ndice Assunto Apresentao Cronograma gua e sistemas-tampo Aminocidos Estrutura primria de protenas Estruturas secundria e terciria de protenas Cintica

Enzimtica Mecanismos de catlise enzimtica Acares: estrutura e funo Lpides, membranas e transporte Colesterol e lipoprotenas Termodinmica Metabolismo geral: estratgias Gliclise Ciclo de Krebs Ciclo das pentoses Sntese e degradao de cidos graxos Cadeia respiratria e fosforilao oxidativa Neoglicognese Metabolismo do glicognio Metabolismo de aminocidos Ciclo da uria Fotossntese Degradao de purinas e pirimidinas Integrao metablica Metabolismo muscular Controle hormonal e diabetes Transduo de sinais cidos nuclicos Pgina 2 4 5 7 10 12 17 22 26 32 38 40 47 50 54 56 58 61 64 66 69 71 72 75 77 81 82 87 90

Qumica Ambiental Noturno Bioqumica QBQ 4020 Noturno 2o Semestre 2011 Apresentao Curso de Bioqumica Estrutura e Metabolismo destinado aos alunos do curso de Qumica Ambiental perodo Noturno. Curso de Bioqumica subseqente a QBQ 4010. Sero estudados: a) estrutura e atividade biolgica de aminocidos, peptdeos e protenas; b) purificao e caracterizao qumica de peptdios e de protenas; c) cintica enzimtica e mecanismos de catlise; d) metabolismo: noes gerais; e) compostos ricos em energia; g) metabolismo de carboidratos: estrutura e vias metablicas; h) ciclo de Krebs; i) cadeia de transporte de eltrons e fosforilao oxidativa; k) Fotossntese; l) metabolismo de cidos graxos: estrutura e vias metablicas, m) Noes gerais sobre o metabolismo de aminocidos: destino dos grupos amino e esqueletos de Carbono; n) Integrao e regulao do metabolismo (ao de hormnios); e o) Radicais livres: conceitos e propriedades. O curso visa fundamentar os conceitos aprendidos na QBQ4010 as informaes fundamentais sobre as estruturas moleculares dos componentes do meio biolgico como o solvente e as molculas constituintes como protenas, acares e lipdios. Objetiva-se apresentar as condies gerais do Metabolismo enfocando tanto a degradao (obteno de energia) como o armazenamento de energia e a construo das estruturas macromoleculares.

Horrio, Vagas e Local

O curso ser realizado s sextas feiras no perodo das 19:00 s 23:00 horas na sala 4 do Bloco 6 Trreo do IQUSP. O curso oferecido para 35 alunos sendo pr-requisito a disciplina QBQ 4010. Mtodo Aulas expositivas, resoluo de exerccios e apresentao de Seminrios conforme temas abaixo. Os grupos sero de cinco alunos.

Avaliao

Mdia superior ou igual a cinco entre duas provas (P1 e P2, peso nove) e nota de seminrio (peso um). A presena obrigatria.

Professores e Monitor

Alexander Henning Ulrich, henning@iq.usp.br Mrio Jos Politi, mjpoliti@usp.br, B-12 S, sala 1258 Arquimedes Cheffer, arquiqbq@iq.usp.br Site da Disciplina 2

No site da disicplina estar disponibilizada uma apostila que contm exerccios e teoria do material apresentado

Bibliografia Manual de Bioqumica com correlaes clnicas Edgard Blucher - 6th ed. 2007. Bioqumica Bsica - A. Marzzoco & B.B. Torres - Guanabara Koogan 3a ed. - 2007. Bioqumica - L. Stryer - Guanabara Koogan - 6a ed. - 2006. A Lehninger; D.L. Nelson & M.M. Cox - Principles of Biochemistry, Worth Publishers, Fourth Edition, 2005. D. Voet e J.G. Voet - Biochemistry, 3a ed. Editora J. Wiley & Sons, 2004 A Lehninger; D.L. Nelson & M.M. Cox - Princpios de Bioqumica, Editora Savier, 3a. Edio, 2002. J. M. Berg, J. L. T. e L. Stryer - Biochemistry - 5a edio ,Editora W.H. Freeman and Co, 2002. Voet, J. G. Voet, C.W. Pratt - Fundamentos de Bioqumica, Editora Artmed, 2002. Bioqumica - M.K. Campbell Artmed - 3a ed. 2001. A Lehninger; D.L. Nelson & M.M. Cox - Principles of Biochemistry, Worth Publishers, Third Edition, 2000. Fundamentos de Bioqumica D. Voet, J. G. Voet & C. W. Pratt Artmed Editora- 2000. M. K. Campbell. - Biochemistry, 3a edio, Editora Saunders College Pub, 1999. Biochemistry M.K. Campbell Brooks/Cole 5th ed. 2006. A. Marzzocco e B. B. Torres - Bioqumica Bsica, Editora Guanabara, 2 Edio, 1999. D. Voet, J. G. Voet, C.W. Pratt - Fundamentals of Biochemistry, Editora J. Wiley & Sons, 1999.

Ms

Dia 5

Agosto

12 19 26 2 9 16 23 30 7 14 21 28 4 11 18 25

Setembro

Outubro

Novembro

Dezembro

2 9

Assunto Introduo, pH, pKa, tampes biolgicos, foras intermoleculares, aminocidos Ligao peptdica, protenas (estruturas 2, 3 e 4; enovelamento), funo (hemoglobina) Enzimas Mecanismos e Cintica Estrutura de carbiodratos, lipdeos e membranas (transporte) Bioenergtica e gliclise Semana da Ptria Prova 1 Semana da Qumica Ciclo de Krebs e via das pentoses Neoglicognese e metabolismo do lcool/Seminrio 1 Transporte de eltrons e fosforilao oxidativa Seminrio 2 Degradao e sntese de glicognio/ Seminrio 3 Dia do funcionrio pblico Degradao e sntese de cidos graxos Seminrio 4 Oxidao de aminocidos e ciclo da uria Seminrio 5 Sntese de aminocidos e derivados/Seminrio 6 Regulao hormonal e integrao metablica Seminrio 7 Prova 2 Prova substitutiva

Professor Politi Politi Politi Politi Politi Politi Politi Politi Politi Henning Henning Henning Henning Henning Henning/Politi Henning/Politi

Artigos para os seminrios: Seminrio 1. Pedersen, P.L. Warburg, me and Hexokinase 2: Multiple discoveries of key molecular events underlying one of cancers' most common phenotypes, the "Warburg Effect", i.e., elevated glycolysis in the presence of oxygen. J. Bioenerg. Biomembr. 2007, 39:211-22. Seminrio 2. Senior, A.E.; Nadanaciva, S.; Weber. J. The molecular mechanism of ATP synthesis by F1F0-ATP synthase. Biochim. Biophys. Acta. 2002, 1553:188-211. Seminrio 3. Wolfsdorf, J.I.; Weinstein, D.A. Glycogen storage diseases. Rev. Endocr. Metab. Disord. 2003, 4:95-102. Seminrio 4. Istvan, E.S.; Deisenhofer, J. Structural mechanism for statin inhibition of HMG-CoA reductase. Science. 2001, 292:1160-4. Seminrio 5. Caldovic, L.; Ah Mew, N.; Shi, D.; Morizono, H.; Yudkoff, M.; Tuchman, M. Nacetylglutamate synthase: structure, function and defects. Mol. Genet. Metab. 2010, 100:S13-9. Seminrio 6. Blau. N.; van Spronsen, F.J.; Levy, H.L. Phenylketonuria. Lancet. 2010, 376:1417-27. Seminrio 7. Shulman, G.I. Cellular mechanisms of insulin resistance. J. Clin. Invest. 2000, 106:1716.

H2O e Sistemas TAMPO 4

1. A molcula de gua, H2O, apresenta um ngulo de 104,5 graus entre as duas ligaes O-H, dando-lhe um carter altamente polar. Alm disso, o tomo de O possui 2 pares de eltrons livres, permitindo a formao de ligaes (ou pontes) de H entre molculas vizinhas. Esta estrutura d gua propriedades fsicas e qumicas de enorme importncia biolgica. 2. A gua se ioniza atravs de uma reao cido-base: H2O + H2O H3O++ OH-

A reao cido-base se caracteriza pela troca de prtons entre pares conjugados de cidos e bases. A gua pode se comportar como cido e como base: AH + H2O B + H2O Por exemplo: K = [H3O+] [A-] [AH] [H2O] K mede a afinidade relativa das bases, de cada par cido-base conjugados (AH/ A- e H3O+/ H2O), por prtons. Fala-se comumente em constante de dissociao de um cido (Ka), significando: Ka = K [H2O] = [H+] [A-], onde [H2O] essencialmente constante (55 M). [AH] 3. [H ] a concentrao hidrogeninica e os valores de [H+] para a maioria das solues so muito baixos e difceis de serem comparados. Um valor mais prtico conhecido como pH: pH = - log [H+]. como pode-se obter por analogia e 1/[H+] = 1/K x [A-]/[AH] pH = - logK + log [A-]/[AH] - log K = pK pH = pK + log [A-]/[AH]
+

H3O+ + ABH + OH-

Estas so reaes de equilbrio, s quais correspondem constantes de equilbrio definidas.

Conclui-se que pK numericamente igual a pH da soluo na qual as concentraes molares do cido e sua base conjugada so iguais (ie log [A-]/[AH] = 0). A igualdade pH = pK + log [A-]/[AH] conhecida como Equao de HendersonHasselbach. 4. cidos so classificados de acordo com sua fora relativa, ou seja, de acordo com sua capacidade de transferir um prton para a gua. cidos com constantes de dissociao menores do que aquela de H3O+ (que, por definio, igual a 1 em solues aquosas (v se consegue confirmar porqu!)) so s parcialmente ionizados em solues aquosas e so conhecidos como cidos fracos (K < 1). J os cidos fortes tm constantes de dissociao maiores que a de H3O+, sendo quase completamente ionizados em solues aquosas (K>1). 5. Tampes so sistemas aquosos que tendem a resistir a variaes no seu pH quando pequenas quantidades de cido (H+) ou base (OH-) so adicionadas. Um sistema tampo consiste de um cido fraco (o doador de prtons) e sua base conjugada (o aceptor de

prtons). comum encontarr os seguintes smbolos para representar um cido (AH ou BH+) e sua base conjugada (A ou B:) 6. A adio de cido forte (H+) ou base forte (OH-) a uma soluo aquosa de um cido fraco, por exemplo, cido actico (pKa = 4,76), causa pequenas variaes de pH, se a soluo estiver a um pH prximo do pK do cido. Este comportamento define um tampo cido-base. 7. O pH do sangue mantido atravs de um sistema de reaes envolvendo a Hemoglobina e o CO2, ie o on HCO3-. Exerccios 1 1) Defina cidos e bases no conceito de Brnsted, mostrando exemplos.
-

2) a) Qual o pH das solues 0,1 M dos cidos fortes HCl e HNO3? b) Usar a equao HendersonHasselbach para calcular o grau de dissociao dos cidos fracos i) H2S (Ka=1x10-7) e ii) cido actico (Ka=2x10-5) em solues 0,1 M. Qual o respectivo pH dessas solues? 3) Esquematize a curva de titulao de 1 L de uma soluo de 0,1 M H3PO4 com uma soluo de 10 M NaOH, colocando pH (eixo y) em funo de volume de base adicional (eixo x). Indicar os pontos na titulao (volumes de NaOH) em que o pH equivale cada um dos pKas do cido. 4) Indique como se pode preparar 1 L de um tampo a pH=7,0, capaz de manter o pH estvel com adio de 10 mL de HCl 0,1M, dispondo-se das solues: a) 1M H3PO4 b) 1M cido actico c) 1M NaOH

5) Desenhe a estrutura do gelo, mostrando pontes de hidrognio entre molculas de gua. O que acontece quando o gelo derrete? Porque a gua lquida 4oC mais densa do que o gelo 0oC? 6)Discuta as propriedades de gua em comparao a outros solventes e a molculas isoeletrnicas.

7) Desenhe a estrutura do NaCl no estado slido e tambm no estado aquoso, neste ltimo, destaque suas interaes com gua.

8) Discuta como o sistema tampo do sangue mantm o pH estvel em condies de acidose e de alcalose.

AMINOCIDOS 6

1. Aminocidos, bases purnicas e pirimidnicas, nucleosdeos e nucleotdeos, hexoses (como glicose), so componentes monomricos dos principais polmeros biolgicos, ou seja, protenas, cidos nuclicos (DNA e RNA) e polissacardeos (glicognio, amido e celulose). Aminocidos, bases, nucleosdeos e nucleotdeos so muito solveis em gua e possuem grupos funcionais que participam em reaes cido-base. Glicose tambm altamente solvel em gua, mas no participa em reaes cido-base. i. H 20 aminocidos que compem protenas (Tabela 1), todos mostrando a frmula geral: R
+

H3N

C H

COO-

on dipolar ou zwitterion encontrado em gua pH 7

2. Aminocidos podem ser agrupados em classes com base nas propriedades dos seus grupos radicais (R), em particular sua polaridade ou tendncia de interagir com gua em pH biolgico ( 7,0). 3. Todos os aminocidos livres comportam como cidos poliprticos. Quando um aminocido cristalino dissolvido em gua, ele pode agir como um cido ou como uma base. O grupo carboxlico mostra um pK em torno de 2,0, enquanto o grupo amino tem um pK entre 9,0 e 10,0. Portanto, no pH fisiolgico (pH 7,0), a maioria das molculas de todos os aminocidos est na forma de ons dipolares (zwitterions). Chama-se pI de um aminocido o pH da soluo na qual suas molculas possuem carga lquida nula. Na cadeia lateral (-R) os aminocidos apresentam grupos funcionais, entre os quais existem grupos cido-base. 4. O carbono dos aminocidos, excetuando-se a glicina, assimtrico, fazendo com que estas substncias tenham atividade ptica e, portanto, apresentem pares de ismeros pticos.

Exerccios 2

1) Quais dos aminocidos tm dois carbonos quirais e qual deles no possui isomeria ptica?

2) Mostre porque a seguinte forma no-inica de um aminocido no pode ser encontrada em soluo aquosa. R H2N C H COOH

3) O etanol no tem carter cido em gua, enquanto fenol e cido actico se dissociam em soluo aquosa, sendo o cido actico (pK=4,8) mais forte que o fenol (pK=10). Como se pode explicar o comportamento destes trs compostos em gua a partir de suas estruturas moleculares? 4) Esquematize a curva de titulao da glicina com NaOH a partir de pH=1 e do cido asprtico com HCl a partir de pH=11. Coloque o pH na ordenada e, na abscissa, a quantidade de equivalentes de cido ou base forte. 5) a) Quais os pontos isoeltricos de: glicina (pKs=2,5 e 9,5), cido asprtico (pKs=2,5; 4,0 e 9,5), lisina (pKs=2,5; 9,5 e 10) e histidina (pKs=2,5; 6,0 e 9,5)? b) Calcular as cargas lquidas (aproximadas) do cido asprtico, lisina ou histidina nos seguintes pHs: pH 1, pH 8, pH 11.

6) Tentar classificar os aminocidos em termos da natureza qumica dos seus grupos radicais: a) ionizveis ou no ionizveis, b) cidos ou bsicos, c) polares ou no polares, d) hidroflicos ou hidrofbicos, e) alifticos ou aromticos, f) lineares ou ramificados e g) pequenos e grandes.

7) Na Tabela 1 indicar: a) O cdigo de letra nica para cada aminocido e b) os pKR dos aminocidos com grupos radicais ionizveis.

ESTRUTURA PRIMRIA DE PROTENAS

1. A descrio da estrutura das protenas dividida em quatro nveis de organizao: estrutura primria, secundria, terciria e quartenria. 2. A estrutura primria se refere seqncia de aminocidos que compem a protena. Tratase, portanto, da estrutura de ligaes covalentes. A principal ligao covalente entre aminocios a ligao peptdica. Os aminocidos podem formar polmeros atravs da ligao do grupo carboxila de um aminocido com o grupo amino de outro. Esta ligao carbono-nitrognio chamada ligao peptdica, obtida por excluso de uma molcula de gua. Quimicamente, a formao da ligao peptdica pode ser representada pela seguinte equao:

Esta reao, como esta escrita, jamais ocorre nos seres vivos. A unio dos aminocidos por ligao peptdica no feita por reao direta entre eles, mas atravs de um complexo aparato de sntese protica, que inclui ribossomos, cidos ribonuclicos, vrias protenas e enzimas num processo chamado traduo. A equao mostra apenas o resultado liquido do processo. 3. As propriedades da ligao peptdica impem restries ao dobramento do polmero formado. A ligao peptdica apesar de ser representada por um nico trao de ligao, tem caractersticas intermediarias entre uma ligao simples e uma dupla ligao, devido as interaes entre duas formas de ressonncia.

A conseqncia desse carter parcial de dupla ligao que no h possibilidade de rotao em torno da ligao peptdica. Assim sendo, os quatro tomos dos grupamentos que participam da ligao peptdica ficam dispostos em um plano rgido, constituindo o que se costuma chamar de grupo peptdico ou unidade peptdica (vide retngulos) Notar tambm que os dois carbonos alpha (C) vizinhos de cada ligao peptdica tambm se encontram o plano.

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Marzzocco & Torres, Bioqumica Bsica.

O polmero formado pode, portanto, ser visualizado como uma cadeia constituda por unidades planares (unidades peptdicas), unidas entre si com uma articulao flexvel: o carbono . Esta cadeia chama-se cadeia polipeptdica. As protenas podem ser formadas por uma ou mais cadeias polipeptdicas. 4. Todavia, existem pontos de dobramento entre as unidades peptdicas rgidas, graas a possibilidade de rotao em torno das ligaes com o carbono alfa (N-C e C-C), que so ligaes efetivamente simples (vide figura acima). Estas ligaes so chamadas phi () e psi () respectivamente. 5. A cadeia polipeptdica pode ser dividida entre a cadeia principal e as cadeias laterais (grupos R) ligados aos carbonos alfa.

Exerccios 3

1) Defina estrutura primria, secundria, terciria e quaternria de uma protena, dando exemplos.

2) Esquematize a estrutura de uma ligao peptdica.

11

3) a) Desenhar o tripeptdeo Ala-Asp-His. b) Calcular o seu pI. c) Calcular sua carga lquida em pH 1, pH 6 e pH 12. 4) Com os dados abaixo, defina a seqncia do peptdeo analisado: a) hidrlise cida total resultou em: Arg, Tyr, Leu, Ala, Glu Lys, Ser e Pro; b) dansilao e hidrlise produziram: dansil-Leu; c) dois ciclos consecutivos de degradao de Edman liberaram, respectivamente Leu e Tyr; d) tripsina liberou 2 peptdeos cujas composies, aps hidrlise cida total, foram, respectivamente (Tyr, Leu, Arg) e (Ser, Glu, Pro, Ala Lys); e) carboxipeptidase A no liberou nada, mas carboxipeptidase C liberou Ser; f) endopeptidase V8 liberou o tripeptdeo Lys-Pro-Ser e um pentapeptdeo que, tratado com carboxipeptidase C, liberou Glu.

5) Mostre a reao de xido-reduo da cistena que importante na estrutura de peptdeos.

ESTRUTURA SECUNDRIA E TERCIRIA DE PROTENAS

1. A estrutura secundria definida pela conformao local do esqueleto de ligaes peptdicas que compe o eixo da protena. Esta conformao local pode ser explicitamente expressa atravs dos ngulos phi () e psi (). Em geral, certas combinaes de ngulos phi () e psi () so permitidas enquanto outras no so permitidas devido a impedimentos estricos entre tomos de grupos vizinhos. Este princpio pode ser resumido numa diagrama de Ramachandran (Figura 1).

Figura 1: Diagramas de Ramachandran. Esquerda: Estruturas secundrias correpondentes s combinaes estericamente permitidas para angulos phi e psi. Direta: ngulos observados para todos as ligaes em 12 protenas com estruturas de alta resoluo determinadas por cristalografia.

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Figura 2: -hlice.

Figura 3: Folha pregueada.

2. H duas estruturas secundrias principais: -hlice (Figura 2) e folha pregueada (Figura 3), que so estruturas organizacionais regulares e repetitivas. Estas duas estruturas podem ser caracterizadas por combinaes de angulos phi e psi (Figura 1) adotadas pela cadeia principal. Alm de -hlice e folha , as protenas globulares mostram tambm alas de formas definidas, mas irregulares e no repetitivas. 3. A estrutura terciria descreve o arranjo tridimensional da cadeia principal da protena, incluindo a disposio espacial das cadeias laterais dos aminocidos. H muitas possibilidades de arranjos tridimensionais para a estrutura terciria das protenas. a. As propriedades bioqumicas e biolgicas de uma protena so determinadas pelo arranjo tridimensional de sua cadeia, isto , pela sua estrutura terciria. Logo, nas condies fisiolgicas a protena adquire uma estrutura terciria bem definida e necessria sua funo, que conhecida como estrutura nativa. O desarranjo da estrutura terciria leva perda de funo da protena, processo que genericamente chamado de desnaturao. b. Em protenas pequenas da estrutura primria define a estrutura terciria nativa da protena. Nestes casos os processos de desnaturao e renaturao da estrutura da protena so reversveis. A estrutura nativa a conformao da protena de menor nvel de energia livre (G) e alcanada espontaneamente (processo exergnico). O exemplo clssico desse comportamento dado pela protena Rnase A, uma enzima que no seu estado nativo catalisa a hidrlise de RNA. Para protenas grandes o processo de desnaturao irreversvel e o fenmeno de alcance da conformao nativa complexo e ainda mal entendido.

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c. A estrutura tridimensional das protenas mantida por ligaes fracas como pontes de H, ligaes inicas e interaes hidrofbicas. A exceo a ponte de dissulfeto (-S-S-) que, apesar de covalente, importante na manuteno da conformao nativa de protenas. d. Protenas possuem muitos grupos ionizveis atravs de reao cido-base, cujos pKs variam enormemente. O pI de uma protena definido como pH da soluo na qual a carga lquida da molcula de protena nula. 4. Existem muitas maneiras diferentes para apresentar estruturas tridimensionais de protenas.

Estrutura de mioglobina de baleia, uma protena globular tpica

Topografia de superfcie

Fita (azul = H)

modelo space-filling

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4. A Hb e a Mb so protenas com funes parecidas. Ambas apresentam afinidade pelo O2 molecular. A HB o carreador do O2 pelo sistema arterial e capilares enquanto a Mb seqestra o O2 em nvel do tecido muscular. Servindo como depsito para a contrao do msculo em aerobiose. A curva de interao Hb/O2 tem carter sigmoidal (alostrica) emquanto a da Mb hiperblica. Esta diferena permite um controle fino da troca de O2 entre artrias e msculo. Em paralelo a curva de afinidade O2/Hb entre a me e o feto apresenta maior afinidade pela Hb fetal permitindo a troca eficiente de O2 para o feto. 5. Efeito Bohr.

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Exerccios 4

1) Distinga estrutura secundria e terciria de uma protena. D exemplos. 2) Descreva -hlice e folha pregueada. Aponte as diferenas essenciais entre estas formas de estrutura secundria encontradas em peptdeos. 3) Discuta os dois diagramas de Ramachandran apresentados na Figura 1 e relacione-os com as estruturas apresentadas nas Figuras 2 e 3. 4) Descreva a experincia clssica de Anfinsen com a enzima ribonuclease A, indicando sua concluso principal. Qual o papel das pontes de dissulfeto na manuteno da estrutura nativa (terciria) da ribonuclease? Conceitue estrutura nativa e desnaturao de protenas, mostrando o que isso tem a ver com a atividade enzimtica da ribonuclase A. Que funo termodinmica promove espontaneamente a transio da ribonuclease de desnaturada para nativa?

5.) Duas protenas, apesar de terem diferenas quanto a alguns de seus aminocidos, so capazes de desempenhar a mesma funo. Explique como isto possvel.

6.) Pesquisar informaes sobre a estrutura de hemoglobina. Descrever a sua estrutura terciria e quartenria. Descrever as mudanas na estrutura quartenria que acontecem devido ligao de oxignio.

7) O que efeito hidrofbico e qual o seu papel na manuteno da estrutura terciria das protenas? Qual o fator preponderante no efeito hidrofbico: o entlpico ou o entrpico? Explique qualitativamente sua resposta. 8) Mostre porque uria desorganiza a -hlice.

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CINTICA ENZIMTICA

1.

Enzimas so catalisadores biolgicos cuja natureza qumica proteica. A natureza proteica das enzimas lhes proporciona alto grau de especificidade.

2.

A grande maioria das reaes biolgicas no ocorre, ou ocorrem a velocidades baixssimas nas condies fisiolgicas de pH e temperatura. Logo, as reaes biolgicas, em geral, necessitam de catlise para ocorrer, isto , necessitam de enzimas. Para cada reao h uma enzima especfica. Na reao genrica A B a direo espontnea da reao dada pela variao de energia livre, .G0, conforme esquematizado no grfico da Figura 5.

3.

Energia Livre (G)

* G10# G0#-1

Estado de transio da reao no catalisada

Estado de transio da reao catalisada

Estado Inicial (S) (Reagentes)

G0#1cat G
0

G0#-1cat

Coordenada de Reao
Figura 6. Variao de energia livre (G) na reao genrica A B. G0 uma constante que se relaciona com a constante de equilbrio da reao pela expresso G0=2.3 RTlogK. Por outro lado, as velocidades das reaes AB e BA ou, respectivamente, as constantes de velocidade k1 e k-1 no dependem do G0 da reao, mas dos, respectivos, G10 e G-10, que por sua vez s dependem da energia livre (G) do estado de transio (energias de ativao). A enzima (catalisador) no muda o G0 da reao, pois catalisadores no interferem com os estados inicial e final das reaes, mas mudam o caminho da reao e, por conseqncia diminuem a energia do Estado de Transio.

Estado Final (P) (Produtos)

4.

Uria uma substncia muito estvel em gua, mas que pode ser rapidamente decompostas por hidrlise se a reao for catalisada pela enzima urease:

17

H2N C=O + H2O H2N

UREASE

CO2 + 2 NH3

Trata-se de reao de primeira ordem, onde v=k1[uria], apesar da equao estequiomtrica indicar a existncia de 2 reagentes. Esta reao pode ser acompanhada em tubo de ensaio no laboratrio. As Tabelas 3 e 4 mostram resultados obtidos na prtica.

Tabela 3. Cintica da enzima urease.

Tubo n 1 2 3 4 5 6
o

Tempo (minuto) 0 2 4 6 8 10

NH3(moles) 0 0.084 0.168 0.252 0.336 0.420

Concentrao da uria: 5 mM; Concentrao da urease: 0,1 g/mL; Volume de reao: 1 mL; Temperatura: 30 C.
o

Os dados da Tabela 3 mostram que a velocidade da reao constante ao longo do tempo estudado. J os dados da Tabela 4 mostram variaes relativamente complexas da velocidade de reao em funo da concentrao da uria para um perodo de 10 minutos de reao. Os dados da Tabela 4 permitem medir experimentalmente duas constantes importantes das reaes enzimticas Vmax (velocidade mxima) e Km (constante de Michaelis) atravs da equao v = Vmax[S] / (Km + [S]).

Tabela 4. Cintica da enzima urease. Tubo n 1 2 3 Uria (mM) 2,5 5,0 10 Urease (g) 0,1 0,1 0,1 NH3 (moles) 0,21 0,42 0,59

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4 5 6 7 8 9

15 25 50 100 200 200

0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 -

0,67 0,73 0,78 0,79 0,78 0,00

Os significados de Vmax e Km so definidos no modelo de cintica enzimtica proposto por Michaelis e Menten no incio do sculo passado onde ES um complexo enzima substrato formado antes de converso do substrato em produtos.

E + S

k1 k-1

ES

kcat

E + P

A derivao da equao Michaelis Menten:

v = Vmax[S] / (Km + [S]) = kcat[Et][S] / (Km + [S]) apresentada na prxima pgina.

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Velocidade naquela [S]

Velocidade mxima

Concentrao do substrato

Kdiss aparente do Complexo enzima-substrato

Frao de Etot na forma de ES = [S]/(Kdiss + [S])

20

5.

Substncias que reduzem a atividade de uma enzima so chamadas inibidores. Em termos gerais, inibidores podem atuar em vrias maneiras. Aqui vamos focalizar em inibidores que ligam reversivelmente com a enzima com constantes de dissociao KI. Estes tipos de inibidores podem atuar em duas maneiras diferentes: a) Eles podem competir com o substrato para o mesmo stio de ligao na superfcie da enzima livre. Neste caso so chamados inibidores competitivos ou b) Eles podem ligar em outro stio na enzima livre (E) e/ou no complexo enzima-substrato (ES). Estes inibidores so chamados inibidores mistos/nocompetitivos se podem ligar a E e ES e so chamados acompetitivos se ligam somente ao complexo ES.

6.

A presena de um inibidor competitivo se manifesta em uma mudana no valor do Km: Km obs = Km(1+[I]/KI) = Km onde = (1+[I]/KI)

7.

A presena de um inibidor misto/no-competitivo se manifesta em uma mudana nos valores do Km e no valor do Vmax: Km obs = Km(1+[I]/KI)/(1+[I]/KI) = Km / Vmax obs = Vmax /

8.

A presena de um inibidor acompetitivo se manifesta em uma mudana nos valores do Km e no valor do Vmax: Km obs = Km / (1+[I]/KI) = Km / Vmax obs = Vmax /

Exerccios 5

1) As velocidades de uma reao enzimtica foram determinadas para diversas concentraes de substrato, conforme a tabela abaixo: [S] (M) 5 10 20 50 100 200 V (mol/L.min) 22 39 65 102 120 135

Os grficos de, respectivamente, V em funo de [S] e 1/V em funo de 1/[S] podem servir para determinar Km e Vmax? Como?

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2) Numa reao enzimtica, o valor de Vmax, mas no o de Km diretamente proporcional concentrao da enzima? Justifique. 3) A velocidade inicial de uma reao enzimtica em funo da concentrao do substrato S, na ausncia e na presena dos inibidores A e B segue os dados da tabela abaixo:

[S] (M) 1,25 1,67 2,5 5,0 10,0

VELOCIDADE (MOL/L X MIN) SEM I

1,72 2,04 2,63 3,33 4,17 Com Inibidor A 0,98 1,17 1,47 1,96 2,38 Com Inibidor B 1,01 1,26 1,72 2,56 3,49

a) Qual a classe dos inibidores A e B? b) Determine Vmax e Km na ausncia e presena dos inibidores. 4) Utilizando-se dos valores de Km e Vmax determinados nas questes 1 e 3, esquematize num mesmo grfico, para as duas reaes, V em funo da concentrao de substrato, expressa em mltiplos de Km. No eixo dos Y ajuste arbitrariamente as escalas para cada reao fazendo coincidir os pontos de V = Vmax. Como so as curvas para duas reaes? Justifique o resultado.

5) O que so enzimas alostricas? Defina utilizando-se de grficos esquemticos de V em funo de [S], compare uma enzima michaeliana (da questo 4) com uma enzima alostrica positiva e com uma enzima alostrica negativa.

MECANISMOS DE CATLISE ENZIMTICA

1. Catlise cido/base catlise por transferncia de protons. A catlise cida um processo no qual a transferncia parcial de prtons de um cido para o estado de transio diminui a energia livre do estado de transio de uma reao. A reao pode ser tambm estimulada por uma catlise bsica se a taxa de reao aumentar com a abstrao de um prton por uma base. Algumas reaes podem ser sujeitas simultaneamente a ambos os processos, caracterizando uma catlise cido-base. Em reaes catalisadas por enzimas os cidos e bases catalisadores so grupos especficos ionizveis da enzima localizados no seu

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stio ativo/stio cataltico. A mutarrotao da glicose (Figura 6) e a catlise da ribonuclease pancretica bovina A (RNase A) (Figura 7) so exemplos de catlise cido-base.

Figura 6. Mutarrotao da glicose.

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Figura 7. Catlise da ribonuclease pancretica bovina A (RNase A).

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2. Catlise covalente envolve a acelerao da taxa de reao atravs da formao transiente de uma ligao covalente substrato-catalisador. A descarboxilao do acetoacetato um exemplo deste processo:

No primeiro estgio desta reao, a amina faz um ataque nucleoflico ao grupo carbonila do acetoacetato formando uma base de Schiff (ligao imina).

OH

O tomo de nitrognio protonado do intermedirio covalente atua como um receptor de eltrons reduzindo assim o carter de alta energia do enolato. A catalise covalente possui estgios nucleoflicos e eletroflicos. A catlise covalente pode ser dividida conceitualmente em trs estgios:

1) A reao nucleoflica entre o catalisador e o substrato formando uma ligao covalente. 2) A perda de eltrons do centro da reao pelo catalisador agora eletroflico. 3) A eliminao do catalisador que uma reao essencial para retornar ao estgio 1.

Exerccios 6

1) Examine a reao de hidrlise de RNA catalisada pela RNase A para verificar que se trata de um mecanismo de catlise cido-base.

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2) Faa o grfico da velocidade de uma reao enzimtica em funo do pH para uma enzima estvel entre pHs 3 e 12, considerando que o substrato no possui grupos ionizveis e a atividade enzimtica exige no centro ativo uma carboxila (pKa = 5) desprotonada e um grupo amino (pKa = 9) protonado. 3) Definir catlise eletrosttica. Procure um exemplo de uma enzima que utiliza esta estratgia.

4) Descrever o mecanismo empregado pelas serina proteases (tripsina, quimiotripsina, elastase, etc) para hidrolisar ligaes peptdicas. Descrever todas as etapas da reao. Quais tipos de catlise so empregados em cada uma das etapas?

ACARES: ESTRUTURA E FUNO

1. Os carboidratos so compostos que apresentam a frmula emprica (CH2O)n (n> ou = 3), sendo funcionalmente poliidroxialdedos ou poliidroxicetonas. Os carboidratos mais simples so os monossacardeos, que se apresentam na formas de aldoses ou cetoses, conforme o grupo funcional carbonlico que possuem, isto , respectivamente, aldedo ou cetona. H duas trioses: o gliceraldedo, uma aldotriose, e a diidroxiacetona, uma cetotriose (Figura 8). O gliceraldedo apresenta um carbono (C2) assimtrico, dando origem a dois ismeros opticos, as formas D e L (Figura 9). J a diidroxiacetona no possui C assimtrico e, por isso, no mostra esse tipo de isomeria. Os outros monossacardeos podem ser derivados pelo crescimento da cadeia destas duas trioses. A Figura 10 mostra a famlia D derivada do Dgliceraldeido, cujas frmulas estruturais planares obedecem as regras de Fisher.

Figura 8. Gliceraldedo e diidroxiacetona.

Figura 9: Carbono quiral ou carbono assimtrico.

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Figura 10. Famlia D derivada do D-gliceraldedo.

Figura 11. Ciclizao da D-glicose.

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O aumento da cadeia do monossacardeo leva ao aparecimento de novos Cs assimtricos e, portanto mais ismeros estruturais, tambm chamados estereoismeros. O nmero de ismeros dado pela expresso 2n onde n o nmero de carbonos assimtricos. Por exemplo, em aldoexoses h 4 Cs assimtricos, logo o nmero de ismeros 24 =16, sendo 8 da forma D e 8 da forma L. Mas, as estruturas lineares como representadas na Figura 10 tanto para pentoses como para hexoses so poucos estveis em soluo, formando estruturas cclicas segundo a reao mostrada na Figura 11. Esta uma reao bem conhecida da qumica orgnica, pela qual um lcool (OH) faz uma adio nucleoflica a carbonila de um aldedo, formando um composto de condensao da conhecido como semiacetal. No caso do exemplo da Figura 11 a hexose a D-glicose e, como a figura mostra, a ciclizao leva ao aparecimento de uma outra isomeria estrutural devido s duas posies possveis do OH do C1 em relao ao plano do anel, gerando os ismeros e . importante enfatizar que o OH do C1 no quimicamente equivalente aos demais OHs que so alcolicos, sendo por isso chamado de OH glicosdico. A existncia do OH glicosdico permite que todos os monossardeos sejam oxidados em condies brandas pelo reagente de Fehling, uma reao de oxido-reao na qual os OHs alcolicos no participam.

Figura 12. Nomenclatura para estereoismeros.

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2. Conforme exemplificado na Figura 12 h uma nomenclatura especificamente designada para distinguir pares de estereoismeros. Enantimeros possuem estruturas isomricas que so uma imagem especular da outra, por exemplo, cada membro da famlia D de hexoses mostrada na Figura 10 tem um, e, somente um, enantimero na famlia L. So epmeros pares de estereoismeros que diferem apenas pela configurao de um C assimtrico. So anmeros os dois ismeros resultantes da posio do OH glicosdico do C1 na estrutura cclica da hexose. E, finalmente, so denominados diastereoismeros pares de ismeros que no caem em nenhuma das categorias anteriores.

3. Ligao glicosdica: os monossacardeos podem se apresentar na forma de oligo ou polissacardeos, onde os monmeros so ligados atravs de ligaes glicosdicas. Oligossacardeos so formados por um pequeno nmero de monossacardeos, resultantes da condensao de um OH glicosdico com um OH alcolico, como exemplificado abaixo pela dimerizao de duas molculas de -glicose por ligao 1-4, originando o dissacardeo maltose:

Caso a ligao glicosdica envolva a condensao dos dois OHs glicosdicos como o caso da trealose, uma 1-1-diglicose, o dissacardeo no pode ser oxidado pelo reagente de Fehling (dissacardeo no redutor). J a maltose, que possue um OH glicosdico livre um dissacardeo redutor, sendo oxidado pelo reagente de Fehling.

4. Polissacardeos so polmeros constitudos de centenas ou milhares de resduos de monossacardeos, geralmente glicose, formando cadeias lineares, como a celulose (1-4poliglicose), ou cadeias ramificadas, como o glicognio e o amido. O glicognio altamente ramificado, as suas cadeias lineares so formadas por ligaes 14-glicosdicas e suas ramificaes decorrem de ligaes 1-6-glicosdicas (Figura 13). O glicognio apresenta uma nica extremidade redutora livre (C1 no resduo final na ltima molcula de glicose da cadeia) e inmeras extremidades no redutoras. A partir das extremidades no redutoras h acrscimo ou retirada de resduos do polmero. Portanto, as molculas de glicognio no tm tamanhos definidos.

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Figura 13. Glicognio Poli (1-4) (1-6) glicose. 5. Ciclodextrinas so compostos derivados da unio de molculas de glicose por ligao 1-4, gerando sistemas cclicos denominados em funo do nmero de unidades de glicose de , e CDs macrociclos estes que tem, 6, 7 e 8 unidades glicosdecas. Estes compostos so produzidos por enzimas extra-celulares. Estes ciclos tem a cavidade interna relativamente hidrofbicas e permitem a incluso de vrios compostos, na ordem estes so benzeno, naftaleno e antraceno. Estes compostos tem grande aplicao em Farmcia e na indstria de alimentos.

Exerccios 7

1) Desenhe o conjunto dos ismeros de D-aldoses de 6 C, atravs das frmulas de projeo de Fisher. Quantos epmeros possue uma hexoaldose. Identifique todos os epmeros de D-glicose. Existem pares enantiomricos na famlia D de monossacardeos. Explique.

2) Descreva o fenmeno da mutarrotao de D-glicose, incluindo as reaes qumicas pertinentes com as respectivas frmulas estruturais dos reagentes. O que este fenmeno tem a ver com os conceitos de C anomrico e anmeros. 3) Compare os dissacardeos maltose e sacarose, identificando a ligao glicosdica em cada caso. Por que maltose redutora e sacarose no . 4) Analise a estrutura do glicognio. Procure destacar as vantagens e desvantagens da funo deste polmero como composto de reserva energtica.

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5) Verifique as principais caractersticas dos polissacardeos estruturais, comparando celulose, quitina e glicosaminoglicanos (estes tambm chamados mucopolissacardeos). 6) A poro de natureza sacardica de algumas glicoprotenas pode servir como stio de reconhecimento celular. Para desempenhar esta funo, os oligossacardeos ou glicoprotenas devem ter a capacidade de formar um grande nmero de diferentes estruturas. Qual dos dois pode produzir uma maior variedade de estruturas: oligopeptdeos compostos de cinco resduos de diferentes aminocidos ou oligossacardeos compostos de cinco resduos de diferentes monossacardeos? Explique. 7) Frutose, o principal acar do mel, comumente usada como adoante de alimento. Este acar na forma -D-piranose provavelmente a substncia mais doce conhecida. A forma -Dfuranose muito menos doce. a) Quais so as estruturas da -D-frutopiranose e -D-frutofuranose? b) A doura do mel diminui ao deix-lo em repouso e ao mesmo tempo aumentando a temperatura. Explique. 8) Interconverso das formas de D-galactose. Uma soluo recm-preparada da forma de Dgalactose (1g/ml em um tubo polarimtrico de 1 dm) mostra uma rotao ptica de + 150,7o. Quando deixada em repouso por um longo perodo de tempo a rotao decresce gradualmente at atingir um valor de equilbrio igual a + 80,2o. Em contraste, uma soluo recm-preparada (1g/ml) da forma mostra rotao tica de apenas +52,8o . Quando esta soluo deixada em repouso por vrias horas a rotao aumenta at o valor de equilbrio igual a +80,2o , valor idntico quele observado para a -D-galactose. a) Escreva as frmulas de projeo de Haworth das formas e da D-galactose. Qual caracterstica distingue as duas formas? b) Por que a rotao de uma soluo recm-preparada da forma decresce gradualmente com o tempo? Explique por que solues das formas e (de concentraes iguais) atingem o mesmo valor de rotao ptica no equilbrio? c) Calcule a composio percentual das duas formas de galactose no equilbrio. 9) Esquematize as , e CDs indicando o tamanho da cavidade e a forma de cone truncado. Como voc acha que o processo de formao de complexos de incluso? Qual a cintica dos mesmos?

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CIDOS GRAXOS: ESTRUTURA E FUNO

1. Lpides ou lipdeos so substncias biolgicas solveis em solventes orgnicos, como clorofrmio e metanol e, praticamente, insolveis em gua. Os lpides compreendem: a) cidos graxos, em geral na forma de triacilglicerois; b) glicerofosfolpides; c) esfingolpides; d) colesterol e derivados. 2. cidos graxos so cidos carboxlicos com longas cadeias hidrocarbonadas, encontrados na forma de tri-esteres de glicerol. A maioria possui um nmero par de C, predominando os de 16 C (cido palmtico) e os de 18 C (cido olico). Grande parte apresenta dupla ligao (insaturado) e muitos so poli-insaturados. 3. As propriedades fsicas dos cidos graxos dependem do grau de insaturao da cadeia hidrocarbonada. As molculas dos cidos graxos saturados so muito flexveis, facilitando a atrao e coeso entre si. Duplas ligaes entre C impe rigidez cadeia, tornando-a menos flexvel e limitando a coesividade entre as molculas do cido graxo. Em conseqncia disso, a temperatura de fuso (transio de fase slido/lquido) diminui com o grau de insaturao dos cidos graxos. 4. Os triacilglicerdeos desempenham um papel de reserva de energia metablica. Algumas de suas propriedades fsico-quimicas so ideais para essa funo: a) elevado grau de reduo de seus C, maximizando a quantidade de energia livre liberada na oxidao e b) alta hidrofobicidade, permitindo estocagem livre de gua (estoques anidros). No por acaso que os triglicerdeos compe cerca de 90% da reserva de energia metablica e tambm da dieta lipdica dos humanos. 6. A reserva de triacilglicerdeos do tecido adiposo mobilizada atravs da hidrlise a glicerol e cidos graxos livres, catalisada por lpase especfica. Os cidos graxos livres so carregados pela corrente sangunea na forma de complexos com albumina, que representa 50% da protena do plasma.

LPIDES, MEMBRANAs & TRANSPORTE

1. Molculas anfiflicas, como lipdeos com uma nica cauda hidrofbica, cidos graxos livres e detergentes, quando em soluo aquosa e acima de um limiar de concentrao (concentrao micelar crtica ou cmc) formam agregados globulares chamados micelas. 2. Por outro lado, lipdeos com duas caudas hidrofbicas, como glicerofosfolipdeos e esfingolipdeos, tendem a formar bicamadas lipdicas, que so a base estrutural das membranas biolgicas.

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Micela

Bicamada

3. As membranas biolgicas so compostas por protenas associadas a uma matriz de bicamada lipdica. As protenas que compe as membranas pertencem a duas categorias: a)

Modelo de mosaico fludo para membranas biolgicas

integrais ou intrnsecas e b) perifricas ou extrnsecas. Este arranjo estrutural foi originalmente proposto em 1972 por Singer e Nicholson como o modelo de mosaico fludo para as membranas biolgicas, que foi plenamente confirmado por resultados experimentais estruturais e funcionais.

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4. As membranas so barreiras hidrofbicas que oferecem grande resistncia passagem de solutos hidroflicos, cuja permeao exige protenas transportadoras especficas, conforme esquematizado na figura abaixo. Desta maneira a membrana, atravs de transportadores especficos, regula o transporte de metabolitos entre compartimentos celulares.

5. Um exemplo clssico de transporte a tomada de glicose pela hemcia mediada por um transportador especfico, cuja velocidade depende da concentrao externa de glicose e

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obedece a uma curva hiperblica de saturao j bem conhecida da cintica enzimtica, sendo Kt anlogo a Km: Esta forma de transporte conhecida como transporte passivamente mediado ou difuso facilitada. Trata-se de um processo exergnico, pelo qual o soluto, no caso a glicose, atravessa espontaneamente a membrana indo do compartimento de maior para o de menor concentrao. 6. Existem 5 transportadores conhecidos que mediam a difuso facilitada de glicose em humanos: GLUT1 a 5, cujos Kts so diferentes para atender as necessidades funcionais dos tecidos nos quais so expressos. GLUT1 o transportador em hemcias, j GLUT2 expresso no fgado e clulas beta do pncreas, enquanto GLUT4 aparece no msculo esqueltico, tecido adiposo etc. 7. Mas, no epitlio do intestino a glicose obtida da dieta transportada para dentro da clula contra o gradiente de concentrao, portanto atravs de um processo endergnico que exige consumo de energia metablica para ocorrer e referido como transporte ativo. Neste caso o transportador chamado simport, pelo qual a glicose transportada junto com Na+ e termodinamicamente possvel porque existe um gradiente eletroqumico de Na+ de fora para dentro da clula. H mltiplas formas de transporte ativo, das quais este exemplo da glicose apenas uma delas. Grande parte da energia metablica consumida pelas clulas se deve manuteno da enorme diversidade de transportadores que promovem a transferncia de metabolitos e ons contra gradientes de concentrao.

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Exerccios 8

1) O que concentrao micelar crtica. Como varia tamanho e forma de micelas formadas por anfiflicos de uma nica cauda hidrocarbonada? Explique. 2) Uma hiptese central na pesquisa de membranas que os lipdeos da membrana devem ser fludos (em oposio a "congelados") a fim de que a membrana possa desempenhar suas funes. O apoio para esta hiptese fornecido pela observao de que a composio de cido graxo das membranas pode ser alterada pelas condies nas quais a bactria cresce. Por exemplo, se a bactria est crescendo em temperatura menor que a normal, as quantidades observadas de cidos graxos insaturados (relativas ao contedo de cido graxo saturado) esto acima do normal. Contrariamente, se a bactria est crescendo em temperatura acima da normal, as quantidades observadas de cidos graxos insaturados nos lipdeos da membrana (relativas aos cidos graxos saturados) esto abaixo do normal. a) Sugira razes para o fato de que o contedo lipdico na membrana bacteriana deve ser fluido para que a membrana intacta opere apropriadamente. b) Explique como a alterao observada nos nveis dos cidos graxos insaturados relativa aos nveis dos cidos graxos saturados, em diferentes temperaturas de crescimento, apia a hiptese da fluidez da membrana. 3) Fornea uma explicao termodinmica para o fato de que molculas de fosfolipdeo difundem rapidamente no plano da bicamada, mas muito lentamente mudam de uma face oposta.

4) Descreva os mecanismos pelos quais detergentes extraem protenas integrais de membrana, mantendo-as em soluo. 5) Explique porque soda funciona bem para desentupir pias entupidas com gordura animal.

6) Para saber se uma bactria tomava leucina e etileno glicol por transporte mediado ou no mediado, foram feitas medidas de velocidade inicial de tomada em funo da concentrao de ambas substncias, resultando na tabela fornecida abaixo. O que voc conclui do exame dessa tabela? Explique e calcule Kt e Vmax se encontrar evidncias de transporte mediado.

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Componente
Leucina

Concentrao [M]
1 x 10 2 x 10 5 x 10 1 x 10 3 x 10 1 x 10 5 x 10 1 x 10
-6 -6 -6 -5 -5 -4 -4 -3 -3 -3

Velocidade Inicial (unidades arbitrrias)

110 220 480 830 1700 2600 3100 3200 1 5 10 50 100 500 1000

Etileno glicol

1 x 10 5 x 10 0,01 0,05 0,1 0,5 1,0

7) Clulas epiteliais de intestino de camundongo isoladas em cultura transportam L-leucina e Dleucina mostrando Kt (mM) e Vmax, respectivamente iguais a: 0,24 e 420 para L-leucina e 4,7 e 310 para D-leucina, ambos em presena de Na+ no meio de cultura. Mas na ausncia de Na+ , Lleucina mostra 0,24 e 23 enquanto D-leucina mostra 4,7 e 5 para Kt (mM) e Vmax, respectivamente. Classifique esse transportador de leucina quanto ao tipo e mecanismos de ao. Que efeitos voc esperaria se nesse meio de cultura fosse colocada valinomicina (ionforo de Na+)? E se fosse dissolvida ouabana (inibidor da ATPase Na+/K+) no meio de cultura? Explique. 8) O pH e a absoro de drogas. A droga aspirina, intensamente receitada, um cido fraco com um pKa de 3,5. A aspirina absorvida para o sangue atravs das clulas de revestimento do estmago e do intestino delgado. Para uma substncia ser absorvida ela deve atravessar facilmente a membrana celular. A passagem atravs da membrana celular determinada pela polaridade da molcula: molculas inicas (carregadas) e molculas altamente polares passam lentamente, enquanto aquelas neutras e hidrofbicas passam rapidamente. Como o pH do suco gstrico cerca de 1 e o pH no intestino delgado, cerca de 6, pergunta-se: a) Escreva por frmulas estruturais a ionizao reversvel da aspirina. b) Onde a aspirina mais absorvida para a corrente sangunea, no estmago ou no intestino delgado? Justifique claramente a sua escolha.

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COLESTEROL E LIPOPROTENAS

1. O colesterol do organismo humano pode ser obtido atravs da dieta ou por sntese endgena. Os principais rgos responsveis pela produo de colesterol so o fgado e o intestino, que produzem em torno de 25 % do colesterol endgeno. 2. A sntese de colesterol ocorre no citoplasma das clulas, sendo a acetil-CoA a precursora de todos os tomos de carbono presentes na molcula e o agente redutor, NADPH. A via composta por vrias reaes em que a acetil-CoA forma unidades de cinco carbonos, com estrutura similar do isopreno, que se polimerizam em um intermedirio linear que, aps, ciclizao, origina o colesterol. 3. A sntese inicia-se com a condensao de duas molculas de acetil-CoA, produzindo acetoacetil-CoA; esta condensa-se com outra molcula de acetil-CoA, produzindo 3-hidrxi3-metilglutaril-CoA (HMG-CoA). As enzimas que catalisam estas reaes so,

respectivamente, tiolase e hidroximetilglutaril-CoA sintase. A HMG-CoA a seguir reduzida a mevalonato, custa de 2 NADPH, numa reao catalisada pela HMG-CoA redutase, uma enzima ligada ao retculo endoplasmtico. Esta a reao limitante da sntese do colesterol, sendo controlada por vrios fatores. 4. O mevalonato sofre duas fosforilaes, que consomem 3 ATP, e uma descarboxilao, originando a unidade isoprenide, o isopentenil-pirofosfato 5. Um total de 6 molculas de isopentenil-pirofosfato so consumidas para formar esqualeno, o ltimo intermedirio linear da via. A sntese de esqualeno processa-se atravs de reaes de isomerizao, condensao, reduo por NADPH e eliminao de pirofosfato. 6. A etapa final consiste na ciclizao do esqualeno, incluindo consumo de O2 e NADPH, remoo de grupos metila e migrao de ligaes duplas, que levam, finalmente, produo de colesterol. 7. O colesterol, alm de ser um importante componente das membranas biolgicas, precursor dos cidos biliares, hormnios esterides e vitamina D. 8. As lipoprotenas so responsveis pelo transporte de lipdeos no nosso organismo. Consistem de uma poro protica mais externa e uma poro no-protica (nesse caso, lipdica) mais interna. O cerne lipdico composto por lipdeos mais apolares (triglicerdeos e steres de colesterol) e/ou mais polares (fosfolipdeos e colesterol livre). So classificadas de acordo com sua densidade (quanto maior o cerne lipdico, menor a densidade). Em ordem crescente de densidade, temos: Quilomcrons: realizam o transporte preferencial de triglicerdeos (85 %) do intestino para o fgado e tecidos extra-hepticos (tecidos adiposo, cardaco e

musculoesqueltico).

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VLDL (Lipoprotena de densidade muito baixa): transporta triglicerdeos (50 %) endgenos do fgado para tecidos extra-hepticos. IDL (Lipoprotena de densidade intermediria): responsvel pelo transporte de colesterol e steres de colesterol para tecidos extra-hepticos, sendo metade captada pelo fgado e a outra, convertida em LDL.

LDL (Lipoprotena de densidade baixa): realiza o transporte de colesterol (8 %) e steres de colesterol (37 %) para tecidos perifricos e est envolvida na regulao da sntese de colesterol.

HDL (Lipoprotena de densidade alta): faz o transporte reverso do colesterol, isto , dos tecidos extra-hepticos para o fgado, e para tecidos que o utilizam como precursor biossinttico.

9. Conforme mencionado, a regulao da sntese do colesterol incide principalmente sobre a reao catalisada pela HMG-CoA redutase, atravs de alteraes na atividade e concentrao da enzima. Sua atividade controlada por fosforilao/desfosforilao: a forma desfosforilada ativa e a fosforilada, inativa. Isto quer dizer que a adrenalina e o glucagon inibem a enzima, enquanto a insulina a estimula. A concentrao da HMG-CoA redutase regulada por variao da expresso gnica e da velocidade de degradao da enzima. O colesterol e o mevalonato inibem a sntese e a traduo do RNAm da HMG-CoA redutase e aumentam a velocidade de degradao da enzima. 10. A sntese de receptores de LDL tambm inibida por nveis elevados de colesterol intracelular. As LDL penetram nas clulas por endocitose adsortiva, que se inicia pela ligao da lipoprotena ao seu receptor presente na membrana plasmtica. Sendo assim, uma diminuio do nmero de receptores de LDL propicia uma reduo no aporte de colesterol para as clulas. A conseqncia da menor incorporao celular de LDL-colesterol o aumento da sua concentrao no plasma.

Exerccios 9

1. Qual a principal forma de excreo do colesterol? Que importante papel fisiolgico tem a
excreo do colesterol? Explique quimicamente.

2. Quais so os principais grupos de hormnios esterides? Onde so sintetizados e quais so

seus papis fisiolgicos? Esquematize a sntese de tais hormnios a partir do colesterol. 3. Quais so as conseqncias de uma doena hereditria caracterizada pela ausncia de receptores de LDL? Explique.

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4. Por que comum referir-se ao LDL-colesterol e HDL-colesterol como colesterol mau e bom, respectivamente? 5. Por que uma dieta com restrio em colesterol, no suficiente para reduzir seus nveis plasmticos? 6. Uma das terapias medicamentosas utilizadas para a normalizao do colesterol plasmtico o uso de resinas, como a colestiramina. Explique o processo fisiolgico sobre o qual tal interveno atua e de que forma essas resinas funcionam. 7. As estatinas (sinvastatina, lovastatina, pravastatina, atorvastatina, etc.) so medicamentos utilizados para reduzir os nveis plasmticos de colesterol. Baseados na estrutura qumica de tais compostos, explique seu mecanismo de ao.

8. Por que indivduos diabticos possuem maior predisposio para nveis elevados de colesterol? Justifique bioquimicamente. 9. Que so Sais Biliares e quais as funes dos mesmos? Quais os pigmentos que conferem a colorao s fezes?

TERMODINMICA

1. A variao de energia livre padro diretamente relacionada constante de equilbrio: Go = -2.3RT log Keq 2. A composio de um sistema de reao (uma mistura de reagentes e produtos) tende a uma variao contnua at que o equilbrio alcanado. No equilbrio, as taxas de reao para um lado e para outro so exatamente iguais. As concentraes de reagentes e produtos no equilbrio definem a constante de equilbrio. Na reao: A + B Keq = [C][D] / [A][B] 3. Quando um sistema no est em equilbrio, ele tende ao equilbrio, e a magnitude desta tendncia pode ser medida como a variao de energia livre da reao, G. A energia livre de Gibbs (G), uma propriedade termodinmica, definida pela equao: G = H TS, onde H, T e S so respectivamente entalpia, temperatura absoluta e entropia, todas tambm propriedades termodinmicas. 4. Numa transio de estado a temperatura (T) e presso constantes (condies comuns s reaes bioqumicas) a variao de G (G) : G = H - TS. Se se trata de uma reao bioqumica, H o calor de reao. Quando H positivo a reao endotrmica, se H for negativo a reao exotrmica. Nestas condies, a espontaneidade da reao definida pelo valor de G: se G negativo, a reao espontnea, sendo denominada exergnica. Se, ao contrrio, G for positivo, a reao no ocorre C + D , a constante de equilbrio dada por:

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espontaneamente e denominada endergnica. Portanto, a reao ocorre no sentido em que a energia livre total diminui. 4. No equilbrio, G = 0. Logo, possvel demonstrar a validade das seguintes igualdades: G = G + 2,3 RT logB/A B/A = K G = - 2,3 RT logK

5. Em condies padro, 25C (298K), com concentraes de reagentes e produtos iguais a 1M, pH = 0, a variao de energia livre considerada padro, ou G. Entretanto, a maioria das reaes bioqumicas ocorrem em pH 7,0, para as quais utiliza-se G. 6. A Figura 4 mostra esquematicamente como varia G com o desenvolvimento da reao, indicado no eixo das abcissas como coordenada de reao

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Energia Livre (G)

Estado de Transio (T) G*

Estado Inicial (S)

G'

Estado Final (P)

Coordenada de Reao
Figura 4. Variao de energia livre (G) no decorrer de uma reao genrica. Para que a reao ocorra, necessariamente tem-se Gfinal < Ginicial, isto , G negativo. Um ponto importante a ser destacado que o valor de G permite prever se a reao pode ocorrer, mas no a velocidade com que a reao atinge o equilbrio. A velocidade de reao depende da energia livre do Estado de Transio que maior que do que o dos reagentes no Estado Inicial, isto , G* positivo. Quanto maior o valor de G*, menor ser a velocidade de reao. 8. Na reao genrica A B a velocidade (v) proporcional a [A], isto , v1=k1[A]. A velocidade da reao inversa ser, consequentemente, v-1=k-1[B]. k1 e k-1 so constantes de velocidade e reaes como AB e BA so ditas de primeira ordem, porque as suas respectivas velocidades dependem de concentrao molar de um nico reagente elevado potncia 1. As constantes de velocidade k1 e k-1 so diferentes da constante de equilbrio da reao, K=[B]/[A]. No estado de equilbrio, por definio, v1=v-1 e, portanto, formalmente, K=k1/k-1. As reaes representadas pelas equaes seguintes: 2AB e A+BC so de segunda ordem, cujas velocidades so, respectivamente, v=kA[A]2 e v=kAB[A][B]. Notar que a ordem da reao no coincide necessariamente com a estequiometria da equao qumica. 9. As quinases formam uma classe muito importante e abundante de enzimas, que se caracterizam por catalisar a transferncia de um grupo fosfato de alta energia para uma outra substncia receptora. 10. So chamados compostos de alta energia substncias orgnicas com o grupo fosfato em ligaes anidrido ou fosfoenol, cuja hidrlise libera fostato inorgnico (Pi) com um G0 negativo e em valor absoluto superior a 8kcal/mol. Outros compostos fosforilados com o fosfato em ligaes ester ou tioester tambm mostram um G0 de hidrlise negativo, mas de valor absoluto

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da ordem de 3kcal/mol. Estas classes de compostos esto ilustradas na Tabela 2. O principal composto fosforilado da clula o ATP; cuja frmula estrutural est na Figura 5. O ATP possui fosfato em ligaes anidrido e ester, aos quais correspondem G0 de hidrlise de, respectivamente, -8kcal/mol e -3,5kcal/mol. Todas estas reaes so, portanto, muito voltadas para os produtos de hidrlise, sendo praticamente irreversveis. No entanto, nenhuma destas reaes ocorre na clula a velocidade significante se no houver catlise por uma enzima especfica, da classe das fosfatases.

NH2 N HC N OOOO H C C N C N C H Ad e n i n a

- O- P - O- P - O- P - O- C H 2 O O O H H HO

H OH

Ri b o s e

A MP ADP AT P

ATP = Adenosina 5-trifosfato

Na clula: FIGURA 2

[ATP] + [ADP] + [AMP] = Constante

Figura 5. Frmula estrutural do ATP.

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Tabela 2. Compostos fosforilados.

R C O P + H2O R C O + Pi cido

Go' = - 13.000 cal/mol

CH2 Fosfoenol R C O P + H2O

CH3 cetona

R C OH O cido cido + Pi

Go' = - 8.000 cal/mol

O Anidrido fosfrico

R O

H2O

R OH lcool

Pi cido

Go' = - 3.000 cal/mol

ster fosfrico

R C S O Tioster

CoA

H2O

R C OH + HS-CoA O cido tiolcool

Go' = - 3.000 cal/mol

ATP Adenosina trifosfato ADP Adenosina difosfato AMP Adenosina monofosfato

H2O

ADP cido

Pi cido

Go' = - 8.000 cal/mol

H2O

AMP cido

Pi cido Pi cido

Go' = - 8.000 cal/mol

H2O

A OH + lcool (Adenosina)

Go' = - 3.500 cal/mol

Pi = fosfato inorgnico = HPO 2- (pH=7,4) 4 P = PO32-

Na clula: [ATP] + [ADP] + [AMP] = constante

11. No metabolismo muito importante a transferncia de fosfatos de um composto fosforilado de alta energia para outro. Uma das reaes chave deste tipo : fosfoenolpiruvato + ADP ATP + piruvato G0=-5kcal/mol Como esta reao no ocorre sem catlise, seu controle pela clula feito atravs de uma enzima quinase especfica.

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12. Alm das quinases que catalisam a transferncia de grupo fosfato do ATP para metablitos, existem as quinases que tem como substratos protenas, genericamente referidas como quinases de protena ou, simplesmente, protena-quinases. H alguns milhares de protena-quinases diferentes em um organismo, que catalisam a transferncia de fosfato de ATP para o grupo OH da cadeia lateral de resduos especficos de serina e treonina formando um ster de fosfato. As reaes deste tipo so genericamente chamadas de fosforilaes e so modificaes covalentes que causam mudana de conformao das protenas, alterando sua atividade biolgica. Por exemplo, um grande nmero de enzimas so fosforiladas para sofrer uma transio do estado inativo ao ativo ou vice-versa. Mais raramente as protenas so fosforiladas no grupo enlico de resduos de tirosina.

Exerccios 10

1) Defina reaes exotrmicas e endotrmicas. Qual a relao entre estes conceitos e a funo termodinmica entalpia? 2) Defina reaes exergnicas e endergnicas. Qual a relao destes conceitos com G0. 3) G0 caracterstico de cada reao (desde que a temperatura seja constante) e no varia com as concentraes de reagentes e produtos no equilbrio. G, por outro lado, no caracterstico da reao, podendo assumir qualquer valor em funo das concentraes iniciais de reagentes e produtos (quociente Q na expresso de G). Mostre por que estas afirmaes so verdadeiras discutindo a expresso que relaciona G0 e G. 4) Na reao genrica A B Keq=103. Qual o valor de G0? No ponto de equilbrio as concentraes molares de A e B podem variar? Como varia G com as concentraes molares iniciais de A e B?

5) Ainda para a reao A B (questo 4) proponha uma condio na qual a reao inversa seja espontnea. Mostre que a sua proposta possvel calculando o respectivo G. Esta questo possui mltiplas respostas ou apenas uma resposta nica? 6) Para a reao A B (questo 4), se a constante de velocidade de primeira ordem, k1 for igual a 10, qual deve ser o valor da constante k-1 para a reao inversa? Para um mesmo K, constante de equilbrio, pode haver mltiplos valores de k1 e k-1 ? Qual a interpretao termodinmica para a sua resposta?

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7) Considerando a equao G0 = -2,3 RT log K, sendo: R = 1,98 x 10-3 kcal/mol K; T = 298K e 2,3 RT = 1,36 kcal/mol. Calcule os valores de G0 quando K varia de 105 a 10-5. Faa uma tabela.

8) Porque a hidrlise de ATP necessita catlise enzimtica, sendo este um composto rico em energia? Utilize-se do grfico esquemtico de variao de G (energia livre) em funo de coordenada de reao para responder a esta questo, definindo estado de transio e energia de ativao.

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Metabolismo Geral Estratgias 1. Os sistemas vivos para se manterem na condio de baixa entropia (alta organizao) e ainda fora do equilbrio termodinmico, necessitam retirar energia e poder redutor do meio ambiente. Lembre-se que as molculas sintetizadas pelo organismo via de regra esto no estado reduzido, como acares e lipdios. Lembre-se tambm que os organismos autotrficos procedem sntese de Glicose a partir de CO2, H2O e energia na forma de Luz (h). Este processo inclui a reduo do C (CO2) (Nox=4) para CH2O (hidrato de Carbono) (Nox= 0). 2. Do ponto de vista metablico dois processos ocorrem. Queima de compostos para obteno de energia e poder redutor = Catabolismo. Uso das energias (ATP) e poder redutor para Snteses de macromolculas, movimentos, transportes contra gradientes etc. Processos estes upHill. 3. A manuteno dos processos Metablicos e o Fluxo de materiais controlada por meticuloso sistema enzimtico que permite o controle metablico seja em direo ao catabolismo, seja em direo ao anabolismo. Este fino controle exercido em funo da condio metablica, no qual vias so bloqueadas e outras so ativadas. 4. Reaes upHill podem ser tranformadas em downhill pelo acoplamento de reao favorvel, em geral pela hidrlise de ATP, seja para ADP e Pi seja para AMP e PPi (pirofosfato). Este PPi pode ser ainda hidrolizado duas de Pi e isto auxilia em deslocar o equilbrio no sentido de produtos. 5. Como os produtos de reaes pouco favorveis so retirados para outras vias, isto pode levar a reao complexo. 6. O ATP considerado a moeda corrente de Energia Livre. O ATP esta sempre sendo formado e consumido. O ATP no depsito de energia. Depsitos de energia so Lipdios, Glicognio, Creatina-Pi (msculo). 7. O creatina-Pi reserva de ~Pi no msculo. 8. NADH e FADH2 so os principais carreadores de eltrons nas oxidaes biolgicas. O NADPH a maior fonte de eltrons para as redues biossintticas. Note que o grupo Pi a nica diferena entre o NAD e o NADP, o quem permite o reconhecimento por enzimas. 9. A Coenzima-A o carreador de grupos acila. 10. Abaixo se encontram figuras do catabolismo e anabolismo

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Catabolismo

Anabolismo 48

Estratgia Metablica 1) Alvos: Produzir ATP, gerar poder Redutor, obter blocos para Snteses. 2) Funes do ATP : Fonte de Energia para Msculo Transporte Ativo Amplificao de Sinais (checar AMPc) Biossntese 3) Hidrlise de ATP muda equilbrio acoplado por um fator de 108!! 4)Sntese de ATP glicose 2 ATP (vantagem a rapidez) Ac. Graxos 30/32 ATPs (cido palmtico) 5)Via das Pentoses NADPH (biossnteses) 6)Blocos DHP glicerol TAGs PEP aas aromticos Acetil-CoA unidades de 2C Succinil-CoA porfirinas Pentose Ribose 5 Pi 7)Degradao Sntese, porm em geral exergnicos graas ao ATP. 8)Atividade Enzimtica Chave para Sucesso 9) Controle do Metabolismo em geral no Passo Irreversvel Transforma processos de msegundos para Segundos 10)Modificao Covalente 11)Nvel de Enzimas (controle da transcrio). Sntese vs. Degradao Hormnios 12)Compartimentalizao de Processos. Ex. mitocndria, fluxo de metablitos.

Exerccios 11

1) Qual o valor do G0 para hidrlise do ATP? E do PPi? 2) Escreva a forma do ATP e esquematize quais grupos podem ser denominados ~Pi? 3) Por que o ATP rico em energia livre? Qual as formas do ATP no pH fisiolgico? Por que o ATP em geral esta acompanhado do on Mg2+? 4) Qual o fator que a hidrlise de ATP desloca equilbrios? 5) Mostre as estruturas do NAD, do FAD e do NADP oxidados e reduzidos. Saliente quais grupos das molculas so oxidados e reduzidos. 49

6) Como a estrutura da Co-Enzima A? 7) Quais as vitaminas presentes no NAD, FAD e CoA. 8) O que significa Carga Energtica e Potencial de fosforilao? 9) Discuta os 12 tens apresentado no tema acima Estratgia Metablica.

GLICLISE

1. A gliclise a principal via catablica da glicose compreendendo as 10 reaes enzimaticamente

catalisadas que so mostradas na figura abaixo e cuja estequiometria total pode ser observada na equao qumica seguinte: Glicose + 2 NAD+ + 2 ADP + 2 Pi 2 Piruvato + 2 NADH + 2 ATP + 2 H2O + 2 H+ A gliclise, como todas as vias catablicas, exergnica e a equao acima corresponde a Go = -43,4 kJ/mol. Mas o dado da variao de energia livre mais interessante em termos de G, cujo valor exato depende de cada clula especfica, por exemplo, em msculo cardaco estima-se que seja igual a 74,0 kJ/mol.

2. A finalidade da gliclise obteno de energia, como a equao estequiomtrica indica, cada

molcula de glicose degradada a duas de piruvato e parte da energia livre liberada nesta degradao retida nos produtos na forma de 2 NADH e 2 ATP.

3. A reao que permite a obteno de NADH a nica de oxido-reduo da gliclise, pela qual
gliceraldedo-3-P oxidado a glicerato-1,3-bisP, atravs da ao oxidante de NAD+ catalisada pela enzima gliceraldedo desidrogenase. A manuteno da capacidade oxidante da gliclise exige que NADH seja re-oxidada a NAD+ , uma alternativa para isso apresentada na figura, atravs da reao pela qual NADH reduz piruvato a lactato, recuperando NAD+. Esta alternativa ocorre no msculo esqueltico com baixos nveis de O2.

4. J ATP produzido em duas reaes distintas pelas quais um radical fosforil transferido de,
respectivamente, glicerato-1,3-P e P-enolpiruvato para ADP, em transferncias catalisadas por glicerato-1,3-P-quinase e P-enolpiruvato-quinase. Esta maneira de fosforilao de ADP conhecida como fosforilao a nvel do substrato, para distingui-la da fosforilao oxidativa da mitocndria que ser vista mais adiante.

5. Na gliclise, h 3 reaes de fosforilao irreversveis catalisadas, respectivamente, pela

hexoquinase, fosfofrutoquinase e piruvato-quinase, que funcionam como marca-passos da via, cuja regulao se d por um elaborado sistema de controle alostrico das enzimas.

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6. Diversas outras hexoses, como frutose, galactose e manose, tambm so metabolisadas pela via
glicoltica.

7. A gliclise em condies anaerbicas tem energtica e funes variadas, conforme o organismo.

Cabe fazer dois destaques importantes.

8. Em vertebrados, encontram-se msculos esquelticos muito pobres em mitocndria, que so

especializados para produzir ATP a partir de gliclise anaerbica, cuja energtica obedece a seguinte reao geral: Glicose 2Lactato + 2H+ ; Go = -196kJ/mol. Mas, parte dessa energia livre liberada que seria dissipada (61kJ/mol) retida na forma de 2ATP produzidos por mol de glicose degradada. Deve-se ainda enfatizar que o lactato no descartado, pois vai ser aproveitado no fgado, aonde reoxidado a piruvato, alternativa metablica importante a ser examinada mais frente.

9. Leveduras mostram um exemplo de gliclise anaerbica na forma da fermentao alcolica,

segundo a reao geral: Glicose 2Etanol + CO 2; Go = -235kJ/mol. Aqui tambm parte da energia livre, +61kJ/mol, mantida com a produo de 2ATP. A parte final da fermentao alcolica compreende duas reaes: a primeira envolve a descarboxilao de piruvato e liberao de acetaldedo, catalisada pela enzima piruvato-carboxilase, que no existe em animais. Na segunda reao a desidrogenase alcolica catalisa a reduo do acetaldedo por NADH.

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HOCH2 O OH HO OH ATP ADP P -OCH2 O OH HO OH OH ATP ADP OH

GLICLISE

Glicose

Glicose 6-fosfato

P -O-CH2 O CH2OH HO OH HO ATP

Frutose 6-fosfato

ATP ADP P -O-CH2 O CH2O- P ADP

HO OH HO

Frutose 1,6 bisfosfato

H2C-O- P C=O H2C-OH

HC=O HC-OH H2C-O- P Pi NAD+ NADH O=C-O- P HC-OH H2C-O- P ADP ATP O=C-OHC-OH H2C-O- P ADP ATP Pi NAD+ NADH

Diidroxiacetona fosfato

Gliceraldedo 3-fosfato

1,3 Bisfosfoglicerato

3-Fosfoglicerato

COOHC-O- P H2C-OH

2-Fosfoglicerato

H2O COOC-O- P CH2 ADP ATP COOHC-OH CH3 NAD+ NADH COOC=O CH3 ADP ATP

Fosfoenolpiruvato

Lactato
NAD+ NADH

Piruvato

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Exerccios 12

1) Classifique as reaes da gliclise, destacando as que so de xido-reduo.

2) Equacione a reao de oxidao de gliceraldedo-3-fosfato, destacando o oxidante e o redutor.

3) Na reao do item 2) parte da energia utilizada para produzir ATP. Mostre como isso possvel, equacionando as etapas relevantes da reao. Defina fosforilao ao nvel do substrato. 4) Equacione a reao lquida da transformao de glicose em piruvato. Como regenerada a capacidade oxidante do sistema NAD+/NADH necessria atividade glicoltica nos glbulos vermelhos humanos (que no tm mitocndria) e na cultura de levedo sem O2 (fermentao). 5) Examine uma tabela com as 10 reaes da via glicoltica que contenha, respectivamente, o G0 e o G das reaes. Quais so as reaes irreversveis da gliclise? 6) Porque os valores de G0 e de G da mesma reao podem ser diferentes? Para decidir se a via glicoltica numa determinada clula reversvel ou irreversvel, que valor mais relevante, G0 ou G? 7) Uma pessoa incapaz de executar exerccios fsicos intensos e prolongados teve suas enzimas analisadas. Todas as enzimas da via glicoltica estavam em concentrao normal, com excesso da fosfoglicerato mutase muscular. a) Como ser afetada a produo de energia metablica em uma clula que apresenta baixos nveis desta enzima? b) Como ser afetada a produo de Lactato na ausncia desta enzima? [Referncia: Di Mauro, S.; Miranda, A.F.; Kahn, S.e Gitlin, K. - Human muscle phosphoglycerate mutase deficiency Science 1981, vol. 212, 1277-1279. 8) Calcular a porcentagem de energia armazenada pela clula ao degradar glicose pela via glicoltica. Sabe-se que:

Glicose 2 lactato

G ' = - 47.000 cal/mol

o

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CICLO DE KREBS

1. Em condies aerbicas, o destino do piruvato produzido na gliclise sofrer uma

descarboxilao oxidativa catalisada pela piruvato desidrogenase, que um complexo multienzimtico existente no interior da mitocndria de eucariotos. Portanto, o piruvato precisa entrar na mitocndria para ser degradado por essa via. A reao geral a seguinte: Piruvato + CoA + NAD+ Acetil-CoA + NADH + CO2

2. O acetilCoA resultante da metabolizao do piruvato totalmente oxidado no ciclo do cido

ctrico, tambm chamado ciclo de Krebs, conforme a seguinte reao geral: Acetil-CoA + 3 NAD+ + FAD + GDP + Pi + 2 H2O 2 CO2 + 3 NADH + FADH2 + GTP + CoA + 2 H+ O ciclo de Krebs, esquematizado na figura, compreende 8 reaes, envolvendo 8 enzimas e 8 cidos carboxlicos, di e tri-cidos, todos dispersos na matriz da mitocondria. Portanto, comeando no piruvato e passando pelo acetilCoA, ocorre oxidao completa desses metabolitos liberando 3CO2 sem participao de O2 molecular. Os agentes oxidantes em todas as reaes so NAD+ ou FAD e as formas reduzidas destas co-enzimas (NADH + FADH2 ), resultantes do processo, s so reoxidadas na cadeia respiratria, uma via especializada que se localiza na membrana mitocondrial interna e ser considerada mais adiante. 3. O ciclo de Krebs, conforme sua reao geral indica, essencialmente catablico, pois promove a oxidao do radical acetil a 2CO2 e retm parte da energia livre desta reao na forma de coenzimas reduzidos que, posteriormente, serviro produo de ATP atravs da fosforilao oxidativa. Para cumprir esta funo basta que os 8 intermedirios do ciclo ocorram em concentraes catalticas. Mas, o ciclo possui outra funo, alm da catablica, diversos de seus intermedirios alimentam as vias de sntese de aminocidos, lipdeos e glicose, isto , o ciclo tem tambm funo anablica e, portanto, deve ser classificado como anfiblico. Para que o ciclo desempenhe concomitantemente ambas as funes, catablica e anablica, as concentraes dos intermedirios so mantidas e controladas atravs de um complexo sistema de reaes auxiliares, conhecidas como reaes anaplerticas. Um exemplo de reao anaplertica a carboxilao de piruvato para obter oxalacetato, catalisada pela enzima piruvato carboxilase. 4. A transformao de piruvato em acetil-CoA, uma reao para a qual convergem diversas vias catablicas e anablicas, alm da gliclise. Por esse motivo a piruvato desidrogenase est sujeita a um controle altamente elaborado, compreendendo dois nveis de regulao: a) controle alostrico atravs da inibio pelo produto, exercido por NADH e acetil-CoA; b) modificao covalente reversvel da subunidade E1 da enzima, por fosforilao/desfosforilao. 5. As enzimas citrato sintase, isocitrato desidrogenase e -cetoglutarato desidrogenase so as reguladoras do fluxo metablico atravs do ciclo de Krebs e esto sujeitas a controle alostrico, envolvendo NADH como inibidor e Ca+ e ADP como ativadores.

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Piruvato
CoASH + NAD+ CO2 + NADH

Acetil-CoA
H 2O CoASH

Oxaloacetato
NADH + H+ NAD+ L-Malato H 2O

Citrato
H 2O

cis-Aconitato
H 2O

Fumarato
FADH2 FAD

Ciclo de Krebs

Isocitrato
NAD+ NADH + H+

Succinato
GTP GDP + Pi CO2 CoASH CO2

Oxalosuccinato

Succinil-CoA
NADH + H+

a-Cetoglutarato
NAD+

Exerccios 13

1) Escrever a reao de formao de acetil-CoA a partir de piruvato e indicar: a) as 5 coenzimas necessrias b) as vitaminas envolvidas c) a sua localizao celular 2) Como a equao qumica, estequiometricamente equilibrada, que representa a oxidao de acetil-CoA no ciclo de Krebs? Como se pode medir o rendimento do ciclo de Krebs em termos de coenzimas reduzidos (poder redutor) e ATP (ligaes de fosfato de alta energia).

3) Identifique os tipos de reaes que ocorrem no ciclo de Krebs, mostrando as respectivas equaes qumicas.

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4) Equacione a descarboxilao oxidativa de -cetoglutarato a succinato, respeitando a estequiometria da reao. Mostre as etapas que compem esta reao com as respectivas enzimas e coenzimas. 5) Quais so as enzimas do ciclo de Krebs sujeitas a regulao? Explique como cada uma delas regulada.

6) Explique porque piruvato estequiometricamente convertido a CO2 na respirao de fatias de msculo mantidas em soluo fisiolgica, enquanto oxalacetato e citrato tem efeito cataltico neste mesmo processo. Mostre porque a respirao pode ser sustentada pelo consumo estequiomtrico de citrato, mas no de acetato, quando o ciclo de Krebs inibido por malonato. 7) Dispondo das enzimas necessrias, a adio de que compostos far aumentar a concentrao de oxaloacetato em um sistema in vitro que contm mitocndrias: acetil-CoA, piruvato, glutamato, citrato ou cidos graxos? 8) Uma suspenso de mitocndrias, suplementada com acetil-CoA marcada com C14, produz CO2 marcado apenas quando suprida de oxignio. Em condies anaerbias, a adio de azul de metileno restaura a produo de CO2 marcado, observando-se tambm a descolorao do corante (azul de metileno reduzido incolor). Explique estes dados.

CICLO DAS PENTOSES

1. Muitas funes celulares que envolvem reaes endergnicas so efetuadas graas hidrlise
exergnica de ATP. Outras reaes endergnicas, como a sntese de cidos graxos e colesterol e a fotossntese, requerem NADPH, que tem um grande poder redutor.

2. O grupo fosforila no carbono 2 de uma das unidades de ribose do NADPH o diferencia de NADH.
NADH oxidado pela cadeia respiratria para gerar ATP, enquanto que NADPH serve como um doador de eltrons em reaes biossintticas redutoras.

3. Na via das pentoses, NADPH gerado quando a glicose-6-fosfato oxidada a ribose-5-fosfato,

que um acar de 5 carbonos, componente de vrios compostos importantes, como ATP, CoA, NAD+, FAD, RNA e DNA.

4. A via das pentoses tambm catalisa a interconverso de acares de 3, 4, 5, 6 e 7 carbonos, em

uma srie de reaes no oxidativas que ocorrem no citosol.

5. As reaes da via das pentoses so as seguintes:

glicose-6-fosfato desidrogenado e convertido a ribulose-5-fosfato, em trs reaes, produzindo 2 NADPH + H+.

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 ribulose-5-fosfato isomerizada a ribose-5-fosfato. Nestas reaes, 2 NADPH + H+ e uma ribose-5-fosfato so gerados para cada glicose-6-fosfato oxidada. ribose-5-fosfato convertida a gliceraldedo-3-fosfato e frutose-6-fosfato pela transcetolase e transaldolase. A transcetolase catalisa a transferncia de unidades de C2 de uma cetose para uma aldose. A transaldolase transfere unidades de C3 de uma aldose para uma cetose. As reaes de transcetolase e transaldolase criam uma ligao reversvel entre a via das pentoses e a via glicoltica. O resultado dessas reaes a formao de 2 hexoses e 1 triose a partir de 3 pentoses: C5 + C5 C7 + C3 C5 + C4 C3 + C7 C4 + C6 C3 + C6 Transcetolase Transaldolase Transcetolase

6. O excesso de ribose-5-fosfato formado pela vias das pentoses pode ser completamente
convertido em intermedirios da via glicoltica.

7. A primeira reao da via das pentoses, a desidrogenao da glicose-6-fosfato, praticamente

irreversvel. E essa a reao em que a via das pentoses controlada. O fator regulatrio mais importante o nvel de NADP+, o receptor de eltrons na oxidao da glicose-6-fosfato a 6fosfogluconolactona. Alm disso, NADPH compete com NADP+ pela ligao enzima. A parte no oxidativa da via das pentoses controlada principalmente pela disponibilidade de substratos.

8. A via percorrida pela glicose-6-fosfato depende da necessidade celular de NADPH + H+, ribose-5fosfato e ATP: Quando muito mais ribose-5-fosfato requerida que NADPH + H+, a maior parte de glicose-6-fosfato convertida a frutose-6-fostato e gliceraldedo-3-fosfato pela via glicoltica, a transaldolase e a transcetolase convertem esses em ribose-3-fosfato. Quando a necessidade de NADPH + H+ e ribose-5-fosfato esto balanceadas, a reao predominante a formao de 2 NADPH e uma ribose-5-fosfato de glicose-6-fosfato pela fase oxidativa da via das pentoses. Quando muito mais NADPH + H+ requerido que ribose-5-fosfato, a glicose-6-fosfato completamente oxidada a CO2, ou convertida a piruvato.

Exerccios 14

1) Mostre a parte oxidativa do ciclo das pentoses com as equaes das reaes envolvidas, indicando os agentes oxidantes e a origem do carbono presente no CO2 liberado.

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2) Compare NADH e NADPH, indicando suas funes no metabolismo de carboidratos. Explique porque a via da pentose-fosfato muito mais ativa no tecido adiposo que no msculo. 3) Quando h necessidade de NADPH, o ciclo das pentoses pode funcionar dando um resultado lquido que equivale oxidao total de glicose a CO2. Explique este processo atravs das respectivas reaes estequiometricamente equilibradas. 4) Ribose 5-fosfato pode ser obtida para a sntese de nucleotdeos atravs da via das pentoses, com ou sem oxidao da glicose. Mostre como isso possvel com as respectivas equaes qumicas. 5) Explique como a via da pentosefosfato controlada, tendo em vista que grande parte das reaes dessa via reversvel. 6) Compare as reaes catalisadas por transaldolases e transcetolases, indicando reagentes, produtos e a natureza das reaes. Sntese e Degradao de cidos Graxos

1) A via catablica de degradao de cidos graxos para produo de ATP ocorre na matriz mitocondrial e se chama beta-oxidao. Esta via leva clivagem sequencial da cadeia do cido graxo em pares de C, liberando a cada ciclo: 1 acetilCoA, 1 NADH e 1 FADH2 (ver reaes abaixo), que alimentaro, respectivamente, o ciclo de Krebs e a cadeia respiratria. Mas, a betaoxidao exige previamente uma ativao inicial que consome 1 ATP e libera o cido graxo na forma de acilCoA. Esta etapa preliminar de ativao se d associada membrana externa da mitocndria e, a transferncia da acilCoa para dentro da mitocndria, mediada pela carnitina.

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Reaes de um ciclo de beta-oxidao:

O R CH2 CH2 CH2 C S-CoA oxidao FAD FADH2 H O (enoil-CoA) R CH2 C = C C S-CoA H hidratao H2O O (L-hidroxiacil-CoA) NAD+ NADH O O (ceto acil-CoA) R CH2 C CH2 C S-CoA tilise CoA (acil-CoA)

HO H

R CH2 C C C S-CoA H oxidao H

O R CH2 C S-CoA +

O H3C C S-CoA (acetil-CoA)

2. A oxidao completa de uma molcula de palmitato (16 C) a CO2 e H2O, atravs da betaoxidao, ciclo de Krebs e cadeia respiratria, rende 129 ATP. importante destacar que este rendimento, medido em ATP/mol-oxidado, muito superior ao da oxidao completa de aucares e protenas, pois a oxidao de um cido graxo leva liberao de 37,6 kJ/g de energia livre, enquanto oxidao de aucares ou protenas libera apenas 16,7 kJ/g. 3. Os cidos graxos so sintetizados no citosol por via anablica prpria que adiciona seqencialmente unidades de 2 C cadeia em crescimento. Esta via alimentada por acetilCoA, mas s a primeira unidade de 2 C entra como acetilCoA, as subseqentes so na forma de malonilCoA. Portanto, o acetilCoA precisa ser previamente ativado a malonilCoA, por carboxilao e consumo de 1 ATP, para permitir a reao de condensao, levando ao crescimento da cadeia do cido graxo de uma unidade de 2 C, por ciclo de sntese. A ativao de acetilCoA catalisada pela acetilCoA-carboxilase, uma enzima sujeita a controle complexo,

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envolvendo regulao alostrica e ativao / desativao por modificao covalente (fosforilao / desfosforilao). 4. A sntese de palmitato (16 C) altamente endergnica, obedecendo a sequinte estequiometria: AcetilCoA + 7 malonilCoA + 14 NADPH + 7H+ palmitato + 7 CO2 + 14 NADP+ + 8 CoA + 6H2O A elongao da cadeia alm de 16 C e a insero de duplas ligaes feita por outros sistemas enzimticos especializados, que se localizam na membrana do retculo endoplasmtico. Mas, mamferos no possuem enzimas para introduzir duplas ligaes em cadeias de cidos graxos acima do C9. Por isso, linoleato (18:2) e linolenato (18:3), so cidos graxos essenciais que precisam ser adquiridos pela dieta. 5. importante destacar que animais degradam eficientemente glicose at acetilCoA pela gliclise e assim podem converter C de acar em cadeias de lipdeo de reserva. Mas, estes organismos no podem fazer o caminho de volta de cadeias de cido graxo para glicose, pois no possuem reaes que convertam acetilCoA em piruvato ou oxalacetato.

Exerccios 15

1) Ponto de fuso dos cidos graxos. Os pontos de fuso de uma srie de cidos graxos de 18 tomos de carbono so: cido esterico (69,9oC), cido olico (13,4oC), cido linolico(-5oC) e cido linolnico (-11oC). Que aspecto estrutural destes cidos graxos de 18 carbonos pode ser correlacionado com o ponto de fuso? Fornea uma explicao molecular para esta tendncia do ponto de fuso.

2) Mostre como os cidos graxos so ativados antes de serem degradados. Em que compartimento celular isso ocorre?

3) Aonde e sob que forma so estocados os cidos graxos? Como os cidos graxos da reserva metablica so mobilizados para serem oxidados na matriz mitocondrial? 4) Explique os passos da -oxidao dos cidos graxos, partindo de uma molcula de palmitato. Calcule o rendimento energtico da oxidao completa de palmitato a CO2 e H2O. 5) Na -oxidao, a cadeia de cidos graxos degradada aos pares de carbono. Na sntese de cidos graxos, a cadeia cresce tambm aos pares de carbono. No entanto, o precursor na elongao da cadeia, durante a sntese, malonil-CoA e no acetil-CoA. Explique porqu.

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6) Equacione as etapas que compem o conjunto de reaes que permitem adicionar acetil-CoA cadeia de cido graxo crescente durante a sntese de palmitato. Mostre que etapa torna o processo favorecido termodinamicamente. 7) Compare a -oxidao e a biossntese de palmitato, mostrando diferenas e semelhanas em: a) carregadores de grupos acila; b) reaes de xido-reduo; c) coenzimas de xido-reduo; d) gasto ou produo de energia em termos de equivalentes de ATP e de coenzimas redutoras.

8)Mostre como se d a oxidao do cido olico.

CADEIA RESPIRATRIA E FOSFORILAO OXIDATIVA

1. Fosforilao oxidativa o processo bioqumico pelo qual a oxidao de NADH e FADH2

produzidos na gliclise e ciclo de Krebs, ocorre acoplada produo de ATP, a partir de ADP + Pi. Este processo se d na cadeia respiratria ou cadeia de transporte de eltrons, que compreende um conjunto ordenado de enzimas e transportadores de eltrons inseridos na membrana interna da mitocndria.

2. A cadeia respiratria contem 4 complexos, I,II, III e IV, ordenados por ordem crescente de
potencial redox, indo do potencial padro de NAD+/NADH (E0= -0,315V) ao do O2/H2O (E0= +0,815V). Os eltrons so transferidos do complexo I ou II para o complexo III pela coenzima Q (ou ubiquinona), e do complexo III para o complexo IV pelo citocromo C para chegar ao O2. NADH e FADH2
,

cedem eltrons, respectivamente, aos complexo I e II. A transferncia

exergnica de eltrons do nvel redox de NADH para o de O2 (E0= 1,130V) envolve uma diferena de energia livre liberada (G0= -218kJ/mol) que em parte retida pelo transporte de H+ do lado interno para o externo da membrana, criando o gradiente eletroqumico de prtons que permitir empurrar o processo endergnico de fosforilao de ADP por Pi para gerar ATP, atravs da bomba de prtons que constitui a ATP sintase (tambm conhecida com F1F0ATPase).

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Espao Intermembranar

2 H+

4 H+ Cit C

2 H+

Complexo I

Complexo III

Complexo IV

Matrix Mitocondrial

NAD+ NADH + H+ 1/2 O2 + 2H+ H2O

Complexo II FADH2

3. A ATP sintase distinta e fisicamente separada da cadeia de transporte de eltrons. A

transferncia de 2e de NADH at O2 envolve um G0= -218kJ/mol, que gera um incremento no gradiente de prtons suficiente para mover a ATP sintase, permitindo a produo de 3 moles de ATP (G0= +30,5kJ/mol). Nestas condies, a ATP sintase trabalha com uma eficincia termodinmica igual a 42%. , no entanto, necessrio destacar que quando os 2e saem do nvel redox de FADH2
,

formam-se apenas 2ATP. Naturalmente, para uma melhor medida da real

eficincia termodinmica da fosforilao oxidativa seria preciso estimar o G da transferncia de eltrons em vez do G0.

4. A grande quantidade de energia livre que seria dissipada na oxidao completa da glicose a CO2
e H2O [C6H12O6 + 6 O2 6 CO2 + 6 H2O; G0= -2823 kJ/mol] aproveitada para produo de ATP, graas quase exclusivamente ao processo de fosforilao oxidativa, rendendo 38ATP por mol de glicose (incluindo neste total 2ATP da gliclise e 2 do ciclo de Krebs).

5. Vrios mecanismos da cadeia de transporte de eltrons e de seu acoplamento sntese de ATP

foram elucidados atravs da utilizao de inibidores e desacopladores, entre os quais esto: rotenona, amital, antimicina A, cianeto e DNP. Rotenona e amital inibem a reduo dos complexo I e III por NADH. Antimicina A inibe o transporte de eltrons no complexo II. Cianeto inibe o transporte no complexo IV. DNP desacoplador, pois promove o vazamento de H+ ,levando dissipao do gradiente de prtons e contnuo transporte de eltrons, desacoplado da sntese de ATP.

6. A sntese de ATP a partir de ADP e Pi na mitocndria, que catalisada pela ATP sintase,
dirigida pelo processo de transporte de eltrons. Mas como a ATP sintase fisicamente separada das protenas do transporte de eltrons, a energia livre liberada no transporte de eltrons deve ser conservada em uma forma que possa ser utilizada pela ATP sintase. A energia livre do

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transporte de eltrons conservada pelo bombeamento de H+ da matriz mitocondrial para o espao intermembranar, criando um gradiente de H+. A volta dos prtons ao interior da mitocndria termodinamicamente favorvel. A membrana interna da mitocndria impermevel a prtons em toda sua extenso, exceto na ATP sintase; e ento por este canal que os prtons atravessam a membrana, de volta matriz mitocondrial. A variao de energia livre associada ao transporte de um prton atravs da membrana interna da mitocndria pode ser determinada atravs de medidas da diferena de pH e do potencial de membrana estabelecidos em mitocndrias consumindo oxignio.

Exerccios 16

1) Definir potencial de xido-reduo (E), potencial de xido-reduo padro (Eo) e potencial de xido-reduo padro bioqumico (Eo). 2) Entre os transportadores universais de eltrons da cadeia respiratria esto NAD+ e os nucleotdeos de flavina (FAD e FMN), quais so as diferenas entre estes transportadores de eltrons quanto a potencial redox e forma de interao com as enzimas com as quais atuam?

3) Classifique os seguintes inibidores quanto a seus mecanismos de ao na cadeia respiratria: a) rotenona; b) antimicina A; c) oligomicina e d) DNP (2,4-dinitrofenol).

4) Descreva o mecanismo de ao do DNP (2,4-dinitrofenol), mostrando porque o mecanismo de ao deste inibidor uma demonstrao experimental importante da hiptese quimiosmtica da fosforilao oxidativa. 5) Porque F1 e Fo so ambos necessrios para a sntese de ATP? 6) Em mitocndrias isoladas, o transporte de eltrons no ocorre na ausncia de ADP e Pi, mesmo que haja abundncia de succinato para fornecer eltrons. Como se explica que mitocndrias nessas condies passam a transportar eltrons e consumir oxignio se forem tratadas com DNP?

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7) A relao entre energia livre padro de uma reao e o potencial redox : Go = -nFE0onde n o nmero de eltrons transferidos F a constante de Faraday (F = 23.60 cal V-1) Eo' o, diferena de potencial padro da dupla redox. A uma soluo 1 M de NAD+, NADH, Piruvato e Lactato, adicionou-se lactato desidrogenase: Lactato + NAD+Piruvato + NADH + H+ Eo' (NAD+/NADH) = -0,32 V Eo' (Piruvato/Lactato) = -0,19 V a) Em que sentido a reao ocorrer? b) medida que a reao ocorre, como variam esses potenciais redox?

8) Na hiptese do acoplamento quimiosmtico, a energia que comea na forma de potencial qumico de reduo/oxidao, convertida na forma de potencial prton-motriz e finalmente convertida na forma de potencial qumico de ATP. Qual a diferena entre o potencial qumico (G) e o potencial eltrico ( ) de um soluto distribudo dos dois lados de uma membrana? Defina fora prton-motriz

GLICONEOGNESE

1. O fgado humano precisa manter nveis mnimos da glicose circulante, porque crebro e hemcias dependem quase exclusivamente de glicose para produo de energia. No entanto, a reserva de glicognio heptico no suficiente para essa finalidade. Por isso, o fgado sintetiza glicose de novo a partir de lactato, piruvato, glicerol, intermedirios do ciclo de Krebs e aminocidos, atravs de uma via anablica chamada de gliconeognese. No jejum, mesmo o jejum de poucas horas, a gliconeognese a principal fonte da glicose liberada pelo fgado na circulao. 2. A gliclise, como j foi visto, um a via catablica com a finalidade de produzir energia na forma de 2 NADH + 2 ATP a partir da degradao de glicose a piruvato de acordo com a equao qumica seguinte: Glicose + 2 NAD+ + 2 ADP + 2 Pi 2 Piruvato + 2 NADH + 2 ATP + 2 H2O + 2 H+ A gliconeognese tem a finalidade de sintetizar glicose a partir de piruvato, isto , faz o caminho metablico inverso ao da gliclise. Mas, a gliconeognese, contrariamente gliclise, muito

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endergnica. Para produzir glicose a partir de piruvato necessitam-se 2 NADH + 4 ATP +2 GTP, conforme a estequiometria indicada na equao abaixo: 2 Piruvato + 2 NADH + 4 ATP + 2 GTP + 2 H2O Glicose + 2 NAD+ + 4 ADP + 2 GDP + 6 Pi + 2 H+ 3. A gliconeognese utiliza enzimas glicolticas reversivelmente, mas trs dessas enzimas, a hexoquinase, a fosfofrutoquinase e a piruvato quinase, catalisam reaes com G- muito negativo, sendo essencialmente irreversveis. Estas reaes so substitudas na gliconeognese por reaes exergnicas, tornando termodinamicamente favorvel a sntese de glicose a partir de piruvato. Destas reaes, as duas primeiras correspondentes s enzimas hexoquinase e fosfofrutoquinase, so substitudas por reaes simples de hidrlise de ligao fosfo-ester, catalisadas, respectivamente, pelas enzimas glicose-6-P-fosfatase e frutose-1,6-bis-fosfatase. J a terceira reao, que permite a volta de piruvato para P-enolpiruvato mais complexa e se d em duas etapas catalisadas, respectivamente, por piruvato-carboxilase e P-enolpiruvatocarboxiquinase. 4. O balanceamento entre gliclise e gliconeognese coordenadamente controlado por um complexo sistema de regulao enzimtica, envolvendo interaes alostricas e modificaes covalentes. Todo esse controle est concentrado nas 3 reaes nas quais gliclise e gliconeognese seguem reaes independentes, irreversveis e opostas, que so: 1) glicose / glicose-6-P; 2) frutose-6-P / frutose-1,6-bisP; 3) P-enolpiruvato / piruvato.

Grupo de discusso 18 e Exerccios

1) Explique como a hemcia mantm glicose a 5 mM e G6P a 0,0083 mM, se a converso de glicose em G6P muito exergnica. Como seriam afetadas as concentraes relativas dos intermedirios da gliclise se a glucoquinase (Km = 5mM) fosse colocada artificialmente na hemcia em lugar da hexoquinase (Km = 0,1mM)? 2) Na gliconeognese, como so revertidas as reaes de glicose G6P e F6P F-1,6-BP, que so altamente exergnicas. Conceitue ciclo ftil. 3) A reverso da reao de PEP + ADP piruvato + ATP no pode ocorrer por um processo relativamente fcil como a reverso de glicose + ATP G6P + ADP. Qual a soluo bioqumica que os sistemas biolgicos utilizam para ir de piruvato a PEP?

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4) Qual o consumo de energia na sntese de glicose a partir de piruvato, medido em equivalentes de ATP. Indique as reaes onde h consumo. Compare o rendimento da via glicoltica com o consumo da gliconeognese, so iguais ou diferentes? 5) Um procedimento comum para determinao da efetividade de compostos como precursores da glicose colocar um animal em jejum at que os estoques de glicognio do fgado sejam depletados e ento administrar o substrato em questo. Um substrato que leva a um aumento lquido no glicognio heptico chamado de glicognico pois ele deve primeiro ser convertido em glicose-6-fosfato. Mostre por meio de reaes enzimticas conhecidas quais das seguintes substncias so glicognicas: a) succinato, b) glicerol, c) acetil CoA, d) piruvato e e) butirato.

Escreva as frmulas estruturais das substncias relacionadas de (a) a (e).

6) Citar os efetuadores alostricos positivos e negativos de fosfofrutoquinase e frutose 1,6 bisfosfatase no fgado. Quais so as consequncias destes efetuadores no fluxo relativo dos metabolitos atravs da neoglicognese e da gliclise? 7) O nvel de frutose 2,6 bisfosfato nos hepatcitos varia com a disponibilidade da glicose: baixo no jejum e alto aps as refeies. Como isso se explica em termos das reaes catalisadas por fosfofrutoquinase-2 e frutose 2,6 bisfosfatase.

METABOLISMO DO GLICOGNIO

1. O glicognio um polissacardeo que funciona como forma de reserva de energia em animais e microrganismos. Em animais, o glicognio est depositado no fgado, um rgo central de reserva de energia, e, tambm, nos msculos, onde degradado localmente. O glicognio heptico exportado para manter a glicemia. 2. A natureza polimrica e semi-solvel do glicognio constitui-se numa maneira perfeita de armazenar energia na forma de glicose. O estoque de glicognio do fgado na forma de glicose causaria tamanha presso osmtica, que a viabilidade do hepatcito seria impossvel.

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3. O glicognio um polmero de -D-glico-piranose altamente ramificado. Na cadeia os monmeros so interligados por ligaes glicosdicas (14); nos pontos de ramificao a ligao tambm glicosdica, mas (16). 4. A glicose, na forma de glicose-1-P, liberada da reserva de glicognio pela fosforlise da ligao (14) da extremidade no redutora do polmero. Esta reao catalisada pela glicognio fosforilase. 5. A glicognio fosforilase degrada at restarem 4 resduos antes de uma ramificao at que a enzima desramificadora transfere 3 dos 4 resduos para outra extremidade da cadeia de glicognio formando uma nova ligao (14). O resduo restante est ligado a cadeia pela ligao (16) que hidrolisada pela enzima desramificadora atravs de sua atividade (16) glicosidase. 6. Glicose-1-fosfato convertida a glicose-6-fosfato pela fosfoglicomutase, esta pode ser liberada pela circulao no fgado pela ao da glicose-6-fosfatase ou degradada pelo msculo. 7. A sntese do glicognio se d atravs de via uma diferente da de degradao. A glicose-1-P primeiro ativada uridinadifosfato-glicose, ou simplesmente UDP-G. UDP-G o substrato da glicognio sintase que catalisa a adio de um resduo de glicose ao carbono 4 da glicose de uma extremidade no redutora do glicognio, liberando ainda como produto UDP. Esta reao necessita de cadeias glicognicas pr-existentes que funcionam como PRIMER da reao, oferecendo extremidades no redutoras para reagir com UDP-G. Gli 6-P Gli 1-P Gli 1-P + UTP UDP-Gli + PPI (1-fosfato uridil transferase) UDP-Gli + glicognio (n) UDP + glicognio (n + 1) O UDP convertido a a UTP as custas da utilizao de ATP: PPI + H2O 2 PI (pirofosfatase) UDP + ATP UTP + ATP (nucleosdeo difosfato quinase) 8. A glicognio fosforilase e glicognio sintase formam um ciclo que, respectivamente, libera e deposita glicose-1-P no estoque da glicognio:

UTP + H2O Glicose-1P Glicognion Fosforilase SintaseI UDPG

2 Pi

Pi

Glicognion+1

UDP

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 fcil notar que se estas enzimas funcionarem concomitantemente o ciclo ser FTIL, cujo nico resultado lquido ser dissipao de energia atravs da reao: UTP + H2O UDP + Pi Conclui-se que, necessariamente, no hepatcito estas enzimas so coordenadamente reguladas, isto , quando a fosforilase ativada para mobilizar glicose-1-P, a sintase desativada, e vice-versa, conforme a necessidade celular. 9. Ambas fosforilase e sintase so reguladas por fosforilao (modificao covalente) em resduos especficos de serina, reaes catalisadas pela mesma protena-quinase que possui dupla especificidade, sendo por isso chamada de sintase-fosforilase quinase. A fosforilase e a sintase so espcies fosforiladas, portanto a fosforilao, catalisada pela sintase-fosforilase quinase, causa ativao da fosforilase e inativao da sintase. 10. A fosforilase a e a sintase I (formas ativas), por um lado, e a fosforilase b e a sintase D (formas no ativas), por outro, so, respectivamente interconversveis. Para tanto necessrio que fosforilase a e a sintase I sejam desfosforiladas, atravs de uma reao que requer catlise. A principal enzima, catalisadora comum destas desfosforilaes, a fosfoprotena fosfatase 1. 11. A integrao metablica requerida pelo bom funcionamento do organismo faz com que as interconverses coordenadas da fosforilase e sintase do glicognio no fgado, por fosforilao, sejam controladas extracelularmente por hormnios especficos, principalmente: adrenalina, glucagon e insulina. 12. As formas inativas fosforilase b e sintase D so intracelularmente estimuladas por fatores alostricos positivos, por razes de economia interna do metabolismo celular,

independentemente de controle hormonal. So estimuladores alostricos da fosforilase b e sintase D, respectivamente, 5-AMP e glicose-6P.

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Grupo de discusso 19 e Exerccios

1) A ativao de glicose-1-fosfato (G1-P), requer a clivagem de uma ligao de alta energia, liberando PPi. Considere os passos de ativao de G1-P e a reao de regenerao de UTP e analise o gasto de energia necessrio para a sntese de glicognio. Compare o gasto de energia para a adio de um resduo de glicose ao glicognio, com a obteno de energia a partir da liberao de glicose na degradao do glicognio.

2) Qual a finalidade das reservas de glicognio do fgado e msculo? Qual a principal diferena bioqumica entre esses tecidos? 3) Equacione as etapas de mobilizao da glicose a partir do glicognio no fgado e no msculo. Mostre: a) no fgado (desde a fosforlise at a liberao de glicose no plasma); b) no msculo (desde a fosforlise at o aproveitamento na gliclise).

4) Qual a funo da hidrlise de PPi no controle da sntese de glicognio? 5) Esquematize as etapas de degradao total do glicognio, indicando as enzimas envolvidas, reagentes e produtos da reao. 6) Mostre como so coordenadas sntese e degradao do glicognio. Restrinja-se ativao e inativao da fosforilase e da sintase, explicando a natureza do processo e as enzimas envolvidas (no considere o controle hormonal).

METABOLISMO DE AMINOCIDOS

1. Em animais, o N do grupo amino dos aminocidos so eficientemente obtidos a partir de NH4+ pelas reaes catalisadas pelas enzimas desidrogenase glutmica e glutamina sintetase, fornecendo, respectivamente, glutamato e glutamina. 2. Ainda em animais de forma geral, os aminocidos alanina e aspartato podem ser obtidos a partir de, respectivamente, piruvato e oxalacetato, atravs da reao de transaminao tendo glutamato como doador de grupo amino. Outros aminocidos exigem reaes adicionais, alm da transaminao para sua sntese final. Mas, como regra, os esqueletos de C dos aminocidos so obtidos a partir dos intermedirios da gliclise, do ciclo de Krebs e do ciclo das pentoses.

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3. H, no entanto, aminocidos que no podem ser sintetizados por animais devido a falta do precursor que fornece o esqueleto de C. Estes so ditos aminocidos essenciais e tem que ser obtidos na dieta. Por exemplo, humanos tem que conseguir da dieta 9 aminocidos essenciais. 4. Triglicerdeos e glicognio so compostos de reserva, mobilizados quando h necessidade de energia. Em animais, no existem espcies de protena com funes de reserva energtica, mas no jejum prolongado protenas so hidrolisadas para liberar aminocidos que sero catabolisados para produo de energia. O fgado o centro de catabolisao de aminocidos. 5. O catabolismo de aminocidos envolve a eliminao de N na forma de NH4+ e a transformao dos esqueletos de C em intermedirios da gliclise e do ciclo de Krebs. 6. Duas reaes principais permitem a eliminao do amino grupo. Diversos aminocidos podem transferir o grupo amino para o alfa-cetoglutarato numa reao catalisada por transaminases: aspartato + alfa-cetoglutarato oxalacetato + glutamato Por outro lado, glutamina e glutamato podem ser desaminados em reaes catalisadas pela glutaminase e desidrogenase glutmica, respectivamente: glutamina + H2O glutamato + NH4+ glutamato + NAD+ (ou NADP+) + H2O NH4+ + alfa-cetoglutarato + NADH (ou NADPH) + H+ O ction amnio txico, sendo utilizado para a sntese de glutamina ou convertido em uria no ciclo correspondente, para fins de excreo. 7. Aminocidos como alanina, aspartato e glutamato so ditos glicognicos porque podem ser convertidos em, respectivamente, piruvato, oxalacetato e alfa-cetoglutarato, que, por sua vez, podem ser transformados em fosfoenolpiruvato para sntese de glicose. J os aminocidos leucina e lisina so chamados cetognicos por produzirem exclusivamente acetilCoA como produto de degradao, portanto servindo sntese de corpos cetnicos, mas no de glicose.

Grupo de discusso 21 e Exerccios

1) Como a reao de transaminao e qual a sua importncia para o metabolismo de aminocidos? 2) A amnia pode ser txica para a mitocndria heptica? Como se explica bioquimicamente esta toxidez? Que reaes e respectivas enzimas protegem a mitocndria da toxidez de amnia?

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3) Uma das duas principais reaes de entrada de NH3 no metabolismo a reao catalisada pela glutamina sintetase. Mostre a equao dessa reao. Qual a importncia da glutamina para o metabolismo? D exemplos. 4) O que so aminocidos glicognicos e cetognicos? D exemplos e explique mostrando as reaes relevantes do metabolismo. 5) Humanos sintetizam parte dos aminocidos que precisam, o restante obtido da dieta e por isso, chamados essenciais. Mostre, com as reaes pertinentes, porque e como alguns aminocidos so sintetizados por humanos e qual a limitao que impede a sntese dos essenciais. 6) Animais em geral no possuem reservas na forma de protenas ou qualquer outra macromolcula nitrogenada. Quais as conseqncias desse fato para o balano de nitrognio nesses organismos em condies de alimentao abundante e de jejum acentuado?

Uria

1. O ciclo de uria no fgado tem como finalidade eliminar o excesso de nitrognio proveniente da quebra metablica de aminocidos. A uria produzida pela maioria dos vertebratos. Aves e rpteis excretam o excesso de nitrognio na forma de cido rico. A uria secretada para dentro do corrente sangunea e retirada pelos rins para excreo pela urina. 2. O ciclo de uria envolve cinco reaes com duas mitocondriais e trs citoslicas. - A aquisio do primeiro tomo de nitrognio ocorre pela ao da carbamoil-fosfato-sintase. Essa enzima catalisa a condensao e ativao de carbonato de hidrognio e amnio com gasto de duas molculas de ATP. - A ornitina transcarbamoilase catalisa a transferncia do grupo carbomoila do carbamoilfosfato para ornitina, formando citrulina. A reao da transcarbamoilase ocorre na mitocndria. Portanto, a ornitina sintetizada no citosol precisa ser transportada para mitocndria. A citrulina formada na mitocndria transportada para o citosol onde as reaes restantes ocorrem. -A arginino-succinato sintase responsvel para aquisio do segundo tomo de nitrognio da uria. Essa enzima catalisa a condensao do grupo uredo da citrulina com o grupo amino do aspartato, com gasto equivalente de energia de duas molculas de ATP. - O grupo amino doado pelo aspartato est ainda anexado ao esqueleto carbonado do aspartato. A arginino-succinase catalisa a reao de eliminao do fumarato, liberando arginina. O fumarato

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produzido pode ser convertido em aspartato e, ento, novamente ser utilizado na reao da arginino-succinato sintase. A arginina precursor imediato da uria. - Como reao final do ciclo de uria, a arginase catalisa a hidrolise de arginina, produzindo uria e regenerando ornitina. A ornitina transportada para mitocndria para iniciar o prximo ciclo de uria. Grupos de discusso 22 e Exerccios 1. A amnia pode ser txica para a mitocndria heptica? Como se explica bioquimicamente esta toxidez? Que reaes e respectivas enzimas protegem a mitocndria da toxidez de amnia? 2. Explique como a velocidade do ciclo de uria regulada. 3. Explique porque a deficincia parcial do ciclo de uria atenuado em condies de uma dieta com baixa quantidade de protenas. 4. Explique como uma baixa velocidade do ciclo de uria pode interferir com o ciclo de Krebs. 5. Qual a origem dos tomos de nitrognio da uria? 6. Animais em geral no possuem reservas na forma de protenas, ou qualquer outra macromolcula nitrogenada. Quais as conseqncias desse fato para o balano de nitrognio nesses organismos em condies de alimentao abundante e de jejum acentuado?

FOTOSSNTESE

1. A fotossntese o processo pelo qual a energia luminosa transformada em energia qumica e

poder redutor, armazenada nas molculas de ATP e NADH +H+. Num segundo passo fase escura (na verdade, fase independente de luz) a energia armazenada utilizada para sntese de glicose a partir de CO2 +H2O. A fotossntese ocorre nos cloroplastos, uma organela que, como a mitocndria, possui uma membrana externa altamente permevel e uma membrana interna praticamente impermevel, separadas por um espao intermembranar. A equao geral da fotossntese : 6 CO2 + 6 H2O C6H12O6 + 6 O2 Go= +2.870 KJ x mol-1

3. As reaes dependentes de luz ocorrem na membrana tilacide e envolvem processos

semelhantes ao transporte de eltrons e fosforilao oxidativa da mitocndria. As reaes independentes de luz ocorrem no estroma.

4. Os primeiros estudos de fotossntese realizados levaram concluso de que CO2 era a fonte do
O2 gerado na fotossntese. Em 1931, entretanto, demonstrou-se que bactrias fotossintetizantes anaerbicas, sintetizam glicose a partir de CO2, sem gerar O2:

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CO2 + 2 H2S luz (CH2O) + 2 S + H2O

5. A reao geral da fotossntese pode ser demonstrada como segue:

CO2 + 2 H2A luz (CH2O) + 2 A + H2O Em cianobactrias, H2A H2S, e em plantas, H2O. Isso sugere que a fotossntese seja um processo de duas fases, nos quais a energia solar utilizada para oxidar H2A (fase clara): 2 H2A luz 2 A + 4[H] e o agente redutor resultante [H] subsequentemente reduz CO2 (fase escura): 4[H] + CO2
luz

(CH2O) + H2O

6. O principal fotorreceptor na fotossntese a clorofila. A luz absorvida pelas clorofilas antena e

pigmentos acessrios transferida para centros de reao fotossintticos, onde ocorrem as principais reaes da fotossntese.

7. Plantas e cianobactrias utilizam o poder redutor gerado pela oxidao de H2O dirigida pela luz
para produzir NADPH.

8. A produo de O2 na fotossntese requer 2 fotossistemas: Fotossistema I (P700) gera um forte

agente redutor, capaz de reduzir NADP+, e concomitantemente, um oxidante fraco; Fotossistema II (P680) gera um forte agente oxidante, capaz de oxidar H2O, e concomitantemente, um redutor fraco. O redutor fraco reduz o oxidante fraco. Assim, fotossistemas I e II precisam funcionar em srie para acoplar a oxidao da H2O com a reduo de NADP+ (transferncia de eltrons de H2O para NADP+, formando O2 e NADPH + H+).

9. Quando iluminado, o FS II passa para uma forma excitada e perde eltrons, os quais so
transportados por reaes de xido-reduo para o fotossistema I. O PS I iluminado fornece eltrons para a reduo de NADP+. Como resultado temos a oxidao do FS II e a reduo do FS I. A reposio de eltrons em PS II feita por eltrons provenientes da oxidao de gua e, em PSI, por eltrons emitidos por PSII.

10. Os componentes envolvidos no transporte de eltrons de H2O para NADP+ com produo de
NAPDPH + H+ esto organizados em trs partculas, que esto ligadas a membrana tilacide: (1) fotossistema II; (2) complexo do citocromo b6f; (3) fotossistema I (fotofosforilao no-ciclica).

11. Os cloroplastos geram ATP de maneira muito semelhante da mitocndria, ou seja, atravs do
acoplamento da dissipao de um gradiente de prtons sntese de ATP.

12. Na fotofosforilao cclica, os eltrons emitidos por P700 (PSI) so transferidos ao complexo
citocromo b6f, retornando finalmente a P700. No h sntese de NADPH + H+, nem liberao de oxignio.

13. Na fase clara da fotossntese, ATP e NADPH + H+ so sintetizados, e esses so utilizados na

fase escura para a sntese de carboidratos. A via pela qual as plantas incorporam CO2 em carboidratos denominada de Ciclo de Calvin.

14. O ciclo de Calvin engloba duas fases: (1) a fase de produo, na qual 3 molculas de ribulose-5fosfato reagem com 3 molculas de CO2, gerando 6 molculas de gliceraldedo-3-fosfato, com o gasto de 9 ATPs e 6 NADPH + H+; (2) a fase de recuperao, na qual os tomos de carbono de 5

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gliceraldedo-3-fosfato entram em uma srie de reaes para dar origem a 3 ribulose-5-fosfato, com as quais o ciclo recomea.

Grupo de discusso 23

1) Porque as folhas das plantas so verdes? Explique em termos de composio e espectro de absoro dos pigmentos foliares. 2) H muito tempo, foi observado que a eficincia da fotossntese, medida em termos de O2 produzido por energia luminosa absorvida, cai drasticamente quando uma fonte de luz monocromtica alcana o comprimento de onda de 700 nm (queda no vermelho). Alm disso, observou-se tambm que a aplicao concomitante de um feixe de luz de baixa intensidade e comprimento de onda de 650 nm complementava a luz vermelha de 700 nm, recuperando a eficincia fotossinttica de liberar O2. Que importncia teve no passado a descoberta deste fenmeno e qual a explicao atual para sua existncia? 3) O que fotofosforilao cclica e no que difere da fotofosforilao no cclica? Quando o [NADPH + H+ / NADP+] alto, a produo de O2 durante fotofosforilao suprimida. Explique o fenmeno considerando os papis dos dois fotossistemas. 4) Porque a descoberta da reao de Hill, em 1939, deu apoio hiptese anterior de Van Niel, propondo que o O2 da fotossntese vem da gua? 5) Compare a fase clara da fotossntese com o processo de respirao na mitocndria, indicando diferenas e semelhanas.

6) Sabe-se que a produo de O2 na fotossntese requer o funcionamento de dois fotossistemas. Explique resumidamente como ocorre a interao entre os dois fotossistemas, incluindo doador e receptor de eltrons no processo.
7) Compare a fase clara da fotossntese com o processo de respirao na mitocndria, indicando diferenas e semelhanas. 8) Sabe-se que a produo de O2 na fotossntese requer o funcionamento de dois fotossistemas. Explique resumidamente como ocorre a interao entre os dois fotossistemas, incluindo doador e receptor de eltrons no processo.

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9) Explique como algumas bactrias anaerbicas podem realizar a fotossntese.

10) Explique como organismos fotossintetizantes sintetizam carboidratos a partir de CO2 e H2O. 11) Explique a regulao do ciclo de Calvin, mencionado as enzimas-chave sujeitas a regulao e como as reaes da fase controlam o processo da fixao de CO2. 12) Quando uma suspenso de algas verdes iluminada na ausncia de CO2 e depois incubada no escuro com CO2 radiomarcado [14CO2], o
14

CO2 convertido em [14C]-glicose por um curto

14

tempo. Qual o significado dessa observao e como ele est relacionado com as reaes luminosas da fotossntese? Por que cessa a converso de tempo? CO2 depois um curto intervalo de

DEGRADAO DE PURINAS E PIRIMIDINAS 1. Os nucleotdeos de purina so degradados atravs de uma via na qual o grupo fosfato
liberado pela ao da 5-nucleotidase. O adenilato libera adenosina, que ento desaminada a inosina pela adenosina desaminase. A inosina sofre hidrlise para liberar D-glicose e a base purnica hipoxantina. Esta ltima oxidada sucessivamente a xantina e cido rico pela xantina oxidase.

2. O catabolismo do GMP (guanilato) tambm libera cido rico como produto final. O GMP
inicialmente hidrolisado para liberar o nucleosdeo guanosina, o qual clivado para liberar guanina. A guanina sofre remoo hidroltica do seu grupo amino, liberando xantina, que convertida em cido rico pela xantina oxidase.

3. Embora o cido rico seja o produto final do catabolismo das purinas nas aves, primatas,
rpteis e insetos, em muitos outros organismos, ele ainda mais degradado para o produto de excreo alantona, sob a ao da urato oxidase. Os peixes cartilaginosos e os anfbios

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degradam a alantona uria antes da excreo. Finalmente, invertebrados marinhos decompem a uria a seu produto de excreo nitrogenado, NH4+.

4. A gota uma doena provocada por nveis elevados de cido rico no sangue e nos tecidos.
E, devido a um depsito anormal de cristais de urato de sdio, as articulaes se inflamam, tornando-se dolorosas e artrticas. Os rins so afetados porque o cido rico tambm se deposita nos tbulos renais. A gota pode ser tratada pela administrao do inibidor da xantina oxidase alopurinol.

5. As clulas animais degradam os nucleotdeos de pirimidina a seus componentes base. A

timina e uracila resultantes so ento clivadas no fgado atravs de reaes de reduo. Os produtos do catabolismo das pirimidinas, -alanina e -aminoisobutirato so aminocidos e, portanto, metabolizados como tais. So convertidos, atravs de reaes de transaminao e ativao, a malonil-CoA e metilmalonil-CoA. Este ltimo, por sua vez, convertido em succinil-CoA para posterior utilizao.

GRUPO DE DISCUSSO 24 E EXERCCIOS

1) Que vantagem alguns organismos levam por excretar preferencialmente cido rico e no uria como o produto final do catabolismo das purinas? 2) Compare o catabolismo das purinas e das pirimidinas, estabelecendo suas semelhanas e diferenas. 3) Descreva, resumidamente, os cuidados alimentares que um portador de gota deve tomar, justificando cada caso. Explique, tambm, por que o alcoolismo crnico pode agravar o quadro patolgico da hiperuricemia. 4) Explique, baseados na estrutura qumica, o mecanismo bioqumico atravs do qual o alopurinol atua. Por que esse medicamento to eficaz no tratamento da gota? 5) Um determinado indivduo, aps radioterapia e tratamento com mercaptopurina, um antineoplsico, apresentou hiperuricemia e outros sintomas caractersticos da gota. Quando o alopurinol foi administrado, os sintomas no s desapareceram como houve um aumento na eficcia do tratamento com mercaptopurina. Explique bioquimicamente. 6) A Doena da Imunodeficincia Severa Combinada causada pela deficincia da enzima adenosina desaminase. Os portadores devem viver em ambiente estril devido ao risco de infeces generalizadas e morte. Explique, sob um ponto de vista bioqumico, os sintomas dessa doena.

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INTEGRAO DO METABOLISMO

1. O fluxo metablico deve ser controlado para haver equilbrio entre o fornecimento e a demanda de nutrientes e para manter homeostasia. A integrao do metabolismo em termos do

organismo completo requer uma reavaliao integrativa dos conceitos estudados em cada via metablica individual. Esta avaliao inclui um entendimento da especializao de cada rgo ou tecido e dos sinais hormonais que indicam e coordenam estas aes.
2. O fluxo metablico atravs de uma etapa determinante da velocidade de uma via pode ser alterado por controle alostrico, modificao covalente ou controle da enzima que catalisa a reao. freqente que um produto final atue como efetuador alostrico negativo de uma enzima que catalisa uma das primeiras reaes da via (retroinibio); esse mesmo produto final pode atuar como efetuador alostrico positivo em uma outra via que o utilize como substrato inicial. 3. As etapas determinantes da velocidade de uma via so endergnicas. 4. A funo central do fgado no metabolismo processar e distribuir nutrientes. Ele transforma os nutrientes obtidos da dieta em combustveis e precursores requeridos por outros tecidos e os exporta para o sangue. O metabolismo de glicose controlado por insulina e glucagon. A sntese do glicognio catalisada pela glicognio sintetase e a degradao catalisada pela glicognio fosforilase. A glicognio sintetase tem duas formas: fosforilada (inativa) e nofosforilada (ativa). A glicognio fosforilase possui duas formas: fosforilada (ativa) e nofosforilada (inativa) (ver captulos glicognio e hormnios e diabetes). O glucagon promove a ativao da fosforilase quinase, causando o estmulo da degradao do glicognio e inibindo a sntese dele da mesma forma que ocorre no msculo. A insulina promove a ativao da

fosfatase 1, levando a sntese de glicognio e inibindo sua degradao da mesma forma que ocorre no msculo. A glicognio fosforilase inativa pode ser estimulada por AMP e, na forma ativa, pode ser inibida pela glicose. 5. No fgado, a regulao da gliclise e da gliconeognese feita de forma recproca (quando uma via est ativa, a outra desacelerada). Os principais pontos de controle da gliclise so: converso de glicose a glicose-6-fosfato, de frutose 6-fosfato a frutose 1,6-bifosfato e de fosfoenolpiruvato a piruvato (reaes irreversveis). 6. O controle da gliclise e da gliconeognese no fgado mediada pela frutose-2,6-bifosfato, que ativa a fosfofrutoquinase-1, estimulando a gliclise no fgado, e inibe a frutose-1,6-bifosfatase, inibindo a gliconeognese. A concentrao celular de frutose-2,6-bifosfato regulada pelas velocidades relativas de sua sntese, catalisada pela fosfofrutoquinase-2, e sua destruio, catalisada pela frutose-2,6-bifosfatase. Fosfofrutoquinase-2 e frutose-2,6-bifosfatase so atividades diferentes de uma nica protena; essa protena, quando fosforilada, tem sua

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atividade frutose-2,6-bifosfatase aumentada e sua atividade fosfofrutoquinase-2 diminuda. O glucagon causa a fosforilao da protena e, dessa forma, ele inibe a gliclise e estimula a gliconeognese. 7. Mais um stio de controle da gliclise e da gliconeognese incide sobre a piruvato quinase, que converte fosfoenolpiruvato em piruvato; Piruvato quinase est ativa quando desfosforilada e inativa quando fosforilada. A via de sinalizao do glucagon leva a fosforilao da piruvato quinase e conseqente inativao, enquanto a insulina promove a desfosforilao da piruvato desidrogenase e, portanto, sua ativao. 8. No fgado, a piruvato quinase inibida por alanina; essa inibio fundamental para levar o fgado a converter o aminocido em glicose (por gliconeognese) e no em piruvato; a alanina, oriunda do msculo, convertida em glicose no fgado e volta para o msculo novamente em forma de glicose; 9. No msculo, a adrenalina ou o aumento intracelular de clcio promove a ativao da fosforilase quinase, que fosforila a glicognio sintetase, inativando-a, e fosforila a glicognio fosforilase, ativando-a, o que estimula a degradao do glicognio e inibe a sua sntese. 10. Na maioria dos tecidos, a fosforilao da glicose catalisada pela hexoquinase, que inibida pelo seu produto, a glicose-6-fosfato; esse mecanismo de inibio ajusta a captao da glicose sua utilizao. 11. No fgado, a fosforilao da glicose catalisada pela glicoquinase, que tem Km maior que o da hexoquinase e no inibida pelo seu produto; o Km alto da glicoquinase impede a captao de glicose pelo fgado quando a glicose est em baixas concentraes no sangue. 12. Quando a concentrao de glicose no sangue est abaixo da necessria, a glicose-6-fosfato presente no fgado desfosforilada para a produo de glicose livre, que exportada para o sangue; 13. No h regulaes por modificao covalente conhecidas para o ciclo de Krebs. NADH age como inibidor alostrico das enzimas do ciclo de Krebs; A isocitrato desidrogenase, que converte isocitrato em -cetoglutarato, estimulada por ADP e inibida por NADH; O complexo -cetoglutarato desidrogenase, que converte -cetoglutarato em succinil-CoA, inibido por succinil-CoA, NADH e ATP; A citrato sintase inibida competitivamente por succinil-CoA; A succinato desidrogenase inibida competitivamente por oxaloacetato;

14. Enzimas da sntese e degradao de triacilgliceris so fosforilados e defosforilados por transduo de sinal induzida por glucagon, adrenalina e insulina. A lipase, enzima dos adipcitos que hidrolisa triacilgliceris, ativada por fosforilao e inativada por desfosforilao. Glucagon e adrenalina promovem a fosforilao da lipase, causando a degradao de triacilgliceris. A insulina promove a desfosforilao da lipase, inibindo a degradao de triacilgliceris;

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15. A sntese de cidos graxos e, conseqentemente, a de triacilgliceris, pelo fgado de adipcitos tem como principal ponto de regulao a reao catalisada pela acetil-CoA carboxilase (converso de acetil-CoA a malonil-CoA). A acetil-CoA carboxilase constitudas por protmeros sem ao cataltica que, ao se associarem, passam a ter funo cataltica. A presena de palmitoil-CoA estimula a desagregao desse protmeros, como tambm a citrato liase, a tricarboxilato translocase (enzima que transfere citrato para o citosol) e a piruvato desidrogenase; 16. Acetil-CoA carboxilase tambm est sujeita a regulao por modificao covalente: glucagon e adrenalina promovem a fosforilao e conseqente inativao da enzima, enquanto a insulina promove a desfosforilao e conseqente ativao da enzima. A insulina estimula a sntese de lipdios de outras formas: estmulo da piruvato desidrogenase, da glicerol 3-fosfato acil transferase e da expresso das enzimas acetil-CoA carboxilase, sintase de cidos graxos e lipase lipoprotica. Malonil-CoA inibe a carnitina acil transferase I, evitando a entrada dos cidos graxos recm sintetizados na mitocndria e sua conseqente oxidao. 17. Os ajustes metablicos desencadeados por insulina, glucagon e adrenalina ocorrem em escala curta de tempo; a leptina uma protena que regula o metabolismo em uma escala de tempo mais longa; 18. A leptina produzida nos adipcitos e atua nos receptores do hipotlamo, causando diminuio do apetite. A produo e liberao da leptina aumentam com o nmero e o tamanho dos adipcitos. A leptina promove, nas mitocndrias dos adipcitos, o desacoplamento entre transporte de eltrons e fosforilao oxidativa, causando termognese. A liberao de leptina pelo tecido adiposo reduzida durante os perodos de jejum. Grupo de discusso 25 e Exerccios

1. Os nutrientes absorvidos no trato intestinal passam diretamente ao fgado (com exceo de uma
grande parte de triacilgliceris). Por este grande centro de distribuio, acares, aminocidos e alguns lipdeos so processados e distribudos aos outros rgos e tecidos. Propor um mapa metablico unificado, integrando as principais vias destes nutrientes neste rgo. 2. Ao contrrio do msculo esqueltico, o msculo cardaco deve trabalhar constante e ritmicamente. O que torna possvel, a nvel de metabolismo e caractersticas da clula cardaca, esta adaptao para o trabalho constante? 3. O glicerol-3-fosfato um intermedirio chave na biossntese dos triacilgliceris. As clulas adiposas, que so especializadas na sntese e degradao dos triacilgliceris, no podem usar o glicerol diretamente devido falta da gliceroquinase, que catalisa a reao: Glicerol + ATP Glicerol-3-fosfato + ADP

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Como o tecido adiposo obtm o glicerol-3-fosfato necessrio para a sntese do triacilglicerol? Explicar. 4. Pacientes com deficincia de tiamina exibem um conjunto de sinais neurolgicos caractersticos: perda dos reflexos, estado de ansiedade e confuso mental. Sugira uma razo por que a deficincia de tiamina manifestada na funo cerebral. 5. Pessoas que consomem muita bebida alcolica desenvolvem nveis sangneos no normais e baixos de glicose (hipoglicemia), maiores do que os normais de cido lctico (acidose lctica suave) e ainda apresentam cetose. Explique.

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METABOLISMO MUSCULAR

1. As principais fontes de energia para o msculo so a glicose proveniente da quebra do glicognio, cidos graxos e corpos cetnicos. O msculo bem alimentado, no repouso, sintetiza um estoque de glicognio que chega a representar de 1 a 2 % de sua massa. Tal estoque serve como fonte de combustvel prontamente disponvel. 2. O msculo no disponibiliza glicose para outros tecidos, uma vez que ele carece de glicose6-fosfatase. Entretanto, ele serve como um reservatrio de energia porque, durante o jejum prolongado, suas protenas so degradadas a aminocidos, muitos dos quais so convertidos a piruvato que, por sua vez, transaminado a alanina. A alanina ento levada ao fgado atravs da corrente sangunea, onde sofre transaminao para piruvato, um precursor da glicose (ciclo da glicose-alanina). 3. Visto que o msculo no realiza gliconeognese, ele carece da maquinaria que controla esse processo em rgos gliconeognicos como rins e fgado. No possui receptores para glucagon. Contudo, possui receptores para epinefrina, que regula a quebra e sntese de glicognio. 4. Os msculos cardaco e esqueltico possuem diferentes isozimas PFK-2/FBP-2. Enquanto a isozima cardaca controlada por fosforilao (de modo oposto do fgado), a do msculo esqueltico no o . Portanto, a concentrao de frutose-2,6-BP aumenta no msculo cardaco, mas diminui no fgado em resposta a um aumento nos nveis de AMPc. Ademais, a isoforma muscular da piruvato quinase no est sujeita fosforilao/desfosforilao como a isoforma heptica. Logo, ao passo que um aumento de AMPc no fgado estimula a quebra de glicognio e a gliconeognese, resultando em liberao de glicose, um aumento de AMPc no miocrdio ativa a quebra de glicognio e a gliclise, resultando em consumo de glicose. Conseqentemente, a epinefrina atua independentemente do glucagon que, atuando reciprocamente com a insulina, regula os nveis sanguneos de glicose. 5. A contrao muscular depende da hidrlise do ATP e, conseqentemente, do processo de respirao. O msculo esqueltico, no repouso, utiliza cerca de 30 % do oxignio consumido pelo corpo humano. Durante uma carga de exerccio pesado, a hidrlise do ATP aumenta muito mais do que a velocidade da respirao. O ATP inicialmente regenerado pela reao do ADP com fosfocreatina, catalisada pela creatina quinase: Fosfocreatina + ADP creatina + ATP

(a fosfocreatina ressintetizada no msculo, em repouso, pela reao inversa). Sob condies de exerccio vigoroso, contudo, o suprimento de fosfocreatina insuficiente e o msculo tem que contar com a gliclise da glicose-6P proveniente da quebra do glicognio para a produo de ATP. A velocidade desse processo excede aquela do ciclo de Krebs e fosforilao oxidativa. Assim, a maior parte da glicose degradada anaerobicamente a

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lactato que, no ciclo de Cori, levado ao fgado pela corrente sangunea, onde reconvertido glicose atravs da gliconeognese. 6. O corao um rgo predominantemente aerbico. rico em mitocndrias (elas chegam a compreender mais de 40 % de seu espao citoplasmtico). Pode metabolizar cidos graxos, corpos cetnicos, glicose, piruvato e lactato. Os cidos graxos representam o combustvel de escolha para o msculo cardaco em repouso mas, sob a imposio de uma carga de trabalho pesado, ele aumenta grandemente seu consumo de glicose, que proveniente em maior parte de seu limitado estoque de glicognio.

GRUPO DE DISCUSSO 27
1) Os nveis plasmticos de lactato desidrogenase (LDH) podem servir como elemento diagnstico e prognstico para avaliao de leso cardaca em situaes de hipxia. Explique. 2) Faa um esquema dos ciclos de Cori e da glicose-alanina. Quais vantagens esses ciclos representam para o msculo esqueltico? 3) O consumo de glicose pelo msculo esqueltico maior em condies aerbicas ou anaerbicas? Justifique. 4) Enquanto o glicognio heptico utilizado para manter os nveis sanguneos de glicose dentro de valores normais, o glicognio muscular utilizado como fonte de energia prontamente disponvel. Em que fato se pauta essa diferena? 5) Um indivduo sedentrio, aps um perodo de exerccios fsicos intensos, sente cibras nas pernas. Explique, resumidamente, os eventos bioqumicos que originaram as cibras.

CONTROLE HORMONAL E DIABETES

1. A regulao metablica feita de interferncia direta de determinadas reaes qumicas que compem o metabolismo, aumentando ou reduzindo sua velocidade. O resultado direto deste processo a maior oferta de substratos ou acmulo de metablitos que acabar por influenciar outras vidas dependentes destes compostos e a forma mais eficiente de regulao desta rede aumentar a concentrao ou alterar a eficincia da enzima. 2. Pode se controlar a sntese ou degradao enzimtica; tambm se pode modular a atividade enzimtica atravs de mudanas conformacionais da prpria enzima provocada atravs da ligao de compostos ou grupos na cadeia peptdica: regulao alostrica e regulao por modificao covalente. A concentrao enzimtica tambm pode variar conforme a oferta do substrato; alterao mediada atravs de hormnios.

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3. Hormnios so sinais qumicos que permitem a comunicao entre clulas. So sintetizados em clulas glandulares para atingir clulas alvo atravs da circulao sangunea. As clulas alvo respondem a hormnios especficos por possurem os respectivos receptores hormonais. A ligao do hormnio ao receptor segue uma reao de equilbrio semelhante interao enzima-substrato: H + R [RH]: a constante de dissociao de RH (KD), correspondente reao inversa muito baixa - (10-12 a 10-9 M) - devido alta afinidade entre hormnio e receptor. 4. Uma parte importante dos receptores hormonais so protenas integrais de membrana, muitas da quais tem, atualmente, sua estrutura primria conhecida e sua estrutura tridimensional modelada, em conseqncia da clonagem e seqenciamento dos seus respectivos genes. Por exemplo, o receptor -adrenrgico do hormnio adrenalina, encontrado em hepatcito e outros tipos celulares, possui um peso molecular de 64 kD, compreendendo uma nica cadeia peptdica que, de maneira serpentiforme, atravessa a membrana 7 vezes, deixando do lado extracelular, a extremidade N-terminal e 3 alas, e do lado intracelular, outras 3 alas mais a extremidade C-terminal. A poro extracelular do receptor contm o stio de ligao da adrenalina, enquanto a poro intracelular se associa a um trmero de protenas conhecidas como protena-G, por ter um stio especfico para ligao do nucleotdeo GTP. So hoje conhecidos mais de 1000 receptores, de mltiplos hormnios, com esta estrutura bsica formando a superfamlia chamada dos receptores associados a protena-G. A funo deste receptor transduzir o sinal adrenalina de fora para dentro da clula, processo que mediado pelas protenas-G. H tambm receptores presentes no citoplasma nuclear e citoplasmtico e neste caso, o hormnio precisa ter alta solubilidade a lipdeos, atravessando a membrana plasmtica como os hormnios esterides para encontrar o seu receptor dentro da clula. 5. Os hormnios esto envolvidos no metabolismo em dois nveis: induo ou represso gnica de determinadas enzimas ou atravs da modificao covalente: A fosforilao mediada pelas protenas quinases que transferem o grupo fosfato do ATP para resduos especficos de serina, treonina e tirosina, formando uma ligao ster fosfrico ou a retirada do grupo fosfato catalisada pela ao de fosfoprotenas fosfatases atravs da hidrlise. 6. A ligao de adrenalina ao receptor -adrenrgico acoplado a protena G ativa a enzima adenilato ciclase atravs da ativao da subunidade (por ligao de GTP), presente na face interna da membrana citoplasmtica, qual ativa a adenilato ciclase, catalisando a formao de cAMP a partir de ATP e desencadeando a transduo de sinal. A descoberta de cAMP, por Sutherland e colaboradores h cerca de 40 anos, levou criao do conceito do segundo mensageiro da ao hormonal, sendo cAMP o primeiro a ser descrito, e permitiu dar incio progressiva compreenso dos mecanismos de ao do receptor de adrenalina. Devemos lembrar que os primeiros mensageiros qumicos extracelulares so os hormnios. cAMP tem efeito transiente e hidrolisada pela ao da fosfodiesterase. Na clula, o balano entre as reaes de sntese (a) e degradao (b) regula a concentrao intracelular do cAMP.

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a) ATP + H2O cAMP + 2 Pi; catalisada pela adenilato ciclase b) cAMP + H2O AMP; catalisada pela fosfodiesterase. 7. A base da ao metablica do cAMP a ativao alostrica de uma quinase cujos substratos so protenas, sendo conhecida como protena quinase dependente de cAMP, ou simplesmente PKA (Protein Kinase dependent on cAMP). A PKA, uma vez ativada, catalisa a fosforilao ativadora (modificao covalente) de uma cascata de protenas quinases que terminam na fosforilao da fosforilase a e da sintase do glicognio, causando, respectivamente, a ativao e a inativao dessas enzimas. O resultado final dessa seqncia de ativaes enzimticas, com alternncia de regulao alostrica e modificao covalente, a fosforlise do glicognio liberando glicose-1P, comandada por sinais hormonais extracelulares. 8. Os efeitos de ativao ou no da via dependem do receptor ativado, no caso dos receptores adrenrgicos, os efeitos de 1 so mediados atravs dos ons clcio e e a ativao de 2 leva a inibio da via de adenilato ciclase. H casos aonde a protena G do tipo Gs sendo ativadora de adenilato ciclase e do tipo GR inibindo a adenilato ciclase. Algumas toxinas podem ativar ou bloquear a via de transduo de sinal: toxina da clera e a toxina da coqueluche. 9. Dois hormnios so os principais responsveis pelo equilbrio da concentrao da glicose circulante: glucagon e insulina. 10. O glucagon um hormnio que tem efeitos equivalentes aos da adrenalina no controle do metabolismo do glicognio: possui um receptor da famlia dos receptores acoplados a protenaG e ativa a cascata que se inicia com cAMP/PKA. Este liberado em condies de hipoglicemia ativando processos degradativos para manuteno da glicemia sangunea. A PKA (protena quinase ativada por cAMP) fosforila a fosforilase quinase tornando-a ativa. A fosforilase quinase fosforila agora glicognio fosforilase. A glicognio fosforilase ativada (quando fosforilada, glicognio fosforilase b a) catalisa a hidrlise de resduos de glicose do glicognio liberando grupos de glicose-1-fosfato. No mesmo tempo, a fosforilase quinase, ativada pela cascata do receptor de glucagon-protena-G, cAMP/PKA, fosforila a glicognio sintase, a qual se torna inativa quando fosforilada (sntase I sintase D). 11. A insulina tem efeito oposto, promove a absoro de glicose pelo fgado e msculos e usa deposio nas reservas de glicognio. Mas importante notar que a insulina tem mecanismos de ao totalmente diferentes da adrenalina e do glucagon. Os receptores de insulina no pertencem famlia dos receptores acoplados a protena-G e no tm ao sobre a adenilato ciclase. Seus receptores so do grupo de receptores cujo domnio intracelular apresenta atividade intrnseca de protena-quinase de tirosina. A insulina estimula fosfoprotenas fosfatases. Para reverter a ao do glucagon, a insulina promove a ativao da fosfoprotena fosfatase que catalisa a desfosforilao da glicognio fosforilase e da glicognio sintase, levando a inativao da primeira (fosforilase a b) e ativao da segunda (sntase D sintase I). Desta forma o fluxo glicoseglicognio favorecido. O transporte da glicose no interior das clulas

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com a atuao da insulina um processo passivo mediado por uma famlia de permeases denominadas GLUT (glucose transporter). 12. Respostas celulares rpidas desencadeadas por hormnios s podem ser obtidas atravs da ativao, ou da inibio, de enzimas pr-existentes. Hormnios esterides (por exemplo cortisol) quando secretados difundem-se pela membrana citoplasmtica e ligam-se ao seus receptores intracelulares os quais, quando ativados, promovem no ncleo a regulao do metabolismo pela induo da transcrio de genes que codificam enzimas especficas, levando sntese de novo das protenas correspondentes, fenmeno conhecido como induo enzimtica. Mas o mecanismo de induo enzimtica desencadeado por hormnios resulta necessariamente numa resposta celular lenta, uma vez que os RNAs mensageiros (mRNAs) precisam ser transcritos, processados, transportados para o citoplasma e protenas enzimticas exigidas. 13. A adrenalina estimula uma resposta local no msculo. A liberao de adrenalina induzida por estmulo nervoso autnomo em situaes de perigo, exerccio fsico, e hipoglicemia e induz a degradao do glicognio com os fins de fornecer glicose-1-fosfato como fonte de energia para atividades musculares que permitem ao animal reagir a estas situaes. 14. Regulao da gliclise e gliconeognese. A gliclise uma das vias metablicas principais para o fornecimento de energia. No fgado, encontra-se tambm a gliconeognese, a qual , de forma geral, uma via antagnica da gliclise. A regulao das duas vias feita de forma reciproca, isto , quando uma delas est ativa, a outra est inibida. H trs vias sob controle metablico: as converses reversveis de: (i) glicose para glicose-6-fosfato (hexoquinase e glicose-6-fosfatase); (ii) frutose-6-fosfato e frutose-1,6-bisfosfato (fosfofrutoquinase e frutose-1,6-bisfosfatase; e (iii) fosfoenolpiruvato e piruvato (piruvato quinase e fosfoenolpiruvato carboxiquinase, piruvato carboxilase). A fosfofrutoquinase o principal ponto de regulao da gliclise. AMP e frutose2,6-bisfosfato agem como efetuadores alostricos positivos. A formao de frutose-2,6-bisfosfato est sob controle hormonal. Em condies de hipoglicemia, o glucagon estimula a produo de cAMP no fgado. Isso ativa a PKA a fosforilar e inativar a fosfofrutoquinase e ativar a frutosebisfosfatase-2, diminuindo a concentrao de frutose-2,6-bisfosfatase. Como resultado, o equilbrio entre as reaes de fosfofrutoquinase alterado, em favor da sntese de frutose-6fosfato, aumentado o fluxo gliconeognico e a sntese de glicose-6-fosfato. Ao contrrio, em condies de hiperglicemia, as concentraes de cAMP diminuram, e o conseqente aumento de frutose-2,6-bisfosfato ativa a fosfofrutoquinase e promove a gliclise. finalmente traduzidos para produzir as

Diabetes: 1. A doena diabetes mellitus causada por uma deficincia na produo ou ao da insulina, levando a exacerbao dos efeitos metablicos do glucagon. Como a insulina no secretada em quantidades suficientes ou seus receptores se tornam menos sensveis a ativao, a via intracelular de transduo de sinal induzida por insulina no ativada. Consequentemente, a disfuno da

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transduo de sinal induzida por insulina torna os nveis de glicose sangunea to elevadas que a glicose tambm transborda para urina, fornecendo um teste diagnostico para doena. 2. A estimulao por glucagon qual no tem contrabalana pela insulina leva a degradao de triacilglicerol, de cidos graxos e do glicognio como tambm a elevao de gliconeognese e inibio da entrada de glicose nas clulas. Como efeito da inibio de entrada de glicose nas clulas, essas praticamente morrem de fome. 3. O metabolismo acelerado de glicose e cidos graxos como tambm o aumento da gliconogenese resulta na elevao da formao de corpos cetnicos (formado a partir de acetil CoA) no sangue. A acumulao de corpos cetnicos acidifica o pH sanguineo. A eliminao dos prtons em excesso leva tambm a excreo de outros ons causa hidratao grave e reduo do volume sanguneo. 4. Existem duas formas de Diabetes mellitus: -Diabete dependente da insulina causada por uma deficincia das clulas b pancreticas em produzir insulina. -Diabete no dependente da insulina causada por uma deficincia dos receptores de insulina. A escassez dos receptores de insulina pode resultar da presena continua de altas concentraes de insulina baseada em predisposio gentica ou superalimentao. A continua superproduo de insulina pode inibir a sntese e/ou induzir a dessensibilizao dos seus receptores (fazendo-os menos sensvel a estimulao por insulina).

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TRANSDUO DE SINAIS 1) 2) As clulas precisam responder ao seu ambiente, recebendo, processando e respondendo a De modo geral, a transduo de sinais envolve um sinal, tambm denominado como

sinais externos. primeiro mensageiro, reconhecido por um receptor, convertido em outros sinais qumicos intracelulares (transduo por mensageiros secundrios), que podem sofrer passos de amplificao, e finalmente geram uma ou mais respostas. A maioria dos sinalizadores extracelulares no capaz de atravessar a membrana plasmtica, e requer um receptor associado membrana para transmitir o sinal para o ambiente intracelular. 3) A associao receptor-ligante leva a alterao da estrutura do receptor, induzindo a atividade

de enzimas as quais catalisam a sntese de mensageiros secundrios como cAMP, cGMP, inositol-3,4,5-trifosfato ou levam ao aumento das concentraes intracelulares de Ca2+. Os mensageiros secundrios permitem tanto a difuso do sinal para vrios ambientes intracelulares quanto a amplificao do sinal. Muitos mensageiros secundrios agem ativando protenas quinases, que transferem grupos fosforila do ATP para resduos especficos de serina, treonina e tirosina proticos, promovendo alterao de estrutura e funo de enzimas. Protenas fosfatases fosfatases atuam em sentido contrrio. 4) Um exemplo de resposta que envolve segundo mensageiro e fosforilao protica promovida por receptores de sete hlices transmembranares, responsveis pela transmisso de uma variedade de sinais. So compostos por um nico polipeptdeo que atravessa a membrana sete vezes. A ligao do receptor com o ligante induz mudana conformacional induzindo a transduo de sinal. Como primeiro passo h ativao da protena G associada ao receptor. Na sua forma inativa, a protena G um heterotrmero que liga GDP na sua subunidade , e a interao com o receptor ativado induz a substituio de GDP por GTP e dissociao da subunidade das subunidades e . Existem subtipos de subunidade G. A subunidade Gs, associado ao receptor de adrenalina, ativa a adenilato ciclase interagindo com a superfcie que anteriormente se ligava s outras subunidades da protena G. Esta interao ativa a adenilato ciclase, que passa a sintetizar mais AMPc. A subunidade Gi possui atividade contrria, inibindo a adenilato ciclase e produo de AMPc. A atividade da G continua at que a sua atividade intrnseca GTPsica degrada o GTP e leva-a a se associar de novo com as outras subunidades da protena G. O AMPc pode afetar mltiplos processos celulares atravs da ativao da protena quinase A, que catalisa a fosforilao de diversas protenas. Como exemplos, promove a ativao da glicogenlise e inibio da sntese de glicognio por fosfoforilao da glicognio fosforilase e sintase, respectivamente. 5) Receptores acoplados a protena Gq podem agir tambm atravs da cascata do inositol trifosfato (IP3). O IP3 formado, aem do diacilglicerol, a partir da clivagem do fosfatidilinositol bifosfato, presente nas membranas celulares, pela fosfolipase C- ativada pelas subunidades da protena

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Gq. O IP3 formado difunde pela clula e causa liberao de Ca2+ do retculo endoplasmtico. A concentrao elevada de Ca2+ citoslica ento promove uma srie de respostas como, por exemplo, contrao muscular, quebra de glicognio ou secreo. Alm de gerar IP3, o

diacilglicerol produzido pela atividade enzimtica da fosfolipase C- age como segundo mensageiro. O diacilglicerol se liga e ativa protena quinase C, a qual fosforila serinas e treoninas em protenas alvo, como, por exemplo, canais de Ca2+ na membrana citoplasmtica, ativando-os. 6) O on Ca2+ um importante secundo messangeiro com atividade regulatria sobre muitas protenas incluindo protena quinases e fosfatases, as quais, quando ativadas por ligao de Ca2+ fosforilam ou desfosforilam demais protenas. A concentrao mdia de Ca2+ citoslico livre [Ca2+]i em torno de 10 - 100 nM, enquanto a concentrao extracelular na faixa de 2 milimolar. Contudo, o clcio tambm acumulado em alguns compartimentos intracelulares como, por exemplo, no reticulo endoplasmtico. Entrentanto, a ativao de receptores de hormnios ou de canais inicos levam a alterao de [Ca2+]i no citossol. Tipicamente h aumento transiente de [Ca2+]i como resultado do estimulao da clula pelo hormnio ou neurotransmissor. Entranto, o influxo de clcio pelos canais localizados na membrana como tambm a mobilizao de estoques de clcio intracelulares podem contribuir para alteraes de [Ca2+]i. Uma via para liberao de Ca2+ a partir de estoques no retculo endoplasmtico (RE) fica ativada com a sntese de IP3, o qual se liga nos seus receptores no RE, resultando na abertura de canais de Ca2+ localizados na membrana do RE. H vrios mecanismos que mantm a concentrao citoslica de Ca2+ baixa e contribuem para as caractersticas transientes de elevaes de [Ca2+]i, incluindo ATPases na membrana plasmtica e retculo sarco(endo)plasmtico, o trocador Na+/Ca2+ da membrana plasmtica e o uniporter de Ca2+ mitocondrial. 7. Ao contrrio de receptores acoplados a protena G, receptores de neurotransmissores, tambm denominados canais inicos ativados na presena do ligante, diretamente permitem o fluxo de ons pela membrana citoplasmtica. Quando ativados, os receptores sofrem uma mudana estrutural, resultando na formao de um poro e permitindo o fluxo inico. 8. Receptores com atividade enzimtica intrnseca, como tirosina quinases e fosfatases, representam uma nica ala transmembrnica e possuem dois domnios: o receptor, voltado para o lado externo da membrana e a poro com atividade enzimtica, a enzima efetuadora, voltada para o citoplasma. Os receptores, quando ativos por ligao dos seus ligantes, exercem as suas atividades catalticas de fosforilao e desfosforilao e iniciam a transduo de sinal. Em alguns casos, a ligao do ligante provoca a dimerizao do receptor e, em outros casos, como o receptor de insulina, o receptor j est dimerizado na ausncia do ligante. Existe ainda um terceiro caso em que a protena receptora e a enzima efetuadora so entidades fsicas separadas. A ativao do receptor leva a dimerizao das suas subunidades e subsequentemente a interao

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com uma tirosina quinase citosolica. Essa tirosina quinase ativada pela interao com o receptor fosforila protenas alvo e d inicio a transduo de sinal. 9. Hormnios lipoflicos esterides e tireoidianos no possuem receptores na superfcie celular. Estes hormnios esterides e tireoidianos penetram facilmente na clula atravs da membrana celular e encontram seus receptores proticos no interior do citoplasma ou ncleo. Na forma de complexo com protenas, eles adentram o ncleo para promover sntese especfica de mRNA de enzimas regulatrias. Entretanto, a ao de hormnios esterides, como, por exemplo, a cortisona, lenta, uma vez que regula a sntese de protenas Por outro lado, a transduo de sinal induzida por receptores acoplados a protena G, tirosina quinases e fosfatases rpida, pois leva a regulao imediata da atividade de protenas alvo por fosforilao e desfosforilao. 10. A transduo de sinal, coordenada por uma rede imensa de diferentes receptores e seus ligantes, controla as atividade de protenas chave no metabolismo, e responda a estmulos do ambiente onde o organismo se encontra. A transduo de sinal tambm direciona o desenvolvimento do organismo e tambm envolvido em condies fisiopatolgicos como cncer. Grupo de discusso 29 1) Compare a ao hormonal de glucagon / insulina com cortisona na regulaao da gliconeogense. 2) Identifique as diferenas na transduao de sinal por glucagon e insulina, levando a sntese e degradao do glicognio. 3) A toxina do clera permanentemente ativa a subunidade Gs enquanto a toxina pertussis leva a inibio da subunidade Gi. Quais so as conseqncias imediatas sobre a concentrao de adenilato ciclase e o que voc espera referente a formao de AMPc na presena de um inibidor de fosfoesterase? 4) Efeitos diferentes podem ser induzidos pelas vias idnticas de transduo de sinal, como, por exemplo, a produo de inositol-trifosfato levando a mobilizao de clcio intracelular, levando a vasodilatao quando clulas foram ativadas pelo peptdeo A e a vasoconstrio quando estimuladas pelo peptdeo B. Explique como isso possvel? 5) Clcio um messageiro importante e a concentrao citoslica de clcio fica elevada durante a sinalizao por hormnios e neurotransmissores. Explique como a clula consegue abaixar a concentrao de clcio citoslico aps o estmulo. 6) Na juno neuro-muscular occore elevao da concentrao citosolica de clcio por ativao com acetilcolina. Explique a via de sinalizao e o mecanismo da regulao de troponina e tropomiosina, levando a contrao muscular.

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cidos Nuclicos
Conforme j bem estabelecido estes polmeros (polieletrlitos) so constitudos por um corrimo que consiste de riboses e deoxiriboses grupo fosfato, e pendente `a estes encontram-se as bases pricas e pirimidnicas. Nos RNAs estas bases so C, T, A e U j nos DNAs as bases so C, T, A e G. 1) A estrutura do DNA de dupla fita e do RNA fita simples.

2) Nucleosdeos so denominados os dmeros de purinas ou pirimidinas aos acares ribose e deoxiribose (deoxinucleosdeo).

3) Nucleotdeos (deoxinucleotdeos) so ster de fosfato de nucleosdeos (deoxinucleosdeos). 4) A fita de DNA em -hlice apresenta as denominadas cavernas (grooves) maior e menor. Stios estes de ligao de molculas.

5) as bases constituem espcies de degraus, sendo as interaes entre T-A estabilizada por 2 pontes de H e C-G por trs pontes.

6) O teor de CG e AT determina a temperatura de fuso das cadeias ie a temperatura de separao das cadeias. Esta temperatura acorre abruptamente.

7) O DNA encontra-se altamente enovelado no ncleo da clula.

8) O fenmeno de hipercromismo ajuda detectar a temperatura de melting das cadeias e permite fazer a hibridizao de cadeias.

9) Molculas de DNA so extremamente longas e frgeis. A simples sonicao leva fragmentao em vrias sub partculas. Exerccios 7 1) Esboce as estruturas do DNA e do RNA.

2) Por que a molcula do DNA tem a funo desoxy enquanto o RNA oxy?

3) Como deve ser a viscosidade de solues de DNA enovelado e aps a fuso?

4) Qual deve ser o efeito de sais na questo 3?

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5) Considerando seja um DNA linear ou circular como possvel enovelar o DNA em tal dimenses?

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