2.

2- CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA: A cromatografia em camada fina (ou delgada) uma tcnica simples, barata e muito importante para a separao rpida e anlise quantitativa de pequenas quantidades de material. Ela usada para determinar a pureza do composto, identificar componentes em uma mistura comparando-os com padres; acompanhar o curso de uma reao pelo aparecimento dos produtos e desaparecimento dos reagentes e ainda para isolar componentes puros de uma mistura. Na cromatografia de camada delgada a fase lquida ascende por uma camada fina do adsorvente estendida sobre um suporte. O suporte mais tpico uma placa de vidro (outros materiais podem ser usados). Sobre a placa espalha-se uma camada fina de adsorvente suspenso em gua (ou outro solvente) e deixa-se secar. A placa coberta e seca chama-se "placa de camada fina". Quando a placa de camada fina colocada verticalmente em um recipiente fechado (cuba cromatogrfica) que contm uma pequena quantidade de solvente, este eluir pela camada do adsorvente por ao capilar.

Figura 2: Cromatografia em camada delgada. A amostra colocada na parte inferior da placa, atravs de aplicaes sucessivas de uma soluo da amostra com um pequeno capilar. Deve-se formar uma pequena mancha circular. medida que o solvente sobe pela placa, a amostra compartilhada entre a fase lquida mvel e a fase slida estacionria. Durante este processo, os diversos componentes da mistura so separados. Como na cromatografia de coluna, as substncias menos polares avanam mais

rapidamente que as substncias mais polares. Esta diferena na velocidade resultar em uma separao dos componentes da amostra. Quando estiverem presentes vrias substncias, cada uma se comportar segundo suas propriedades de solubilidade e adsoro, dependendo dos grupos funcionais presentes na sua estrutura (Figura 2). Depois que o solvente ascendeu pela placa, esta retirada da cuba e seca at que esteja livre do solvente. Cada mancha corresponde a um componente separado na mistura original. Se os componentes so substncias coloridas, as diversas manchas sero claramente visveis. Contudo, bastante comum que as manchas sejam invisveis porque correspondem a compostos incolores. Para a visualizao deve-se "revelar a placa". Um mtodo bastante comum o uso de vapores de iodo, que reage com muitos compostos orgnicos formando complexos de cor caf ou amarela. Outros reagentes para visualizao so: nitrato de prata (para derivados halogenados), 2,4-dinitrofenilidrazina (para cetonas e aldedos), verde de bromocresol (para cidos), ninhidrina (para aminocidos), etc. Um parmetro freqentemente usado em cromatografia o "ndice de reteno" de um composto (Rf). Na cromatografia de camada fina, o Rf funo do tipo de suporte (fase fixa) empregado e do eluente. Ele definido como a razo entre a distncia percorrida pela mancha do componente e a distncia percorrida pelo eluente. Portanto: Rf= dc / ds Onde: dc = distncia percorrida pelo componentes da mistura. ds = distncia percorrida pelo eluente. Quando as condies de medida forem completamente especificadas, o valor de Rf constante para qualquer composto dado e correspondente a uma propriedade fsica. Este valor deve apenas ser tomado como guia, j que existem vrios compostos com o mesmo Rf. Sob uma srie de condies estabelecidas para a cromatografia de camada fina, um determinado composto percorrer sempre uma distncia fixa relativa distncia percorrida pelo solvente. Estas condies so: 1- sistema de solvente utilizado; 2- adsorvente usado; 3- espessura da camada de adsorvente;

4- quantidade relativa de material. 2- METODOLOGIA Na aula de hoje sero apresentadas as tcnicas bsicas para o desenvolvimento de cromatografia em camada delgada e cromatografia em coluna. Na cromatografia em camada delgada (CCD) sero analisados e identificados os componentes coloridos extrados de folhas verdes (clorofila A e B) e os da cenoura (-caroteno), assim como os componentes de uma droga analgsica, comparando-os com padres. Ser ainda estudado o efeito do solvente no valor do Rf para os compostos -naftol e p-toluidina. Na cromatografia em coluna sero separados os componentes de uma mistura colorida de azul de metileno e alaranjado de metila em duas colunas diferentes, uma contendo alumina como fase estacionria e a outra contendo slica gel. A alumina, ou xido de alumnio, tem ao bsica e interage fortemente com espcies cidas. Por sua vez, a slica gel interage com espcies bsicas devido a natureza cida do xido de silcio. 3- PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL 3.1- CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA: 3.1.1- PREPARAO DAS PLACAS CROMATOGRFICAS: Prepare duas placas para cromatografia em camada fina a partir de lminas de vidro de microscpio. Agite com um basto de vidro uma suspenso espessa de slica em tetracloreto de carbono em um bquer de 50 mL. Quando a pasta resultante estiver homognea mergulhe na mistura as duas placas juntas, face a face, por um a dois segundos, retire-as e deixe-as secar ao ar. 3.1.2- SEPARAO DOS COMPONENTES DE UMA MISTURA: Com um capilar, semeie duas manchas a 1 cm da base da placa e separadas entre si; uma de extrato de folhas verdes e outra de extrato de cenoura. Coloque ento a placa em uma cuba cromatogrfica contendo o eluente (acetato de etila : ter de petrleo 2:3). O nvel de eluente deve estar abaixo do nvel das manchas na placa. Aps a eluio deixe secar a placa. O -caroteno (polieno isolado da cenoura) aparece como uma mancha amarela prxima ao topo da placa; as clorofilas A e B aparecem como manchas verde oliva e verde azulada, respectivamente. Calcule os Rf. 3.1.3- EFEITO DO SOLVENTE NO VALOR DE Rf:Em uma placa de slica gel ativada aplique, com ajuda de um capilar, uma soluo diluda de -naftol e outra de p-toluidina (use cloreto de metileno ou ter como solvente) e deixe desenvolver o cromatograma usando como eluente os seguintes solventes (faa uma placa para cada eluente):

a) cloreto de metileno puro. b) cloreto de metileno contendo 25% de acetato de etila. c) cloreto de metileno contendo 50% de acetato de etila. Aps o solvente atingir o topo da placa, retire a placa da cuba, evapore o solvente na capela e coloque-a numa atmosfera de iodo para revelar a manchas das substncias. Calcule o Rf para cada amostra em cada mistura de solvente. Qual o efeito causado sobre o Rf pelo aumento da proporo do acetato de etila na mistura de solvente utilizado? 3.1.4- ANLISE DOS COMPONENTES DE UM ANALGSICO: Pegue 3 tubos de ensaio. No primeiro, coloque o comprimido da amostra. No segundo, coloque cido acetilsaliclico e no terceiro tubo coloque a cafena. Nos 3 tubos, coloque 2,5 mL de metanol, macere o slido e agite cada tubo por 3-5 minutos. Em seguida, filtre e despreze o slido. Com a ajuda de um tubo capilar, aplique a uma distncia de 1 cm uma da outra as trs solues metanlicas em duas placas cromatogrficas distintas. Dependendo da concentrao desta soluo, duas ou trs aplicaes sero suficientes. Prepare a seguir dois sistemas de eluentes: i) acetona : clorofrmio 1:1 e ii) tolueno : clorofrmio : cido actico glacial : metanol 12:5:1,8:0,1. Prepare duas cubas cromatogrficas, uma para cada sistema de eluentes. Coloque cada placa cromatogrfica dentro de uma cuba. Aps a eluio, retire as placas da cuba. Deixe-as secar. Aps a secagem, coloque-as em uma atmosfera de iodo para revelar as manchas. Em 1-3 minutos, aparecero manchas amareladas sobre as placas. Remova ento as placas de dentro da cuba de iodo, contornando cada mancha com o tubo capilar. Calcule o Rf.