioaumentao necessrio, a melhor estratgia seria a de que um baseado em injeo de consrcios, pois mesmo culturas com reconhecida capacidade de biodegradao hidrocarbonetos podem falhar quando aplicadas isolada. Palavras-chave : biodegradabilidade, biorremediao, leo diesel comercial, resistiu leo diesel.

RESUMO Este Trabalho Objetivou Avaliar uma capacidade de Diferentes microrganismos los degradar leo diesel comercial los Comparao com hum leo diesel intemperizado coletado da gua Subterrnea los hum posto de Combustveis. Dois MTODOS microbiolgicos foram Usados Par a Avaliao da biodegradabilidade: a baseada Tcnica no Indicador de redox 2,6-diclorofenol indofenol (DCPIP) e OS Experimentos respiromtricos usando OS respirmetros de Bartha. Sem Primeiro, testamos como Culturas bacterianas Staphylococcus hominis , Kocuria palustris, Pseudomonas aeruginosa LBI, Ochrobactrum anthropi e Bacillus cereus , hum inculo comercial, consrcios obtidos do Solo e da gua Subterrnea contaminados com Hidrocarbonetos e hum consrcio de UMA rea nao contaminada. Respiromtricos n s Experimentos, FOI avaliada uma capacidade Nativos dos microrganismos do solo de de hum posto de Combustveis los biodegradar OS leos diesel. Os Experimentos com o Indicador de redox mostraram Que apenas OS consrcios, AQUELE MESMO UMA rea de nao contaminada, foram capazes de biodegradar o diesel intemperizado. Em 48 dias, um Remoo de Hidrocarbonetos Totais de Petrleo (HTP) nn Experimentos respiromtricos FOI Approximate 2,5 vezes Maior quando o leo diesel comercial FOI USADO. ESTA FOI Diferena causada pelo Consumo de Hidrocarbonetos facilmente biodegradveis, Presentes los Maior quantidade no leo diesel comercial, Como demonstrado Pelas Anlises cromatogrficas. ASSIM, RESULTADOS indicam Opaco Estudos de biodegradabilidade Que nao consideram o Efeito de intemperizao dos poluentes PoDE Sobre Estimar como taxas de biodegradao e quando o bioaumento necessrio e, a Melhor Estratgia sria Aquela baseada nd injeo de consrcios, POIs MESMO Culturas com reconhecida capacidade de biodegradar Hidrocarbonetos podem falhar quando Aplicadas isoladamente. Palavras-chave : biodegradabilidade, biorremediao, leo diesel comercial, leo diesel intemperizado.

INTRODUO
A composio de um produto liberado para o meio ambiente comea a mudar quase que imediatamente por causa de inmeros processos bioqumicos e fsico. A geoqumica relacionada com compostos orgnicos descrita em detalhes por Kaplan et al. (14). Segundo eles, os hidrocarbonetos liberados no meio ambiente esto sujeitas a biticos e abiticos reaes intemperismo no solo e guas subterrneas da mdia. Estes processos agem em conjunto, com a taxa de transformao estar relacionado com a composio qumica do combustvel e locais fatores ambientais, incluindo temperatura, umidade do solo e de nutrientes e teores de oxignio. Granulometria e argila do tipo tambm so parmetros importantes para o controle de processos intemperismo no solo. Principais reaes abiticos incluem hidrlise, desidrogenao, oxidao e polimerizao (17). Estas reaces so normalmente intimamente relacionadas com microbiana (biticos) transformaes no perfil do solo. Biticos intemperismo de um combustvel de

hidrocarbonetos composto por dois mecanismos interdependentes: a captao microbiana (4) e da degradao metablica (26). Estas transformaes podem ocorrer por etapas, produzindo lcoois, fenis, aldedos e cidos carboxlicos na seqncia. Biodegradao o principal processo de intemperismo destilados mdios, como o leo diesel (14). leo diesel contm 2000-4000 hidrocarbonetos, uma complexa mistura de normal, alcanos ramificados e cclicos, e compostos aromticos obtidos a partir do meio frao de destilado de petrleo durante a separao (11). Alguns destes compostos podem ser usados como indicadores para avaliao do leo diesel intemperismo. Alteraes em relaes de concentrao de hidrocarbonetos como o benzeno, tolueno, etilbenzeno e xilenos (BTEX) so devido principalmente a processos de evaporao e dissoluo. Estes compostos so caracterizados pela sua alta presso de vapor e solubilidade em gua aquosa. Benzeno e tolueno preferencialmente dissolve na gua subterrnea em relao ao etilbenzeno e xilenos, que tm uma baixa solubilidade e so mais resistentes biodegradao (14). Os hidrocarbonetos poliaromatic (PAH) fornecer uma ferramenta til para monitorar alteraes ambientais. Alguns dos compostos PAH de leo diesel esto entre os menos afetados pelo intemperismo. Estes compostos semi-volteis com uma baixa solubilidade e caractersticas recalcitrantes podem persistir por um longo tempo no ambiente. O processo de intemperismo tambm pode ser avaliada atravs da anlise dos hidrocarbonetos totais de petrleo (TPH). Neste caso, os perfis cromatogrficos de um diesel comercial, geralmente apresentam uma resoluo satisfatria para todos os n-alcanos e alguns alcanos isoprenides, tais como 2,6,10 pristine (2,6,10,14tetramethylpentadecane) e fitano (, 14 tetramethylhexadecane). No entanto, a maior frao do leo diesel no se caracteriza porque a maioria dos componentes no pde ser resolvido e eles aparecem nos cromatogramas como uma "corcunda", que chamado de "mistura complexa no resolvida (UCM)", que presumivelmente inclui alcanos ramificados e cclicos e produtos de transformao polares (19, 6). Os hidrocarbonetos resolvidos so chamados de "total hidrocarbonetos resolvvel (TRH)" eo TPH so a soma de TRH e UCM. A TRH so no-degradados de hidrocarbonetos, e eles aparecem como picos no cromatograma. Microorganismos degradam hidrocarbonetos degradante geralmente alcanos ramificados e compostos isoprenides a taxas muito mais lento do que de cadeia linear alcanos. Portanto, a proporo de alcanos de cadeia linear a esses compostos biomarcadores altamente ramificados pode refletir at que ponto os microorganismos tm degradado os hidrocarbonetos no leo diesel (2). O teor de hidrocarbonetos no diesel intemperizado principalmente caracterizado como alcanos isoprenides e UCM, que so mais recalcitrantes do que n-alcanos (11). Assim, devido biodegradao, a UCM "corcunda" torna-se maior ea diminuio picos TRH. Estratgias para acelerar a degradao biolgica de hidrocarbonetos no solo incluem a estimulao dos microorganismos indgenas (bioestimulao), otimizando fatores como nutrientes, a oxigenao, temperatura, pH, adio de biossurfactantes e atravs de inoculao de um consrcio microbiano enriquecido misturado no solo (bioaumentao) ( 1,10). Se refere tcnica bioaumentao, uma avaliao anterior da capacidade de microrganismos de degradar os poluentes o primeiro passo para criar um campo de projeto de remediao escala baseada adio de microorganismos. No entanto,

nesta fase, muitos estudos so realizados por contaminaes simulao, onde, por exemplo, combustvel comercial adicionado ao solo ou guas subterrneas. Esta abordagem pode resultar em concluses equivocadas, pois os poluentes tm suas caractersticas alteradas por mecanismos fsico-qumicos e biolgicos quando expostos a longos perodos em condies ambientais, o chamado efeito intemperismo. Assim, este trabalho objetivou avaliar a capacidade de diferentes microrganismos para degradar leo diesel comercial em comparao com um leo diesel intemperizado coletado da gua subterrnea em um posto de gasolina.

MATERIAL E MTODOS
Microorganismos Diferentes culturas de bactrias e microorganismos consrcios foram testados em relao sua capacidade de biodegradao de leo diesel. As culturas de bactrias de Staphylococcus hominis e palustris Kocuria foram isoladas do solo do posto de gasolina onde o leo diesel intemperizado foram coletados e identificados por rDNA seqncia 16S (realizada por CPQBA / UNICAMP) (21). A estirpe bacteriana Pseudomonas aeruginosa LBI foi isolado por Benincasa et al. (5) de uma rea de hidrocarbonetos contaminadas. A bacteriana cepas Ochrobactrum anthropi e Bacillus cereus foram previamente isoladas e identificadas por Kataoka (15) a partir de um landfarming no Brasil refinaria de petrleo Replan (Petrobras S / A). Das guas residuais da refinaria mesmo, um consrcio microbiano (R) tambm foi obtida. O inculo comercial chamado Microorganismos eficientes (EM) uma mistura de microorganismos que tem demonstrado um desempenho eficiente como um fertilizante biolgico e como uma emenda aos tratamentos biolgicos lagoa de guas residuais. Apesar de EM tem sido aplicado com sucesso em tratamentos de guas residuais biolgico, nunca foi testado como um agente para aumentar a biorremediao de stios contaminados de hidrocarboneto, assim originalmente EM no foi fornecida a esta proposta. A partir do leo da Petrobras terminal (Terminal Martimo Almirante Barroso Tebar), localizada em So Sebastio (SP-Brasil), obteve-se o L consrcio, o lodo ativado de um biorreator piloto que foi testado para tratar a gua de produo. Outros consrcios foram testados ASP e ASP-S-GW, respectivamente, obtidos a partir do solo e das guas subterrneas da estao de gasolina onde o weathered leo diesel foram coletadas; SB S-e SB-GW, respectivamente, do solo e guas subterrneas em outro a gasolina estao; RC, a partir do solo coletadas durante a substituio de tubulaes subterrneas de um posto de gasolina terceiros; U, de um solo contaminado coletado no campus da Unesp. Preparao de inculos Os inculos S. hominis , K. palustris , O. anthropi , B. cereus , P. aeruginosa LBI e consrcio R foram preparados utilizando clulas bacterianas transferidos da cultura tubos de armazenamento e estrias na superfcie de placas de Petri contendo agar nutriente (Merck, Alemanha). Para preparar os consrcios ASP-S, SB-S, RC-S e U, 1,0 g de solos respectivos foram adicionados ao Erlenmeyers (125 mL) contendo 50 mL de Bushnell-Hass mdio (BH) e mantida sob agitao durante trs dias . Aps

este perodo, o meio foi semeado na superfcie de placas de Petri contendo gar nutriente. O ASP-GW e SB-GW foram preparados por listras 1 mL de gua subterrnea respectivos na superfcie de placas de Petri contendo agar nutriente. Os pratos de Petri foram incubadas durante 24 horas a 35 C. Em seguida, as clulas foram colhidas utilizando gua estril. A EM e consrcio L foram adicionados aos experimentos os frascos de biodegradabilidade, sem preparao prvia. Biodegradabilidade de leo diesel experimentos Os experimentos de biodegradao foram realizados utilizando uma tcnica baseada no indicador redox 2,6 - diclorofenol indofenol (DCPIP) (13). Os inculos S. hominis , K. palustris , O. anthropi , B. cereus , P. aeruginosaLBI e consrcio R foram adicionados (125 mL, OD = 0,55 em P = 610 nm (SHIMADZU UV-1601PC)), separadamente, para tubos de ensaio (duplicatas) que continha estril Bushnell-Hass mdio (BH) (7,5 mL) e 50 mL de leo diesel. A concentrao de DCPIP foi de 27 mg / mL. O EM de inculo (200 mL, concentrao igual a 10 9 UFC / mL), o consrcio L (1,0 mL de concentrao igual a 10 7 UFC / mL), o inculos preparados a partir de microorganismos nativos de solos e guas subterrneas (1,0 mL, a concentrao no ) determinada e P.aeruginosa LBI novamente (1,0 mL, a concentrao no determinada) foram adicionados ao Erlenmeyers (125 mL) (duplicatas) que continha meio BH estril (50 ml) e 1% (v / v) de leo diesel. A concentrao de DCPIP foi de 20 mg / mL. Tubos de ensaio e frascos Erlenmeyer foram mantidos sob agitao (240 rpm) em temperatura ambiente (27 2 C). O meio BH composto por, gL -1 : MgSO 4 : 0,2; CaCl 2 : 0,02; KH 2 PO 4 : 1,0; K 2 HPO 4 : 1,0; NH 4 NO 3 : 1,0; FeCl 3 : 0.05 (9). O princpio desta tcnica que, durante a oxidao microbiana de hidrocarbonetos, eltrons so transferidos para receptores de eltrons, tais como O 2 , nitratos e sulfatos. Incorporando um receptor de eltrons, como DCPIP ao meio de cultura, possvel verificar a capacidade do microrganismo para utilizar substrato de hidrocarbonetos, observando a mudana de cor de DCPIP de azul (oxidado) para incolor (reduzido). Este Hanson et al. (13) a tcnica tem sido utilizada em vrios trabalhos (8,20,24). Experimentos solo respiromtrico A fim de comparar a biodegradabilidade dos leos diesel quando lanados para o ambiente, a contaminao do solo foi simulada pela adio do leo diesel (6g / kg de solo), separadamente, ao solo coletado no posto de gasolina onde consrcio RC foi obtida (RC solo). Os experimentos foram realizados em frascos de Bartha bimetro (250 mL) que foram usados para medir microbiana CO 2 de produo, como descrito por Bartha & Pramer (3). Estudos de mineralizao envolvendo medidas do total de CO 2 de produo pode fornecer excelentes informaes sobre o potencial de biodegradabilidade de hidrocarbonetos (2). Para cada condio experimental ( Tabela 1 ), os frascos bimetro foram preparadas em triplicatas (3 x 50 g de solo) e incubados a 27 C no escuro. CO produziu dois ficou preso em uma soluo de 10,0 mL de KOH (0,2 N), localizado no lado do brao do bimetro. Esta soluo foi retirado periodicamente por seringa, ea quantidade de dixido de carbono absorvido foi ento medida pela titulao da KOH residual (aps a adio de soluo de cloreto de brio (1 mL, 1,0 N) usado para

precipitar os ons carbonato) com uma soluo padro de HCl (0,1 N).Durante este procedimento, o bimetros foram aeradas durante 1,5 minutos atravs dos filtros ascarite.

No final dos experimentos, rplicas de cada tratamento foram completamente misturados entre si para anlises fsico-qumicas e microbiolgicas. Experimento 2, realizado aps o experimento 1, teve como objetivo confirmar as tendncias observadas no segundo, assim, apenas o CO 2 de produo foi avaliado nas mesmas condies, mas em um maior perodo de incubao. Enumerao de bactrias Bactrias heterotrficas totais foram enumerados usando a tcnica de placa derramar em Plate Count Agar (Acumedia, EUA). Contagem em placas da populao bacteriana do solo foi realizada da seguinte forma: amostras de 1 g de solo foram adicionados 9 mL de 0,85% soluo salina estril em tubos de ensaio e agitado mecanicamente durante 2 minutos. Aps apropriado diluies em srie, 1 mL da suspenso foram espalhados sobre a superfcie dos pratos duplicar Petri e incubadas por 48 h em 35 C. O total contagem de bactrias heterotrficas foi realizada no incio e no final do primeiro experimento respiromtrico. Composio do leo diesel A fim de caracterizar os leos diesel, superficial do solo foi coletado em uma rea no contaminada (campus Unesp), sem vegetao, e peneirada (tyler 14) antes de ser contaminado com diesel comercial ou resistido. Para o BTEX (benzeno, tolueno, etilbenzeno e xilenos) e PAH (poli-compostos aromticos) analisa, 8 mg diesel / kg de solo foram adicionados e para a anlise de TPH (hidrocarbonetos totais de petrleo), 3 mg / kg. As anlises foram realizadas pelo laboratrio Analytical Solutions (So Paulo), de acordo com os mtodos USEPA: 8021B, 8015B e 8270, respectivamente. Amostragem de solo e caractersticas As amostras de solo foram coletadas em RC 0,50 m de profundidade durante a substituio de tubulaes subterrneas em um posto de gasolina. Estas amostras apresentaram baixo nvel de contaminao por combustvel desconhecido, possivelmente devido a vazamentos nas tubulaes e infiltraes cho. At a realizao dos experimentos respiromtrico, as amostras foram armazenadas a 5 C. A Tabela 2 resume algumas caractersticas fsico-qumicas do solo RC. Valores

das concentraes de metais pesados no esto acima dos nveis mais restritos fixados pela Cetesb (Agncia Ambiental So Paulo - Brasil) e pela lista holands (7).

RESULTADOS E DISCUSSO
Diesel caracterizao de petrleo O weathered diesel foi coletado de uma espessa camada acima da gua subterrnea em um posto de gasolina onde ocorreu o vazamento de aproximadamente 10 anos atrs. Como afirmado por Kaplan (14), nesta situao, onde h um produto na fase de espessura livre, o ndice de alterao mais lento do que para uma camada fina, porque esses processos afetam o combustvel interface / gua e no o corpo do produto a granel . Biodegradao dentro do corpo de um produto livre extremamente lento, devido limitao de gua, oxignio e nutrientes.Assim, o combustvel pode permanecer relativamente inalterada por um perodo de tempo to longo quanto dcadas. As alteraes mais provveis de ocorrer nesta situao so a evaporao de hidrocarbonetos volteis e maior dissoluo dos componentes mais solveis. Apesar destas consideraes, as anlises mostram que o leo diesel teve algumas caractersticas alteradas, e, provavelmente, devido a ambos os processos biolgicos e fsico-qumicas. O weathered diesel tem uma cor verde escuro e um cheiro diferente do diesel avermelhada comerciais. Como o tempo passa, as tinturas de um produto lanado livre deteriorar-se, assim, a cor do combustvel podem mudar (14). Tabela 3 mostra que o diesel comercial tem uma maior concentrao de BTEX do que o diesel intemperizado.Os cromatogramas comparativa esto em Fig. 1 . Ela reflete principalmente o efeito da exposio a diesel para um ambiente aquoso, e volatilizao. Na vigilncia bem onde o leo foi coletada, a gua subterrnea apresentou as seguintes concentraes de BTEX: 112,1; 98,5; 115,7 e 865,8 mg / L, respectivamente.

As concentraes de PAH esto em Tabela 4 . Estas molculas recalcitrantes esto lentamente biodegradado, e como a outras alteraes relacionadas com os outros hidrocarbonetos, progredir mais rapidamente, o leo diesel se enriquecido com a HAP, assim, o leo diesel intemperizado teve um aumento significativo nas concentraes de PAH. Fig. 2 mostra os cromatogramas comparativa.

Analisando as concentraes de TPH ( Tabela 5 ), o leo diesel intemperizado no apresenta detectvel n-alcanos e uma alta abundncia de pristine e fitano, que est de acordo com um processo de desgaste. Alm disso, as fraes de TRH e UCM so, respectivamente, menores e maiores no leo diesel intemperizado, que outro indicativo de biodegradao. No cromatograma ( Fig. 3. ), possvel observar que a UCM corcunda" torna-se maior e os picos TRH diminuio do leo diesel intemperizado.

Experimento de biodegradabilidade: DCPIP indicador redox Os resultados obtidos com os experimentos de biodegradabilidade utilizando o indicador redox DCPIP esto listados em Tabelas 6 e 7 , relacionadas com as experincias realizadas em tubos de ensaio e Erlenmeyers, respectivamente.

Inicialmente, como em tubos de ensaio do inculo foram adicionados em concentraes iguais, capacidades relativas de diferentes culturas pode ser determinado dependendo do tempo necessrio para a mudana de cor (13). Assim, todas as culturas tiveram capacidade similar de biodegradao do leo diesel comercial, mas somente os R consrcio, das guas residuais de refinaria, degradou o weathered leo diesel ( Tabela 6 ). Mesmo as culturas nativas ( S. hominis e K. palustris ) e os gneros Bacillus e Pseudomonas , conhecido por ser responsvel pela degradao do leo (2), no foram capazes de biodegradar o combustvel resistiu. Nenhum estudo relacionando as culturas S. hominis e K. palustris a biodegradao de hidrocarbonetos foi encontrado. No entanto, Gomes et al. (12) descrevem a produo de biossurfactante por uma cepa de S. aureus utilizando hidrocarbonetos como fonte de carbono. As outras culturas tm demonstrado ser capazes de degradar hidrocarbonetos. P. aeruginosa um produtor bem conhecido do biossurfactante rhamnolipid (18). A cepa P.aeruginosa LBI foi capaz de produzir biossurfactante utilizando soapstock (22), manitol eo glicerol (25) e querosene, leo diesel, petrleo bruto e borra oleosa (23). A mesma cultura O. anthropi , em Kataoka (15), aumentou a biodegradao de borra oleosa e era capaz de biodegradao hexano, heptano, leo diesel, hexadecano e comerciais. Nos experimentos realizados em frascos Erlenmeyer ( Tabela 7 ), novamente P. aeruginosa LBI no demonstrou capacidade de degradar o leo diesel intemperizado. Todos os consrcios foram capazes de degradar ambos os leos diesel, exceto o inculo comercial EM. Como mencionado anteriormente, EM nunca foi testado em hidrocarbonetos antes. Aqui, ele s foi capaz de biodegradar o combustvel comercial, como a outros microrganismos com a capacidade de biodegradao reconhecido. Experimentos realizados com os microrganismos nativos (ASP-S, SB-S, RC-S, ASPGW e SB-GW) indicam que os solos contaminados ou subterrneas j tinha um microbiot adaptada para degradar hidrocarbonetos recalcitrantes. Alm disso, o resultado obtido com a mostra consrcio U, como em outros trabalhos (27,16), que

a presena de microorganismos em solos hydrocarbonoclastic onipresente, mesmo em solos no poludos. O melhor desempenho dos consrcios demonstram a importncia de considerar o papel do comensalismo ao tratar mais poluentes recalcitrantes como um leo diesel intemperizado, onde cada espcie tem uma funo especfica nas seqncias de reao enzimtica responsvel pela quebra de complexas cadeias de hidrocarbonetos. Experimento de biodegradabilidade: respiromtrico O CO 2 de produo do experimento 1 e os seus valores cumulativos so representados, respectivamente, emFigs. 4 e 5 . Estes resultados mostram que, at o 10 dia aproximadamente, as taxas de biodegradao foram muito semelhantes, mas aps este perodo, a taxa de consumo do petrleo aumenta comercial at o dia 27 dia (valor mximo), enquanto a taxa em relao ao weathered diesel mantm quase constante. Certamente, os hidrocarbonetos lbil, em maior quantidade no leo comercial, foram responsveis por essa diferena.

Resultados do experimento 2, que foi realizado nas mesmas condies, mas em um perodo maior de tempo, so plotados juntamente com experimento 1 ( Figs. 4 e 5 ). Esta comparao confirma que aps 70 dias as taxas tornam-se iguais, indicando o consumo dos hidrocarbonetos lbil durante este perodo no leo diesel comercial.Alm disso, a similaridade entre as curvas mostra que a tcnica respiromtrico tem uma boa reprodutibilidade. As concentraes de hidrocarbonetos no incio e no final do experimento respiromtrico 1 esto listados na Tabela 8 . Estes valores esto de acordo com os resultados respiromtrico. As eficincias de biodegradao dos hidrocarbonetos lbil (total n-alcanos e da frao de TRH) so claramente mais elevados no leo diesel comercial, o que explica o aumento do CO 2 taxa de produo, e as concentraes das fraes principais hidrocarbonetos (TRH e UCM) so semelhantes ao final do experimento, confirmando a tendncia de equalizao do CO 2 as taxas de produo. Fig. 6 mostra que a populao de bactrias heterotrficas totais foi favorecido pela abundncia relativa maior dos hidrocarbonetos lbil no leo diesel comercial.

Finalmente, embora os microrganismos nativos no solo RC (consrcio RC-S) foi capaz de biodegradar os leos diesel, como demonstrado pelas experincias indicador redox, em uma condio de contaminao simulada (experimentos respiromtrico), a eficincia de biodegradao de TPH foi de aproximadamente 2,5 vezes maior quando o leo diesel comercial foi usado, uma diferena que pode ser significativo ao estimar o tempo para limpar um site antigo poludo. Em concluso, os estudos de biodegradabilidade que no consideram o efeito dos poluentes atmosfricos podem superestimar as taxas de biodegradao e quando o bioaumentao necessrio, a melhor estratgia seria a de que um baseado em injeo de consrcios, pois mesmo culturas com reconhecida capacidade de biodegradao de hidrocarbonetos pode falhar quando aplicadas isoladas.

AGRADECIMENTOS
Os autores agradecem Agncia Nacional do Petrleo, Gs Natural e Biocombustveis (ANP) (PRH-05), a Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de So Paulo (FAPESP); estaes de gasolina e os proprietrios Petrobras S / A.

Referncias
1. Alexander, M. (1994). Biodegradao e Biorremediao . Academic Press, San Diego. [ Ligaes ] 2. Balba, MT; Al-Awadhi, N.; Al-Daher, R. (1998). Biorremediao de solos contaminados com leo: mtodos microbiolgicos para avaliao de viabilidade e avaliao de campo. J. Microbiol. Mtodos , 32, 155-164. [ Ligaes ]

3. Bartha, R.; Pramer, D. (1965). Caractersticas de um frasco e mtodo para medir os efeitos biolgicos e persistncia de pesticidas no solo. Soil Sci. ., 100, 6870. [ Ligaes ] 4. Baughman, GL; Paris, DF (1981). Bioconcentrao microbiana de poluentes orgnicos a partir de sistemas aquticos uma reviso crtica. Crit. Rev. Microbiol. , 8 (3), 205-228. [ Ligaes ] 5. Benincasa, M.; Contiero, J.; Marnresa, MA; Moraes, IO (2002). Produo Rhamnolipid por Pseudomonas aeruginosa LBI crescendo em soapstock como fonte de carbono. J. Eng de alimentos. , 54, 283-288. [ Ligaes ] 6. Bregnard, TPA; Hhener, P.; Haner, A.; Zeyer, J. (1996). Degradao do leo diesel intemperizado por microorganismos a partir de um aqfero contaminado em microcosmos aerbicos e anaerbicos. Env. Tox. Chem., 15, 299307. [ Ligaes ] 7. Cetesb Companhia de Tecnologia de Saneamento Ambiental. (2005). Relatrio de estabelecimento de Valores Orientadores pargrafo Solos e guas Subterrneas nenhum Estado de So Paulo. [Companhia de Tecnologia de Saneamento Ambiental]. Relatrio tcnico. [ Ligaes ] 8. Cormack, WPM; Fraile, ER (1997). Caracterizao de uma bactria degradar hidrocarbonetos psicrotrficos Antrtica. Antrtica Sci. , 9, 150155. [ Ligaes ] 9. Difco Manual. (1984). Detroit:. Difco Laboratories

[ Ligaes ] ]

10. Duarte da Cunha, C.; Leite, SGF (2000). Biodegradao de gasolina em microcosmos de solo diferentes. Braz.J. Microb ., 31, 45-49. [ Ligaes

11. Gallego, JLR; Loredo, J.; Llamas, JF; Vzquez, F.; Snchez, J. (2001). Biorremediao de solos contaminados com diesel:. Avaliao do potencial em tcnicas situ pelo estudo da degradao bacteriana Biodegradao ., 12, 325335 [ Ligaes ] 12. Gomes, RV; Martins, SCS; Melo, VMM (2004). Produo de biossurfactante Por Staphylococcus aureus isolado de UMA Amostra de Petrleo Pesado. IX Encontro Nacional Enama de Microbiologia Ambiental, Curitiba, PR. [ Ligaes ] 13. Hanson, KG; Desai, JD; Desai, AJ (1993). A tcnica de deteco rpida e simples para microorganismos bruto potencial petrolfero degradante. Biotechnol. Tech. , 7, 745-748. [ Ligaes ] 14. Kaplan, IR; Galperin, Y.; Lu, S.; Lee, R. (1997). Geoqumica ambiental forense: diferenciao de combustvel tipos, suas fontes e tempo de liberao. Org. Geochem ., 27, 289-317. [ Ligaes ] 15. Kataoka, APAG (2001). Biodegradao de resduo oleoso de Refinaria de Petrleo Por microrganismos Isolados de "landfarming". Rio Claro, Brasil (D.Sc. Thesis. Instituto de Biocincias. Unesp). [ Ligaes ]

16. Lee, M.; Kim, MK; Singleton, I.; Goodfellow, M.; Lee, ST (2006). Biodegradao melhorada de leo diesel por um recm-identificados Rhodococcus baikonurensis EN3, na presena de cido miclico. J. Appl. Microbiol. , 100, 325333. [ Ligaes ] 17. Lyman, WJ; Reidy, PJ; Levy, B. (1992). Mobility e degradao de contaminantes orgnicos em ambientes subterrneos . CK Smoley, Inc., Chelsea, MI. [ Ligaes ] 18. Maier RM,; Sobern-Chavez, G. (2000). Pseudomonas aeruginosa rhamnolipdeo: aplicaes biossntese e potencial. Appl. Microbiol. Biotechnol. , 54, 625-633.

[ Ligaes ]

19. Marchal, R.; Penet, S.; Solano-Serena, F.; Vandecasteele, JP (2003). Gasolina e diesel biodegradao do petrleo. Oil & Gas Tecnologia Cincia , 58, 441448. [ Ligaes ] 20. Mariano, AP; Bonotto, DM; Angelis, DF (2007). Monitoramento de Indicadores geoqumicos e Avaliao de biodegradao los rea contaminada com leo diesel. Engenharia Sanitria e Ambiental , 12 (3), 296-304. [ Ligaes ] 21. Mariano, AP; Kataoka, APAG; Bonotto, DM; Angelis, DF (2007). Estudo de laboratrio na biorremediao de solo contaminado o leo diesel a partir de um posto de gasolina. Braz. J. Microb. , 38, 346-353. [ Ligaes ] 22. Moraes, IO; Benincasa, M.; Monte Alegre, R. (2002). Produo e caracterizao de rhamnolipdeo produzida por uma cepa recm-isolada de Pseudomonas aeruginosa . Braz. J. Food Technol ., 5, 145-149. [ Ligaes ] 23. Pirllo, MPS (2006). Estudo da Produo de biossurfactantes utilizando Hidrocarbonetos . Rio Claro, Brasil (M.Sc. Dissertation. Instituto de Biocincias. Unesp). [ Ligaes ] 24. Roy, S.; Hens, D.; Biswas, D.; Kumar, R. (2002). Pesquisa de petrleo de degradao de bactrias nas guas costeiras de Sunderban Reserva da Biosfera. Mundial J. Microbiol. Biotechnol. , 18, 575-581. [ Ligaes

25. Silva, BH (2005). Influncia das Fontes: Carbono e nitrogneo da Produo de biossurfactantes Por Pseudomonas aeruginosa ATCC 31479 e Pseudomonas aeruginosa LBI. Rio Claro, Brasil (Term Paper Final. Instituto de Biocincias. Unesp). [ Ligaes ] 26. Singer, ME; Finnerty, WR (1984). metabolismo microbiano de alcanos de cadeia linear e ramificada . In:. R. Atlas (ed) Petrleo Microbiologia McMillan Publishing Co., NY [ Ligaes ] 27. Venkateswaran, K.; Harayama, S. (1995). Enriquecimento sequencial das populaes microbianas exibem maior biodegradao de petrleo bruto. Can. J. Microbiol. , 41, 767-775. [ Ligaes ]

Enviado: 15 de fevereiro de 2007; devolvidos aos autores para correes: 21 de novembro de 2007; Aprovado: 20 de janeiro de 2008.

Disponvel em: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S151783822008000100028