VALIDACIÓN PARTE 1 (Pucp)

Instituto para la Calidad
Pontificia Universidad Catlica del Per -1-

Profesor: Lupe Ognio De Muscari / Pablo Crdenas Zambrana
Curso: Validacin de Mtodos de Ensayo
Diplomado Gestin de la Calidad en Laboratorios de Ensayos y/o Calibracin ISO/IEC 17025:2005
INSTITUTO PARA LA CALIDAD 2009. Prohibida su reproduccin total o parcial sin permiso del autor y del Instituto para la Calidad de la Pontificia
Universidad Catlica del Per.
VALIDACI VALIDACI N DE M N DE M TODOS DE ENSAYO TODOS DE ENSAYO
Docente: Ing. Lupe Ognio de Docente: Ing. Lupe Ognio de Muscari Muscari
Parte 1
Definiciones
Validacin:
Confirmacin mediante el suministro de evidencia
objetiva de que se han cumplido los requisitos para una
utilizacin o aplicacin especfica prevista.
Es un programa documentado que debe incluir evidencia
del funcionamiento y confiabilidad del equipo, de los
sistemas y del personal para proporcionar un alto grado
de seguridad de que el mtodo de ensayo propuesto es
el adecuado para los usos diseados.
Definiciones
Validacin de un mtodo de ensayo es el proceso que
permite establecer mediante estudios de laboratorio que
los parmetros de desempeo del mtodo de ensayo
cumplen las especificaciones relacionadas con el uso
previsto de los resultados del ensayo.
Definiciones
Validacin de mtodos de ensayo:
Establecer mediante estudios sistemticos de
laboratorio, que las caractersticas tcnicas de dichos
mtodos cumplen las especificaciones relativas al uso
previsto de los resultados analticos.
Aseguramiento de la Calidad
Todas aquellas actividades sistemticas planeadas
dentro del sistema de calidad, demostradas como
necesarias que proporcionan una confianza adecuada
para que una entidad satisfaga requisitos de calidad.
Material de Referencia Certificado
(MRC)
Material de referencia acompaado de un certificado ,
en el cual uno o ms valores de las propiedades estn
certificados por un procedimiento que establece
trazabilidad a una realizacin exacta de la unidad en la
cual se expresan los valores de la propiedad y en el que
cada valor certificado se acompaa de una
incertidumbre con un nivel declarado de confianza.
Trazabilidad
Propiedad del resultado de una medicin o del valor de
un patrn por la cual pueda ser relacionado a
referencias determinadas, generalmente patrones
nacionales o internacionales, por medio de una cadena
ininterrumpida de comparaciones teniendo todas
incertidumbres determinadas.
Verificacin
La verificacin consiste en la evaluacin de las
caractersticas de desempeo analtico seleccionadas;
para generar datos relevantes y adecuados, en vez de
repetir el proceso de validacin ( USP).
Parmetros de desempeo Analtico
Caractersticas de validacin que necesitan ser
evaluadas y que se relacionan a la exactitud, precisin,
especificidad, limite de deteccin, limite de
cuantificacin, linealidad, intervalo de linealidad y
robustez.
Mtodo Normalizado
Es aquel mtodo desarrollado por un Organismo de
Normalizacin u otras organizaciones y que son
aceptados por el sector tcnico involucrado (INDECOPI,
ASTM, AOAC,APHA, etc.).
Mtodo No Normalizado
Es aquel mtodo desarrollado por el propio laboratorio y
otras partes, o que ha sido modificado a partir de una
norma (mtodos publicados en revistas tcnicas,
mtodos de fabricantes de equipos, mtodos que
utilizan Kits).
Validacin como requisito de la
ISO/IEC 17025
En el apartado 5.4.5 establece que el laboratorio debe
validar:
Mtodos no normalizados,
Mtodos diseados/desarrollados por el laboratorio
Mtodos normalizados utilizados fuera del alcance
previsto,
Ampliaciones y modificaciones de mtodos
normalizados
ISO/IEC 17025
Establece asimismo que la validacin debe:
Ser tan extensiva como sea necesario para satisfacer las
necesidades de aplicacin.
Registrar los resultados obtenidos, el procedimiento utilizado y
una declaracin de si el mtodo es adecuado para el uso
propuesto.
ISO/IEC 17025
Asimismo debe declarar:
Rango y exactitud de los valores (parmetros de
desempeo) que se obtienen de los mtodos
validados (incertidumbre, lmite de deteccin,
selectividad del mtodo, linealidad, lmite de
repetibilidad y/o reproducibilidad, robustez etc.), as
como la evaluacin para el uso propuesto deben ser
pertinentes a las necesidades de los clientes.
ISO/IEC 17025
El requisito sugiere que la validacin incluya:
Procedimientos para el muestreo, manipuleo,
transporte,
Empleo de tcnicas para determinar los parmetros
de desempeo del mtodo como:
Uso de materiales o patrones de referencia,
Comparacin de los resultados con otros mtodos
de ensayo,
Comparaciones interlaboratorios,
ISO/IEC 17025
Evaluacin de la incertidumbre.
Especificacin de los requisitos,
La determinacin de las caractersticas de los
mtodos,
Verificacin de que los requisitos pueden cumplirse
con el mtodo usado,
La validacin incluya una declaracin sobre la validez.
Para qu validar
Para demostrar experimentalmente, la funcionalidad del
mtodo para las aplicaciones analticas propuestas,
como tambin obtener evidencia documentada del
procedimiento seguido, un tratamiento estadstico
apropiado y unos criterios de aceptacin.
Adems se debe validar un mtodo cuando es necesario
verificar que sus parmetros de desempeo son
adecuados para ser utilizados en un problema analtico
especfico.
Cundo es necesario validar un
mtodo?
Un mtodo de ensayo debe ser validado cuando es
necesario verificar que los parmetros ejecutados son los
adecuados para resolver un problema analtico en
particular.
Esquemas de Validacin
Considerando la variedad de ensayos, es lgico que
diferentes mtodos de ensayo adquieran diferentes
esquemas de validacin.
Estas categoras son las siguientes:
Categora I. Los mtodos analticos para la
cuantificacin de componentes mayores de aditivos
en alimentos o ingredientes activos (incluyendo
preservantes).
Categora II. Los mtodos analticos para la
determinacin de impurezas en aditivos para
alimentos o componentes de degradacin en
productos terminados.
Estos mtodos incluyen ensayos cuantitativos y
ensayos de lmite (contaminante, conservadores).
Categora III. Mtodos analticos para la
determinacin de caractersticas llevadas a cabo
(ejm: solubilidad, punto de fusin anlisis
semicuantitativos).
Categora IV. Pruebas de Identificacin.
Para cada categora de ensayo hay diferente informacin
analtica que se requiere.
Lo que se menciona en la tabla siguiente son datos de
elementos que son normalmente requeridos para cada
una de las categoras ( segn USP).
Elementos requeridos para los
ensayos de Validacin
Parmetros
analticos
Categora I
Categora II
Categora III Categora IV
Cuantitativo
Ensayos de
Lmite
Exactitud S S * * No
Precisin S S No S No
Especificidad S S S * S
Lmite de
deteccin
No No S * No
Lmite de
cuantificacin
No S No * No
Linealidad S S No * No
Rango S S * * No
Robustez S S S S S
Elementos requeridos para los
ensayos de Validacin
* Puede ser requerido, dependiendo de la naturaleza del
ensayo especfico.
Parmetros que deben comprobarse en la validacin de
mtodos analticos segn el objetivo de los mismos dado
por la AOAC *
Cualitativo
Determinacin
de contenidos
Anlisis
de trazas
Parmetro
fsico-qumicos
EXACTITUD X X X
PRECISIN X X X
LINEALIDAD X X X
SELECTIVIDAD X X X
L. DETECCIN X X
L. CUANTIFICACIN X
ROBUSTEZ X X X X
Validacin
Qu parmetros se deben evaluar?
Especificidad
Rango de trabajo y rango lineal
Lmite de deteccin
Lmite de cuantificacin
Exactitud
Precisin: Repetibilidad
Precisin intermedia
Reproducibilidad
Validacin
Robustez (Robustness)
Fortaleza (Ruggedness)
Recuperacin
Adecuacin del sistema (Systemsuitability)
Criterios de Validacin
El rango, la exactitud y la precisin de los valores
obtenidos debe estar de acuerdo con las necesidades del
cliente
La validacin incluye especificacin de los
requerimientos.
La validacin es siempre un balance entre costos,
riesgos y posibilidades tcnicas.
Criterios de Validacin
Las caractersticas de funcionamiento de un mtodo
analtico comprenden todos los datos y resultados
experimentales que demuestran su aptitud para el uso al
que se destina.
Criterios de
Validacin
Se consideran los siguientes grupos de caractersticas de
funcionamiento:
Fiabilidad
Practicabilidad
Idoneidad
Caractersticas de Fiabilidad
Son las que demuestran la capacidad del mtodo
analtico para mantener a lo largo del tiempo los criterios
fundamentales de validacin, no necesariamente
aplicables en todos los casos, y de los que derivan los
parmetros de validacin.
Fiabilidad
Proporcionalidad entre concentracin del analito y
respuesta del instrumento.
Este concepto se relaciona con los parmetros de:
Linealidad
Intervalo o rango
Sensibilidad
Fiabilidad
Dispersin de una serie de resultados alrededor del valor
medio o central es decir el mas menos de un
procedimiento analtico.
Se relaciona con los siguientes parmetros:
Precisin
Repetibilidad
Reproducibilidad
Robustez
Fiabilidad
Diferencia entre el valor hallado en el anlisis y el valor
verdadero, relacionado a:
Exactitud
Recuperacin
Fiabilidad
Cantidad mnima de analito requerida para obtener un
resultado significativo, relacionado con los parmetros
de:
Sensibilidad
Limite de deteccin
Limite de cuantificacin
Fiabilidad
Capacidad de un mtodo para determinar el analito sin
interferencias de impurezas, productos de degradacin,
excipientes u otras sustancias presentes en la muestra.
Concepto relacionado con los parmetros de:
Selectividad
Especificidad
Practicabilidad
La practicabilidad se evala en la fase de desarrollo del
mtodo analtico: tiempo, costo, tamao de la muestra,
tipo de equipo o instrumentacin, condiciones de
seguridad etc.
Idoneidad
El termino idoneidad se aplica al conjunto de parmetros
relacionados con la verificacin del buen funcionamiento
de los instrumentos.
Procedimientos de Validacin
Validacin prospectiva: se aplica cuando se elabora un
nuevo mtodo.
Validacin retrospectiva: Mtodos no validados
previamente y de los que se tiene un record de
resultados.
Revalidacin : Se aplica cuando en un mtodo analtico
previamente validado se ha introducido un cambio
significativo.
Actividades previas a la Validacin
Referidas a los factores que afectan la
exactitud y confiabilidad de los resultados de
la validacin:
Factores humanos ( competencias)
Instalaciones y condiciones ambientales
( controles).
Mtodos y procedimientos definidos
( muestreo, manipuleo, transporte,
almacenamiento)
Actividades previas a la validacin
Disponer del equipo necesario ( calibrados y
verificados).
Mantenimiento de computadoras y equipos
automatizados asegurando que funcionen
adecuadamente.
otros
Planeamiento de Validacin
La planificacin y grado de control sobre los factores que
influyen en los anlisis deben ser establecidos desde el
inicio y mantenidos rigurosamente, se sugiere una
secuencia de trabajo como la que se muestra a
continuacin:
Definir el objetivo y campo de aplicacin del
mtodo;
Definir los parmetros de validacin y criterios de
aceptacin (de dichos parmetros);
El mtodo analtico debe ser claro y establecido al
inicio de los anlisis;
Un pre-requisito esencial para el xito de la
validacin, la disponibilidad de muestras matrices
estables homogneas y en la cantidad suficiente
para ser utilizadas a lo largo del estudio de
validacin;
La validacin es realizada por un mismo analista
usando el mismo equipo, aparatos y reactivos en
un periodo de una semana a dos semanas.
Definir los ensayos a efectuarse en la validacin;
Verificar si las caractersticas de operacin de los
equipos con los que cuenta el laboratorio son
compatibles con las exigidas por el mtodo de
estudio;
Verificar las condiciones de operacin y
performance del equipo a usarse;
Caracterizar los materiales, por ejemplo, patrones
y reactivos;
Ejecutar los ensayos para los parmetros
considerados en la validacin;
Ajustar los parmetros de validacin del mtodo y
los criterios de aceptacin, si es necesario;
Preparar las descripcin del mtodo validado;
Definir criterios de revalidacin (por ejemplo:
periodicidad, cambios de personal, condiciones
ambientales, equipos, etc.)
Definir tipo y frecuencia de verificacin de control
de calidad analtica de rutina.
Los ensayos y los resultados deben ser
documentados y registrados.
Documentacin de la Validacin
La documentacin esta referida a:
Plan de validacin
Protocolo de validacin incluye declaracin del
mtodo validado.
Mtodo de ensayo objeto de la validacin
Procedimiento de operacin normalizado.
Reportes de resultados,
Evaluacin estadstica
Documentacin de la Validacin
Certificados de calibracin y /o de verificacin de los
equipos empleados.
Verificacin del material de vidrio
Certificados de los estndares y/o material de
referencia.
Registros de las soluciones
Informe de la incertidumbre del mtodo.
Precisin
Es el grado de concordancia entre resultados
individuales, cuando el mtodo de anlisis se aplica
repetidamente a diferentes muestras a partir de una
muestra homognea.
Se pueden considerar en tres niveles:
Repetibilidad
Precisin intermedia
Reproducibilidad
Repetibilidad
Expresa la precisin de los resultados de las mediciones
del mismo analito, la precisin en condiciones de
repetibilidad e involucra:
Mismo laboratorio
Mismo equipamiento
Un nico analista
Mismo mtodo
Misma muestra
Intervalos cortos de tiempo
Repetibilidad
Puede determinarse de una manera interna en el
laboratorio.
Teniendo en cuenta:
Realizar un mnimo de 10 mediciones.
Repetir tres veces (como mnimo) en un intervalo corto
de tiempo.
Determinar la desviacin estndar de los resultados.
Precisin intermedia
Es la precisin en condiciones de precisin intermedia:
Mismo laboratorio
El equipamiento puede ser el mismo o pueden
emplearse otros equipos
Distintos analistas
Mismo mtodo
Misma muestra
Intervalos de tiempo mayores que para r
Reproducibilidad
Es la precisin en condiciones de reproducibilidad e
involucra:
Distinto laboratorio
Diferente equipamiento
Distintos analistas
Mismo mtodo
Misma muestra
Intervalos de tiempo largos
Reproducibilidad Ensayos interlaboratorios
Precisin
El estimador estadstico de la precisin es la desviacin
estndar (S) la cual normalmente se expresa como desviacin
estndar relativa o coeficiente de variacin (CV).
1
) (
1
2
=
=
=
n
X X
S
n
i
i
ri
ensayo el en obtenidos datos los todos de promedio X
ensayos los en datos X
analista un o o laboratori un de estndar desviacin S
i
ri
=
=
=
Precisin
Clculo de coeficiente de variacin:
Limite de repetibilidad (r): Diferencia critica entre analistas para
determinar la repetibilidad del metodo.
r =
100 =
X
S
CV
ri
) 1 (
2
1
2
1
8 . 2 . .
2 1
K K K K K K
n n
S D C
r
+ =
analista segundo del datos de N n
analista primer del datos de N n
analistas dos los de o laboratori del datos los de estndar desviacin S
crtica diferencia D C
r
) (
. .
2
1
=
=
=
=
Precisin
Este criterio se acepta si la diferencia crtica es mayor o igual
a la diferencia absoluta de las medias entre los dos analistas
Si los analistas no son comparables usar la siguiente ecuacin:
2 1
. . y y D C
( ) ( )
(
+
+
+
=
2 1 2 1
2
2 2
2
1 1
1 1
2
1 1 1
n n n n
S n S n
S
r
datos de nmero n
cuadrado al analista segundo del estndar deviacin S
cuadrado al analista primer del estndar deviacin S
=
=
=
2
2
2
1
Limite de reproducibilidad
Diferencia critica entre laboratorios para determinar la
reproducibilidad del mtodo.
) , (
) , ( ) , (
8 . 2 ) (
) , ( 8 . 2 ) (
2
1
2
1
1 ) ( ) ( 8 . 2
2 1
2 2
l d CM
n
l d CM l e CM
R
l d CM r
n n
r R CD R
+
=
=
|
|
\
|
= =
" "
" "
) , (
) , (
) ( ) (
) (
% 95
:
2
1
B o laboratori del datos de nmero n
A o laboratori del datos de nmero n
o laboratori cada de dentro error del medio cuadrado l d CM
os laboratori entre del medio cuadrado l e CM
analistas entre os laboratori entre ilidad reproducib de estndar desviacin R
o laboratori cada de dentro dad repetibili de estndar desviacin r
ilidad reproducib de critica diferencia CD
Donde
=
=
=
=
=
=
=
El criterio se acepta si la diferencia critica es mayor o
igual a la diferencia absoluta de las medias entre los dos
laboratorios.
2 1
. . y y D C
Ejercicio
Calculo de:
Precisin
Precisin intermedia
Reproducibilidad
Exactitud
Exactitud es el grado de concordancia entre el resultado
de un ensayo y el valor aceptado como referencia.
Exactitud expresa la cercana de un resultado verdadero.
Exactitud de un mtodo (sesgo) expresa la cercana de
la media de un conjunto de resultados (producido por
ese mtodo, al valor verdadero).
Exactitud
Es la diferencia entre el valor de la concentracin
considerada verdadera y el valor experimental, cuando se
aplica el mtodo varias veces a diferentes muestras,
incluye una combinacin de errores aleatorios y
sistemticos.
Exactitud
Generalmente se expresa la exactitud en funcin del
porcentaje de recuperacin, que se obtiene al aplicar el
ensayo luego de agregar a la muestra cantidades
conocidas de analito.
Se recomienda usar un mnimo de 9 determinaciones
sobre 3 niveles de concentracin, 3 replicas por cada
nivel.
Exactitud
Se calcula de la siguiente manera:
Se establece el rango de aceptacin para el porcentaje
de recuperacin por ejemplo:
( ) 100 / (%)
3 2 1
= C C C n Recuperaci
in fortificac la de in concentrac C
a fortificad no muestra en a determinad in concentrac C
a fortificad muestra en a determinad in concentrac C
Donde
1
=
=
=
3
2
:
% 105 % 95 R
Cmo se evala la Exactitud?
100 %
) (
=
=
verd
obs
verd
obs
X
X
R n recuperaci Como
V X Sg bias sesgo Como
Exactitud
Manera de determinar la exactitud:
Analizar materiales de referencia certificados.
Comparar con un mtodo de referencia
Comparar con resultados obtenidos en un ensayo de
aptitud
Utilizar pruebas estadsticas para evaluar las diferencias.
Veracidad
Grado de concordancia entre el promedio de un serie
grande de resultados y el valor de referencia.
La validacin de mtodos de ensayo busca cuantificar
la exactitud de los resultados evaluando los efectos de
los errores aleatorios y sistemticos sobre los
resultados.
Precisin Veracidad Exactitud + =
Inexacto Inexacto
Inexacto Exacto
Alta Baja
Baja
Alta
Precisin
V
e
r
a
c
i
d
a
d
Ejercicio
Determinacin de exactitud

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