SERVIO PBLICO FEDERAL UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIS INSTITUTO DE CINCIAS BIOLGICAS DEPARTAMENTO DE BIOQUMICA E BIOLOGIA MOLECULAR

Enzimas
Prof. Dr. Angela Adamski da Silva Reis
angeladamski@gmail.com angeladamski@gmail.com

angela@icb.ufg.br

Universidade Federal de Gois (UFG)

ICB /DBBM

Enzimas
Catalisar reaes qumicas com eficincia e seletividade; A atividade cataltica depende da integridade das suas conformaes nativas. Algumas enzimas no necessitam de outros grupamentos qumicos alm de seus resduos de aminocidos Outras enzimas, no entanto, necessitam de um componente adicional qumico (Cofator), que pode ser um ou mais ons inorgnicos, ou molcula orgnica Coenzima. Uma enzima ativa junto com uma coenzima e/ou um on metlico denominada holoenzima, sendo a parte protica, apoenzima.

Enzimas
As enzimas so classificadas em funo das reaes que catalisam

Exemplo:

ATP + D-glicose

ADP

+ D-glicose-6-fosfato

Enzimas
O que Energia de Ativao ?
uma barreira de energia que separa o nvel de energia dos reagentes do nvel de energia dos produtos. preciso fornecer energia aos reagentes para ultrapassar a barreira, e essa energia recuperada quando os produtos so formados. Esta barreira de energia conhecida como, energia de ativao (Ea) A energia de ativao se distingue da diferena de energia livre (G) que a diferena de Energia entre produtos e reagentes.

Enzimas
A diferena entre os valores de energia, indica a eficincia do catalisador

Enzimas
Comparao entre a quantidade de Energia de ativao (Ea) numa reao no catalisada e catalisada

As ENZIMAS abaixam (diminuem) a Ea necessria para ocorrer a reao A velocidade de uma reao ser diretamente proporcional ao nmero de molculas com energia igual ou maior que a energia do estado de transio.

Enzimas

Enzimas
As enzimas aceleram a velocidade da reao por diminuir sua Energia de ativao (Ea)
A em B irreversvel, A B, a velocidade da reao v (Moles/L/s) ser:

v = d[B]
dt

ou v= -d[A] dt

A velocidade da reao diminui medida que a reao prossegue e a concentrao de A diminui. Portanto, a velocidade proporcional concentrao de A.

v= k [A]

Enzimas
As enzimas aceleram a velocidade da reao por diminuir sua energia de ativao
A maior parte das reaes qumicas processadas nos organismos so mais complexas, por envolverem, pelo menos 3 molculas diferentes e por serem geralmente, reversveis. So reaes de segunda ordem:
2A B + C ou A + B C + D

Para as quais, pode-se demonstrar, as velocidades de reao sero, respectivamente,

v= k [A]2

v= k [A][B]

Enzimas
Cintica da Reao Enzimtica
(Cintica = Velocidade)
As enzimas formam um complexo com o(s) substrato(s) durante a catlise, antes de liberar o(s) produto(s)
Isto pode ser ilustrado pelas equaes :
k1 k2
Enzima + Substrato --- (Complexo Enzima-Substrato) --- Produto + Enzima

k3

Enzimas
Cintica Enzimtica
k1 k2 k3

v1 = k1 [E] [S]

A formao de ES ocorre com velocidade maior do que a formao do Produto

k1 k3

k2

v3 = k3 [ES] Constantes de Velocidade k1 > k2 > k3

Enzimas
A relao entre concentrao do substrato e velocidade expressa quantitativamente
Quando um substrato S liga o stio ativo de uma enzima E, um complexo enzima-substrato (ES) formado em processo rpido e reversvel antes da formao do produto. Aps um breve tempo se dissocia da enzima conforme a equao:

E +

K1 K -1

ES

K2

E + P

As equaes de velocidade para as reaes componentes do processo so:

v1= k1 [E][S] v-1= k-1 [ES] v2= k2 [E][S]

Enzimas
Equao de Michaelis-Menten
A relao (k-1 + k2 / k1) foi definida por Michaelis e Menten como uma constante, KM.

v = Vmx [S]
0

K-1 + k2 + [S] k1

v = Vmx [S]
0

KM + [S]

vmx= Vmx [S]

2 KM + [S]

1 + Vmx [S] 2 KM + [S]

KM + [S] = 2 [S]
KM = [S] (mol/L)

Enzimas
[S] >>Km

v = Vmx
0

[S] << Km

Enzimas

KM
KM numericamente igual concentrao de Substrato que determina a metade da velocidade mxima da reao
O valor de KM pode indicar o grau de afinidade da enzima pelo Substrato (quanto menor KM , maior a afinidade) A descrio matemtica destes fenmenos cinticos dada pela equao de Michaelis-Menten KM tambm chamada de Constante de Michaelis

Enzimas

Enzimas
Os valores de KM e da Vmx de uma enzima so determinados pela medida das velocidades iniciais para vrias concentraes de substrato. A determinao mais acurada possvel pela modificao algbrica da equao de Michaelis-Menten (Linebeweaver-Burk)

Enzimas
Ligao de um substrato a um stio ativo de uma enzima
A superfcie do stio ativo delimitada por resduos de aminocidos que catalisam a sua transformao qumica. O stio ativo engloba o substrato, sequestrando-o completamente da soluo.

Substrato (S)

Enzima

Produto (P)

Enzimas
A relao substrato-enzima no deve ser entendida como u modelo rgido de chavefechadura. Este modelo exemplifica a especificidade de uma enzima pelo seu substrato, mas no explica toda a complexidade da relao estabelecida entre eles durante a catlise
Emil Fischer (1894), as enzimas seriam estruturalmente complementares aos seus substratos de modo a se encaixarem como uma chave em uma fechadura

Enzimas modelos stio ativo cataltico

Modelo Chave-fechadura proposto por Fisher 1890, interao entre enzima e seu substrato

Modelo encaixe induzido proposto por Koshland 1958, a enzima induz uma mudana conformacional na enzima produzindo um melhor encaixe

Enzimas
As enzimas so protenas com a funo especfica de acelerar reaes
qumicas que ocorre sob condies termodinmicas no-favorveis. Elas aceleram consideravelmente a velocidade das reaes qumicas quando comparadas com as reaes correspondentes no-catalisadas.

Uma enzima deve:

Apresentar extraordinria eficincia cataltica; Demonstrar alto grau de especificidade em relao a seus substratos (reagentes) e aos seus produtos; Acelerar a velocidade das reaes em 106 a 1012 vezes mais do que as reaes correspondentes no-catalisadas; No ser degradada ou alterada ao participar da catlise;

No alterar o equilbrio das reaes;

Ter sua atividade regulada geneticamente ou pelas condies metablicas

Fatores que influenciam atividade enzimtica

Fatores que influenciam atividade enzimtica

- A protonao ou desprotonao dos resduos de aminocidos em funo do pH, altera a eficincia da catlise

Para muitas enzimas, o pH timo est prximo a pH 7

Fatores que influenciam atividade enzimtica

pH timo de enzimas a eficincia de catlise depende do meio
Enzima Pepsina Fosfatase cida Urease Tripsina Arginase pH 1,5 4,5 6,5 7,8 9,7

Fatores que influenciam atividade enzimtica

[S] >>Km

[S] << Km

Fatores que influenciam atividade enzimtica

Enzimas plasmticas cujas concentraes so alteradas em condies patolgicas
Enzima Transaminases Creatina quinase, lactado desidrogenase Amilase, Lipase Fosfatase cida Lactato desidrogenase Molstia Hepatite Enfarte Pancreatite Cncer de prstata Anemia hemoltica

Creatina quinase

Leso cerebral grave

Inibidores enzimticos
Substncias que diminuem a atividade enzimtica

Podem ser constituintes normais das clulas ou substncias estranhas ao organismo

Os inibidores encontrados nas clulas regulam a atividade enzimtica Muitos medicamentos baseiam suas propriedades na inibio especfica de certas enzimas

Inibidores enzimticos
Substncias que reduzem a atividade das enzimas
Inibidores competitivos reversveis

Km aumentada na presena de um inibidor competitivo

Inibidores enzimticos
Inibidores competitivos reversveis
V

Vmx Vmx
2

Sem inibidor

Inibidor [x] Inibidor [2x]

KM1 KM2 KM3

[S] KM1 < KM2 < KM3

Inibidores enzimticos
Substncias que reduzem a atividade das enzimas
Inibidores No-competitivos reversveis

Km no alterado na presena do inibidor

Regulao enzimtica por modificao covalente

A atividade de algumas enzimas que modulam o fluxo das vias metablicas regulada por modificaes covalentes reversveis, em reaes catalisadas por outras enzimas

Regulao enzimtica por modificao covalente

Muitas enzimas podem ser reguladas por modificao covalente, mais frequentemente pela adio ou pela remoo de grupos fosfatos de resduos especficos de serina, treonina ou tirosina na enzima. A fosforilao de protenas reconhecida como u das principais formas pelas quais os processos celulares so regulados.
Quinase ATP ADP

Enzima Inativa PO4

PO4

Enzima
Ativa

Quinase

A. Mecanismo de regulao de atividade enzimtica pelo fosfato

Enzimas
Mecanismos Catalticos
1) Efeitos de proximidade e orientao Os substratos se aproximam dos grupos funcionais catalticos da enzima em uma orientao espacial apropriada para que a reao possa ocorrer.
2) Catlise por ons metlicos A fora das interaes eletrostticas est relacionada com a capacidade das molculas solventes vizinhas em reduzir os efeitos de atrao entre os grupos qumicos. 3) Catlise cido-bsica geral Os grupos qumicos podem se tornar mais reativos pela adio ou remoo de prtons. Os stios ativos das enzimas contm cadeias laterais que podem atuar como doadores ou receptores de prtons. 4) Catlise covalente Acelera a velocidade da reao pela formao de uma ligao covalente transitria entre a enzima e o substrato.