CULTIVO DE MERISTEMAS

1. DEFENICIN

2. RESEA HISTRICA

3. OBJETIVOS Y APLICACIONES

4. TEORAS

5. METODOLOGA

6. CULTIVO DE MERISTEMAS DENTRO DEL PROGRAMA DE CERTIFICACIN

7. VENTAJAS Y LIMITANTES

8. SITUACIN ACTUAL

DEFINICIN DE MERISTEMA
Son masas de clulas no diferenciadas que conservan su capacidad de dividirse activamente

RESEA HISTRICA DEL CULTIVO DE MERISTEMA

ROBBINS, 1922 Intentos de cultivo de meristemas de tallo y raz. WHITE, 1934 El virus del TMV se distribua irregularmente a lo largo de las diferentes zonas de la raz. LIMASSET Y CORNUET, 1949 La concentracin relativa de virus disminuye acropetalmente hacia el meristema apical. GEORGES Y SHERRINGTOS, 1984 La distribucin del virus en la planta es muy variable. MOREL Y MARTIN, 1952 El meristema apical esta libre de virus y es generalmente igual a la planta madre. Ej. Dalia y papa. MOREL, 1960 Obtencin de protocormos de orquideas a partir de cultivo de pices y multiplicacin vegetativa precoz, con alta tasa de multiplicacin. MURASHIGUE, 1972 Obtiene el primer microinjerto de citrus.

QUAK, 1977 Competencia entre la sntesis de partculas virales y la multiplicacin celular. PIERIK, 1987 Durante la divisin celular la capacidad para la sntesis de cidos nucleicos es utilizado para la proliferacin celular en detrimento de la multiplicacin del virus.

OBJETIVOS Y APLICACIONES

1. Produccin de plantas libres de patgenos 2. Propagacin vegetativa 3. Especies que son difciles de propagar 4. Especies de elevada contaminacin 5. Rejuvenecimiento 6. Preservacin del germoplasma

TIPO DE MERISTEMAS
1. Meristemas primarios o apicales

a. Meristemas radiculares (terminal, lateral y adventicio*) b. Meristema caulinares (terminal, axilar y adventicios*)

*Meristemas de neoformacin (callo)

2. Meristemas secundarios o cambium

a. cambium (floema y xilema) b. sber o felodermis

3. Meristemas intercalares
a. Meristemas de la base de los entrenudos de las gramineas b. Meristemas intercalares del escapo floral

c. Meristemas del carpforo del cacaguate

TEJIDO NO PORTADOR DE VIRUS

TEORAS
1.Competencia entre divisin celular y multiplicacin del virus (Quack, 1966).

2.Ausencia de elementos vasculares transporte del virus (Quack, 1966).

en

el

meristema

evita

el

3.Ausencia de enzimas en el meristema necesarias multiplicacin del virus (Mellor y Stace-Smith, 1969).

para

la

4.Sustancias inhibidoras tambin presentes en las semillas (Martn y Tanguy et al., 1976).

5.Alta concentracin de auxinas y citoquininas impiden la penetracin de partculas virales (Quack, 1977).

METODOLOGA DEL CULTIVO DE MERISTEMAS

1. Material madre, explanto y factores que lo afectan

2. Condiciones del cultivo - medio - condiciones fsicas

3. Factores que influyen en la erradicacin del virus

1. Planta madre y explanto papa, utilizacin de yemas axilares clavel, se utilizan yemas laterales (13% de xito) y yemas terminales (20% de xito)

Factores que lo afectan a. genotipo b. efecto de diferentes aos c. posicin del explante d. tamao del explante e. condicin sanitaria

2. Condiciones del cultivo

a. Medio

Composicin bsica - sucrosa o sacarosa 1-3% - sales de Murashige y Skoog, B5 o White - vitaminas - agar 6-7gr/lt - ph 5.5-6 - carbn activado, reguladores de crecimiento

b. Condiciones fsicas

Luz 1000-3000 luxes Fotoperiodo 16hrs de luz Temperatura 22-25C

3. Factores que influyen en la erradicacin del virus a. tamao del meristema b. localizacin del meristema c. edad d. tratamiento de termoterapia o quimioterapia (virazole, 2-thiouracil)

- Regeneracin por micropropagacin.

REQUERIMIENTOS

1. Lupa estereoscpica
2. 3. 4. 5. 6. pinzas y bistur mechero material de vidrio fuente de luz fra cmara de flujo

CULTIVO DE MERISTEMAS EN EL PROGRAMA DE CERTIFICACIN

1. IMPORTANCIA Virus, bacterias, hongos son transmitidos vegetativamente bajan la produccin: citrus 10-20% papa 5-75% vid 50%

2. ETAPAS
a. Seleccin y caracterizacin de la planta madre b. Obtencin de plantas libres
- termoterapia - cultivo de meristemas (ajo, 25-50%- crisantemo, 5%) - termoterapia + cultivo de meristemas (ajo, 25-80%-crisantemo, 90%) - microinjerto

c. Evaluacin de las plantas obtenidas

- serologa - plantas indicadoras - microscopa electrnica - sondas moleculares

Programa de Certificacin de Citrus

Seleccin de materiales sobresalientes

Produccin de plantas libres de virus Microinjerto

Termoterapia Quimioterapia

Introduccin de nuevas variedades

Indexacin
Plantas indicadoras Serologa Electroforesis Microscopa electrnica

Creacin de un bloque Fundacin Libre de virus Banco de plantas madres

Identificacin varietal Evaluacin permante Registro y Certificacin de yemas a viveristas y productores

CULTIVO DE MERISTEMAS EN EL PROGRAMA DE CERTIFICACIN

d. Mantenimiento de plantas libres

- invernculos - control de vectores - higiene - continua seleccin visual - mantenimiento stock in vitro

VENTAJAS Y LIMITANTES
VENTAJAS
Se logran plantas con un porcentaje alto, libres de virus. Alta tasa de multiplicacin Pueden ser proliferados en cualquier poca del ao Pequea cantidad de tejido para regenerar una planta Estabilidad gentica alta

LIMITANTES
Muerte de meristemas
a. oxidacin b. desidratacin

Tamao del meristema Enraizamiento Aclimatacin

SITUACIN ACTUAL
Ornamentales Forrajeras Hortcolas Tropicales Leosas
Crisantemo, Dalia, Jacinto, Geranio

Dactylis glomerata, Lolium multiflorum, Trifolium repens

Ajo, Esprrago, Frutilla, Tomate, Papa

Anan, banana, boniato Citrus, Duraznero, Vid, Manzano.

En Uruguay

Citrus Frutilla Papa

Virus (Psorosis, Tristeza) y viroides (Exocortis) virus, (SLV virus latente de la frutilla), bacterias, hongos.

virus PLRV, PVY, PVX, PVS

Ajo virus

TECNICA DE AISLAMIENTO DE MERISTEMAS Y MICROINJERTO

1) Preparacin y siembra de portainjertos in vitro

1.1 Siembra de semillas de citrange Troyer o Carrizo (Poncirus trifoliata L. x

Citrus sinensis L. Obs.).

1.2 Desinfeccin con hipoclorito de sodio al 1% y con una gota de twenn 20 durante 10 min. 1.3 Siembra en medio de Murashige y Skoog con sales minerales. 1.4 Incubacin a 27C durante 2 semanas en oscuridad. 2) Preparacin de brotes 2.1 Extraccin de brotes de campo, invernculo o varetas puestas a brotar en cmara de crecimiento a 32C. Los brotes extrados tienen que tener 0.5 a 2 cm de largo. 2.2 Se desinfecta con hipoclorito de sodio al 0.5% y con una gota de tween 20 durante 10min. 2.3 Se enjuagan con bastante agua destilada.

TECNICA DE AISLAMIENTO DE MERISTEMAS Y MICROINJERTO 3) Realizacin del microinjerto

3.1 Se toma el portainjerto, extraccin de cotiledones, el hipoctilo de 1.5-2 cm de longitud y el epictilo a 4 cm de longitud.

3.2 En el pice del hipoctilo se realiza un corte a 1-2 mm de largo en forma de ventana o T invertida.

3.3 Se toma el brote desinfectado y se aisla el meristema con 2 o 3 primordios foliares. Se lo coloca es el portanijerto.

3.4 El microinjerto se lo coloca en medio lquido de Murashige y Skoog con sales y vitaminas.

3.5 Se lo coloca en oscuridad a 27C durante 1 semana.

3.6 Se lo coloca en cmara de crecimiento a 16 hrs de luz a 27C.

3.7 Se transplanta y se coloca en cmara de crecimiento a 27C durante 1 mes y luego se los traslada a invernculo.