Anemia infecciosa equina

Enviado por carrizales Indice 1. Introduccin 2. Transmisin 3. Sntomas 4. Patologa 5. Conclusiones 6. Bibliografa 1. Introduccin La Anemia Infecciosa Equina (AIE) es una enfermedad viral, no contagiosa pero transmisible, que afecta nicamente a miembros de la familia equidae. Su principal caracterstica es la cronicidad, y la aparicin de accesos febriles despus de un primer acceso de fiebre (Parek, et al.1980). El carcter recurrente de la enfermedad, haba sido un verdadero reto para los investigadores, hasta que el proceso fue explicado gracias a varios trabajos, como los de Montelaro, et al (1984); Payne, et al. (1984); Orrego, et al. (1982); Montelaro, et al. (1984); y Orrego, et al. (1983). En la actualidad existe un problema de diagnstico con la AIE, dado que la prueba rutinaria, o que se emplea comnmente, es la prueba de Coggins, que es una prueba de inmunodifusin doble en Agar, que es muy especfica, pero de baja sensibilidad Y actualmente no hay un tratamiento especifico o efectivo para la anemia infecciosa equina (AIE). La AIE tambin es conocida con los nombres de fiebre recurrente de los pantanos, fiebre malaria, fiebre de la montaa y fiebre lenta. Objetivos Desarrollar y Clarificar los tems como los son el agente etologico, transmisin, sntomas, patologa, diagnostico, etc. Adems dando una explicacin y profundizacin sobre cada uno de ellos. Definir y explicar en si que es la anemia infecciosa equina con base en guas como los son libros, para as formarse un concepto claro sobre esta importante enfermedad. El objetivo de este trabajo es presentar una actualizacin sobre el estado actual de esta enfermedad proponiendo un par de conceptos que nos ayudan a conocerla a fondo. Agente Etilogico El agente etilgico es simplemente el virus retroviridae de alto peso molecular que causa anemia hemoltica de tipo inmune. Son susceptibles los equinos, mulas y asnos de cualquier raza, edad y sexo. Tres son las formas de presentacin de la enfermedad: aguda, subaguda y crnica. 2. Transmisin AIE ha sido reportada en todo Estados Unidos y en muchas otras partes del mundo donde hay equinos los brotes nuevos son generalmente de la forma aguda, mientras que la forma inaparente es la ms comn en reas donde la enfermedad est bien establecida. El virus es transmitidos por la picadura de un mosquito (Anopheles psorophora), del tbano Stomoxys calcitrans tambin la enfermedad se transmite por va natural por medio de insectos que llevan el virus, especialmente la mosca de mula o la mosca borriquera. AIE tambin puede ser transmitida de yegua a potrillo, o cuando los animales saludables reciben

transfusiones de sangre de animales infectados. Adems, la AIE es transmitidas a travs de cuchillos y jeringas que no estn esterilizadas y agujas que se utilizan para marcar o tatuar o para sacar sangre que han sido previamente usadas en animales infectados. La AIE mata de 30 a 70 por ciento de los animales infectados. El nmero de muertes es generalmente ms alto cuando la enfermedad es introducida dentro de una nueva rea. La bronconeumona, que frecuentemente sigue a la anemia infecciosa, puede ser la causa directa de muerte. Los equinos normalmente desarrollan anemia infecciosa de 2 a 4 semanas despus de expuestos. Sin embargo, los signos pueden aparecer hasta 2 meses despus. 3. Sntomas Los animales infectados pueden experimentar una alza repentina de temperatura, de 100 F, que es normal, a 105 F o ms alta. Los ataques de fiebre pueden ser espordicos o continuos. Los animales infectados pueden tambin sudar profusamente, padecer de respiracin acelerada, y depresin. Pueden bajar de peso, an si mantienen su apetito normal. Los ojos se les tornan de un color rojizo y un poco acuosos. Los animales infectados orinan frecuentemente, y si el caso es grave, sufren de diarrea. Las patas y la parte inferior del cuerpo se les hinchan. El animal dbil se tambalea al caminar; a veces se le paralizan las patas posteriores. A medida que la enfermedad progresa, el animal infectado desarrolla anemia. Sus membranas mucosas se vuelven plidas o amarillentas, su pulso es dbil, y los latidos de su corazn son irregulares. No todos los animales infectados con AIE muestran signos clnicos. A veces los animales visiblemente afectados muestran slo algunos sntomas. Algunos animales con el virus en la sangre nunca muestran ningn sntoma, sin embargo en algunos animales los sntomas son variados, depende del estado de la enfermedad. Evolucin crnica en la mayora de los casos, con accesos agudos en los que se constata fiebre-abatimiento, anemia-edemas enflaquecimiento-debilidad del tren posterior, inapetencia, respiracin acelerada, conjuntivitis.

4. Patologa Para facilitar la descripcin de la enfermedad, se consideran tres tipos: aguda, subaguda y crnica. Las manifestaciones anatomopatologicas en cada tipo clnico son semejantes a las de los otros dos. La anemia se caracteriza por elevacin rpida de temperatura (hasta 42 C.) despus de un periodo de incubacin de una a tres semanas. La fiebre se acompaa por una debilidad extrema, sed excesiva, anorexia, depresin, edema de la porcin inferior del abdomen y hemorragia sublingual o nasal adems la cuenta normal de 8 millones de glbulos rojos baja hasta 4 millones en la mayora de los casos. Lesiones Generales Tipo Agudo: En general se encuentran edemas y hemorragias. El edema es lo ms notable en el tejido subcutneo de la pared ventral del abdomen, en la base del corazn y en la grasa perirrenal y sublumbar. Tipo subagudo: El edema y las hemorragias son caractersticos, pero son menos notables que la anemia, se presentan inflamacin y pigmentacin del hgado, el crecimiento del bazo y los riones y la hiperplacia de la medula sea.

Tipo crnico: se presenta hipertrofia del bazo y de la medula sea pueden ser las nicas alteraciones anatomoparologicos en un animal sacrificado. Diagnostico El Servicio de Inspeccin de Sanidad Agropecuaria del Departamento de Agricultura de los Estados Unidos (APHIS-USDA, sigla en ingls) tiene la responsabilidad de observar y anotar la prevalencia de AIE. APHIS trabaja esmeradamente con estados individuales para desarrollar programas de control adecuados y analiza pruebas para diagnosticar AIE en sus laboratorios veterinarios. Para el diagnostico de la enfermedad entregue una muestra de sangre del animal a un laboratorio aprobado. Ambas pruebas de Coggins y de inmunoensayo enzimtico (enzymelinked immunosorbent assay, ELISA), son utilizadas para realizar el diagnostico de la AIE. Tratamiento En muchos pases como Espaa Y Estados Unidos ya se establecen el sacrificio obligatorio y es de declaracin oficial. Es importante enfatizarse en las medidas de control, que ms adelante se explicaran y adems no es aconsejable implementar ningn tipo de tratamiento. Profilaxis Principalmente para prevenir que la AIE se utilizan las siguientes medidas:

Aislamiento y eliminacin de animales positivos en el diagnostico. Control de los insectos. Utilizacin de material estril para inyecciones y otras actividades medicas Control de animales que entran y salen del hato. Control peridico con el test (aproximadamente 2 veces en el ao). Si se detectan casos positivos, realizar un chequeo total de los animales, repitiendo la prueba de 30 a 45 das despus. Los animales positivos deben ser separados del resto de animales y en lo posible sacrificados. Usar agujas individuales para cada animal. Mantenga limpios y estriles los establos y alrededores en todo momento. Obedezca las leyes del estado que gobiernan la AIE.

Discusin La AIE es una enfermedad muy contagiosa y con diferentes medios por los cuales los animales de un hato son fcilmente contagiados, por lo cual se debe tener responsabilidad en el manejo, sanidad de una serie de animales por parte del dueo o el administrador (zootecnista), y cumplir con requisitos para prevenir la enfermedad. En desarrollo de la enfermedad en una serie de animales se debe al poco cuidado y responsabilidad en el manejo de la AIE, por lo cual puede producir un alto valor econmico al tratar de erradicarla, sin la posibilidad de un tratamiento efectivo contra esta enfermedad. Al no existir un tratamiento efectivo la nica solucin es el sacrificio de los animales infectados y por ello s vera disminuido la cantidad de animales y por esto causando el dao econmico. El trabajo explico de una forma clara como prevenir la AIE. 5. Conclusiones

La Anemia Infecciosa Equina (AIE) es una de las enfermedades ms importantes, entre las que afectan a miembros de la familia Equidae. su caracterstica principal es la ocurrencia de accesos febriles, que ocurren a intervalos de tiempo no predecibles, despus de la infeccin. La forma ms comn de la enfermedad es la forma crnica, en la cual el aspecto general del animal es normal, e incluso puede ser negativo en la prueba rutinaria de diagnstico, que actualmente es la prueba de Coggins. El diagnstico de la AIE representa con frecuencia un problema, ya que la prueba de Coggins es muy especifica, pero de baja sensibilidad, el virus produce destruccin de los glbulos rojos y la consiguiente anemia. La enfermedad como tal es muy fcil de controlar con medidas sencillas de limpieza, evaluaciones semestrales y una atencin de los animales que presentan la serie de sntomas anteriormente nombrados que se presentan en caso de estar infectados. La AIE en si para el propietario trae perdidas econmicas y en cuanto al animal lo perjudica en trminos de rendimiento y eficiencia, notada por un desgano en el animal. Resumen De Anemia Infecciosa Equina La forma ms comn de la enfermedad es la forma crnica, en la cual el aspecto general del animal es normal, e incluso puede ser negativo en la prueba rutinaria de diagnstico, que actualmente es la prueba de Coggins. El diagnstico de la AIE representa con frecuencia un problema, ya que la prueba de Coggins es muy especifica, pero de baja sensibilidad, el virus produce destruccin de los glbulos rojos y la consiguiente anemia, La AIE tambin es conocida con los nombres de fiebre recurrente de los pantanos, fiebre malaria, fiebre de la montaa y fiebre lenta. El agente etologico es simplemente el virus retroviridae de alto peso molecular que causa anemia hemoltica de tipo inmune. La enfermedad se transmite por va natural por medio de insectos que llevan el virus, especialmente la mosca de mula o la mosca borriquera. AIE tambin puede ser transmitida de yegua a potrillo, o cuando los animales saludables reciben transfusiones de sangre de animales infectados. Es aconsejable no implementar ningn tipo de tratamiento. En Espaa y U.S.A se lleva al animal infectado a sacrificio. 6. Bibliografa Patologa Veterinaria, Smith y Jones; Unin Tipogrfica Editorial Hispano Americana, 1962. Trabajo enviado por: Juan Jacobo Carrizales carrizales[arroba]hotmail.com Alejandro Ruiz Martn

Anemia infecciosa equina

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Virus de la Anemia infecciosa equina

La anemia infecciosa equina es una enfermedad vrica crnica, exclusiva de los quidos y transmitida habitualmente por artrpodos, con clnica caracterizada por crisis hemolticas febriles intermitentes. Su importancia clnica es elevada, por ser infeccin vitalicia y recidivante, letal en las formas agudas e incapacitante en las crnicas. Asimismo, su relevancia econmica, por las bajas y sacrificios que conlleva, el coste de medidas diagnsticas y profilcticas y por las limitaciones y prohibiciones de trfico de seropositivos. Su impacto sanitario tambin es importante, debido a que afecta al hombre, causando una enteropata febril aguda recidivante, con viremia persistente.

Contenido
[ocultar] 1 Etiologa 2 Epidemiologa 3 Patogenia 4 Clnica 5 Lesiones 6 Diagnstico 7 Prevencin 8 Aspectos zoonticos

Etiologa [editar]
El virus causal pertenece al Gnero Lentivirus, Familia Retroviridae. Es un ribovirus monocatenario con envoltura; el virin, aproximadamente esfrico, de 80130 nm. de dimetro, cuya envoltura lipoproteica doble, con peplmeros glicoproteicos, envuelve una nucleocpsida icosadrica.

Muy resistente a desecacin y temperaturas inferiores a 50C, sensible a desinfectantes y cambios de pH. Cultivable en histocultivo de leucocitos y de fibroblastos drmicos equinos, as como en lneas celulares equinas, caninas y felinas, en los que no causa ECP, sino infeccin persistente como provirus integrado en el genoma de la clula hospedadora. Existen cepas diferenciables por seroneutralizacin con una hemaglutinina comn, pero sin proteccin cruzada...

Epidemiologa [editar]
Reservorios: Los quidos infectados, tanto clnicos como inaparentes, son portadores virmicos en sus linfocitos, manteniendo la infeccin a lo largo de toda la vida. Es frecuentsimo el estado de portador asintomtico. El ms frecuente es el contagio mecnico indirecto vehiculado por picaduras de moscas del gnero Stomoxys, tbanos del gnero Tabanus y Chrysops, y mosquitos Anopheles, cuya presencia se ve favorecida por la existencia de una adecuada temperatura, humedad y vegetacin. La transmisin tambin se puede verificar indirectamente a partir del utillaje, fmites e instrumentos quirrgicos. Es factible asimismo un contagio directo horizontal por va venrea o vertical por va transplacentaria. La infeccin intrauterina puede no ser letal, dando lugar a un portador congnito. Las especies sensibles son los quidos, especialmente el caballo. Estos animales son especialmente susceptibles cuando son sometidos a circunstancias estresantes tales como trabajo intenso, altas temperaturas, gestacin o tratamientos con frmacos esteroideos. La contagiosidad es elevada. La enfermedad suele adoptar una presentacin moderadamente estacional, con mximos durante los meses estivales. Es habitualmente enzotica aunque puede presentar brotes epizoticos. La morbilidad suele llegar al 75-100% en los colectivos expuestos; la mortalidad es muy variable, pero siempre elevada a largo plazo.

Patogenia [editar]
Penetracin parenteral, inoculada por insectos o instrumental, o vehiculada en fmites en contacto con lesiones preexistentes; transplacentaria; o por microlesiones en mucosa genital. Difusin linfohemtica, vehiculada por hemates como virin libre, mediante la hemaglutinina, o capturado por macrfagos, en los que se puede replicar, o integrado como provirus en el genoma de linfocitos. Tropismo y localizacin por clulas hematopoyticas de mdula sea, hemates y linfocitos. La eliminacin siempre se produce por las secreciones y excretas contaminadas con sangre. Esta eliminacin nunca es completa, quedando siempre un fondo de provirus sin expresar. La infeccin producida reduce la eficacia de la hematopoyesis e induce la produccin masiva de anticuerpos fijadores de complemento. Al unirse estos anticuerpos al virus fijado

a los hemates, se produce por una parte la lisis extracelular de tales hemates, mientras que por otra se estimula la eritrofagocitosis por las clulas del SRE. Ambos fenmenos determinan intensas crisis hemolticas con la consiguiente anemia. A su vez, las enormes cantidades de complejos inmunes circulantes causan vasculitis a diversos niveles, y el exceso de hemosiderina retenida en clulas de SRE puede dar lugar a infiltraciones linfoides masivas y necrosis viscerales. Si la muerte no se produce durante una crisis hemoltica, suele pasar a la forma recidivante o a la cronicidad.

Clnica [editar]
Perodo de incubacin de 7 a 21 das.
Forma aguda Es caractersticas de los caballos que entran en contacto por primera vez con el virus. Se caracteriza por: Fiebre alta, anorexia, debilidad, sudoracin profusa y descarga nasal serosa, taquicardia con pulso dbil y taquipnea, intensa anemia anisoctica, ictericia, heces hemorrgicas y petequias en mucosas. Curso de 5 a 30 das, mortal en el 30% de los casos, o con lenta recuperacin, con paso como portador a la Forma subaguda, caracterizada por recidivas de gran intensidad y corta duracin, cualquiera de las cuales puede ser mortal; de presentacin muy regular durante los primeros meses, con aparente normalidad en los intervalos, y ms espaciada despus, sealando el paso a la Forma crnica con febrcula persistente, anemia, hipergammaglobulinemia persistentes, debilidad muscular y marcha insegura, caquexia progresiva sin anorexia, arritmias y debilidad cardaca con edemas declives.

Lesiones [editar]
Macroscpicas: Canal anmica, subcutneo con tinte ictrico y hemorragias focales, petequias y equimosis en mucosas y serosas viscerales, hipertrofia de mdula sea roja, anemia, ictericia y atrofia serosa de tejidos grasos, hemorragias subcapsulares en todas las vsceras,hepato y esplenomegalia, infarto hemorrgico y atrofia serosa de mdula sea. Microscpicas: Hemlisis intravascular, infiltracin linfocitaria y depsitos de inmunocomplejos en paredes vasculares y glomrulo renal, eritrofagocitosis en macrfagos, especialmente en mdula sea, donde proliferan junto con plasmocitos, y depsitos de hemosiderina en hgado, bazo y ganglios.

Diagnstico [editar]
Clnico-epizootiolgico-lesional: de valor presuntivo. Requiere diferenciar de la anemia primaria hemoltica autoinmune, que responde a los esteroides; de las intoxicaciones por hemolticos y anticoagulantes; de las piroplasmosis, la leptospirosis y la arteritis vrica. Laboratorial: serolgico, por IDGA con antgeno esplnico. Rpido, fcil de realizar y seguro.

Prevencin [editar]
No existe ninguna vacuna ni tratamiento etiolgico eficaz; la aplicacin de antianmicos, alimentacin adecuada y un cuidado exquisito pueden espaciar las recidivas, pero el animal sigue expuesto a padecerlas y es un portador permanente. Por tanto, est contraindicado, especialmente en reas no enzoticas. Se combate mediante medidas higinico-sanitarias preventivas, como evitar la exposicin a los vectores y proteger de stos a los animales; desinfeccin cuidadosa del material quirrgico y los arreos; y limitacin, previo diagnstico, del comercio y el movimiento de quidos. En caso de brotes se deben aplicar medidas enrgicas de erradicacin, con sacrificio inmediato y destruccin sanitaria de enfermos, sospechosos, camas y estircoles, desinfeccin y desinsectacin; secuestro, empadronamiento e inmovilizacin; y vigilancia perifrica con diagnstico sistemtico por inmunodifusin, complementados con medidas preventivas como las descritas. Es la nica solucin eficaz, y tanto ms cuanto los animales infectados no sirven ni para trabajo ni para reproduccin.

Aspectos zoonticos [editar]

El virus de la anemia infecciosa equina puede infectar al hombre, causando un cuadro virmico de 2 a 7 aos de duracin, con crisis febriles acompaadas de enteritis hemorrgicas violentas; dolores lumbares, cefalalgias, debilidad, prdida de peso y anemia.
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CAPTULO2.5.4.

ANEMIA INFECCIOSA EQUINA

RESUMEN
La anemia infecciosa equina (AIE) est causada por un lentivirus. Se puede diagnosticar en base a los signos clnicos, lesiones patolgicas y serologa. Los caballos infectados continan siendo portadores del virus de por vida y darn un resultado serolgico positivo. Generalmente, la respuesta de los anticuerpos es persistente, y los animales con anticuerpos positivos mayores de 6 meses, se identifican como portadores de virus (en los menores de 6 meses, las reacciones serolgicas pueden deberse a los anticuerpos maternales). Los animales infectados pueden transmitir la infeccin a otros caballos. Identificacin del agente: Se puede aislar el virus en un caballo enfermo inoculando sangre sospechosa a un caballo susceptible o a los cultivos de leucocitos preparados a partir de caballos susceptibles. El reconocimiento de la infeccin en los caballos que han sido inoculados experimentalmente se puede llevar a cabo en base a signos clnicos, a cambios hematolgicos y a una respuesta positiva de anticuerpos determinada por una prueba de inmunodifusin o por un

enzimoinmunoensayo (ELISA). El aislamiento eficaz del virus en los cultivos de leucocitos de los caballos se confirma mediante la deteccin del antgeno especfico contra la AIE por la prueba de inmunofluorescencia, la reaccin en cadena de la polimerasa, la prueba RTA (reversetranscriptase assay) o por la inoculacin de fluidos de cultivo en caballos susceptibles. Raramente se intenta el aislamiento del virus debido al tiempo, la dificultad y los gastos que conlleva. Pruebas serolgicas: Las pruebas de inmunodifusin en gel agar (AGID) y ELISA son pruebas simples y fiables para demostrar la infeccin por AIE. Cuando las pruebas ELISA son positivas deben confirmarse mediante la prueba AGID. La precipitacin del antgeno se puede preparar a partir de cultivos de tejido infectados utilizando la tecnologa del ADN recombinante. Requisitos para las vacunas y los materiales de diagnstico: No existen actualmente productos biolgicos disponibles.

A. INTRODUCCIN
La anemia infecciosa equina (AIE) se presenta en todo el mundo. La infeccin se limita a los quidos. La enfermedad se caracteriza por episodios febriles recurrentes, anemia, prdida de peso y edema de las partes bajas del cuerpo; tiende a convertirse en una infeccin asintomtica sino se produce la muerte en el curso de los ataques clnicos agudos. Normalmente, el perodo de incubacin es de entre 1 y 3 semanas, pero puede prolongarse hasta 3 meses. En casos agudos, los ndulos linfticos, el bazo y el hgado se agrandan y se vuelven hipermicos. Desde el punto de vista histolgico, estos rganos estn infiltrados con poblaciones de leucocitos inmaduros y de clulas plasmticas. Las clulas de Kupffer, del hgado, generalmente contienen hemosiderina o eritrocitos. Se puede detectar hipertrofia del bazo mediante un examen rectal. Cuando el virus AIE infecta a un caballo, su sangre permanece infectada durante el resto de su vida. Ello significa que el caballo es un portador virmico y que puede transmitir la enfermedad a otros caballos (4). La transmisin se realiza por transferencia de la sangre de un caballo infectado. En realidad, es ms probable que la propagacin del virus se lleve a cabo por la interrupcin de la alimentacin de los tbanos que chupan la sangre a caballos clnicamente enfermos y luego pasan a caballos sanos susceptibles, o mediante la utilizacin de agujas contaminadas. Sin embargo, lo que s se da es la infeccin in utero de un feto (8). El ttulo del virus es ms alto en caballos con signos clnicos y el riesgo de transmisin es ms elevado desde estos animales que desde animales portadores con un ttulo de virus inferior.

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B. TCNICAS DE DIAGNSTICO

Las pruebas de inmunodifusin en gel de agar (AGID) (7) y los enzimoinmunoensayos ELISA (15) son pruebas precisas y fiables para la deteccin de la AIE en caballos, excepto para los animales que estn en las primeras etapas de la infeccin, para los potros y para las madres infectadas. En otras circunstancias poco frecuentes, pueden obtenerse resultados equvocos cuando la cantidad de virus que circulan en la sangre durante un episodio agudo de la enfermedad es suficiente para hacer que disminuya la cantidad de anticuerpos disponibles, y si la cantidad inicial de anticuerpos nunca aumenta lo suficiente para que stos sean detectables (16). Aunque con el ELISA se detectan los anticuerpos en concentraciones bajas antes que con la prueba AGID, sta se utiliza para confirmar los ELISA positivos. Esto es debido a que los resultados falsos positivos han sido detectados con ELISA. La prueba AGID tiene tambin la ventaja de distinguir entre la anemia infecciosa equina y las reacciones de los anticuerpos antgenos de AIE mediante lneas de identidad. El virus de la AIE es un lentivirus, una subfamilia del Retroviridae, que incluye tambin maedivisna, artritis y encefalitis caprina, inmunodeficiencia bovina y los virus de inmunodeficiencia humana. Las comparaciones de secuencias de cido nucleico han demostrado una relacin estrecha entre estos virus.

1. Identificacin del agente

Generalmente, no es necesario el aislamiento del virus para realizar un diagnstico. Se puede aislar el virus en caballos sospechosos inoculando su sangre en cultivos de leucocitos preparados a partir de caballos no infectados. La produccin de virus en cultivos puede confirmarse detectando el antgeno especfico contra AIE por medio de un ELISA, por la prueba de la inmunofluorescencia o por subinoculacin en caballos susceptibles. Apenas se intenta el aislamiento del virus debido a la dificultad para obtener cultivos de leucocitos de caballos.

Se ha descrito una prueba de la reaccin en cadena de la polimerasa anidada, para detectar el ADN provrico de la AIE en la sangre perifrica de los caballos (12). Cuando no se puede confirmar el estado exacto de la infeccin de un caballo, debera realizarse la inoculacin de un caballo susceptible con sangre sospecha. En este caso, a un caballo que ha sido previamente examinado en busca de anticuerpos y da un resultado negativo, se le debe realizar inmediatamente una transfusin de sangre del caballo sospechoso y debe controlarse el estado de sus anticuerpos y sus condiciones clnicas durante al menos 45 das. Generalmente, 125 ml del total de la sangre inyectada en vena es suficiente para demostrar la infeccin, pero, en algunos casos, puede ser necesaria la utilizacin de un volumen mayor de sangre (250 ml) o de los leucocitos lavados de dicha sangre. (5)

2. Pruebas serolgicas

Debido a la persistencia del virus de la AIE en los quidos infectados, la deteccin serolgica de anticuerpos frente al virus de la AIE confirma el diagnstico de la infeccin por dicho virus.

a) Prueba de inmunodifusin en gel de agar (prueba prescrita para el comercio internacional)

Los anticuerpos precipitantes se producen rpidamente como resultado de la infeccin por la AIE y se pueden detectar mediante la prueba AGID. Las reacciones especficas se indican por las lneas de precipitacin entre el antgeno de la AIE y el suero problema y se confirman por ser idnticas a la reaccin que se da entre el antgeno y el suero estndar positivo. Generalmente, en las primeras 23 semanas despus de la infeccin, los caballos presentarn reacciones serolgicas negativas. En algunos casos, el tiempo posterior a la infeccin previo a la aparicin de anticuerpos detectables puede durar hasta 60 das. Estn disponibles comercialmente reactivos para AGID de diversas compaas. Alternativamente, el antgeno AGID y el suero de referencia se pueden preparar como se describe a continuacin. Preparacin del antgeno El antgeno especfico para la AIE se puede preparar a partir del bazo de caballos infectados experimentalmente con enfermedad aguda (6), del cultivo de tejidos de caballos infectados (10), de una lnea celular de timo canino con infeccin permanente (3) o de protenas recombinantes expresadas en bacterias o en baculovirus utilizando la tcnica del ADN recombinante (2,9). La preparacin del antgeno a partir de cultivos infectados o mediante la tcnica de ADN recombinante, proporciona un resultado ms uniforme que utilizando las clulas del bazo, y permite una mejor estandarizacin de los reactivos.

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Manual de la OIE sobre animales terrestres 2004 735

Para obtener un antgeno satisfactorio a partir del bazo, debe infectarse un caballo con una cepa muy virulenta del virus de la AIE. El perodo de incubacin resultante debera durar entre 5 y 7 das, y el bazo debe recogerse 9 das despus de la inoculacin, cuando ms alto es el ttulo del virus y antes de que se produzca cualquier cantidad de anticuerpos precipitantes. La pulpa del bazo, sin diluir, se utiliza como antgeno en la prueba de inmunodifusin(6). La extraccin del antgeno del bazo con una solucin salina y una concentracin con sulfato amnico, no proporciona un antgeno tan satisfactorio como una seleccin de bazos con un ttulo alto del antgeno de la AIE. Alternativamente, se infectan clulas de rin fetal equino, clulas drmicas o clulas del timo canino con una cepa del virus de la AIE adaptado para crecer en cultivo de tejido (American Type Culture Collection). El virus se recoge de los cultivos por precipitacin con polietilenglicol al 8%, por confeccin en pellets o por ultracentrifugacin. El antgeno de diagnstico, p26, se separa del virus por tratamiento con detergente o ter. Las protenas del ncleo del virus de la AIE, expresadas en bacterias o baculovirus estn disponibles comercialmente y se utilizan como antgenos de alta calidad para el diagnstico serolgico. Existen evidencias de variacin de la cepa en la secuencia del aminocido p26; sin embargo no hay evidencias de que esta variacin influya en ninguna de las pruebas de diagnstico (19). La p26 es una protena estructural interna del virus que est codificada por el gen gag. Este gen es estable y no se han encontrado variaciones entre las cepas (11). Preparacin del antisuero estndar Se debe recoger un antisuero positivo conocido procedente de un caballo previamente infectado con el virus de la AIE. Este suero debe producir una nica lnea de precipitacin densa, que es especfica para la AIE, tal como se ha demostrado mediante una reaccin idntica a la de un suero estndar conocido. Es esencial equilibrar las concentraciones de antgeno y de anticuerpos, con el fin de garantizar la sensibilidad ptima de la prueba. Las concentraciones del reactivo deben ajustarse para formar una lnea de precipitacin estrecha aproximadamente equidistante de los dos pocillos que contienen el antgeno y el suero. Procedimiento de la prueba (1, 6, 13) i) Las reacciones de inmunodifusin se llevan a cabo en una capa de agar en placas de Petri. Para

placas de Petri de 100 mm de dimetro, se utilizan 1517 ml de agar Noble al 1%. Se perforan 6 pocillos en el agar en torno a un pocillo central del mismo dimetro. Los pocillos sern de 5,3 mm de dimetro y con una separacin de 2,4 mm. Cada pocillo debe contener el mismo volumen de reactivo. ii) Se coloca el antgeno en el pocillo central y el antisuero estndar en uno de cada dos pocillos exteriores. Las muestras del suero problema se colocan en los tres pocillos restantes. iii) Se mantienen las placas a temperatura ambiente en un ambiente hmedo. iv) Transcurridas 2428 horas, se examinan las reacciones de precipitacin con un haz estrecho de luz oblicua e intensa frente a un fondo negro. Las lneas de referencia deben ser claramente visibles a las 24 horas y, en ese momento, cualquier suero problema que sea fuertemente positivo tambin puede haber formado lneas idnticas a las que se dan entre los reactivos estndar. Una reaccin positiva dbil puede tardar 48 horas en formarse, y se indica mediante una pequea inclinacin de la lnea de precipitacin del suero entre el pocillo del antgeno y el pocillo del suero problema. Los sueros con ttulos de anticuerpos de precipitacin altos, pueden formar bandas anchas de precipitina que tienden a extenderse. Tales reacciones pueden confirmarse como especficas de la AIE por dilucin al o antes del contraensayo; stas pueden ofrecer una lnea de identidad ms marcada. Los sueros libres de anticuerpos de la AIE no formarn lneas de precipitacin y no tendrn efecto sobre las lneas de reaccin de los reactivos estndar. v) Interpretacin de los resultados: Los caballos que estn en las primeras etapas de la infeccin pueden no dar una reaccin serolgica positiva en la prueba AGID. Tales animales deberan sangrarse de nuevo despus de 34 semanas. Con el fin de realizar un diagnstico en un potro joven, es necesario determinar el estado de los anticuerpos procedentes de la madre. Si la yegua posee algn anticuerpo de la AIE, entonces ser necesario un perodo de 6 meses o ms despus del nacimiento para que el anticuerpo materno disminuya; se somete al potro a una nueva prueba para determinar si una reaccin positiva inicial se debi al anticuerpo materno o a la infeccin.

b) Enzimoinmunoensayo
Existen tres tipos de ELISAue han sido aprobados por el Departamento de Agricultura de los Estados Unidos para el diagnstico de la anemia infecciosa equina y que estn disponibles internacionalmente; un ELISA competitivo y dos ELISAS no competitivos. El ELISA competitivo y uno de los ELISAs no competitivos detectan los anticuerpos producidos contra el antgeno proteico del ncleo p26. El otro ELISA no competitivo incorpora la protena del ncleo p26 y los antgenos gp45 (protena transmembrana vrica). Los protocolos del ELISA tpicos se utilizan en todas las pruebas. Si los materiales comerciales del ELISA

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736 Manual de la OIE sobre animales terrestres 2004

no estn disponibles, puede emplearse un ELISA no competitivo utilizando antgeno p26 purificado procedente del material de cultivo de clulas (14). Un resultado positivo obtenido mediante ELISA debe comprobarse de nuevo utilizando la prueba AGID para confirmar el diagnstico, debido a que se han detectado algunos resultados positivos falsos mediante ELISA. Tambin se puede confirmar el resultado por la tcnica inmunobloting. Los Laboratorios de Referencia de la OIE tienen disponible un antisuero estndar para inmunodifusin que contiene una cantidad mnima de anticuerpo que debera detectarse en los laboratorios. (Vase el cuadro que aparece en la parte 3 de este Manual para Animales Terrestres). Se han publicado mtodos uniformes para el control de la AIE (17).

C. REQUISITOS PARA VACUNAS Y MATERIALES DE DIAGNSTICO

No existen productos biolgicos disponibles en estos momentos.

REFERENCIAS

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