Biologia

DNA
1. Extrao

ORIENTAO PARA O PROFESSOR

RECOMENDAES
Os alunos devero responder a questo prvia individualmente e por escrito antes de iniciar a atividade. No final, o professor dever discutir novamente a questo com os alunos; Comentar com seus alunos que o procedimento para extrao do DNA em clulas animais basicamente o mesmo; A totalidade do DNA extrado ser composta por vrias rplicas das mesmas molculas, uma vez que inmeras clulas do mesmo organismo sero degradadas para que possamos visualizar o DNA; Chamar a ateno dos alunos para o fato de que a estrutura de dupla hlice do DNA s pode ser visualizada de modo indireto e por meio de metodologias sofisticadas. O que ser observado ao final do experimento so milhares de fitas de DNA juntas.

OBJETIVOS
Conhecer como se d o procedimento de extrao do DNA; Identificar o local onde o DNA encontrado; Visualizar um aglomerado de fitas de DNA.

OBSERVAES
Explicao do procedimento e da utilizao dos reagentes utilizados no experimento. Maceramento A cebola (morango ou banana) deve ser macerada para que a parede celular (estrutura espessa e rgida presente em clulas vegetais) seja rompida. A aplicao de fora mecnica pode tambm romper a membrana celular de algumas poucas clulas, embora esta estrutura deva ser desestruturada quimicamente, conforme explicado no prximo item. Alm disso, o maceramento dissocia os tecidos, permitindo que a soluo de lise (detergente + sal) aja sobre um nmero maior de clulas, liberando um grande nmero de molculas de DNA. Assim, a cebola (morango ou banana) deve ser muito bem macerada para garantir um bom rendimento do experimento. Peneirar Peneirando o material possvel separar restos de estruturas celulares da soluo contendo DNA de outras molculas. Detergente As membranas plasmtica e nuclear so compostas principalmente por lipdios. A funo do detergente desestruturar as molculas de lipdio das membranas biolgicas. Desta maneira, as membranas sofrem ruptura e todo o contedo celular - inclusive o DNA - fica disperso na soluo.

Banho-maria O aumento da temperatura promove uma maior agitao molecular, o que ajuda o detergente a desestabilizar as membranas lipdicas. Alm disso, a alta temperatura inativa enzimas que podem degradar o DNA (DNAses). Sal A adio do sal (NaCl) no incio da experincia proporciona um ambiente favorvel para a extrao, pois o sal, depois de dissolvido na gua, se dissocia e contribui com ons positivos que neutralizam a carga negativa do grupo fosfato do DNA. As molculas de DNA passam a no sofrer repulso de cargas entre si, o que favorece sua aglomerao. lcool O lcool desidrata o DNA, de forma que este no mais fica dissolvido no meio aquoso. Alm disso, o DNA tende a no ser solvel em lcool e, deste modo, suas molculas se agrupam. Como o DNA tem menor densidade que os outros constituintes celulares, ele surge na superfcie do extrato. Quanto mais gelado o lcool, menos solvel ser o DNA. Preparao da soluo Preparar a soluo de lise na jarra de vidro. Colocar 450 mL de gua, adicionar duas colheres de sopa de detergente incolor e uma colher de caf de sal de cozinha. Agitar bem para que o sal e o detergente se dissolvam totalmente.

SUGESTO
Este experimento pode ser utilizado conjuntamente por professores de biologia e qumica. O professor de biologia pode explorar a estrutura das membranas celulares e o professor de qumica a ao dos reagentes qumicos sobre estas estruturas.