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CIENCIAS BSICAS PUERTO MONTT

GUA LABORATORIOS BIOLOGA CELULAR 1 SEMESTRE 2012 PUERTO MONTT

UNIVERSIDAD SANTO TOMAS Departamento de Ciencias Bsicas Biologa Celular

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Normas de laboratorio
Normas para el trabajo en el Laboratorio Actividades prcticas: Se realizarn actividades prcticas y seminarios. Ambos tipos de actividades tendrn una duracin de cuatro mdulos. Asistencia: La asistencia mnima (entre actividades prcticas y seminarios) debe ser igual o superior a un 90%. En el caso de una asistencia inferior al 90%, el alumno queda en situacin de reprobar la asignatura conforme a lo que indica el Reglamento Acadmico. La ausencia a un prctico (o seminario) implica la obtencin de la nota mnima (1,0) en la prueba. Presentacin personal y conducta en el laboratorio: El alumno debe presentarse: 1. Puntualmente a la actividad. No se permitir el ingreso de estudiantes a la actividad despus de 10 minutos de iniciada sta.

2.

Con delantal, pelo tomado (si corresponde) y zapato cerrado, para proteger la ropa y el cuerpo en caso de accidente. Asimismo, debe evitarse el uso de accesorios (anillos, pulseras u otros) que puedan enredarse o limitar la manipulacin de los instrumentos y material de laboratorio. No se permitir el ingreso de estudiantes a la actividad si no cumple con estas medidas. Cada estudiante debe ingresar al laboratorio con su Gua del Laboratorio, de modo que pueda desarrollar la actividad sin entorpecer el trabajo de los dems: el estudiante responsable tiene derecho a trabajar tranquilo. La falta reiterada de este material puede ser motivo de una evaluacin mnima (1,0). En el laboratorio slo se permitir el uso de cuaderno, lpices, calculadora, guas y libros de apoyo. Las mochilas y bolsos deben guardarse en los sectores destinados para tal fin. El estudiante debe evitar situaciones de riesgo, como correr y jugar en el laboratorio. Si el estudiante requiere salir del laboratorio, debe informarle al profesor. Una ausencia prolongada y sin informar puede y debe ser considerada como inasistencia.
En el transcurso del prctico NO est permitido el uso de aparatos de audio, telfonos celulares, ni el consumo de ningn tipo de bebida o comida (INCLUIDO EL CHICLE). Tampoco est permitido FUMAR. El profesor puede solicitar al estudiante que abandone el laboratorio si no cumple con esta norma, quedando ausente de la actividad. No existe la posibilidad de apelar a esta sancin, pues el estudiante debe aprender las normas mnimas de comportamiento en un laboratorio.

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Evaluaciones: Las evaluaciones del laboratorio corresponden al 20% de la nota final de ctedra. Como parte de la evaluacin de la actividad, los alumnos debern rendir pruebas por cada actividad. Aquel alumno que no rinda una prueba, ser calificado con nota 1,0 (uno coma cero). Normas de Seguridad en el Laboratorio

Normas de Utilizacin de Productos Qumicos

1. Antes de utilizar un compuesto, leer el rtulo para asegurarse de que es el correcto. 2. Como regla general, utilizar slo los reactivos dispuestos en los mesones de trabajo. No
manipular otros reactivos. 3. Al preparar cualquier disolucin sta debe ser dispuesta en un frasco limpio y rotulado convenientemente.

4. Nunca devolver los sobrantes de los reactivos utilizados a los frascos de origen sin consultar
con el profesor.

5. Al eliminar los productos qumicos de desecho en la pila de desage, es importante dejar circular
abundante agua, aunque stos estn debidamente neutralizados.

6. Los cidos requieren un cuidado especial. Al diluirlos, nunca se debe agregar agua sobre ellos;
siempre se debe agregar el cido sobre agua.

7. Los productos qumicos inflamables (gases, alcohol, ter, etc) no deben estar cerca de
fuentes de calor. Si hay que calentar tubos con estos productos, se har al bao Mara, nunca directamente a la llama. 8. No tocar los productos qumicos con las manos ni con la boca. As mismo, debe evitarse exponerse a sus vapores.

9. No pipetear reactivos con la boca. Utilizar la bomba manual, una propipeta, jeringuilla o
artilugio que se disponga para ello.

10.

Si, por accidente se vierte sobre cualquier cido o producto corrosivo sobre usted, lvese inmediatamente con abundante agua y avise al profesor.

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Normas de Utilizacin de Vidrio 1. Cuidado con los bordes y puntas cortantes de los tubos u objetos de vidrio.

2. El vidrio caliente no se diferencia a simple vista del vidrio fro. Para evitar quemaduras,
deje enfriar antes de tocarlo. 3. Las manos deben protegerse con guantes o trapos cuando se introduzca un tapn en un tubo de vidrio. 4. Al calentar a la llama el contenido de un tubo de ensayo, observe cuidadosamente estas dos normas:
Proceda con mucho cuidado y tenga en cuenta que la boca del tubo de ensayo no apunte a

ningn compaero: el lquido puede hervir proyectndose hacia su entorno, ocasionando un accidente.

Caliente el tubo de ensayo por el costado, nunca por el fondo; agite suavemente.

Normas de Utilizacin de Balanzas 1. Cuando se determinan masas de productos qumicos, debe colocarse un papel de filtro sobre los platos de la balanza. Si el producto fuera corrosivo, se utilizar un vidrio de reloj. 2. La balanza debe estar dispuesta en un mueble aislado para evitar cualquier perturbacin que conduzca a un error, como vibraciones (debidas a golpes o a aparatos en funcionamiento). Asimismo, procure no soplar sobre los platos de la balanza para evitar lecturas errneas. Preparacin de Informes de Laboratorio I. En el Laboratorio. La preparacin de un informe de laboratorio comienza en el mismo laboratorio (realizando medidas, registrando datos, etc.). A continuacin se presentan una serie de consejos que ayudaran a un trabajo provechoso en el laboratorio: 1. 2. 3. 4. 5. 6. Emplear un cuaderno de laboratorio exclusivo para la asignatura. Leer y analizar la gua del prctico antes de ingresar al laboratorio. Usar tablas identificadas claramente para el registro de datos. Escuchar atentamente y tomar nota de las instrucciones dadas por el profesor. Registrar metodologas, observaciones, materiales y reactivos usados en el prctico. Chequear resultados con el profesor.

Los informes debern constar de las siguientes secciones: 1- En la primera pgina o portada

Ttulo de la experiencia (NO nmero del informe o trabajo prctico!!)


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Nombre de la Institucin (Universidad Santo Toms) Autores, los alumnos, en orden alfabtico de acuerdo a su apellido Profesor del prctico Curso o seccin y carrera Fecha de realizacin del prctico (NO fecha de entrega) 2- Tabla de Contenidos (Extensin mxima 1 pgina) Debe indicar cada una de las secciones contenidas en el informe, indicando el nmero de la pgina donde comienza dicha seccin, no todas las pginas que abarca la seccin. 3- Introduccin (Extensin mxima 1 pgina) Descripcin de los antecedentes tericos del tema abordado en la experiencia. Deber comenzar explicando en trminos generales, qu se hizo y para qu se hizo, no confundir con una descripcin del procedimiento experimental (cmo se hizo). Se realiza a partir de una visin general hasta llegar al tema particular y finalmente se definen los objetivos. Se debe explicar, es decir, fundamentar, la eleccin de cada metodologa y tcnicas utilizadas en la experiencia. Adems, en la introduccin se comentar brevemente los resultados que se espera obtener con su respectiva fundamentacin conceptual. Es importante tambin incluir en la introduccin una aplicacin o contextualizacin prctica de las tcnicas abordadas de acuerdo a la carrera que se estudia. Muchas veces, en la introduccin se presenta la terminologa a utilizar, con sus respectivas abreviaturas, que sern utilizadas en el resto del informe. Ejemplo: Si se utiliza el cido acetilsaliclico, se mencionar su nombre completo la primera vez, seguido de su acrnimo entre parntesis (AAS), el cual ser el modo de referirse a este cido en los prrafos posteriores. Siempre deben utilizar correctas reglas gramaticales y ortogrficas en la elaboracin de un informe. Para la introduccin la forma gramatical correcta es: 3 persona impersonal, presente. 4- Objetivos Definicin clara de la motivacin de la experiencia. Objetivo: Punto que se pretende alcanzar como resultado de una operacin o procedimiento experimental. (Definicin segn la Real Academia de la Lengua Espaola). Puede ser expresado en texto o en frases puntuales a modo de lista. 5- Procedimiento Experimental (Extensin mxima 2 pginas) Esta seccin debe incluir una descripcin de materiales y reactivos, junto con las metodologas empleadas en el prctico. a) Materiales y Reactivos:

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Se deben ordenar y citar por separado los materiales, reactivos y equipos utilizados. Los materiales deben ordenarse en una lista que indique para cada uno de ellos, la cantidad necesaria, el nombre completo del material y su tamao y/o volumen. Ej: 3 Pipetas aforadas de 10 mL ( y no: - pipetas) Los reactivos deben citarse por frmula, nomenclatura y concentracin ente parntesis (si es que se conoce previamente). Ej: NaCl, cloruro de sodio. (aqu no es pertinente indicar concentracin) HCl, cido clorhdrico (0,1 M) BaCl2, cloruro de bario (10% p/v)

Los equipos utilizados, deben ser citados indicando su marca y modelo. Ej: Bao termoregulado con agitacin (Julabo, SW22)

b) Procedimiento Adems, en esta seccin se detallar el procedimiento utilizado en forma de flujograma o mapa conceptual. Ej: S, Se agreg 20 ml de tampn citrato sdico (0,15 M, pH = 5,0) a 10 ml de la muestra problema y se centrifug durante 10 min a 300 rpm (marca y modelo de la centrfuga); Obviamente no es necesario decir que centrifug en una centrfuga!
20 ml Tampn Citrato sdico 10 ml Muestra Problema

Centrifugacin 300 rpm x 10 min

Si una solucin de un reactivo determinado se agreg con una pipeta de marca X y capacidad Y, eso NO DEBE ser detallado, en el diagrama, pues es obvio que dicho volumen se tom con el instrumento apropiado (previamente mencionado en materiales y reactivos). Tampoco es relevante mencionar si el tubo en el que se realiz un determinado ensayo era de plstico, vidrio, tefln, etc. o si su capacidad era tal o cual. Ni debe indicar que los materiales fueron previamente lavados, pues se asume que siempre debe ser as.

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Se trata de informar ordenada, precisa y lo ms brevemente posible, el procedimiento o tcnicas realizadas, los reactivos, soluciones o elementos utilizados, de modo que la experiencia se comprenda paso a paso y pueda ser reproducida por otra persona. La forma gramatical correcta es: INFINITIVO. Nunca debe utilizar imperativos, ya que el procedimiento no es una orden, ni tampoco pretritos (pasado), pues es Ud. quien ya realiz la experiencia no quien lee su informe. 6- Resultados (Extensin mxima 1 pgina) Presentacin de los resultados obtenidos, en la forma de tablas y/o grficos, que deben ser numerados secuencialmente con un nmero de figura en el caso de grficos. Deben identificarse claramente las variables contenidas en el grfico o tabla, con las unidades correspondientes entre parntesis. Los grficos adems deben exponer claramente variables asignadas a cada eje, escalas, puntos experimentales e identificacin de curvas. En esta parte del informe se exponen los resultados y observaciones obtenidas mediante: Dibujos, fotografas, tablas, grficos u otros. Cada uno de ellos debe llevar su TTULO y NMERO (consecutivo) respectivo. SOBRE cada figura (incluidos grficos) y mediante flechas, letras o como sea ms claro, sealar y destacar los detalles relevantes (bandas, tamaos, masas moleculares), a las que se har una breve referencia en un texto al pie de cada figura. Tablas, con una breve descripcin en texto (con su nmero respectivo), que seale las tendencias observadas. Grficos, cuyo ttulo NO DEBE SER A versus B. Los grficos deben estar correctamente construidos, se debe detallar el nombre de las variables independiente y dependiente con sus respectivas unidades entre parntesis. Breves descripciones de lo observado

Puesto que el espacio es limitado, NO DEBE REPETIRSE la informacin en tablas (numricas) y grficos; se optar por aquella expresin que sea ms clara y contenga mayor informacin (generalmente ello corresponde a grficos). SLO se debe incluir figuras, tablas y grficos a los cuales se haga alusin en el texto. La forma gramatical correcta es: 3 persona impersonal, pasado. 7- Discusin (Extensin mxima 2 pginas) Este es el captulo MS IMPORTANTE del informe. La primera frase de la discusin es la verbalizacin del resultado ms relevante obtenido. Luego, se discutirn los resultados en detalle de acuerdo con los antecedentes tericos, fundamentacin de la experiencia, objetivos e hiptesis planteados en la introduccin. Aqu tambin se discutirn las eventuales discrepancias respecto de los resultados esperados, en caso que las hubiera. Se propondrn las razones, tanto de orden metodolgico como conceptual, que podran explicar tales discrepancias.

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Se analizaran los resultados haciendo referencia a la tabla o grafico de dicha seccin (ej. Segn lo observado en el grafico n 3, la adicin de x mol de NaOH demuestra que .) La forma gramatical correcta es: 3 persona impersonal presente y participio, a partir del ejemplo anterior: Segn lo observado (participio) en el grfico n 3, la adicin de x mol de NaOH demuestra (3 persona impersonal, presente) que.. 8- Conclusiones (Extensin mxima 1 pgina) El trabajo prctico cumpli los objetivos propuestos? En caso contrario, plantear observaciones o sugerencias orientadas a alcanzar los objetivos propuestos. Se debe concluir sobre el desarrollo del laboratorio, los resultados obtenidos y el anlisis de los mismos. Es la parte ms importante de la investigacin y resume lo ms sobresaliente del tema investigado, lo que permite percibir si el alumno realmente comprendi y asimil los contenidos desarrollados. Por consiguiente, las conclusiones corresponden a un conjunto de explicaciones breves extradas del anlisis y que son verdades obtenidas a partir de sus resultados. Ejemplo: En base a los resultados de los ensayos de destilacin y la teora de las presiones parciales de vapor se puede concluir: 1. Una destilacin fraccionada es equivalente a una secuencia de destilaciones simples y por lo tanto es un proceso mucho ms eficiente. 2. Una buena destilacin depende de la diferencia en los puntos de ebullicin de los componentes. En una mezcla binaria, se puede usar la destilacin simple si la diferencia en los puntos de ebullicin es de 80 C o ms. Para mezclas en las cuales hay una diferencia entre puntos de ebullicin en el rango de 25-80 C, se debe utilizar la destilacin fraccionada. 3. La presin total del sistema corresponder a la suma de las presiones de vapor de los componentes de la mezcla orgnica y del agua, sin embargo, si la mezcla a destilar es un hidrocarburo con algn aceite, la presin de vapor del aceite al ser muy pequea se considera despreciable para efecto de los clculos. La forma gramatical correcta es: 3 persona impersonal presente. 9. Referencias (no Bibliografa) (Extensin mxima 1 pgina) Listado de citas utilizadas durante la elaboracin del informe. No deben aparecer textos o artculos cientficos que no sean mencionados en el texto del informe. Las pginas web no deben ser utilizadas. Las citas en el texto, pueden hacerse a travs de nmeros consecutivos, de acuerdo al orden en que se vayan utilizando, poniendo los nmeros entre parntesis. En la seccin referencias, tambin de manera consecutiva, se debe escribir el nmero y la referencia correctamente. Si una misma referencia se cita varias veces, debe tener siempre el mismo nmero, que se repetir, en el texto, tantas veces como se utilice esa referencia.
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En esta seccin, el listado de las referencias se hace en orden consecutivo, de acuerdo a la numeracin que se les ha dado en el texto. Si se ha optado por el apellido de los autores, las referencias se harn en orden alfabtico segn el apellido del primer autor del trabajo. TODOS los autores de cada trabajo, libro o referencia consultada deben aparecer, figurando primero su apellido y luego las iniciales de su(s) nombre(s). Hay varias normas para escribir correctamente las referencias. La transcripcin de los nombres propios completos de los autores es un error frecuentemente cometido por los estudiantes: trate de no repetirlo y slo escriba las iniciales de estos nombres. Ejemplos: Para un artculo cientfico:

(1) Fagan, T., Morse, D. y Hastings, J.W. 1999. Circadian synthesis of a nuclear-encoded chloroplast glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase in the dinoflagellate Gonyaulax polyedra is translationally controlled. Biochemistry. 38: 7689-7695. En el texto se debiera citar el nmero entre parntesis (en este caso: 1 si es la primera cita) o si no, como (Fagan y cols., 1999) y en las referencias, de acuerdo al orden alfabtico de los apellidos de los autores, ira en la F y NO tendra nmero. Este artculo, fue publicado en 1999, en el volumen 38 de la revista Biochemistry, entre las pginas 7689 y 7695. Para un libro:

Futuyma, D.J. Evolutionary Biology. 2 Ed. Sinauer Associates Inc. Publishers (Sunderland, MA). 1986. pp. 660. Chang, Raymond. Qumica. Sptima Edicin. Mxico. Ed. McGraw-Hill. 2002. pp. 267-271. Al utilizar figuras y grficos disponibles en textos o pginas web, es necesario indicar la fuente al pie del esquema de manera resumida (ej: tomado de Vogel, A. Organic Chemistry, 3 Edicin). No olvidar, en la seccin 6, detallar esta referencia. 10- Anexos Incluir en sta seccin memorias de clculo, tablas anexas, etc. TODOS LOS ANEXOS DEBEN SER CITADOS EN EL CUERPO PRINCIPAL DEL INFORME, por ejemplo: (detalles en Anexo 1) Extensin mxima del informe 10 pginas, si excede el mximo permitido no se corregirn.

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Material elemental de laboratorio: caractersticas y manejo


Aparato de vidrio para la medida de volmenes variables de lquidos. Se emplea para valoraciones, debiendo evitarse lquidos que puedan deteriorar el vidrio. La llave se utiliza el caudal de salida. En su manejo es preciso tener en cuenta las siguientes precauciones: los deben hallarse a la temperatura ambiente, en ningn caso deben verterse lquidos calientes; entre la llave y la boca de salida debe hallarse completamente llena de lquido, sin burbujas, el de hacerse tomando como indicador la parte baja del menisco, si bien algunas buretas poseen denominada de Schellbach, como auxiliar de lectura; el lquido no debe evacuarse demasiado evitar un exceso adherido a las paredes. La precisin de una bureta de 50 mL es de 0,1 mL.

eta.-

regular dos zona se ha franja, isa para

tipo

Embudo cnico de vidrio.- Se emplea para trasvasar lquidos y para filtrar, en cuyo caso se le adapta un cono hecho con papel de filtro. En ocasiones puede utilizarse otro de material filtrante, tal como lana de vidrio.

Matraz Erlenmeyer.- Matraz troncocnico de vidrio que permite disolver solutos y calentar. En las valoraciones suele ser el recipiente sobre el cual se vierte la disolucin contenida en la bureta.

Frasco lavador.- Recipiente de plstico, til para contener agua desmineralizada o disoluciones que no reaccionen con el material del cual est cons1roido. Presionando ligeramente con los dedos en forma de pinza, se controla con facilidad el caudal de salida. El frasco slo debe abrirse para llenarse.

Gradilla.- Es una pieza metlica de madera con taladros, en los cuales pueden alojarse tubos de ensayos.

Vidrio de reloj.- Se trata de una lmina de vidrio de forma cncava-convexa, til, entre otras aplicaciones, para pesar slidos, bien recogerlos hmedos y pesarlos despus de haber llevado a cabo una filtracin. Matraz aforado.- Es un recipiente de vidrio para medir volmenes fijos con gran precisin. Slo posee un enrase o aforo, calibrado a la temperatura estndar. No debe calentarse, ni verterse en l lquidos calientes. Cuando se prepara una disolucin de un slido, se introduce la cantidad pesada adecuada y se disuelve en una porcin del disolvente por agitacin. Finalmente, se enrasa por adicin de la cantidad restante de disolvente hasta la seal del aforo. Si la reaccin de disolucin es apreciablemente
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exotrmica, debe disolverse el soluto previamente en un vaso de precipitado y aguardar antes del enrase a que la temperatura se iguale con la ambiente. Pipeta graduada.- Sirve para precisin. Son frecuentes las de 0,03 mL. Se llena de lquido apropiado hasta un nivel superior al enrase deseado, se evacua el requerido. La ltima gota retenida no debe recogerse. medir volmenes variables con 10 mL con un lmite de error de por succin con un dispositivo exceso y se vaca en el recipiente

Pipeta de un aforo.- Slo sirve para medir un volumen fijo, entre el aforo y el extremo inferior de la pipeta. La ltima gota no debe recogerse. Se obtiene una precisin mayor que en el caso precedente. Probeta.- Recipiente de vidrio para la medida de volmenes aproximados y generalmente variables. No debe utilizarse para preparar disoluciones.

Termmetro.- Instrumento de vidrio con una columna interior de mercurio dilatable para medir temperaturas moderadas. Debe ponerse en contacto el bulbo del termmetro con el cuerpo cuya temperatura se desea medir hasta que la altura alcanzada por el mercurio sea constante, leyndose aqulla en una escala calibrada. Es frgil y no debe emplearse para ninguna otra funcin.

Tubo de ensayo.- Es un recipiente de vidrio cilndrico, cerrado por un extremo, til para realizar ensayos muy diversos en el laboratorio. Se pueden calentar directamente, con cuidado, a la llama de un mechero. Cuando no se usan, es conveniente depositarlos en una gradilla, en posicin invertida para que escurran una vez enjuagados. Algunos tubos de ensayo se hallan graduados.

Vaso de precipitado.- Se suelen distinguir, de acuerdo con su forma, en de tipo alto o bajo. Algunos poseen una escala graduada o aforo que permite medir volmenes aproximados. Construido de vidrio, es el recipiente ms utilizado en el laboratorio. Se pueden calentar con precaucin.

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OTROS MATERIALES DE LABORATORIO

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Laboratorio N 1 "Microscopia y niveles de organizacin celular"


INTRODUCCIN

Todos los seres vivientes estn constituidos por clulas, en algunos casos una sola clula conforma un organismo completo (unicelulares), en otros ms complejos muchas clulas se han organizado para constituir un organismo (pluricelulares). Lo anterior ha llevado a la especializacin celular para la realizacin de variadas funciones, producto de lo cual, es posible observar una muy amplia diversidad celular. As por ejemplo, existen mltiples formas y tamaos celulares, como tambin, diferentes niveles de organizacin: i) los procariontes de una organizacin estructural simple, no presentan compartimentos intracelulares. El DNA se encuentra disperso en el citoplasma ocupando una posicin mas o menos central; ii) los eucariontes, en cambio presentan una mayor complejidad, poseen compartimentalizaciones y han desarrollado una multiplicidad de estructuras membranosas adaptadas para realizar funciones especficas denominadas organelos. El material gentico se encuentra en un compartimento denominado ncleo. El estudio de la estructura y funciones celulares ha experimentado tres perodos fundamentales de progreso. El primer periodo se inicia a comienzos del siglo XVII y se caracteriza por el descubrimiento de un mundo diminuto, no detectable por el ojo humano pero s por lupas o lentes. Las primeras observaciones fueron de glbulos rojos sanguneos por Fierre Borel en 1656. En 1665, Robert Hooke introdujo el trmino clula para describir la estructura del corcho y en 1674, Antn van Leeuwenhoek observ organismos unicelulares vivos. Al paso de los aos, los lentes se perfeccionaron y transformaron en microscopios pticos. En 1838-1839, Mathias Jacob Scheiden y Theodor Schwann formularon la teora celular, que considera a la clula como una unidad estructural comn de todos los seres vivientes, y que una clula madre es capaz de dividirse en dos clulas hijas. Esto ltimo fue un aporte hecho por Rudolph Virchow en 1858. Ya a fines del siglo XIX se dispuso de tincin y fijacin de los tejidos que permitieron una enorme recopilacin de detalles celulares como la divisin celular y la fecundacin celular. Los fenmenos de evolucin y herencia empezaron a tener gran importancia. El segundo perodo, comienza a fines del siglo XIX y se caracteriza por la tentativa de interpretar las estructuras celulares con respecto a su funcin. El tercer perodo en cambio, acenta el conocimiento de la funcin de lo componentes celulares a nivel molecular. El microscopio es sin duda el elemento ms importante para el estudio de la morfologa celular. El tipo de microscopio ms utilizado es el microscopio ptico, que se sirve de la luz visible para crear una imagen aumentada del objeto. El microscopio ptico ms simple es la lente convexa doble con una distancia focal corta. Estas lentes pueden aumentar un objeto hasta 15 veces. Por lo general se utilizan microscopios compuestos, que disponen de varias lentes con las que se consiguen aumentos mayores. Algunos microscopios pticos pueden aumentar un objeto por encima de las 2.000 veces, lo que resulta de gran utilidad considerando, por ejemplo, que una clula animal tpica mide entre 10 y 20 m de dimetro. Las clulas, en la mayora de los casos, no slo son diminutas sino tambin transparentes. Debido a esto, los principales descubrimientos sobre la estructura interna de las clulas dependieron del hallazgo, a fines del siglo XIX, de diversas tcnicas de preparacin de los materiales - mediante fijacin, corte y tincin - que proporcionaron el contraste suficiente para hacerlas visibles. Adems el perfeccionamiento del microscopio lleg a un alto grado y se pudieron obtener aumentos hasta 1500 veces. El microscopio compuesto puede dividirse en: i) Sistema mecnico; conformado por: a) El pie o base de sustentacin. b) El brazo o columna.

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c) La platina; que consiste en una plataforma horizontal con un orificio central por donde pasa la luz. Es aqu donde se ubica la preparacin en un carro mvil que permite desplazarla. d) El tubo; es un cilindro metlico que lleva en el extremo prximo al observador el ocular y el revolver en el extremo opuesto. e) El revlver es una pieza giratoria que posee diferentes lentes objetivos, cada uno de ellos posee un aumento distinto. Al girar esta pieza es posible utilizar estos lentes para la observacin. f) Los tornillos de focalizacin; el enfoque se realiza modificado la distancia entre la preparacin y el objetivo. El ajuste se realiza con dos tornillos; el macromtrico que se usa para los ajustes gruesos y el micromtrico para el ajuste fino o de precisin. Este ltimo tiene una escala graduada, en donde cada marca representa un avance de dos micrones. ii) Sistema ptico est compuesto por: a) La fuente luminosa que se ubica bajo el condensador. b) El condensador consiste en un sistema de lentes que concentra la luz en la preparacin. Posee un tornillo de control que permite mover este dispositivo. c) El diafragma o iris; se localiza en el condensador y permite regular la cantidad de luz que sale de este. d) Anillo porta filtro; permite colocar un filtro de color anexo al condensador para destacar alguna estructura de inters en la preparacin. e) Lentes oculares; se encuentran en la parte superior del tubo, por lo general tienen un aumento de 8X, 10X 12X. Los oculares estn formados generalmente por un sistema de dos lentes plano convexas simples o compuestas, separadas por un diafragma interno. El lente inferior se denomina "lente de campo" y tiene por funcin recoger la mayor cantidad de rayos divergentes que vienen del objetivo. Tiene su foco en el diafragma y ah la imagen es aumentada por el lente superior. f) Lentes objetivos; se encuentran montadas en el revlver que permite su intercambio durante la observacin. Las diferentes lentes estn marcadas con su aumento y la apertura numrica, vale decir el lente tiene la marca 10:1:AN 0.25 significa que ese objetivo tiene un aumento de 10, siendo su apertura numrica 0.25. La lupa u objetivo menor tiene un aumento de 4X, los otros generalmente son 10X, 40X y 100X. En ocasiones tambin se habla de "objetivos a seco" y de "objetivos de inmersin", haciendo referencia a lo que se encuentra entre la preparacin y el objetivo. As el objetivo a seco se refiere a que entre la preparacin la lente existe aire, mientras que los objetivos de inmersin requieren que exista entre la lente y la preparacin una sustancia conocida como aceite de inmersin. Microscopios especiales Varias propiedades pticas pueden utilizarse en combinacin con un microscopio. Nos referiremos al microscopio de campo oscuro, contraste de fases, fluorescencia y al microscopio electrnico. Microscopio de campo oscuro Se basa en la propiedad que tienen los objetos muy pequeos del orden de la longitud de onda de la luz (o el borde de algunos objetos microscpicos tales como membranas celulares o de organelos) de dispersar la luz, o sea el rayo de luz se quiebra al pasar por ellos. Si iluminamos oblicuamente el objeto en tal forma que el rayo de luz no entre al objetivo, se observar un campo oscuro negro. Las membranas biolgicas, macromolculas como las protenas desvan la luz que los ilumina, permitiendo de este modo que la luz entre al objetivo y sea vista por el observador. Microscopio de contraste de fases En este caso la luz es retardada en ciertas zonas del condensador y acelerada para compensar en las zonas correspondientes del objetivo, por lo tanto si no hay preparacin el resultado
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es compensado. Al haber preparacin, la luz se desva ms o menos de acuerdo a la refraccin. La luz retardada por el condensador en estas condiciones no pasa por la parte aceleradora del objetivo y el retardo de ella se hace evidente al observador. Adems los diferentes ndices de refraccin de las distintas fases de la muestra producirn diferentes desviaciones. El resultado es que la luz proveniente de la zona lmite entre dos fases llega al observador con diferentes grados de retardo, produciendo zonas oscuras donde hay cambio de fases. Microscopio de Fluorescencia Un objetivo fluorescente es aquel que al recibir la luz de onda corta, la absorbe y emite luz de onda ms larga. La mayora de los especmenes biolgicos no son fluorescentes pero puede aadirse a la preparacin un marcador fluorescente. El microscopio de fluorescencia requiere dos filtros: uno que deje pasar la luz de onda corta, pero no la de onda larga, para iluminar el objeto o el marcador, y el otro que bloquea el paso de la luz de onda corta, usada para iluminar y deja pasar la luz de onda larga, emitida por el objeto. Microscopio Electrnico A principios de los aos 1940 se desarroll el microscopio electrnico, mucho ms poderoso que el ptico. Este instrumento, permite aumentos cercanos a 1.000.000 X (mil veces el aumento del microscopio de luz), logrando visualizar tomos y molculas. Su introduccin en la dcada de los 50 abri el campo de la Citologa clsica a la Biologa Celular actual. El principio de este instrumento es simple, puesto que la ptica usada es la misma que la del microscopio de luz (o compuesto), usando electrones con una longitud de onda de fracciones de nanmetros. Los electrones son fciles de producir (basta un filamento caliente como el de una ampolleta) y de acelerar para lograr una longitud de onda pequea, pero no pasan por el aire, por ello el elemento ms importante de un microscopio electrnico son sus bombas de vaco. El microscopio electrnico de transmisin consta de una columna donde est el can de electrones, condensadores, objetivo, lentes intermedias, ocular proyector y el portamuestra. Como los electrones no son visibles al ojo humano incluyen una pantalla de observacin y un sistema fotogrfico A diferencia del anterior, el microscopio electrnico de barrido no posee lentes, salvo condensadores. Estos producen un haz muy fino de electrones que choca en la superficie de la muestra y se desprenden nubes de electrones secundarios. Estos, son reconocidos por un detector que asociado a un sistema generador de imgenes nos da una imagen de la superficie de la muestra. Instrucciones bsicas Antes de observar cualquier preparacin debe tener presente que el microscopio es un instrumento delicado. Debido a esto debe utilizarse tomando en cuenta algunas instrucciones bsicas: a) Coloque el microscopio en una posicin cmoda sobre una superficie plana. Tmelo siempre del brazo o columna. Si desea cambiar la posicin del instrumento levntelo y NO lo arrastre por el mesn b) Es conveniente chequear la limpieza de los diferentes lentes antes de comenzar la observacin c) Encienda la lmpara, baje el condensador y abra el diafragma completamente. Realizacin de la observacin a) Aleje el objetivo de la platina y coloque la lente de aumento menor. b) Seleccione la preparacin que desea observar, revsela para asegurarse que esta se encuentra limpia. c) Abra la pinza del carro, coloque la preparacin con el cubreobjeto hacia arriba y cierre el carro. d) Ajuste la posicin del carro de modo que la regin a observar quede justo en el orificio de la platina.
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e) Usando el macromtrico acerque la lente a la preparacin. Cuando logre un foco aproximado utilice el micromtrico (grelo lentamente) para el ajuste de precisin. f) Si desea cambiar el aumento, gire el revlver y seleccione el nuevo objetivo a utilizar. Debiera bastar un pequeo ajuste del micromtrico para llegar a foco, si fuera necesario reajuste la iluminacin usando el condensador. Si requiere usar el lente de inmersin NUNCA lo use como objetivo seco, puede rayarlo. Uso del objetivo de inmersin a) La preparacin debe estar enfocada a 40X (objetivo a seco), gire el revlver de modo que el objetivo de inmersin quede en una posicin intermedia (40X y 100X). b) Coloque una gota de aceite de inmersin sobre el cubre objeto. c) Lleve el objetivo de inmersin al eje ptico. d) Utilizando el tornillo micromtrico lleve el objeto a foco, si lo requiere modifique la cantidad de luz del condensador. e) Cuando finalice la observacin baje la platina, retire la preparacin. Limpie tanto el objetivo como la preparacin con un pao humedecido con Xilol. Al finalizar las observaciones el microscopio y las preparaciones deben quedar limpios. Gire el revlver y deje la lupa como lente de observacin. Apague la lmpara y enrolle el cordn en el pie del microscopio. Asegrese de colocar el microscopio en una superficie plana (no al borde de la mesa) cubierto por su funda. Descripcin de lo observado Debe seguir una estructura, que puede variar segn el observador, pero que debe ser sistemtica y ordenada. Se sugiere que considere en sus observaciones el siguiente esquema: a) Objetivo: referido al porque se realiza la observacin (Ej. observacin de ncleo) b) Material: es el rgano o tejido del que se obtuvo la preparacin (Ej. rin de rata) c) Mtodo: se refiere a la tcnica histolgica usada para elaborar la preparacin (a fresco o permanente) y a la tincin utilizada. (Ej. Preparacin a fresco de clulas catfilo de cebolla) d) Aumento: la amplificacin del objeto observado y depende del ocular y del objetivo. Aumento = aumento del objetivo x aumento del ocular e) Observaciones: considere describir la forma celular; relacin con otros elementos presentes, tamao celular; forma, nmero y posicin del ncleo y algunas caractersticas del citoplasma.

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PARTES DE UN MICROSCOPIO

Objetivos - Conocer las partes del microscopio compuesto y sus funciones. - Aprender a realizar una preparacin. - Aprender a realizar una observacin utilizando el microscopio compuesto. - Diferenciar clulas procariontes y eucariontes. - Reconocer diferencias entre clulas animales y vegetales. Actividades 1.- Dibuje un esquema en el que seale las diferentes partes del microscopio. 2.- Realice una preparacin de catfilo de cebolla, para ello, de la parte cncava de una de las hojas carnosas del bulbo de la cebolla separe una pequea porcin de epidermis, procurando no arrancar el tejido subyacente. Coloque un trocito de catfilo en un portaobjetos, aada unas gotas de agua y cubra con un cubreobjetos limpio. En otro portaobjetos realice el procedimiento anterior y aada gotas de azul de metileno, deje actuar por 2 min., lave con agua cubra con un cubreobjetos limpio. Qu diferencias observa en las preparaciones? Dibuje y anote sus observaciones. Recuerde realizar las observaciones segn las indicaciones de su gua. Seale el aumento, describir formas, estructuras y posicin de estas. 3.- Realice una preparacin de palito de fsforo, para ello, coloque un trocito de en un portaobjetos, aada unas gotas de agua y cubra con un cubreobjetos limpio.

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4.- Realice una preparacin utilizando una hoja de bistur para cortar una lmina muy fina de corcho. Colquela en un porta objetos, aada unas gotas de agua y cubra la preparacin con un cubre objetos. Realice un dibujo de lo observado y describa. 5.- Observe las preparaciones de bacterias que se le entregaran, seleccione una dibuje y descrbala en forma detallada. 6.- Partir una papa y raspar con la punta del bistur, depositando el producto obtenido en un portaobjeto. Dejar secar completamente y teir con unas gotas de lugol o yodo. Dejar actuar dos minutos. Poner el cubre-objeto y observar al microscopio. 7.- Introducir el dedo en la cavidad bucal. Raspar suavemente con la ua la cara interna de la mejilla Limpiar el producto obtenido, del borde interno de la ua, con una aguja enmangada. Depositarla junto con una gotita de agua sobre el porta-objetos. Hacer una extensin frotando con la aguja sobre el portaobjetos. Calentar suavemente a la llama del mechero sin que llegue a quemar. Colocar el porta sobre el soporte de tincin encima de la cubeta. Agregar unas gotas de azul de metileno o de verde de metilo actico, dejando actuar el colorante 2 3 minutos. Verter el colorante sobrante y lavar la preparacin hasta que no suelte color. Poner encima un cubre-objetos, de forma que ste caiga como se cierran las tapas de un libro; dejando caer suavemente el cubre se evita todo riesgo de que queden burbujas de aire entre el porta y el cubre objetos. 8.- Observe una preparacin de neurona, teida con azul de toluidina.

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SEMINARIO N1: Interacciones Moleculares


INTRODUCCIN A nivel molecular, se desarrollan una serie de interacciones que permiten la relacin especfica de macromolculas biolgicas, electrolitos y agentes de variada naturaleza para producir una respuesta determinada en una clula, un tejido y su entorno y, por lo tanto, en un ser vivo. A este nivel, destacan la presencia de grupos especficos que, debido a su naturaleza fisicoqumica, estructural, su tamao, polaridad, orientacin y posicin dentro de una molcula, son capaces de reconocer e interaccionar con otros grupos funcionales, complementarios en carga o en propiedades qumicas para permitir estas interacciones. El gran conjunto de interacciones qumicas que pueden encontrarse a nivel biolgico pueden dividirse en dos categoras: Interacciones covalentes. Interacciones no covalentes.

I.- INTERACCIONES COVALENTES Dentro de las interacciones covalentes se pueden destacar todas aquellas que involucran la formacin de un enlace qumico definido en distancia y energa (simple, doble o triple enlace), esto es, cumpliendo el mnimo de requerimientos para que dos tomos formen entre s un enlace qumico, a travs de la interaccin de dos electrones de valencia. Es as como un tomo interacciona con otro a travs de un enlace covalente, siempre y cuando puedan entre ambos compartirse un par de electrones disponibles. Cada enlace covalente implica la participacin de un par de electrones. Cuando se forma un enlace doble, entonces hay dos pares de electrones en juego. Con un triple enlace, hay tres pares. La capacidad de compartir este par de electrones est determinada por la diferencia de electronegatividad que exista entre los dos tomos. Por lo tanto, un enlace covalente va a tener propiedades polares o no polares (apolares, hidrofbicas) dependiendo de la fuerza con que este par es atrado hacia uno de los dos tomos involucrados. Si el par de electrones de enlace que se comparte es fuertemente atrado hacia uno de los tomos se habla de un enlace covalente polar, pero si el par de electrones no es mayormente atrado por el ncleo de ninguno de los tomos unidos entonces es un enlace covalente no polar. El lmite para determinar la polaridad de un enlace covalente est dada por la diferencia de electronegatividad que surge entre ambos tomos unidos. Si esta diferencia es entre 0,1 y 0,9, se trata de un enlace covalente no polar. Si esta diferencia es entre 1,0 y 1,9 es un enlace covalente polar. Por ejemplo: Un enlace C H En este enlace, el tomo de carbono (C) aporta con uno de sus electrones de valencia ( ) para formar un enlace con el nico electrn ( ) del tomo de hidrgeno (H). Segn la representacin de Lewis esto sera:

El tomo de H tiene una electronegatividad de 2,1 y para el tomo de C el valor es de 2,5. Entre ambos, la diferencia es de 0,4, por lo tanto, este enlace es covalente no polar. En el caso del enlace O-H, calculando la diferencia de electronegatividad entre ambos tomos (O=3,5; H=2,1) da que este enlace es covalente polar.
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II.- INTERACCIONES NO COVALENTES. Dentro de este grupo se encuentran la mayora de aquellas interacciones que se producen entre molculas de un solvente, como el agua, ya sea entre ellas mismas o con otras macromolculas, las asociaciones moleculares entre una enzima y su sustrato, protenas transportadoras y sus ligandos, el reconocimiento antgeno-anticuerpo dentro de la respuesta inmune, la unin de un in a un canal de membrana especfico, etc. Abarcan, por lo tanto, la mayor complejidad de interacciones a nivel biolgico, gracias a que de forma independiente son interacciones ms dbiles que las covalentes, pero en conjunto, pueden determinar la estabilidad de una superestructura compleja como el ensamblaje de protenas en membranas, la estructura doble hlice del cido desoxiribonucleico, la maquinaria de traduccin del mensaje gentico, la estructura secundaria, terciaria y cuaternaria de una protena, etc. Entre las principales se pueden mencionar: Puente de Hidrgeno. Interaccin inica o puente salino. Dipolo Efecto hidrofbico.

a) Puente de Hidrgeno:

Es una interaccin que siempre se forma entre un tomo dentro de un grupo qumico que tenga un tomo de hidrgeno covalentemente unido (grupo dador de H) y que puede compartir con otro tomo vecino y cercano (grupo aceptor de H), el cual interacciona con el H a distancia. La direccionalidad y orientacin de estos tres tomos involucrados determina la fuerza del puente formado.

Ejemplo:

R ROH O C R
Puente de H lineal, fuerte

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ROH

Puente de H diagonal, dbil

O C R R

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b) Interaccin inica o puente salino:

Es aquella interaccin que se forma entre dos tomos con cargas elctricas netas opuestas, como por ejemplo, entre un grupo COO- y un grupo NH3+ de cadenas proteicas.

c) Dipolo:

Se genera al interaccionar dos campos electrnicos cercanos contrarios, de tal forma de que zonas con cargas opuestas se estabilicen a distancia. Puede ocurrir entre dos grupos polares, sin carga neta (interaccin dipolo-dipolo) o entre una carga neta y un grupo polar (interaccin in-dipolo).

d) Efecto hidrofbico:

No es una interaccin propiamente tal, sino que surge por la presencia de un entorno polar (como la del agua), alrededor de grupos de naturaleza no polar (hidrofbica). Los grupos no polares tienden a acercarse estrechamente entre s, de tal forma de interaccionar lo menos posible con el agua o con otros grupos polares. Ejemplo: La formacin de micelas al mezclarse el aceite con el agua: Los esqueletos hidrocarbonados de las cadenas de cidos grasos interaccionan entre s (efecto hidrofbico) para repeler el agua. Este tipo de interaccin constituye el principal factor de estabilidad para mantener la estructura funcional y estable de protenas y cidos nucleicos. OBJETIVOS El desarrollo de esta actividad persigue que los alumnos: - Identifiquen los diferentes tipos de interacciones qumicas a nivel biolgico. Comprendan las caractersticas de cada interaccin. Conozcan la importancia de la participacin de grupos qumicos en la formacin de las interacciones. Comprender el efecto de variaciones de pH y concentracin de sales sobre la formacin de las interacciones.

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Analizar y discutir la solubilidad comparativa entre una sal (NaCl) y la sacarosa (azcar comn) con el agua fra.

CUESTIONARIO 1.- Identificar tipos de interacciones moleculares que se desarrollan en una protena fibrilar como el colgeno para la estabilidad de su estructura. 2.- La hemoglobina es una protena con estructura cuaternaria, es decir, est formada por la interaccin de diferentes cadenas polipeptdicas llamadas subunidades. Identificar y clasificar el tipo de interaccin molecular que se forma entre las cuatro subunidades para mantener su funcin. 3.- Proponer un modelo que explique el efecto del agua (solvente) sobre la disolucin de una sal comn como NaCl y compararla con lo que se genera con el azcar comn. 4.- Mencionar cuatro factores que influyen sobre la posibilidad de formar una interaccin no covalente como el puente de hidrgeno. 5.- De qu manera la temperatura influye sobre la capacidad de dos grupos qumicos de interaccionar entre s no covalentemente. BIBLIOGRAFA Alberts y col. (1997). Biologa Molecular de la Clula. Editorial Omega.

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Laboratorio N 2 "Reconocimiento de molculas"


INTRODUCCIN:

Una macromolcula, se define como una molcula de elevada masa, constituida por un alto nmero de tomos. Las macromolculas son el resultado de la unin de molculas pequeas de un mismo tipo o de tipos distintos, y son caractersticas de los polmeros. Las unidades estructurales de las macromolculas, o monmeros, se unen unas a otras mediante enlaces covalentes y se repiten centenares e incluso millones de veces. Tanto en los polmeros naturales como en los artificiales, la unin entre los monmeros puede ser en una sola direccin, dando lugar a los polmeros lineales, o en ms de una direccin, obtenindose los polmeros reticulares tridimensionales. El diamante y el grafito, formas alotrpicas del carbono, se consideran tambin macromolculas en las que la unidad estructural es el tomo de carbono. Los tipos principales de macromolculas en la clula son las protenas, formadas por cadenas lineales de aminocidos, los cidos nucleicos, cuyas unidades estructurales son los nucletidos, y los polisacridos, formados por unidades de azcares. PROTEINAS: Constituyen los elementos estructurales de mayor importancia de los tejidos anmales, y tambin se encuentran en gran cantidad en los vegetales. Las protenas estn constituidas por aminocidos, de la misma forma en que los polisacridos estn constituidos por monosacridos. El enlace bsico en estas estructuras es el enlace peptdico, de ah que las cadenas de aminocidos que constituyen una protena se denominan cadenas polipeptdicas; cuando son relativamente cortas dan origen a los polipptidos, en cambio, hablamos de protenas para referirnos a polipptidos de elevado peso molecular. La hidrlisis total de una protena simple generalmente produce 10 a 20 aminocidos distintos y su peso molecular vara des algunos miles hasta varios millones. Debido a su elevado peso molecular no forman soluciones verdaderas, sino que producen soluciones coloidales o simples suspensiones en solventes acuosos. Las propiedades biolgicas de las protenas, as como muchas de sus propiedades fsicas y qumicas dependen de la integridad de sus estructuras. Cuando estas estructuras se alteran, aunque no haya ruptura de los enlaces peptdicos (estructura primaria), la protena pierde sus propiedades funcionales, fsicas y qumicas que la caracterizan. Este proceso se denomina desnaturalizacin, y corresponde bsicamente, a la perdida parcial o total de su estructura terciaria. Los agentes desnaturalizantes cono los cidos fuertes (clorhdrico, tricloroactico, perclrico, etc.), lcalis fuertes (hidrxido de sodio, potasio, etc.), el calor mantenido por sobre 50 C y una serie de agentes qumicos ms especficos (urea, Mercaptoetanol, etc.) alteran las estructuras secundaria y terciara de las protenas. La protena desnaturalizada presenta una solubilidad disminuida y habitualmente da origen a un precipitado, el cual, dependiendo de lo drstico de las condiciones puede aparecer como una simple floculacin o enturbiamiento o bien como un precipitado franco, produciendo un gran sedimento en el fondo del tubo de ensayo. Reaccin de Biuret: Se produce por presencia de pptidos y protenas, pero no por aminocidos libres, ya que la reaccin se debe a la presencia del enlace peptdico (- CO- NH -), el cual no esta presente en soluciones de aminocidos libres. Fundamento: Cuando una protena se pone en contacto con un lcali concentrado, se forma una sustancia compleja denominada Biuret, que en contacto con una solucin de sulfato cprico diluida, da una coloracin violeta caracterstica.

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AZUCARES: Los carbohidratos, o azcares, son compuestos solubles en agua que participan tanto en la energtica como en la estructura de clulas y rganos. Los polisacridos son grandes polmetros de carbohidratos constituidos por unidades llamadas monosacridos, que son las unidades de azcar ms simples. Los oligosacridos son compuestos formados por unos pocos residuos de monosacridos que pueden estar unidos a protenas. Los oligosacridos juegan un papel fundamental en lo que se refiere al funcionamiento y estructura celular. El almidn es un polmero de D-glucosa que se forma en las plantas. Aunque su estructura consiste en repeticiones del monmero, nutricionistas consideran al almidn como un carbohidrato complejo. La glucosa y la sacarosa son carbohidratos simples. El almidn se encuentra en muchas plantas y productos derivados de plantas, como la harina. Reaccin del Lugol: Este mtodo se usa para identificar polisacridos. El almidn en contacto con unas gotas de Reactivo de Lugol (disolucin de yodo y yoduro potsico) toma un color azul-violeta caracterstico. Fundamento: La coloracin producida por el Lugol se debe a que el yodo se introduce entre las espiras de la molcula de almidn. No es por tanto, una verdadera reaccin qumica, sino que se forma un compuesto de inclusin que modifica las propiedades fsicas de esta molcula, apareciendo la coloracin azul violeta. Fermentacin alcohlica: Las levaduras son organismos anaerbicos facultativos, lo que significa que pueden vivir en presencia y ausencia de oxgeno. Cuando hay oxgeno lo utilizan para la respiracin, es decir para oxidar la glucosa completamente y as obtener ATP. En condiciones de anaerobiosis, las cepas de Sacharomyces cerevisae (levaduras de la panificacin), y otras especies de levaduras, transforman la glucosa en cido pirvico, siguiendo la secuencia de reacciones de la gliclisis. Este proceso es comn a la mayora de los seres vivientes; pero aqu radica lo especfico de estas levaduras, son capaces de proseguir la degradacin del pirvico hasta etanol. Fundamento: Durante el proceso de fermentacin, las levaduras transforman el pirvico (una molcula de tres carbonos) a etanol (una molcula de dos carbonos). En este paso, se utiliza poder reductor (NADH) y se libera una molcula de CO2 gaseoso. LIPIDOS: Son biomolculas orgnicas formadas bsicamente por carbono e hidrgeno y generalmente tambin oxgeno; pero en porcentajes mucho ms bajos. Adems pueden contener tambin fsforo, nitrgeno y azufre. Es un grupo de sustancias muy heterogneas que slo tienen en comn estas dos caractersticas:

11. Son insolubles en agua 22. Son solubles en disolventes orgnicos

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Los lpidos se clasifican en dos grupos, atendiendo a que posean en su composicin cidos grasos (Lpidos saponificables) o no lo posean (Lpidos insaponificables). 11. Lpidos saponificables 1A. Simples 21. Acilglicridos 32. Cridos 4B. Complejos 51. Fosfolpidos 62. Glucolpidos 22. Lpidos insaponificables 1A. Terpenos 2B. Esteroides Reaccin de saponificacin: Es una reaccin tpica de los cidos grasos, en la cual reaccionan con lcalis. Las grasas reaccionan en caliente con el hidrxido sdico o potsico descomponindose en los dos elementos que la forman: glicerina y los cidos grasos. Estos se combinan con los iones sodio o potasio del hidrxido para dar lugar a una sal de cido graso, que se denomina jabn. Las molculas de jabn presentan simultneamente una zona lipfila o hidrfoba, que rehuye el contacto con el agua, y una zona hidrfila o polar, que se orienta hacia ella, lo que se denomina comportamiento antiptico.

Solubilidad: Las grasas son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se dividen en pequesimas gotitas formando una "emulsin" de aspecto lechoso, que es transitoria, pues desaparece en reposo, por reagrupacin de las gotitas de grasa en una capa que por su menor densidad se sita sobre la de agua. Por el contrario, las grasas son solubles en los llamados disolventes orgnicos como el ter, benceno, xilol, cloroformo, etc.

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Objetivos - Aplicar tcnicas cualitativas para reconocer molculas de importancias biolgicas. ACTIVIDADES 1. Tomar 2 tubos de ensayo, en un tubo de ensayo colocar 3 ml de almidn. Aadir unas gotas de lugol (2-3). En el otro tubo poner 3 mL de agua destilada y agregarle 2-3 gotas de lugol. La disolucin del tubo de ensayo de color azul-violeta, indica que la reaccin es positiva para almidn. 2. Tomar 2 tubos de ensayo, al 1 tubo agregar 3 ml de albmina. Aadir 2ml de reactivo de Biuret. Al segundo tubo agregue 3 mL de agua destilada y 2 mL de reactivo de Biuret. La aparicin de una coloracin violeta-roscea indica una reaccin positiva para protenas. 3. Tomar un tubo de ensayo pequeo. Agregar 3 mL de suspensin de levaduras (7% p/v), 3 mL de agua y 3 mL de glucosa. Tapar con un tubo de ensayo grande, invertir e incubar a 37C hasta que se produzca fermentacin, la que se ver por la aparicin de burbujas de CO2. 4. Saponificacin de grasas: colocar en un tubo de ensayo 2cc de aceite vegetal y 2cc de una solucin de hidrxido sdico al 20%. Agitar enrgicamente y colocar el tubo al bao Mara de 20 a 30 minutos. Transcurrido este tiempo, se puede observar en el tubo tres capas: la inferior clara, que contiene la solucin de sobrante junto con la glicerina formada; la superior amarilla de aceite no utilizado, y la intermedia, de aspecto grumoso, que es el jabn formado. 5. Solubilidad de grasas: tomar dos tubos de ensayo y poner en uno de ellos 2-3 cc de agua y en el otro 2-3cc de ter u otro disolvente orgnico. Aadir a cada tubo 1cc de aceite y agitar fuertemente. Observar la formacin de gotitas o micelas y dejar en reposo. Se ver como el aceite se ha disuelto en el ter y en cambio no lo hace en el agua, y el aceite subir (explique). 6.- Se le entregarn distintos frascos, sin rotular, que contienen agua, soluciones de almidn, glucosa y albmina. Deber identificar cada una de estas soluciones siguiendo los procedimientos descritos.

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CUESTIONARIO
1) Indique 4 tipos de protenas y su funcin.

2) Por qu las grasas no son solubles en agua?

3) Esquematice e indique que macromolculas constituyen los siguientes monmeros:

4) Defina fermentacin y explique por qu las levaduras no pueden fermentar cualquier azcar.

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Laboratorio N 3 "Membrana y Mecanismos de transporte"


INTRODUCCIN:

La membrana plasmtica rodea a todas las clulas, acta como un sensor de seales externas, permitiendo que la clula cambie en respuesta a estmulos ambientales, adems define su extensin y mantiene las diferencias esenciales entre el contenido de la clula y su entorno. Esta membrana es un filtro altamente selectivo y un mecanismo de transporte activo controla la entrada de nutrientes y la salida de productos residuales, adems es responsable de generar diferencias en la concentracin de iones entre el interior y el exterior de la clula. Todas las membranas biolgicas, incluidas la membrana plasmtica y las membranas internas de la clula, tienen una estructura bsica comn: se trata de agrupaciones de molculas lipdicas y protenas unidas en gran parte por interacciones no covalentes. Las membranas celulares son estructuras dinmicas y la mayora de sus lpidos y de sus molculas proteicas son capaces de moverse en el plano de la membrana. Las molculas lipdicas estn dispuestas en forma de una doble capa continua de aproximadamente 5 nm de grosor. Esta bicapa constituye la estructura bsica de la membrana y acta de barrera selectivamente impermeable al paso de la mayora de las molculas hidrosolubles. Las molculas proteicas, que normalmente se hayan "disueltas" en la bicapa lipdica, median la mayora del resto de las funciones de membrana. El citoplasma de la clula eucaritica se encuentra compartimentalizado por membranas, siendo esta una de las propiedades de mayor importancia para la clula eucaritica, puesto que de este modo se hace posible la realizacin de funciones especficas dentro en estructuras (organelos) especialmente diseadas para cada requerimiento. Entre los organelos podemos sealar: 1 2a) El ncleo: Est formado por dos unidades de membrana interrumpida ocasionalmente por poros. En la envoltura nuclear se encuentra el material gentico cromosmico de la clula, diferentes protenas y RNA. En este compartimento se concentran los procesos que dan origen a la mantencin, traspaso y regulacin de la informacin que permite el funcionamiento y reproduccin de la clula.

1b) El retculo endoplasmtico se divide en dos porciones: 1


i) El retculo endoplasmtico rugoso (RER) que deriva de la membrana externa de la envoltura nuclear. Su cara externa est asociada a ribosomas, que le dan un aspecto rugoso. En el RER se originan una gran cantidad de glicoprotenas, ya que en esta regin existe un gran nmero de enzimas glicosilantes. ii) El retculo endoplasmtico liso (REL) juega un importante papel en la detoxificacin, sntesis de lpidos y esteroides.

c) Aparato de Golgi: est constituido por una serie de sacos aplanados tambin denominados cisternas. A el llegan la mayor parte de las glicoprotenas de la clula y mediante un mecanismo desconocido, este organelo, decide el destino final de ellas. En el Golgi es posible distinguir tres zonas claramente definidas: 1 i) Golgi cis o zona de formacin debido a que a esta zona llegan vesculas del RER cargadas con glicoprotenas. La fusin de estas vesculas con el Golgi cis incorpora membranas y glicoprotenas a este compartimento. De esta forma este dominio est en constante formacin.

ii) Golgi medial o zona media, en esta regin se producen glicosilaciones y desglicosilaciones de las glicoprotenas provenientes del Golgi cis.

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iii) Golgi trans; de el se desprenden vesculas con diferentes destinos (otros organelos y membrana plasmtica) segn un proceso de segregacin determinado por el Golgi.

d) Lisosomas: constituido por una sola unidad de membrana, su funcin principal es llevar a cabo la digestin celular. Es por esto que contiene una gran cantidad de enzimas hidrolticas capaces de degradar una amplia gama de sustancias y estructuras (membranas, bacterias, azcares, protenas, etc.). Es decir, juega un importante papel en la degradacin de elementos exgenos (fagocitosis) y de elementos endgenos (autofagia). e) Mitocondria: es un organelo constituido por dos unidades de membrana. Una externa que da la forma y una interna que se pliega formando las denominadas crestas. La principal funcin de este organelo es la respiracin celular. Adems la mitocondria posee su propio material gentico y es capaz de sintetizar gran parte de sus protenas. El nmero de mitocondrias en cada clula depende de los requerimientos energticos de esta. f) Peroxisoma: es un organelo sin forma definida, cuya funcin principal es la detoxificacin de la clula mediante reacciones de xido-reduccin. Mecanismos de Transporte DIFUSIN Consideremos los cambios que ocurren cuando un cubo de azcar se coloca en un recipiente con agua caliente. En el instante cero, todas las molculas de azcar se localizan an dentro del slido, ninguna se encuentra en solucin. Despus de determinado lapso la distribucin de las molculas de azcar cambia hasta llegar a un estado en el cual stas se encontrarn distribuidas uniformemente a lo largo del recipiente, como resultado de la difusin. El movimiento de las molculas desde zonas de mayor concentracin a zonas de menor concentracin implica una modificacin de un estado ms ordenado hacia uno ms desordenado. Por lo tanto, la difusin es un proceso espontneo que se encuentra acompaado por un incremento en la entropa. El tiempo necesario para alcanzar una distribucin uniforme depende de varios factores: la temperatura de la solucin, el tamao de las molculas, la viscosidad del medio. El conocimiento del tiempo que requieren las molculas para difundir dentro de las clulas es importante para los estudios de transporte biolgico. En una bacteria, una molcula del tamao de la sacarosa tarda 10-3 seg. en difundir desde el centro hasta la periferia. Otra del tamao del ATP, 10-2 seg. Las molculas de pequeo tamao migran como si estuvieran en agua mientras que las protenas y las molculas de tamao similar son retrasadas porque chocan con obstculos mayores como los ribosomas y los cidos nucleicos. En las clulas eucariticas, debido a su tamao, los tiempos de difusin son muy grandes e incompatibles con las reacciones qumicas en las que las distintas sustancias son necesarias. Sin embargo, las subdivisiones en compartimentos limitados por membranas facilita la difusin, porque las molculas migran como si estuvieran en "ros" intracelulares. POTENCIAL AGUA El agua es un integrante fundamental de la clula. Por su cantidad, el agua es el principal componente de los seres vivos y su importancia reside en el papel que desempea en la dinmica clular. Los iones inorgnicos, azcares, aminocidos, protenas, nucletidos, etc., reaccionan entre s y con otras sustancias (en el grado en que la actividad de la clula lo requiera) gracias a su

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interaccin con el agua en su carcter de solvente. En estado disuelto, esas sustancias se desplazan de un punto al otro del sistema celular siguiendo sus propios gradientes de concentracin y actividad. Tambin pueden ser arrastradas en forma masiva cuando el agua y las sustancias disueltas en ella, se desplazan como un flujo masal, es decir, simultneamente en la misma direccin. Es esta una caracterstica importante del agua, gracias a la cual reactivos y productos se trasladan a velocidades superiores a las que alcanzaran por simple difusin. De este modo se logra que los productos de la reaccin que ocurre en un punto o compartimiento se alejen de l (modificando as las situaciones de equilibrio de las que depende, en parte, la velocidad de las reacciones) y se hallen disponibles en otros puntos donde han de ser utilizados o almacenados. El agua cumple tambin el papel de reactivo o de producto en numerosos puntos de la intrincada red del metabolismo celular. As, pues, las molculas de sta se incorporan (hidrlisis) a un gran nmero de reacciones metablicas. Adems es del agua de donde proceden los hidrgenos involucrados en la fotosntesis y el oxgeno que es liberado como uno de los productos del proceso. A esta altura del tratamiento de algunas de las funciones que cumple el agua en las clulas, uno se puede preguntar si existe la posibilidad de caracterizar y cuantificar su capacidad para ejercer esas funciones: disolver sustancias e interaccionar con ellas, fluir entre dos puntos y entrar en reaccin con otras sustancias. La cantidad o proporcin de agua de la clula es slo uno de los caracteres que influyen, pero no basta. Lo que da realmente una idea y una medida de como el agua puede desempear esas funciones en distintas situaciones es su capacidad para realizar trabajo. El concepto de potencial qumico expresa esta capacidad. El potencial qumico del agua (a) que se halla en el citoplasma de las clulas depender de la temperatura, la presin, las sustancias disueltas y de la retencin por diversos tipos de superficies. Dado que no es sencillo determinar el potencial qumico absoluto del agua en una condicin determinada, lo que se hace habitualmente es compararlo con el potencial del agua pura en las condiciones estndares (25oC, presin normal), al que se denomina a. Es esa diferencia, a la que denominamos potencial agua (a - a = Ya), la que nos permite caracterizar y medir el nivel energtico del agua en un sistema cualquiera. La idea de potencial agua resulta ms asequible si se apela a los conceptos intuitivos de trabajo y de movimiento. Entonces, se puede afirmar que habr que aplicar menos trabajo para extraer agua de una masa de agua pura que para extraer la misma cantidad de una solucin o de un sistema en el que se halla sometida a atraccin por otras molculas. Esto significa que el agua en el sistema tiene menor capacidad para realizar trabajo, menos nivel energtico y menos potencial agua. Por otra parte, se puede decir que el agua, dentro de un sistema cualquiera se mueve desde puntos donde su capacidad para realizar trabajo, su nivel energtico o su potencial agua es mayor, hacia puntos donde es menor. Si el potencial agua es uniforme en todo el sistema, no habr movimiento neto de agua entre ninguno de sus puntos. POTENCIAL OSMOTICO Si colocamos agua pura y una solucin en un recipiente, pero separados por una membrana semipermeable, es decir capaz de permitir el paso de las molculas de agua pero no de las molculas de soluto, el agua pura se mover desde su compartimiento hacia el que contiene la solucin. El agua pura del compartimiento que la contiene, posee un nivel energtico, una capacidad para realizar trabajo y un potencial agua superiores al del agua que forma la solucin en el otro compartimiento y por eso tiende a moverse, a fluir a travs de los poros de la membrana, que por su tamao lo permiten. Este caso particular de difusin, en que el flujo neto de agua se produce a travs de una membrana semipermeable, recibe el nombre de smosis y es un fenmeno que se produce corrientemente entre clulas vecinas o entre compartimientos celulares separados por membranas. La situacin de equilibrio se alcanzar cuando el exceso de presin hidrosttica que representa la diferencia de nivel entre los dos compartimientos sea de un valor tal que lleve el nivel energtico del agua de la solucin -o sea su capacidad de realizar trabajo o su potencial agua- a una magnitud igual a la del agua pura a la misma temperatura.
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Si observamos bajo el microscopio clulas vegetales, veremos que si estn inmersas en una solucin hipertnica, las clulas se contraen como consecuencia de la salida de agua. En cambio si la solucin es hipotnica el agua entra a la clula y se manifiesta un exceso de presin que recibe el nombre de presin de turgencia pues la membrana plasmtica presiona contra la pared de la clula. La pared celular constituye una trama molecular con poros y espacios suficientemente grandes como para que el agua o la solucin exterior a la clula se mueva a travs de ella como un flujo masal hasta llegar a la membrana celular. Los cambios visibles de turgencia son una evidencia del pasaje de agua desde y hacia el interior del citoplasma: con la salida de agua de la clula por el proceso de smosis, la vacuola se contrae y con ella el citoplasma, separndose de la pared celular. Es lgico preguntar cual es la fuerza directriz que determina ese intercambio de agua. El gradiente de potencial agua entre el interior de la clula y el medio circundante (o las clulas vecinas) constituye esa fuerza directriz. Si el potencial agua en el medio externo y en el interior de la pared celular es mayor que en el citoplasma y la vacuola, el agua fluir hacia el interior y la turgencia celular aumentar. En el caso contrario, el agua fluir desde la clula hacia afuera y la turgencia disminuir. Si se retoma ahora el concepto de potencial agua desarrollado ms arriba se podrn analizar los componentes, es decir las fuerzas que lo determinan en la clula. En primer trmino se reconoce un componente osmtico, ya que en el citoplasma, existen sustancias disueltas que disminuyen el potencial qumico del agua. En segundo lugar, el agua en el interior de la clula puede estar sometida a un exceso de presin hidrosttica, la presin de turgencia, que incrementa el potencial qumico. Por otra parte, las interfases slido-lquido constituyen fuerzas de atraccin que restan potencial qumico al agua. Toda la trama o matriz slido-coloidal de la clula acta de esta manera y constituyen el potencial mtrico. Por ltimo, es preciso considerar el campo gravitatorio ya que ste ejerce influencia sobre el potencial del agua. Efectivamente, el agua asciende a alturas considerables en los rboles. El potencial agua sera pues la suma algebraica de los cuatro componentes: el potencial osmtico (s), el potencial de presin o presin de turgencia (P), el potencial mtrico (m) y el componente gravitatorio (agh). Tanto el potencial osmtico, como el potencial mtrico son siempre negativos. El agua de una solucin, por diluida que sea, tendr siempre un potencial qumico inferior al del agua pura a igual temperatura y presin. Lo mismo vale para el agua retenida en interfases con respecto al agua libre. La presin de turgencia, cuando existe, siempre es positivo. En muchos casos, el componente matricial es despreciable. Es importante preguntarse, qu sucede con las clulas animales que no tienen pared celular. (Averige al respecto) La intervencin del agua en los procesos celulares estar, regida por la cantidad de sustancias disueltas, por la magnitud de las fuerzas de retencin de la matriz celular y por el exceso de presin que la turgencia significa. El conocimiento de los valores de potencial agua en las clulas permite predecir la direccin del flujo de agua en una situacin determinada. OBJETIVOS: - Comprobar la difusin a travs de una membrana permeable y determinar el potencial de agua de un tejido vegetal. - Observar y comprobar algunos fenmenos de membrana en respuesta a diferentes concentraciones salinas. - Observar y distinguir la ubicacin de diferentes organelos en algunos tipos celulares. - Distinguir algunas especializaciones de la membrana plasmtica. ACTIVIDADES Potencial agua

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1. Colocar en los vasos de precipitado las soluciones de sacarosa que indica la tabla. Rotular convenientemente. 2. Lavar una papa y extraer 24 cilindros de 3 cm. de largo. No incluir cscara en ellos. Todos deben ser de la misma papa. 3. Colocarlos inmediatamente en cajas de Petri a fin de evitar la evaporacin. 4. Pesar rpidamente grupos de a cuatro cilindros (P inicial) y colocar cada grupo en las soluciones de sacarosa preparadas previamente 5. Transcurridas por lo menos dos horas, retirar los cilindros, quitarles el exceso de agua y volver a pesarlos (P final). 6. Completar la siguiente tabla. Qu conclusiones obtiene? Conc. de sacarosa Peso inicial Peso final agua destilada 0,1 M 0,2 M 0,4 M 0,6 M 0,8 M 7. Graficar (Pf-Pi)/Pi (% del original) como funcin de la concentracin de sacarosa. De la recta obtener la concentracin de sacarosa en la papa (punto donde corta el eje X). 8. Calcular el potencial agua del tejido sabiendo que cuando el peso inicial y final sean iguales: a clula = a solucin = s. s = -cRT R: constante de los gases (0.00831 Kg. MPa. mol-1.K-1) T: temperatura absoluta (K) c: concentracin de la solucin expresada como molalidad (moles-kg-1) 9. El potencial osmtico (s) de las clulas de papa es el mismo que el de la solucin de sacarosa? Por qu? Osmosis en un sistema viviente 1.- Tome 3 portaobjetos, enumrelos y coloque en cada uno de ellos una gota de sangre, en seguida aada gotas de solucin de NaCl del siguiente modo: Portaobjeto 1 = NaCl 1,5 % Portaobjeto 2 = NaCl 0,9 % Portaobjeto 3 agua destilada Cubra las preparaciones y observe lo ocurrido qu fenmeno ocurre en cada caso? 2.- Tome 3 portaobjetos, enumrelos y coloque en cada uno trozo de catfilo de cebolla, enseguida aada gotas de solucin de NaCl del siguiente modo: Portaobjeto 1 = NaCl 1,5 % Portaobjeto 2 = NaCl 0,9 % Portaobjeto 3 agua destilada (Pf-Pi)/Pi

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Cubra las preparaciones y observe lo ocurrido qu fenmeno ocurre en cada caso?, Existe diferencia con el experimento anterior?

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Seminario N 3: Estructura y funcin de organelos


INTRODUCCIN

La comprensin de la funcin celular implica el conocimiento de la organizacin morfolgica y molecular de ella. La estructura fina o ultraestructura celular est por debajo del lmite de resolucin del microscopio ptico corriente (aproximadamente 0,2 m), por lo que a partir de la introduccin del microscopio electrnico, con un lmite de resolucin terico de ms o menos 1000 veces menor, se lograron grandes avances en el estudio de la ultraestructura celular. As por ejemplo, fue posible conocer la estructura fina de la mitocondria con su doble unidad de membrana, la existencia de poros nucleares, el sistema de endomembranas, etc. Existen bsicamente 2 tipos de microscopios electrnicos: el microscopio electrnico corriente o de transmisin y el microscopio electrnico de barrido superficial o de scanning. MICROSCOPIO ELECTRNICO DE TRANSMISIN (MET) Produce una imagen bidimensional en blanco y negro del objeto. Las estructuras se vern con mayor o menor contraste segn la capacidad que tengan de dispersar los electrones. Es decir, los electrones atraviesan ciertas zonas impactando una pantalla fluorescente, en tanto que son detenidos o dispersados por otras zonas, produciendo as imgenes con contraste en blanco y negro. El microscopio electrnico a diferencia del microscopio ptico o de luz, utiliza un haz de electrones generados por un ctodo incandescente, los que son acelerados en un tubo al vaco, ya que los electrones son detenidos por el aire. La necesidad de vaco impide el estudio de clulas vivas al microscopio electrnico, mientras que la escasa capacidad de penetracin de los electrones exige el uso de cortes muy finos (menos de 50 nm) del material a estudiar. La obtencin de una microfotografa electrnica de un material biolgico requiere un tratamiento previo que implica fijacin, inclusin y corte, similar al procedimiento para microscopa de luz. Sin embargo, existen algunas diferencias, como son que la inclusin se realiza en un material muy duro (resinas epxicas), que permitan obtener cortes muy finos y el uso de metales pesados (Osmio, Plomo, Uranio), para aumentar el contraste de la preparacin y permitir la dispersin de los electrones. Se han desarrollado una serie de tcnicas especiales para el MET, como son por ejemplo: el sombreado metlico para el estudio de macromolculas y virus y la tcnica de congelamiento y fractura para el estudio de las zonas de interaccin (interfaces) de estructuras biolgicas. En ambos casos, se observa un efecto tridimensional de la imagen obtenida. MICROSCOPIO ELECTRNICO DE BARRIDO (MEB) Proporciona imgenes tridimensionales del objeto (clulas, microorganismos o material nobiolgico), porque forma las imgenes a partir de electrones secundarios arrancados de la muestra al ser recorrida o barrida por el haz de electrones incidentes, provenientes desde el microscopio (electrones primarios). Los electrones secundarios son recogidos por detectores que envan informacin para formar la imagen, en una pantalla de televisin. El MEB tiene menor capacidad de resolucin que el MET, pero es til en un rango de aumento que va de 15 a ms de 20.000 dimetros. Existe, adems, el microscopio de alto voltaje o ultramicroscopio para la observacin del material biolgico no tratado o vivo, pero presenta limitaciones por la alta energa que desarrolla.

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OBJETIVOS El desarrollo de esta actividad persigue que los alumnos:

ACTIVIDADES

Reconozcan e identifiquen organelos y/o estructuras celulares en microfotografas electrnicas tipo. Asocien la estructura con la funcin de organelos dentro de la constitucin de una clula. Relacionen la presencia y la cantidad de organelos con el tipo celular de un tejido. Conozcan las unidades de medicin ultraestructural ms comunes.

1.- Usando la literatura sugerida, disee un esquema de una clula eucariota animal, indicando una o dos funciones asociadas para cada uno de los siguientes organelos: - Ncleo. - Mitocondrias. - Ribosomas libres. - RER. - REL. - Aparato de Golgi. - Lisosomas. 2.- Para cada uno de los siguientes tejidos, rganos o clulas, indique qu organelos debieran estar en mayor abundancia para la funcionalidad ptima del tejido y por qu: a) Islotes pancreticos. b) Msculo esqueltico. c) Espermatozoide. d) Linfocito Natural Killer. e) Neuronas. f)Corteza suprarrenal. 3.- En una clula vegetal, qu organelos estn presentes y que no se encuentran en una cula animal y por qu? 4.- Describa brevemente cada una de las siguientes enfermedades asociadas al mal funcionamiento de un organelo: La enfermedad de Menkes. Sndrome de Zellweger Glicogenosis
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BIBLIOGRAFA Alberts y col. (1997). Biologa Molecular de la Clula. Editorial Omega. De Robertis y col. (2000). Biologa Celular y Molecular. Editorial El Ateneo. Murray y col. (2000). Bioqumica de Harper. Editorial El Manual Moderno.

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Laboratorio N 4: BIOENERGTICA FERMENTACIN.


INTRODUCCIN Todos los seres vivos requieren un continuo aporte de nutrientes para suplir sus necesidades de materia y energa. El principal nutriente de la clula es la glucosa, la que es catabolizada para producir ATP, la forma ms importante de energa utilizable en la clula. El metabolismo de la glucosa ocurre a travs de una serie de reacciones: Gliclisis: Glucosa Piruvato, ATP Ciclo de Krebs: Acetil CoA CO2 + NADH + H+ + FAD + ATP Cadena respiratoria: NADH + H+, FADH2 + O2 ATP + H2O En ausencia o deficiencia de oxgeno, ocurre respiracin celular anaerbica o fermentacin, en que el piruvato (producto de la gliclisis) se transforma en etanol (levaduras) o acido lctico (msculo). En presencia de oxgeno suficiente ocurre respiracin celular aerbica, en que el piruvato se incorpora a la mitocondria y se transforma en Acetil CoA, el cual a travs del ciclo de Krebs origina CO2 y coenzimas reducidas. Estas coenzimas reducidas se incorporan a la cadena respiratoria mitocondrial, donde son reoxidados por O2, produciendo ATP y H2O. Esta va aerbica es la principal va de produccin de ATP. Algunas clulas como los glbulos rojos y las bacterias anaerbicas estrictas tienen en la fermentacin la nica va de produccin de ATP, en tanto que otras clulas como las levaduras, que son anaerobios facultativos, en ausencia de O 2 realizan fermentacin y en presencia de l, realizan fermentacin y respiracin celular. ACTIVIDADES Fermentacin alcohlica en levaduras (Saccharomyces cerevisiae). La fermentacin alcohlica en levaduras ocurre de acuerdo a la reaccin: C6H12O6 2CO2 + 2 C2H5OH (etanol) El etanol se acumula en el medio y el CO2 es liberado como gas, por lo que se puede medir la fermentacin por la produccin de CO2. PROCEDIMIENTOS 1. Complete la siguiente batera de tubos: TUBOS Suspensin de levadura 7% Solucin de glucosa Agua destilada (43 C) Solucin rojo de metilo 1 1 mL 2 mL 1 mL 1 mL 1 mL 2 1 mL 1 mL 1 mL 3

Agitar por inversin para homogenizar el contenido de cada tubo. Medir pH a los tubos 1 y 2 con papel pH. Anotar. 2. Tapar cada tubo con tubo de ensayo ms grande invertido, presionndolo girar rpidamente de manera que el tubo quede invertido dentro del frasco. Marcar el nivel del tubo ANTES de taparlo. Ponerlos a incubar en un bao de agua a 43C.

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3. Al cabo de 30 min marque el nivel final de la solucin en el tubo y mida el volumen de gas producido con una pipeta con agua. 4. Verifique el pH en el tubo 2 con papel pH. 5. Anote y discuta sus resultados. Soluciones: 1. Solucin de levadura: disolver a homogeneidad 7 g de levadura en 10 ml de agua destilada a 43C y completar a 100 ml con agua destilada a 43C. 2. Solucin de glucosa 0,1 M 3. Solucin rojo de metilo 0,02 M Papel pH. CUESTIONARIO 1. Por qu es ventajoso para un organismo realizar fermentacin?

2. Se sabe que cuando el carbohidrato es fermentado por la levadura, slo un tercio de los
carbonos son liberados en forma de CO2. El resto del carbono es liberado como molculas de: ...................( Explique) 3. Las levaduras son procariotas o eucariotas? Cmo lo sabe? 4. En qu partes de la clula de levadura ocurre la gluclisis?

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Laboratorio N 5 "Bioenerga: Fotosntesis


INTRODUCCIN: La vida en la tierra depende de la energa derivada del sol. La fotosntesis es el nico proceso de importancia biolgica que puede recolectar esta energa. En sntesis, una gran porcin de los recursos energticos del planeta son producto de la actividad fotosinttica actual (biomasa) o la de tiempos remotos (combustibles fsiles). El trmino fotosntesis literalmente significa sntesis usando luz, es decir que los organismos fotosintticos usan energa solar para sintetizar compuestos orgnicos, que no pueden ser formados sin este aporte de energa. La energa almacenada en estas molculas puede ser usada ms tarde para el desenvolvimiento de procesos celulares en la planta y puede servir como fuente de energa para otras formas de vida. As la fotosntesis representa el primer eslabn en la cadena alimentaria en la tierra, por proveer la energa necesaria para todos los procesos vitales en los seres auttrofos y hetertrofos. El tejido ms activo en la fotosntesis de plantas superiores es sin duda el mesfilo de las hojas, aunque otras partes verdes de la planta como tallos, pecolos, epidermis de frutos, fotosintetizan, aunque en menor proporcin. El mesfilo de las hojas posee un gran nmero de cloroplastos, los cuales contienen los pigmentos especializados en la absorcin de luz. En la fotosntesis, la energa solar es usada por la planta para la oxidacin de la molcula de agua, con su consecuente liberacin de O2 y la reduccin de CO2 en compuestos orgnicos, azcares en forma primaria. La compleja serie de reacciones que culminan en la reduccin de CO2, incluye reacciones en una fase lumnica (dependientes de la luz) y otras que fijan carbono en una fase oscura. Las primeras ocurren en las membranas internas de los cloroplastos llamadas tilacoides. Los productos finales de las reacciones lumnicas son un compuesto dador de energa, el ATP y un compuesto reductor, el NADPH, usados ambos en la sntesis de azcares. La segunda fase sinttica llamada fase oscura, por no requerir luz, tiene lugar en el estroma del cloroplasto, que es la regin acuosa que rodea los tilacoides. La ecuacin general que resume este proceso es la siguiente:

La reaccin es una expresin muy simplificada del proceso fotosinttico que consiste en impulsar energa solar mediante una corriente de electrones desde el H2O y a travs de una serie de transportadores de creciente actividad reductora, hasta un aceptor cuyo potencial lo capacite para cederlos a la molcula de CO2 que de esta manera se reduce. Durante el proceso tambin se captura energa radiante que se transforma en energa qumica en forma de ATP. En funcin de lo expuesto, se considera a la fotosntesis un proceso endergnico de xidoreduccin, dada la existencia de una cadena de compuestos que secuencialmente se oxidan y reducen y transportan de esta manera electrones desde el agua hasta el NADP+ generando un compuesto con gran poder reductor como el NADPH. La energa del sol capturada en forma de ATP y NADPH es utilizada para la fijacin de CO2, como carbohidratos ricos en energa como la glucosa

Este resultado requiere varias reacciones. El carbohidrato es empaquetado como sacarosa para ser transportado desde las hojas hasta las partes no-fotosintetizadoras de la planta, tales como races y frutos. Para almacenamientos a largo plazo es sintetizado el almidn.

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OBJETIVOS: - Definir y comprender el proceso de fotosntesis, sealar los componentes requeridos y sus productos finales. - Estudiar la tasa fotosinttica en plantas de Elodea midiendo la produccin de O2. - Purificar y separar los pigmentos fotosintticos. - Discutir y evidenciar el rol de los pigmentos de las plantas en la fijacin de CO2. ACTIVIDADES I.- Extraccin de pigmentos vegetales. Procedimiento: 1.- Colocar en un mortero las hojas que haya elegido, aadir un poco de alcohol y triturarlas hasta que el alcohol adquiera un tinte verde intenso. 2.- Filtrar el lquido utilizando el embudo con un filtro de caf. 3.- Recortar unas tiras de papel filtro e introducirlas en un vaso hasta que toquen su fondo procurando que se mantengan verticales ayudndose con una pinza. 4.- Esperar 30 minutos y aparecern en la parte superior de la tira de papel unas bandas de colores que sealan a los distintos pigmentos (Ver Tabla).

II.- Observacin de componentes y procesos celulares fotosintticos. 1.- Observar hoja de elodea al microscopio, distinguir cloroplastos y ver ciclosis. 2.- Observar hojas de acelga o espinaca al microscopio y distinguir estomas. 3.- Observacin de cromoplastos: Cortar con el bistur un pequeo trozo de uno o dos milmetros de grosor, de la parte pulposa de un tomate Llevarlo sobre un portaobjetos, sin poner agua. Poner el cubre-objeto y comprimir suavemente la preparacin. Observar al microscopio. 4.- Observar y comprobar la realizacin de la fase oscura de la fotosntesis en hojas seleccionadas de una planta modelo. Procedimiento: 1.- Cada grupo deber seleccionar 3 hojas anchas, lisas y de coloracin verde homognea de alguna planta domstica de interior (Por ejemplo, Schefflera arborcola, Ficus, etc)

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2.- A las hojas seleccionadas, adherir un trozo pequeo circular de una lmina de corcho, o de un pedazo de cartulina o cartn, fijndolo con un alfiler. Incluso, sirve una moneda pequea que puede unirse a una parte de la hoja mediante una tela adhesiva. El objetivo es tapar de la luz una pequea parte de la hoja mediante este PARCHE. 3.- Dejar la planta en condiciones normales de luminosidad y agua, SIN SACAR el parche, durante al menos una semana antes de la realizacin del Laboratorio de Fotosntesis. 4.- Traer al laboratorio las hojas utilizadas en la experiencia realizada de una semana. 5.- En el laboratorio, retirar el parche de las hojas y calentarlas a bao mara, durante 10 minutos. 6.- Cumplido el tiempo, retirar y secar suavemente las hojas con papel absorbente. 7.- Agregar a cada hoja 10 gotas de solucin de iodo (lugol), cubrindola completamente y especialmente donde antes estuvo el parche. 8.- Dejar por 5 minutos. 9.- Retirar el exceso de lugol, dejar secar a temperatura ambiente. 10.- Observar la formacin de un halo o mancha parda donde antes estuvo colocado el parche. 11.- Agregar ms lugol en caso de poca tincin. Preguntas: 1.- Qu molcula se est reconociendo con el lugol? 2.- A qu se debe la coloracin oscura en la zona de la hoja que estuvo cubierta? 3.- Qu relacin tiene la fase oscura con el aumento de la sntesis de azcares en la planta?

Laboratorio N 6: Ciclo Celular y Mitosis


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INTRODUCCIN: El ciclo celular es el perodo comprendido entre la formacin de una clula, por divisin de otra precedente, y el momento en que ella misma se divide para originar dos clulas hijas. El ciclo celular se puede dividir en dos grandes perodos: interfase y mitosis, cada uno de los cuales se subdivide en varias fases o etapas. La interfase se encuentra subdividida en 3 etapas: Perodo G1, Ocurre sntesis de RNA y protenas. Perodo S, donde ocurre la duplicacin del ADN. Perodo G2, fase postsinttica que va desde el final de S hasta el comienzo de la mitosis. Mitosis Es la divisin nuclear asociada con la divisin de las clulas somticas. Cada mitosis nica est asociada con una nica divisin celular que produce dos clulas hijas gentica y cromosmicamente idnticas. El ciclo puede ser dividido en varios perodos: M, S, G1, G2 y G0. Mitosis (M), es generalmente el perodo ms corto del ciclo, que ocupa aproximadamente entre el 5 a 10 % del tiempo total de ciclo. La sntesis del DNA ocurre en S. G1 y G2 son perodos intermedios entre S y M. Juntos G1, S y G2 constituyen la interfase, el perodo entre dos mitosis consecutivas. Los cromosomas no son observables en la interfase. La etapa G0 es una salida del ciclo celular. La ganancia neta de la Mitosis es que se hace una copia de cada cromosoma presente en el ncleo y esta estructura doble luego se rompe para dar origen a dos cromosomas hijos, cada uno destinado a diferentes ncleos hijos. Para su estudio se ha dividido la mitosis en cuatro etapas: I. PROFASE: Se produce la condensacin de la cromatina, hacindose visibles los cromosomas con una apariencia doble, cada cromosoma est compuesto de dos mitades longitudinales llamadas cromtidas hermanas, que se juntan en la regin denominada centrmero. El nucleolo desaparece, la membrana nuclear se desorganiza y el nucleoplasma y el citoplasma se unen. METAFASE: El huso mittico se hace prominente. Este consiste en una serie de fibras microtubulares paralelas. Los cromosomas se mueven al plano ecuatorial de la clula y cada uno queda unido a las fibras del huso por su centrmero. ANAFASE: Comienza cuando las cromtidas hermanas se separan, cada una movindose a polos opuestos. La separacin comienza por el centrmero, que tambin se divide cuando cada cromtida se mueve. TELOFASE: La membrana nuclear se vuelve a organizar alrededor de cada ncleo hijo, los cromosomas se desenrollan y el nucleolo reaparece. El huso desaparece y la membrana celular se estrangula en la parte media del huso (citodiresis), originando dos clulas idnticas.

II.

III.

IV.

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PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL OBJETIVO: Reconocimiento de las distintas etapas de la mitosis. Actividad N1: Preparacin muestra raicilla de cebolla. 1.- Llenar un vaso de precipitados con agua y colocar un bulbo de cebolla (Allium cepa) sujeto con dos o tres palillos de manera que la parte inferior quede inmersa en el agua. Al cabo de 3 a 4 das aparecern numerosas raicillas en crecimiento de unos 3 o 4 cm. de longitud. 2.- Cortar con las tijeras unos 2-3 mm del extremo de las raicillas y depositarlo en un vidrio de reloj en el que se han vertido 2-3 ml de orcena A. 3.- Calentar suavemente el vidrio de reloj a la llama del mechero durante unos 8 minutos, evitando la ebullicin, hasta la emisin de vapores tenues. 4.- Con las pinzas tomar uno de los pices o extremos de las raicillas y colocarla sobre un portaobjetos, aadir una gota de orcena B y dejar actuar durante 1 minuto. 5.- Colocar el cubreobjetos con mucho cuidado sobre la raz. Con el mango de una aguja enmangada dar unos golpecitos sobre el cubre sin romperlo de modo que la raz quede extendida. 6.- Sobre la preparacin colocar unas tiras de papel de filtro, 5 o 6. Poner el dedo pulgar sobre el papel de filtro en la zona del cubreobjetos y hacer una suave presin, evitando que el cubre resbale. Si la preparacin est bien asentada no hay peligro de rotura por mucha presin que se realice. Observar al microscopio. La orcena A reblandece las membranas celulares y la B completa el proceso de tincin. Con la presin sobre el porta de la preparacin se logra una extensin y difusin de las clulas del meristemo de la cebolla. La preparacin presenta el aspecto de una dispersin de clulas por todo el campo que abarca el microscopio. Se observan clulas en diversas fases o estados de divisin celular. Se ven los cromosomas teidos de morado por la orcena. El aspecto reticulado, as como el mayor tamao de algunos ncleos, corresponde a las clulas que se encontraban en los procesos iniciales de la divisin mittica. Describe las fases de la mitosis que has observado y su significado. Por qu los cromosomas se tien de morado? 7.- Para completar el punto anterior observe al microscopio con el objetivo de inmersin una preparacin de raz de cebolla teida con Hematoxilina frrica. Identifique y dibuje algunas etapas de la Mitosis. Cul es el principal objetivo de la Mitosis?

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Cmo distinguira en sus preparaciones una clula interfsica? 8.- Calcular el ndice mittico (Im) del tejido de Allium a partir de la observacin de 50 clulas barriendo el campo y de acuerdo con la frmula:

Im = Nmero de clulas en divisin x 100 Nmero total de clulas observadas


9.- Calcular la duracin relativa de cada etapa de la mitosis (ndice de fases). Use la frmula:

If = Nmero de clulas en la fase x 100 Nmero total de clulas en mitosis


Debe observar 50 clulas de Allium cepa en divisin y anotar la etapa en que se encuentran. Luego calcule el If de cada una de las etapas. Cmo interpreta los valores de interpreta los valores calculados de Im e If? Actividad N2: MICROSCOPIA: Mitosis Objetivo: Material: Mtodo: Aumento:

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Actividad N3:

i.

Calcule el ndice Mittico (Im) del tejido Allium cepa a partir de la observacin de 50 clulas utilizando 3 campos visuales y de acuerdo a la formula.

Actividad N4: a) Cmo distinguira en sus observaciones una clula interfsica?

b) Calcule la duracin relativa de cada etapa de la mitosis (ndice de fase) usando la siguiente
formula: If = Nmero de Clulas en fase x 100 Nmero total de clulas en mitosis

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CUESTIONARIO 1) Por qu los cromosomas se tien de morado?

2) Qu es un cromosoma homlogo?

3) Indique la fase de la mitosis que se representa en el siguiente esquema y nombre las estructuras rotuladas.

DISCUSIN
1) Explique el proceso de mitosis para un organismo eucarionte Unicelular.

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UNIVERSIDAD SANTO TOMAS Departamento de Ciencias Bsicas Biologa Celular

2) Mencione las diferencias de la mitosis entre una clula animal y vegetal

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