UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS ESCUELA DE BIOQUIMICA Y FARMACIA MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL TEMA: AISLAMIENTO DE ZYMOMONA

SPP PARA LA PRODUCCIN DE ETANOL A PARTIR DEL JUGO DEL FRUTO VEGETAL, CABUYA (AGAVACEAE CABUYA)

INTEGRANTES: Arboleda Marcelo Cndor Beln Cueva Nathaly Gngora Estefana CURSO: 9 Semestre Alimentos FECHA: 2009-11-13

TEMA:

AISLAMIENTO DE ZYMOMONA SPP PARA LA PRODUCCIN DE ETANOL A PARTIR DEL JUGO DEL FRUTO VEGETAL, CABUYA (AGAVACEAE CABUYA)
ANTECEDENTES La produccin de etanol por medios biolgicos a nivel mundial es de 37,7 billones de litros al ao, destinado al uso como combustible, para la industria en general y en elaboracin de bebidas; los principales fabricantes son: Brasil, Estados Unidos e Indonesia, los cuales generan un 80% del total de la produccin; actualmente Ecuador solo produce 125.000 litros de etanol diariamente por este medio, con un costo promedio de USD 0,55 por litro, lo que indica que ste es un campo aun no explotado a pesar de poseer ventajas climticas para la produccin de materia prima . La obtencin de etanol a partir del jugo de la sabia de cabuya seria una forma de aprovechamiento de los recursos naturales, as como una ayuda en la industria al reducir la cantidad de energa usada y los costos de produccin que genera la obtencin qumica de etanol a partir de la oxidacin del etileno, que tiene un costo aproximado de USD 1,00 por litro. JUSTIFICACION La cabuya es usada en el Ecuador nicamente en la industria artesanal para la fabricacin de sogas, alfombras, costales y papeles, debido a la dureza de sus fibras. Su produccin anual es de aprox. 1771 toneladas mtricas, siendo este un cultivo no estacional y perenne, se da mayormente en las zonas de Chimborazo, Cotopaxi, Tungurahua, Loja y en las zonas ridas de la costa Manab, Guayas y la provincia de Santa Elena. Sin embargo la cabuya no ha sido utilizada totalmente, se la reconoce como una planta muy generosa que ofrece utilidad para todos sus componentes, por ejemplo su sabia al contener gran cantidad de azcares al ser fermentada puede generar etanol. HIPTESIS Aislamiento de la bacteria Zymomona spp a partir del jugo de cabuya con capacidad de fermentar el mismo para la produccin de etanol. OBJETIVOS Aislar la levadura Zymomona spp. a partir del jugo de la sabia de cabuya para la obtencin de etanol mediante fermentacin. Comprobar la efectividad de este bioproceso, mediante la produccin de etanol a partir de glucosa.

MARCO TERICO MATERIA PRIMA (CABUYA) Es una planta xerfita masiva de 2 a 7 metros de tamao, de la familia de las Agavceas, sin tallo o con un pequeo tronco corto y grueso de menos de 1 metro de tamao; hojas en una roseta densa, ensiforme lanceolada, gradualmente acuminada o en forma de acumen, de 1 a 3 m de largo y de 15 a 20 cm de ancho, muy corpulenta y coricea. ZIMOMONAS SPP (Familia Pseudomonacea) CARACTERISTICAS Bacilo o diplobacilo Gram (-), corto y con extremos redondeados, mvil por flagelos loftricos, sin cpsula, ni esporas, anaerbico facultativo. No produce oxidasa, indol, no reduce nitratos, no hidroliza la urea, ni la gelatina, pero si catalasa y ac. sulfhdrico, Existe en fuentes naturales como frutos vegetales, asociada a levaduras. Quimiorganotrfico Glucosa, fructosa y sacarosa La oxidacin en una fermentacin esta acoplada a la reduccin concomitante de un compuesto orgnico generado por catabolismo a partir del primer sustrato fermentable. Por ello, no se requiere de la adicin de aceptor de electrones exgeno. Por lo que este grupo es la Hexosa (oxidante)

Descripcin Fenotpica Hbitat Grupo trfico Fuente de Carbono y energa Grupo aceptor de electrones

Frmula maestra del bioproceso: Catabolismo Nutrientes:

Hexosa Zymomona 2 E tan ol + 2CO2

Va de Entner-Doudorof

Componente Carbohidratos Nitrgeno Calcio Potasio Fosfato Magnesio Sodio Azufre MARCO METODOLGICO Diseo del medio de cultivo: Deteccin COMPONENTE Extracto de malta Extracto de levadura Peptona de casena Glucosa Cicloheximida Etanol CANTIDAD 3 g/L 3 g/L 5 g/L 4 g/L 100 ppm 3%

Cantidad 17,5% 10,9% 0,013 g/g 3,2 g/g 3,27 % 0,075% 1,49 g/g 0,091%

Aislamiento CANTIDAD 20 g 6,1 g 15 g 16,1 g 0,31 g 0,31 g 0,12 g 6,0 mg 6,0 mg 6,0 mg

COMPONENTE Agar Extracto de levadura Lactosa Glucosa Fosfato dipotsico Fosfato monopotsico Sulfato de magnesio Cloruro de sodio Sulfato ferroso Sulfato de manganeso Nota: Valores obtenidos a partir de las necesidades nutricionales de la Zymomona spp. Origen de las Zymomonas spp Muestras de la sabia de la cabuya se colectaron en frasco estril de 50 ml, laboratorio para su procesamiento. Deteccin de Zymomonas spp.

transportadas en hielo al

Se preparan tubos con el medio de cultivo expuesto anteriormente y se le adiciona la sabia de cabuya en un 20 g/L a un de pH 5.0 ajustado con cido lctico, a cada tubo se le coloca un Durham invertido. Los tubos se incuban a 30C de 24 /48 h. Este etapa se repite para su aislamiento en cultivo axnico. Aislamiento de Zymomonas spp. Los tubos positivos en la etapa anterior, se siembran en cajas de Petri con el medio anteriormente expuesto mas etanol al 3% incubadas a 30C por 24 a 48h. Se seleccionan aquellas colonias tpicas de Zymomonas y por resiembra en el mismo medio sin etanol en placa, as se obtuvieron los cultivos axnicos. Los aislados de Zymomonas, de la resiembra se colocan en crioviales con glicerol al 20%, s congelan en un Freezer a -80C. Medicin de crecimiento. (Mtodo de Neubauer)

Fermentacin: Produccin de etanol.

Para comprobar la capacidad de sntesis de etanol de los aislados de Zymomonas, se sigue el siguiente proceso: Cultivo axnico
Caldo usado en la deteccin sin etanol y sin cicloheximida

Activacin

Caldo usado en la deteccin sin etanol y sin cicloheximida

Preparacin del aislado

100 rpm a 30 C

Inoculo 5%

Extracto de levadura mas KH2PO4. pH 5

Siembra para producir etanol

Fermentacin Medicin crecimiento microbiano por el Espectrofotometra 660nm

30 C por 120 h a 100 rpm 5 mL cada 24 h

Muestreo

Obtencin del etanol

FACTIBILIDAD Recursos: Los materiales, equipos y reactivos se encuentran disponibles en el laboratorio. El costo del proyecto es bajo pues la materia prima es gratis y solo se gastara energa y en materiales inprevistos Personal: Los integrantes del grupo se encuentran capacitados y con el conocimiento necesario sobre el mtodo. Materia Prima: La cabuya es una planta que se encuentra al alcance por crecer en cualquier zona. BIBLIOGRAFIA

1. Chan-Lin Chang, Ceng-Shung Gong, Li-Fu Chen & George T.Tsao. 1981. D-Xylulose Fermentation to 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.
Ethanol by Saccharomyces cerevisiae. Appl. Environ. Microbiol. 42: 284 289. http://www.monografias.com/trabajos38/produccion-etanol/produccion-etanol.shtml http://www.javeriana.edu.co/universitas_scientiarum/universitas_docs/vol6n2/ART2.htm http://www.scielo.org.ar/scielo.php?pid=S1851-30182008000100003&script=sci_arttext Garca Garibay, Biotecnologa Alimentaria, Editorial Limusa, Mxico, 2004, Pg. 317 http://usuarios.lycos.es/matbioq/Protocolos/ExtractoLevadura.htm http://www.monografias.com/trabajos38/produccion-etanol/produccion-etanol2.shtml http://books.google.com.ec/books? id=eHK7eHXBRk4C&pg=PA64&lpg=PA64&dq=entner+doudoroff&source=bl&ots=eKiL50uDJ&sig=Ld uzIczFFCNjqoaeHIyx0TL6KXA&hl=es&ei=wQX8SuLGK4mxngfOqZSRBQ&sa=X&oi=book_result&ct=r esult&resnum=6&ved=0CB4Q6AEwBTgK#v=onepage&q=entner%20doudoroff&f=false http://books.google.com.ec/books? id=Uyapftl6eHMC&pg=PA64&lpg=PA64&dq=caldo+extracto+de+malta %2Bcomponentes&source=bl&ots=YZwpcxNNd3&sig=uPu9bnQm4Lsne876aWaXXcaLpmo&hl=es&ei =7Bj8SoWpNtGEnQep2cCKBQ&sa=X&oi=book_result&ct=result&resnum=5&ved=0CBwQ6AEwBDgK #v=onepage&q=caldo%20extracto%20de%20malta%2Bcomponentes&f=false

9.