UNIVERSIDAD COLEGIO MAYOR DE CUNDINAMARCA. FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO.

INMUNOLOGIA CLINICA TALLER1

DIEGO ALEXANDER CHAVARRO MORENO.

SEMESTRE: IV D BOGOTA D.C FEBRERO 17 2012

ESCOJA EL RECEPTOR POR PUNTAJE MAS ADECUADO PARA ESTE DONANTE, JUSTIFIQUE SU RESPUESTA BASADO(A) EN LOS FUNDAMENTOS DE LAS PRUEBAS QUE SE REALIZARON, MENCIONE QUE TIPO(S) DE RECHAZO A INJERTO SE PUEDE(N) DESCARTAR, INDIQUE CUALES PRUEBAS COMPLEMENTARIAS HARA EN CASO DE SER NECESARIAS Y POR QU. DONANTE CADAVERICO O POSITIVO, VARON, HLA: A*010101, 2609, B*1508(75), 2101(38), DRB1*0401, 090102 Probables receptores: 1. Hombre 25 aos Grupo O Positivo Prueba PRA Diciembre : 10% Prueba PRA Enero : 10% Prueba PRA Febrero : 10% Prueba Cruzada Acs Citotxicos: 15% HLA: A*010101, 0255, B*0108, 2101, DRB1*0401, 0501 2. Hombre 35 aos Grupo O Positivo Prueba PRA Diciembre : 20% Prueba PRA Enero : 10% Prueba PRA Febrero : 10% Prueba Cruzada Acs Citotxicos: 9% HLA: A*030101, 3001, B*0801, 1401(64), DRB1*0801, 0902 3. Mujer 45 aos Grupo O Positivo Prueba PRA Diciembre : 20% Prueba PRA Enero : 30% Prueba PRA Febrero : 10% Prueba Cruzada Acs Citotxicos: 40% HLA: A*3104, 0255, B*0801, 1508(75), DRB1*0401, 0801 4. Mujer 25 aos Grupo O Positivo Prueba PRA Diciembre : 10% Prueba PRA Enero : 10% Prueba PRA Febrero: 10% Prueba Cruzada Acs Citotxicos: 9% HLA: A*010101, 0255, B*1501(75), 2101, DRB1*0401, 090102 5. Hombre 53 aos Grupo O Positivo Prueba PRA Diciembre : 10% Prueba PRA Enero : 10% Prueba PRA Febrero : 10% Prueba Cruzada Acs Citotxicos: 20% HLA: A*0301, 3001, B*1301, 0801, DRB1*0901, 1501 6. Hombre 18 aos Grupo O Positivo Prueba PRA Diciembre : Negativa Prueba PRA Enero : 10% Prueba PRA Febrero : 10% Prueba Cruzada Acs Citotxicos: 9% HLA: A*010101, 2301, B*1508(75), 2101, DRB1*0402, 090102

I. Cul es el mtodo de eleccin para cada una de las pruebas pre-transplante aprendidas en este mdulo? Cules son los valores de referencia para cada una de ellas? II. Cules son los posibles factores de sensibilizacin en una persona que est en lista de espera para un injerto? Describa como se detecta una sensibilizacin previa? III. Defina: a. Colorante supravital b. Sustancia intercalante c. Fluorocromo d. Cromgeno e. Istopo radioactivo f. Luminol g. Anticuerpo monoclonal h. Antisuero policlonal i. Agente alquilante explique los mecanismos de accin j. Anticuerpos quimricos k. Anticuerpos humanizados l. Anticuerpos fros

SOLUCION El paciente que mejor presenta condiciones para el trasplante es el nmero 6 por: Los resultados del histrico en la prueba de panel de anticuerpos reactivos presenta un mes donde no hubo reaccin los dos meses seguidos presenta un valor de 10% teniendo como promedio general de PARA en su histrico de 6,66% lo cual se encuentra por debajo del promedio idealizado para dicha prueba que es del 10%. La PRA se fundamenta en la reaccin de de las clulas del injerto contra el suero del receptor donde por excelencia se encuentran los anticuerpos que este tiene, esta prueba se realiza en el laboratorio y nos es evidente a simple vista se debe suministrar un colorante SUPRAVITAL para evidenciar la reaccin al microscopio en este se deben contar 100 clulas diferencindolas esto con el fin de obtener el porcentaje de celular que reaccionaron. Entre mas alto sea el porcentaje indica que tanto como donante y receptor no son compatible. Esta prueba me permite decidir cual es el donante especifico o mas apropiado. Es una prueba cruzada para determinar anticuerpos preformados contra el HLA y clulas del posible donante que puedan inducir el rechazo del rgano o injerto. Los Ac preformados se inducen debido en pacientes que en su historia clnica se caracterizan por haber tenido transfusiones sanguneas previas, mujeres multparas, infecciones de cualquier naturaleza y previos trasplantes. Puede estar especficamente dirigido contra los antgenos HLA o contra cualquier otro antgeno del donante que no comparta con el receptor. La muerte celular es un indicador de la reaccin antgeno y anticuerpo, constituyendo una prueba positiva. Cuando se determina este tipo de resultado se debe valorar el porcentaje de clulas muertas, si se observa ms del 20% como

valor de referencia. No seria conveniente hacer un trasplante debido a que se inducira la perdida del rgano. Para este caso el receptor No 6 es el ms adecuado en cuanto a la prueba Cruzada Acs Citotxicos, dado que su porcentaje de muerte celular es menor a 20% que se tiene como valor de referencia, lo que quiere decir que la posibilidad de que haga rechazo a corto plazo se descarta. Por otra parte tenemos la tipificacin de HLA Antgeno Leucocitario Humano que es una molcula de membrana que se encuentra en todas las clulas se clasifica en HLA clase 1 y clase 2 en este estudio de caso por ser un injerto que proviene de un donante cadavrico tipificamos HLA de las clulas del rgano que poseen HLA tipo I, las nicas clulas que presentan en su membrana HLA tipo II son las clulas profesionales presentadoras de antgeno. El HLA se puede obtener mediante la tcnica de serologa y de biologa molecular esta ultima fue la empleada por su alta precisin y rapidez. En esta se tiene como principio la comparacin en busca de homologa de los alelos correspondientes que codifican en HLA del posible receptor obteniendo en la tipificacin de HLA que el receptor con mayor homologa presenta un porcentaje de 75% (receptor 6) esto con el fin de prevenir una reaccin de rechazo en el momento de realizar el trasplante. A*010101,2609 HOMOLOGIA 010101,XXXX=1 B*1508(75), 2101(38) HOMOLOGIA XXXX,2101=1 0401,XX01XX=1,33 XX0101,XXXX=0,33 XXXX,XXXX=0 XX01,09XXXX=0,83 XXXX,XXXX=0 XXXX,XXXX=0 0401,XX01XX=1,33 010101,XXXX=1 15XX,2101=1,5 0401,090102=2 XX01XX,XXXX=0,3 3 XXXX,XX01=0,5 XX01,XX01XX=0,83 010101,XXXX=1 1508,2101=2 04XX,090102=1,5 DRB1* 0401, 090102 HOMOLOGIA

DONANTE/ RECEPTOR No 1) A*010101, 0255 1) B*0108,2101 1) DRB1*0401, 0501 2) A*030101, 3001 2) B*0801,1401 (64) 2) DRB1*0801, 0902 3) A*3104, 0255 3) B*0801, 1508(75) 3) DRB1*0401, 0801 4) A*010101, 0255 4) B*1501(75), 2101 4)DRB1*0401,09010 2 5) A*0301, 3001 5) B*1301, 0801 5) DRB1*0901, 1501 6) A*010101, 2301 6) B*1508(75), 2101 6)DRB1*0402,09010

PORCENTAJE DE HOMOLOGA ENTRE DONANTE Y POSIBLE RECEPTOR: Para receptor 1 Para receptor 2 Para receptor 3 Para receptor 4 Para receptor 5 Para receptor 6 38,83% 19,33% 21,16% 75% 27,66% 75%

PRUEBAS DE LABORATORI ANEXAS Y SU Por qu?

Exmenes de laboratorio: PPD (Protena Derivada Purificada, siglas en ingls), VIH (Virus de Inmunodeficiencia Humana), serologa para hepatitis B y C, citomegalovirus y VDRL (Venereal Disease Research Laboratory). Con los cuales se descartar la presencia de algunas infecciones como: tuberculosis, sida, hepatitis viral, citomegalovirus, sfilis.

OTROS

Biometra hemtica Pruebas de coagulacin Qumica sangunea Electrolitos sricos Pruebas de funcin heptica Colesterol, triglicridos EGO ECG

TIPOS DE RECHAZO A DESCARTARSE EN EL CASO DEL RECEPTOR No 6.

Rechazo hiperagudo: este tipo de rechazo se descarta ya que la cantidad de Acs preformados que se detectaron en el PRA es muy baja y el HLA tiene alta homologa como para que pueda actuar frente a las clulas del rgano, por esta razn no es probable que el injerto sea destruido de forma inmediata al trasplante. Rechazo agudo: se descarta porque es un rechazo que se da de manera sbita y la causa principal es que el HLA se encuentre en menor cantidad, en esta caso no podra ocurrir porque al tener un HLA homologo al del receptor, los Acs preformados no podra atacarlo porque lo reconocera como lo propio en un 9% que es el resultado que arrojo el PRA. Rechazo crnico: este tipo de rechazo siempre se va a dar en un trasplante, la diferencia con los otros es que ocurre en un tiempo ms prolongado (ms de un ao), por esta razn el proceso inmunolgico se dar de un manera ms lenta ya que el reconocimiento de lo que no es propio se empieza a dar poco a poco. En este paso la fijacin de complemento que es el proceso por el que se comienzan a lisar las clulas, es ms lento por el mismo reconocimiento.

CUL ES EL MTODO DE ELECCIN PARA CADA UNA DE LAS PRUEBAS PRETRANSPLANTE APRENDIDAS EN ESTE MDULO? Tipificacin de HLA: Los HLA (Antgenos Leucocitarios Humanos) son identificados a partir del DNA obtenido de los leucocitos de receptores y donantes. Las HLA presentes en las superficies de las clulas nucleadas, son las encargadas de que el sistema inmune diferencie lo propio de lo extrao e induzca una respuesta inmune de rechazo en el receptor de un trasplante. En la identificacin del HLA el mtodo de eleccin es por tcnica de Biologa molecular PCRSSP (Sequence Specific Primers), las ventajas de este mtodo son: mayor flexibilidad respecto al nivel de resolucin deseado; mayor confiabilidad en la deteccin de homocigticos. Pruebas cruzadas (Cross match): Esta prueba permite detectar en el suero de los receptores la presencia de anticuerpos dirigidos contra los antgenos HLA presentes en las clulas del posible donante. Esta prueba cruzada detecta en el receptor anticuerpos a-HLA preformados por transfusiones, trasplantes previos o embarazos, contra los antgenos HLA presentes en linfocitos del donante. El mtodo de eleccin para esta prueba es FCXM (crossmatch por citometra de flujo). El FCXM (crossmatch por citometra de flujo) permite detectar DSA pero en vez de complemento, utiliza un anticuerpo fluorescente contra Ig G humana. Cuando se hace pasar por el citmetro de flujo, los DSA pueden ser detectados a ttulos muy bajos, medidos por la fluorescencia emitida, comparado con un control negativo. Panel de anticuerpos reactivos. Esta prueba es requiere la determinacin de la presencia de anticuerpos dirigidos a los antgenos del complejo mayor de histocompatibilidad humano (HLA, para evitar el rechazo del rgano trasplantado. La determinacin de las especificidades HLA reconocidas por el suero nos permite preseleccionar en cada donacin aquellos individuos que no presenten reactividad conocida frente a los antgenos HLA del donante. DETECCION DE LA SENSIBILIZACION PREBIA El mtodo de eleccin es la Tcnica de Luminex, basada en los principios de citometra de flujo, permitiendo la medicin simultneamente hasta de 100 analitos. Utilizando esferas marcadas con material fluorescente, detectando que las adheridas a los antgenos permiten detectar anticuerpos. .

VALORES DE REFERENCIA.
Para trasplante. Cross Match Valores superiores al 20% prueba positiva valores inferiores a 20% prueba negativa. PRA: Valores superiores a 10% indican un alto nivel de sensibilizacin inferiores a 10% ideal para trasplante

Tipificacin de HLA:

II. Principales factores de sensibilizacin: Los pacientes que han recibido previamente un trasplante con alguna disparidad HLA con el donante. Los pacientes que han recibido transfusiones. Las mujeres que han tenido hijos pueden haber desarrollado anticuerpos contra los antgenos HLA fetales heredados del padre. La sensibilizacin previa se detecta mediante la prueba de CROSS MATCH, ya que es la que nos permite identificar los anticuerpos preformados contra los linfocitos de un posible donante en el suero de un paciente, adems suelen estar dirigidos contra los antgenos HLA u otro antgeno del donante que ste no comparta con el receptor. DEFINICIONES: Colorante supravital: Los colorantes supravitales son sustancias que tien de color las clulas o tejidos vivos que para su observacin y diferenciacin de las dems se caracterizan por no generar ningn tipo de dao a las clulas; entre ellos encontramos el azul de cresilo, violeta cristal, azul de Prusia, verde Jano. Sustancia intercalante: Es un compuesto que se inserta entre las bases de una molcula de ADN, interrumpiendo la alineacin y el emparejamiento de bases de las cadenas complementarias, ejemplo el colorante de acridina. Fluorocromo: Sustancia que se emplea para marcar anticuerpos u otras molculas, por su propiedad de emitir luz de una determinada longitud de onda, cuando se le estimula con un laser o luz ultravioleta. Cromgeno: Que produce color. Nombre dado a ciertas sustancias incoloras por s mismas, pero capaces, bajo diversas influencias (oxidacin) de originar productos coloreados. Isotopo radiactivo: Es un istopo inestable que se desintegra espontneamente, emite radiaciones electromagnticas o corpusculares y se utiliza en teraputica y diagnosis. Los istopos radiactivos naturales, por su parte, se usan para determinar cronologas. Luminol: Es un slido verdoso poco soluble. Su mayor importancia reside en la reaccin de quimioluminiscencia que da con perxidos en presencia de complejos de hierro como catalizadores.Permite la revelacin de rastros con una reaccin qumica que se produce entre varios productos qumicos.

Anticuerpo monoclonal: Es un anticuerpo homogneo producido por un clon de clulas. Este clon est derivado de una clula hbrida, creada a partir de la fusin de una sola clula madre del sistema inmune y una clula plasmtica tumoral. Antisuero policlonal: Es el suero sanguneo que contiene los anticuerpos deseados. Al contener una mezcla de anticuerpos, cada uno puede unirse a diferentes puntos de unin del antgeno o eptope. Agente alquilante: Los agentes alquilantes son grupos mutagnicos qumicos que ceden los grupos alquilo como CH3-0 CH3-CH2 a grupos amino o ceto de los nucletidos, provocan su accin citotxica mediante la formacin de enlaces covalentes entre sus grupos alquilo y diversas molculas nucleoflicas presentes en las clulas. Anticuerpos quimricos: Es una molcula artificial en la cual, las porciones constantes de las cadenas pesada y liviana provienen de una Ig humana. El objetivo perseguido con la construccin de un Ac es reducir la inmunogenicidad para el humano, pero sin afectar la especificidad del Ac. Es conocido que las porciones ms inmunognicas de la molcula de Ig estn asociadas a la porcin constante de la molcula. Anticuerpos humanizados: En los Ac las regiones mridas se mantienen inalteradas de forma que la especificidad y la afinidad de la molcula resultante no se afectan. Desgraciadamente, algunas molculas quimricas an son capaces de inducir una respuesta inmune humoral cuando son administradas en humanos. Esta inmunogenicidad "residual" ha sido atribuida a la presencia de epitopos forneos presentes y en las regiones M de los dominios V mridos del Ac. Anticuerpos fros: Anticuerpo fro. Anticuerpo activo solamente por debajo de 10 centgrados; puede ser una aglutinina fra o una hemolisina fra.

BIBLIOGRAFIA.

http://www.ontv-venezuela.org/files/articulos/31.evaluaciones_preTx[1].pdf 1. http://www.scielo.org.mx/scielo.php?pid=S0034-83762005000200006&script=sci_arttext 2. http://mexico.renalinfo.com/treatment/end_stage_kidney_failure/tests_transplantation/inde x.html 3. http://www.cucaiba.gba.gov.ar/Inmunologia%20del%20trasplante.htm 4. http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003005.htm