CATEDRATICO: DRA ROSALBA ORTEGA JIMENEZ PRACTICA No.

3 DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD DE LA ENZIMA SUCCINATO DESHIDROGENASA

EQUIPO 3 QI 601

OBJETIVO

Que el alumno aprecie la actividad de la enzima Succinato Deshidrogenasa mediante una reaccin colorimtrica.

INTRODUCCION
El ciclo de Krebs (de los cidos tricarboxlicos o del cido ctrico) es una va metablica presente en todas las clulas aerobias, es decir, las que utilizan oxgeno como aceptor final de electrones en la respiracin celular. En los organismos aerobios las rutas metablicas responsables de la degradacin de los glcidos, cidos grasos y aminocidos convergen en el ciclo de Krebs, que a su vez aporta poder reductor a la cadena respiratoria y libera CO2.

La acetil-CoA generada por los diferentes catabolismos se condensa con el oxalacetato y genera citrato. A travs de 7 reacciones de oxidacin y

descarboxilacin sucesivas.

La

enzima

succinato

deshidrogenasa

(SDH),

succinato

coenzima

reductasa o complejo II mitocondrial es un complejo proteico ligado a la

membrana interna mitocondrial que interviene en el ciclo de Krebs y en la cadena de transporte de electrones, y que contiene FAD (flavn-adenn-

dinucletido) unido covalentemente. Cataliza la reaccin:

Succinato + ubiquinona=fumarato + ubiquinol

Las reacciones restantes del ciclo oxidan al succinato a oxalacetato, ste al

regenerarse, permite otra vuelta del ciclo. La succinato deshidrogenasa cataliza la oxidacin estereo especfica del enlace - CH2 CH2 del succinato a doble enlace trans, dando el fumarato.

La enzima succinato deshidrogenasa es la nica enzima del ciclo de Krebs que no

se encuentra en la matriz mitocondrial, sino que en la membrana mitocondrial

interna, con el sitio de unin del sustrato accesible desde la matriz. Es adems la nica en el ciclo asociada a un grupo prosttico flavnico (FAD) mediante el cual los equivalentes de reduccin del succinato son transferidos a la ubiquinona,

componente de la cadena de transporte de electrones. En general la funcin

bioqumica del FAD es oxidar alcanos a alquenos, mientras que el NAD+ oxida alcoholes a aldehdos o cetonas. El malonato es un fuerte inhibidor competitivo de la enzima.

RESUMEN
1. 2. Se peso 1 gr de hgado de pollo recientemente sacrificado. En el mortero se moli con 3 ml de acido succnico hasta que se obtuvo una masa

uniforme.
3. La masa se transfiri en partes iguales a 2 tubos y se prosigui de acuerdo a la siguiente tabla:

REACTIVO Fenol al 90 % Azul de metileno Aceite mineral

TUBO 1 1.0 ml 2.0 gotas Mezclar cada tubo 0.5 ml

TUBO 2 --------2.0 gotas 0.5 ml

4. 5.

Se incubaron los tubos diez minutos en un bao mara a 50 C. Se observo.

RESULTADOS
Tubo1: Coloracin caf claro. Tubo2: Coloracin caf verdoso.

DISCUSION
Los cambios observados en el ensayo colorimtrico en presencia del azul de metileno fueron los siguientes El tubo 1 tomo tonalidades verdosas lo que nos indica que hubo una oxidacin ya que si se hubiese reducido se hubiese tornado incoloro. El tubo 2 no sufri ningn cambio.

Por lo que lo que se interpreta que el succinato es oxidado a fumarato por la succinato deshidrogenasa, enzima que tiene como cofactor al FAD, esto produce ATP.

CONCLUSIN
Se llega a la conclusin de que el complejo enzimtico de la succinato deshidrogenasa est asociado a la membrana mitocondrial por esta razn se utiliza el hgado donde se realiza la sntesis proteica, detoxificacin, ya que cada una de sus clulas, tiene un alto contenido de mitocondrias y en estas ocurren la mayor parte de las reacciones del metabolismo oxidativo con un gran numero de enzimas funcionando contantemente.

CUESTIONARIO
1.- Cules son los colores del azul de metileno en sus estados oxidado y reducido? En el azul de metileno la coloracin verde indica oxidacin, y la coloracin transparente indica reduccin. 2.- Cul es la funcin del fenol en la reaccin? El fenol ayuda en la oxidacin que se presenta en la reaccin del azul de metileno y el FADH.

3.- En que va metablica esta involucrada la enzima succinato deshidrogenasa? En las reacciones del ciclo de Krebs y de la cadena respiratoria

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
Marks M.S., Seabra M.C. (2001) The melanosome: membrane dynamics in Black and White. Nat. Rev. Mol.

Cell Biol. 2:73 http://bcelular.fcien.edu.uy/index_archivos/estudiante_2011_A.pdf Bioqumica, Mathews y van Holde, Editorial McGraw Hill Interamericana, 1999

EQUIPO 3 INTEGRANTES

OLIVARES RIVERA IVAN ARMANDO RIVERA MUOZ ESMERALDA

TEPETZI MONTES NATHALY

VASQUEZ MOTA CARLOS MARTIN