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UNIVERSIDADE PRESBITERIANA MACKENZIE


CENTRO DE CINCIAS BIOLGICAS E DA SADE

BRUNA PASCARELLI PEDRICO DO NASCIMENTO CCERA PIMENTA MARCELINO GABRIEL PAEZ DE CASTRO OLIVEIRA LOREDANNA CAVALHEIRO AURORA RENATA LOBATO CATARINACHO

RELATRIO DE AULAS PRTICAS DE BIOQUMICA I

SO PAULO 2009 BRUNA PASCARELLI PEDRICO DO NASCIMENTO CCERA PIMENTA MARCELINO GABRIEL PAEZ DE CASTRO OLIVEIRA LOREDANNA CAVALHEIRO AURORA RENATA LOBATO CATARINACHO

RELATRIO DE AULAS PRTICAS DE BIOQUMICA I

Trabalho apresentado disciplina de Bioqumica I, do Curso de Cincias Biolgicas, da Universidade Presbiteriana Mackenzie. Profa. Dra. Daniela de Oliveira Toyama

SO PAULO 2009

1. INTRODUO

Dentre as diversas molculas constituintes de uma clula, sabe-se que a gua seu componente de maior importncia e o mais abundante, sendo que esta representa cerca de 70% da constituio da maioria dos organismos e participa basicamente de todas as reaes qumicas das clulas. sabido que a gua uma molcula assimtrica e que sua importncia est em sua natureza dipolar, onde temos sua tendncia a se combinar com ons negativos e positivos maior que a tendncia desses ons se combinarem entre si. A presena de carga parcial positiva em seus tomos de hidrognio e de carga parcial negativa no tomo de oxignio, o qual possui dois pares de eltrons no-compartilhados, permite que a gua se associe com outras quatro molculas atravs de pontes de hidrognio. Graas a capacidade que a gua tem de formar pontes de hidrognio ela possui propriedades nicas como altos pontos de fuso e ebulio, alto calor especfico e elevado calor de vaporizao. O que determina as propriedades solventes da gua, em grande parte, a sua natureza polar. Compostos inicos com cargas inteiras e compostos polares com cargas parciais tendem a dissolver-se em gua, pois estes conseguem interagir com a gua atravs das pontes de hidrognio, fato que no observado quando se trata de compostos apolares, que no se dissolvem em gua, pois no conseguem interagir com esta por pontes de hidrognio e na presena destes compostos h um ordenamento energeticamente desfavorvel das molculas de gua em sua superfcie. As substncias que tendem a dissolver-se em gua so chamadas hidroflicas e as substncias que no se dissolvem em gua so chamadas hidrofbicas. Em uma mesma molcula possvel a presena de pores tanto polares (hidroflicas) quando apolares (hidrofbicas), nessa situao a molcula chamada anfiptica. graas a esta funo fundamental da gua como solvente que ela desempenha um papel fundamental nos processos biolgicos devido as suas propriedades cido-bsicas. Por definio, cidos so substncias com capacidade de ceder/doar prtons em uma reao e bases so substncias com capacidade de receber prtons em uma reao. Existe um valor numrico conhecido como constante de dissociao ou Ka, que indica a quantidade de ons hidrognio que um cido libera,

quando dissolvida certa quantidade desse cido em gua, portanto a partir desse valor expressa a fora do cido. conhecida ainda, uma outra constante que determina a tendncia que a gua tem de dissociar-se e formar os ons hidrognio e hidrxido, essa constante chamada de Kw ou constante do produto inico da gua. Graas a esta definio, na gua pura a concentrao de ons hidrognio igual concentrao dos ons hidroxila, portanto dito que a soluo est em um pH neutro. O pH a medida da concentrao de ons hidrognio em uma soluo, sendo que esta medida pode ser obtida em valores aproximados, com a utilizao de corantes indicadores, e em valores precisos com a utilizao de um pHmetro. Existe uma equao, conhecida como equao de Herdenson-Hasselbalch, que relaciona o pH com o Ka e com as concentraes de cido e base conjugados. Esta a equao de dissoluo de um cido fraco, que utilizada para adiantar as propriedades de um tipo de soluo que utilizada para manter o pH de misturas de reao. Esse tipo de soluo conhecido como soluo-tampo, que constituda pela a mistura de cidos fracos suas bases conjugadas. Como citado anteriormente, uma soluotampo capaz de impedir mudanas drsticas/acentuadas de pH diante da adio de pequenas quantidades de cido ou de base fortes. Existem certos fatores que determinam a eficincia de um tampo, sendo que esta restrita a uma faixa de pH na qual as concentraes de cido e base conjugada so capazes de compensar adies de cido e base fortes. A partir da equao de Herderson-Hasselbalch observa-se, que quando h quantidades iguais nas

concentraes de cido e base conjugados o pH dessa soluo igual ao valor do pKa do cido fraco, sendo que a melhor a atuao de um tampo se d nessas condies. Portanto, a zona de maior eficincia de um tampo aquela na qual existem, simultaneamente, 50% de cido conjugado e 50% de base conjugada. Essa regio de maior eficincia pode ser determinada a partir de uma curva de titulao, que representada a partir de um grfico de pH x os valores equivalentes de base adicionados durante a titulao de um cido qualquer. De modo que, a eficincia de um tampo se encontra relacionada com a sua concentrao. A existncia de um sistema-tampo se faz necessria pelo fato de que muitas reaes biolgicas so extremamente sensveis a variaes de pH, e estas no

ocorrem se este estiver um pouco fora de seu valor timo. Alm disso, a estrutura e a atividade de macromolculas biolgicas importantes, como por exemplo as protenas, so alteradas havendo perda de suas atividades em extremos de pH. Os aminocidos so compostos orgnicos constitudos por nitrognio, oxignio, hidrognio e carbono (podendo haver enxofre). Em um aminocido podese evidenciar um grupamento amina (NH2), um grupamento carboxila (COOH), o carbono alfa, o hidrognio e o grupo R, chamado radical, que caracteriza os aminocidos, ou seja, determina suas propriedades e os classifica. A classificao dos aminocidos dse principalmente pela sua polaridade/apolaridade e sua interao com a gua hidrofila/hidrofobia, formando assim duas classes principais de aminocidos: os apolares (hidrofbicos) e os polares (hidroflicos). Os aminocidos formam as protenas a partir das ligaes peptdicas que ocorrem entre o grupamento amina de um aminocido e o grupamento carboxila de um outro aminocido, havendo nesta ligao a perda de uma molcula de gua. As protenas so polmeros de alfa-aminocidos de forma L, podendo ter uma ou mais cadeias polipeptdicas. Uma boa parte das protenas so sintetizadas no citosol da clula pela traduo de RNA, tendo importante funo estrutural, informacional e funcional para os organismos. Essas macromolculas so extremamente sensveis a mudanas de pH, altas temperaturas, compostos que formam pontes de hidrognio e solues polares, sendo que sob essas condies as protenas podem sofrer mudanas em sua conformao, ocasionando a perda de funes. Uma maneira prtica de separar aminocidos a cromatografia em papel ascendente, este mtodo consiste na separao dos componentes de uma mistura, tendo por base a distribuio destes em duas fases, uma estacionria e outra mvel, que esto em contato, dessa forma pode-se classificar os aminocidos de acordo com suas propriedades. H formas experimentais para se caracterizar aminocidos. A interao destes com algumas substncias adicionadas podem causar mudanas muito particulares, evidenciando assim, algumas de suas propriedades a partir da colorao assumida. A reao de Millon, evidencia a presena de tirosina, a reao de Hopkins-Cole , o triptofano; na reao de Sakagushi, a arginina e na reao de ninidrina so

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evidenciados os compostos com grupos amino livres, portanto esse tipo de reao muito importante para anlise qualitativa de aminocidos e protenas. As protenas podem ser caracterizadas a partir de algumas de suas propriedades, como por exemplo, a carga eltrica, a solubilidade, massa molar ou por colorao e precipitao, que pode ocorrer por sais neutros, em que h a solubilizao por salificao (salting in) ou a precipitao por salificao (salting out). H tambm a precipitao por sais de metais pesados ou por cidos fortes; essas duas formas relacionam o pH e o PI dos compostos formados a partir da adio de alguma substncia amostra de protena, no caso, solues que contenham ons positivos de metais (Hg++; Pb++; Fe++, entre outros) e solues de cidos fortes. Um exemplo de determinao quantitativa das protenas pode ser o teste do biureto, em que possvel obter absorbncia de um composto desconhecido a partir de sua colorao e assim, determinar a sua concentrao. A partir do estudo e da realizao das experincias a seguir descritas pdese reconhecer as propriedades e caractersticas de aminocidos e protenas, alm da influncia que alteraes fsicas e qumicas no meio podem causar a esses compostos orgnicos de to importante funo biolgica.

BIBLIOGRAFIA

CAMPBELL, M. K. Bioqumica. 3.ed. Porto Alegre: Artmed Editora, 2000.

MARZZOCO, A. & TORRES, B. B. Bioqumica Bsica. 3.ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2007.

NELSON, D. L. & COX, M. M. Lehninger Princpios de Bioqumica. 4.ed. So Paulo: Sarvier, 2006.

SARDELLA, A & MATEUS, E. Curso de Qumica: Qumica Geral. 21.ed. So Paulo: Editora tica, 1995

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2. MATERIAL E MTODOS

TAMPES E pH

2.1 - EXPERIMENTO 1 - FUNCIONAMENTO DOS TAMPES

Inicialmente deveria ser construda uma escala padro de pH. Para a construo desta escala foram necessrios 7 tubos de ensaio, numerados de 4 a 10, nos quais foram adicionados 2 mL de soluo tampo com pH 4, 5, 6, 7, 8, 9 e 10 em seus respectivos tubos. Deveriam ter sido adicionadas 3 gotas de indicador universal em cada um dos tubos, contudo, foram adicionadas cerca de 6 gotas do mesmo em cada um dos tubos para que estes adquirissem uma colorao mais intensa. Aps a adio do indicador universal os tubos foram agitados para a homogeneizao e colocados em uma estante. A colorao de cada um dos tubos foi observada e correlacionada com o valor de pH. Aps a construo da escala padro de pH, foram necessrios mais 4 tubos de ensaio, que foram numerados de 1 a 4. Foram adicionados 2 mL de gua destilada nos tubos 1 e 3. J nos tubos 2 e 4 foram adicionados 2 mL de soluo tampo fosfato 0,2M pH 7,7. Foram adicionadas 3 gotas de indicador universal nos 4 tubos. Aps a adio do indicador, os tubos foram agitados para a homogeneizao das solues e foi anotado o valor de pH de cada um dos tubos. Aps a medio do pH, foram adicionadas 3 gotas de soluo cida (HCL 0,1M) nos tubos 3 e 4, e 3 gotas de soluo bsica (NaOH 0,1 M) nos tubos 1 e 2. Aps a adio de ambas as solues os tubos foram agitados e foi anotado o valor do pH de cada um deles. 2.2 EXPERIMENTO 2 CAPACIDADE DE TAMPONAMENTO DA SALIVA

Em um copo descartvel foi coletada a saliva de um integrante do grupo. Aps a coleta, a ponta de uma tira de papel indicador de pH foi mergulhada na saliva, para a medio de seu pH. Logo em seguida, foram ingeridos quatro goles de suco de limo, e o procedimento inicial de coleta de saliva e medio do pH foi repetido. Passados 20

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minutos, a saliva foi novamente coletada e da mesma maneira que nos procedimentos anteriores teve seu pH medido.

2.3 - EXPERIMENTO 3 - FORA INICA DOS TAMPES

Para a realizao deste experimento foram necessrios dois tubos de ensaio que foram numerados em 1 e 2. No tubo 1, foram colocados 10,0 mL de soluo tampo fosfato 0,2 M, ph 7,7 e 7 gotas de indicador universal. No tubo 2, foram colocados 2,5 mL da mesma soluo tampo, 7,5 mL de gua destilada e 7 gotas de indicador universal. O pH de ambos os tubos foi medido com o auxlio do pHmetro e anotado. Os tubos deste experimento no foram descartados, pois foram necessrios para a realizao do experimento 4.

2.4 - EXPERIMENTO 4 - CAPACIDADE TAMPONANTE COM PROPORES SAL/CIDO CONSTANTES

Para a realizao deste experimento, foram necessrias as solues do experimento anterior, portanto, foram utilizados os mesmos dois tubos de ensaio. Em ambos os tubos foi adicionado 1,0 mL de soluo cido sulfrico e foi realizada a medio do pH com o auxlio do pHmetro. O mesmo procedimento foi realizado mais duas vezes, lembrando que em todas elas os resultados da medio do pH foi registrado. 2.5 EXPERIMENTO 5 CAPACIDADE TAMPONANTE COM PROPORES SAL/CIDO VARIVEIS

Para a realizao deste experimento foram necessrios 4 tubos de ensaio, que foram numerados de 1 a 4. No tubo 1 foram adicionados 3,5 mL de soluo de Acetato de sdio (CH3COONa 0,1M) e 3,5 mL de soluo de cido actico (CH3COOH 0,1M). No tubo 2 foram adicionados 5,0 mL de soluo de Acetato de sdio (CH3COONa 0,1M) e 2,0 mL de soluo de cido actico (CH3COOH 0,1M). No tubo 3 foram

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adicionados 6,0 mL de soluo de Acetato de sdio (CH3COONa 0,1M) e 1,0 mL de soluo de cido actico (CH3COOH 0,1M). No tubo 4 foram adicionados 6,5 mL de soluo de Acetato de sdio (CH3COONa 0,1M) e 0,5 mL de soluo de cido actico (CH3COOH 0,1M). Aps a adio das solues, todos os tubos foram agitados para a homogeneizao da soluo e, com o auxlio do pHmetro, foi verificado o pH de cada um dos tubos de ensaio. A partir da equao de Henderson-Hasselbalch foi calculado o pH terico de cada um dos 4 tubos. Deveria ser indicado o tubo que apresentasse o maior poder de tamponamento com justificativa. Para que fosse testada a indicao do tubo com maior poder de tamponamento, o contedo de cada um dos 4 tubos foi dividido pela metade, sendo necessrios mais 4 tubos de ensaio, totalizando 8 tubos de ensaio nesta etapa do experimento, sendo estes identificados com 1A e 1B, 2A e 2B, 3A e 3B, 4A e 4B. Nos tubos 1A, 2A, 3A e 4A foi adicionado 1,0 mL de soluo de cido Clordrico (HCL 0,1M). J nos tubos 1B, 2B, 3B e 4B foi adicionado 1,0 mL de soluo de Hidrxido de Sdio (NaOH 0,1M). Aps a adio das solues, todos os tubos foram agitados para a homogeneizao da soluo e, com o auxlio do pHmetro, foi verificado o pH de cada um deles.

SEPARAO ASCENDENTE

DE

AMINOCIDOS:

CROMATOGRAFIA

DE

PAPEL

2.6 EXPERIMENTO 1 - CROMATOGRAFIA DE PAPEL ASCENDENTE

Utilizando papel cromatogrfico (Whatman n1), foram realizados cortes na direo e orientao das fibras de celulose, afim e formar trs tiras de papel de aproximadamente 17,0 cm de comprimento e 2,0 cm de largura. Aps isso, foi traada uma linha a 2,0 cm da ponta inferior de cada tira de papel, essa linha foi denominada Linha de Base. Na primeira tira de papel cromatogrfico, aplicou - se uma gota da

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soluo de glicina (0,1 M), na segunda, uma gota da soluo de leucina (0,1M) e na terceira tira uma gota de cada uma das solues (glicina e leucina). Adicionou-se 20 mL de solvente (butanol, cido actico e gua) em trs tubos calibrosos, estes foram fechados com rolha (para ocorrer a saturao com a atmosfera) e presos com garras de metal um suporte para facilitar o experimento. Cada tira de papel cromatogrfico, j seca ao ar, foi colocada em cada um dos tubos, presas pela rolha, de forma que apenas a ponta inferior do papel entrasse em contato com o solvente. Aps 40 minutos de espera, as tiras foram retiradas e, novamente, secas ao ar, com o uso de um lpis comum a Linha de Frente (parte do papel cromatogrfico em que cessou a subida do solvente) foi traada e a Ninidrina (0,1%) pulverizada sobre cada uma das tiras. Para auxiliar na secagem, as tiras de papel cromatogrfico foram colocadas em uma estufa a 60C permanecendo sob essas condies por aproximadamente 15 minutos. Realizada a secagem, verificou - se as manchas que se formaram e localizou se o centro destas (parte em que apresentam - se mais concentradas).Finalizando o experimento, calculou - se a Relao com a Frente, que d - se pela frmula Rf = d/D, onde Rf (Relao com a Frente), d a distncia percorrida pela mancha e D a distncia percorrida pelo solvente. Os dados obtidos foram anotados para a concluso do experimento. Observao: Todo o experimento foi realizado com o uso de luvas, no deve haver contato direto com o papel cromatogrfico, pois a qualidade do experimento seria comprometida j que o papel usado para evidenciar aminocidos.

REAES DE CARACTERIZAO DE AMINOCIDOS E PRECIPITAO DE PROTENAS 2.7 EXPERIMENTO 1 EXISTNCIA DE AMINOCIDOS SULFORADOS

Em dois tubos de ensaio, foram colocados 1,0 mL de soluo de protena (Albumina) 10 mg/mL e 1,0 mL de gua destilada, respectivamente. Em seguida, foi adicionado lentamente 1 mL de NaOH 6M em ambos os tubos. Ento, os dois tubos foram aquecidos em chama direta do bico de Bunsen com o auxlio de pinas de

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madeira. Aps o aquecimento, foram adicionadas 3 gotas de cido actico concentrado e 3 gotas de Acetato de chumbo 10% em cada um dos tubos. Realizado todo esse procedimento, as reaes foram observadas e os resultados foram anotados.

2.8 EXPERIMENTO 2 REAO DE MILLON

Em dois tubos de ensaio, identificados como 1 e 2, foram adicionados 2 mL de soluo de protena 10 mg/mL e 2 mL de gua destilada, respectivamente. Logo em seguida, foi acrescentado 1 mL do reativo de Millon em ambos os tubos. Ento, os tubos foram aquecidos em chama direta do bico de Bunsen, por cerca de 30 segundos, com o auxlio de pinas de madeira. As reaes foram observadas e seus resultados foram anotados. 2.9 EXPERIMENTO 3 REAO DE HOPKINS-COLE

Em dois tubos de ensaio, foram colocados 1 mL de soluo de protena 10 mg/mL e 1 mL de gua destilada, respectivamente. Em seguida, foram adicionados 3 mL do reativo de Hopkins-Cole em ambos os tubos. Ento, com os tubos inclinados, foram adicionados lentamente 2 mL de cido sulfrico concentrado pelas paredes de cada um dos tubos. Passados alguns minutos, observou-se as reaes e os resultados foram anotados. 2.10 EXPERIMENTO 4 REAO DE SAKAGUSHI

Em dois tubos de ensaio, identificados como 1 e 2, foram adicionados 1,0 mL de soluo de protena 10 mg/mL, no tubo 1, e 1,0 mL de gua destilada, no tubo 2. Em seguida foram adicionados, em ambos os tubos, 1,0 mL de NaOH 2,5M, 0,5 mL de naftol (0,4% em etanol) e 1,0 mL de Hipoclorito de sdio (6-7%). Observadas as reaes os resultados foram anotados.

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2.11 EXPERIMENTO 5 REAO DA NINIDRINA

Em dois tubos de ensaio (numerados 1 e 2) foram colocados 1 mL da soluo de protena (albumina) 10mg/mL e 1mL de gua destilada, respectivamente. Aps isso acrescentou - se aos tubos 3 mL da soluo de Ninidrina 0,1% (em tampo fosfato pH 7,0). Os tubos foram fervidos por aproximadamente 2 minutos em banho maria. Os resultados obtidos foram interpretados e anotados. 2.12 EXPERIMENTO 6 PRECIPITAO POR SAIS NEUTROS

Em um primeiro momento, foram colocados 2 mL de soluo protica 10 mg/mL em um tubo de ensaio e logo em seguida foram adicionados lentamente pela parede do tubo 2 mL de soluo saturada de cloreto de magnsio (MgCl2), observou-se a reao e o resultado foi anotado. Aps esse primeiro procedimento a soluo foi misturada e o resultado foi novamente anotado. Em um segundo momento foram adicionados 2 mL de gua destilada soluo, que foi misturada e teve seus resultados anotados. 2.13 EXPERIMENTO 7 PRECIPITAO POR SAIS DE METAIS PESADOS

Em um tubo de ensaio foi colocado 1mL da soluo de protena (albumina) 10mg/mL, este tubo adicionou-se 0,5 mL da soluo de cloreto frrico (FeCl3) 40%. As modificaes apresentadas foram observadas e, para finalizar o experimento adicionou-se soluo 5 mL de gua destilada, novamente o ocorrido foi observado, interpretado e anotado. 2.14 EXPERIMENTO 8 PRECIPITAO POR CIDOS FORTES

Em um tubo de ensaio foi colocado 1,0 mL de soluo protica 10 mg/mL. A essa soluo, foi adicionado 0,5 mL de cido pcrico 10%. A reao foi observada e o resultado foi anotado. Aps o registro do resultado foram adicionados 5 mL de gua

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destilada soluo, novamente a reao foi observada e seus resultados foram registrados. DETERMINAO FOTOCOLORIMTRICA DE PROTENAS 2.15 EXPERIMENTO 1 TESTE DE BIURETO

Inicialmente, 6 tubos de ensaio foram numerados do seguinte modo: B (branco), 1, 2, 3, 4 e A. No tubo B, foram colocados 2 mL de gua destilada e 5,0 mL do reativo de Biureto. No tubo 1, foram colocados 1,5 mL de gua destilada, 0,5 mL de soluo padro de protena (Albumina) 5 mg/mL e 5,0 mL do reativo de Biureto. No tubo 2, foram colocados 1,0 mL de gua destilada, 1,0 mL de soluo padro de protena (Albumina) 5 mg/mL e 5,0 mL do reativo de Biureto. No tubo 3, foram colocados 0,5 mL de gua destilada, 1,5 mL de soluo padro de protena (Albumina) 5 mg/mL e 5,0 mL do reativo de Biureto. No tubo 4, foram colocados 2,0 mL de soluo padro de protena (Albumina) 5 mg/mL e 5,0 mL do reativo de Biureto. E, finalmente, no tubo A, foram colocados 2,0 mL de soluo desconhecida e 5,0 mL do reativo de Biureto. Aps a distribuio dos reagentes, todos os tubos foram incubados em banho-maria em temperatura entre 20-32C durante 10 minutos. Em seguida, foram medidos os valores de Absorbncia em 545 nm contra o tubo B (branco) e os valores obtidos foram registrados. Por ltimo, foi utilizada a frmula C/A=F, para encontrar o fator (F). E a partir desse fator foi calculada a concentrao da amostra desconhecida, utilizando-se a frmula FxA (Absorbncia), sendo a concentrao dessa amostra expressa em mg/mL.

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3. RESULTADOS

TAMPES E pH 3.1 - EXPERIMENTO 1 FUNCIONAMENTO DOS TAMPES

Ao se relacionar os resultados obtidos com a construo da escala padro de pH com as informaes da tabela presente na apostila, foi observado que no tubo em que foi colocada a soluo tampo de pH 4 a soluo apresentou colorao vermelha; no tubo em que foi colocada a soluo tampo de pH 5 a soluo apresentou colorao alaranjada; no tubo em que foi colocada a soluo tampo de pH 6 a soluo apresentou colorao amarela; no tubo em que foi colocada a soluo tampo de pH 7 a soluo apresentou colorao verde; no tubo em que foi colocada a soluo tampo de pH 8 a soluo apresentou colorao azul; no tubo em que foi colocada a soluo tampo de pH 9 a soluo apresentou colorao anil e no tubo em que foi colocada a soluo tampo de pH 10 a soluo apresentou colorao violeta. Ao se medir o pH dos tubos de ensaio 1 e 3, nos quais foram adicionados gua destilada e indicador universal, verificou-se um pH igual a 7, o qual considerado neutro. Ao se medir o pH dos tubos de ensaio 2 e 4, nos quais foram adicionados soluo tampo e indicador universal, verificou-se um pH igual a 8. Aps a adio da soluo bsica nos tubos 1 e 2, a medio do pH indicou, no tubo 1, um pH igual a 10. J no tubo 2, a mesma medio indicou um pH igual a 7. E aps a adio da soluo cida nos tubos 3 e 4, a medio do pH indicou, no tubo 3, um pH entre 4 e 5, e no tubo 4, a mesma medio indicou um pH entre 6 e 7. 3.2 EXPERIMENTO 2 CAPACIDADE DE TAMPONAMENTO DA SALIVA

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Na primeira medio, o pH ficou em torno de 8. Aps o suco de limo ter sido ingerido, o valor do pH mudou para 5. J na terceira medio, o pH retornou ao seu valor inicial, indicando novamente um pH igual a 8. 3.3 - EXPERIMENTO 3 - FORA INICA DOS TAMPES

No tubo 1, com o auxlio do pHmetro, chegou-se a um valor de pH igual a 8,30, sendo que a colorao da soluo neste tubo era azulada. J no tubo 2, ao se adicionar gua destilada a soluo tampo, o pHmetro indicou praticamente o mesmo valor de pH, sendo este igual a 8,25.

3.4 - EXPERIMENTO 4 - CAPACIDADE TAMPONANTE COM PROPORES SAL/CIDO CONSTANTES

No tubo 1, com as adies graduais da soluo de cido sulfrico, o pH foi diminuindo levemente, obtendo-se um valor de 7,79 na primeira medio, 7,17 na segunda medio e 6,59 na terceira medio, sendo que a soluo foi ganhando uma colorao amarelo-esverdeada. J no tubo 2, com as mesmas adies graduais da soluo de cido sulfrico, o pH foi diminuindo bruscamente, obtendo-se um valor de 6,87 na primeira medio, 4,61 na segunda medio e 1,70 na terceira medio, sendo que a soluo foi ganhando uma colorao avermelhada. 3.5 EXPERIMENTO 5 CAPACIDADE TAMPONANTE COM PROPORES SAL/CIDO VARIVEIS

Com o auxlio do pHmetro foram verificados no tubo 1 um pH igual a 4,56, no tubo 2 um pH igual a 4,95, no tubo 3 um pH igual a 5,40 e no tubo 4 um pH igual a 5,39. A partir da equao de Henderson-Hasselbalch foi calculado o pH terico de cada um dos 4 tubos. Obtendo-se um valor de 4,76 para o tubo 1; 5,76 para o tubo 2; 5,54 para o tubo 3 e 5,87 para o tubo 4. Aps a adio de cido clordrico o tubo 1A indicava um pH de 3,85, o tubo 2A um pH de 4,54, o tubo 3A um pH de 4,47 e o tubo 4A um pH de 4,93. J nos tubos 1B,

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2B, 3B e 4B aps a adio de Hidrxido de sdio foram verificados valores de pH 5,74 no tubo 1B, 13,21 no tubo 2B, 12,91 no tubo 3B e 13,48 no tubo 4B.

SEPARAO ASCENDENTE

DE

AMINOCIDOS:

CROMATOGRAFIA

DE

PAPEL

3.6 EXPERIMENTO 1 CROMATOGRAFIA DE PAPEL ASCENDENTE

Na tira de papel cromatogrfico em que foi aplicada Glicina houve a formao de pequenas manchas de colorao lils, a distncia percorrida pelo solvente foi de 5,5 cm e a distncia percorrida pela mancha foi de 0,5 cm, atravs da frmula obteve se Rf = 0,5/5,5 e, portanto a Relao com a Frente foi de 0,09 cm. Na tira em que foi aplicada Leucina houve a formao de uma grande mancha lils, a distncia percorrida pelo solvente foi de 8,0 cm e a distncia percorrida pela mancha foi de 2,0 cm, pela frmula obteve se Rf = 2,0/8,0 e, portanto a Relao com a Frente foi de 0,25 cm. Na tira de papel em que foram aplicadas as duas solues (Glicina e Leucina), houve a formao de uma mancha lils clara e no contnua, a distncia percorrida pelo solvente neste caso foi de 6,0 cm e a parte percorrida pela mancha foi de aproximadamente 1,0 cm, obtendo se atravs dos clculos Rf = 1,0/6,0 Relao com a Frente igual a 0,16 cm.

REAES DE CARACTERIZAO DE AMINOCIDOS E PRECIPITAO DE PROTENAS 3.7 EXPERIMENTO 1 EXISTNCIA DE AMINOCIDOS SULFORADOS

Realizados todos os procedimentos no tubo 1, observou-se uma mudana na colorao da substncia, que passou de amarelo para um tom castanho escuro. J no tubo 2, aps a realizao de todos os procedimentos, nenhuma mudana foi observada, a colorao da substncia permaneceu incolor assim como no incio.

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3.8 EXPERIMENTO 2 REAO DE MILLON

No tubo 1, no qual havia a soluo protica, aps o aquecimento foi observada uma colorao alaranjada/salmo. J no tubo 2, no qual havia gua destilada, mesmo aps o aquecimento a soluo manteve-se incolor. 3.9 EXPERIMENTO 3 REAO DE HOPKINS-COLE

Observou-se, no tubo 1, a formao de bolhas e uma mudana na colorao da substncia, que passou para um tom violeta com uma formao de anel. J no tubo 2, no foi observada a formao de anel e a substncia apresentava uma colorao amarela. 3.10 EXPERIMENTO 4 REAO DE SAKAGUSHI

No tubo 1, no qual havia a soluo protica, aps a adio dos reagentes foi notada uma mudana na colorao da substncia para um tom avermelhado. J no tubo 2, no qual havia gua destilada, observou-se uma colorao mais amarelada. 3.11 EXPERIMENTO 5 REAO DA NINIDRINA

No tubo 1, em que foi adicionado Ninidrina protena e levado fervura, a colorao da soluo tornou-se violeta/roxo. No tubo 2, em que a Ninidrina foi adicionada gua destilada a colorao tornou-se amarelada. 3.12 EXPERIMENTO 6 PRECIPITAO POR SAIS NEUTROS

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Observou-se que aps a adio do Cloreto de magnsio (MgCl2), houve precipitao de protena, que se apresentou na forma de pequenos filamentos esbranquiados, sendo que a soluo tinha aspecto gelatinoso. Com a adio de gua observou-se o desaparecimento dos filamentos. 3.13 EXPERIMENTO 7 PRECIPITAO POR SAIS DE METAIS PESADOS

Aps adicionar-se a soluo de FeCl3 40% protena, houve formao de precipitado, mas ao adicionar gua destilada soluo, houve a dissoluo do precipitado formado. 3.14 EXPERIMENTO 8 PRECIPITAO POR CIDOS FORTES

A mistura da soluo de protena com o cido pcrico deu origem a uma substncia de colorao amarelo forte. Com a adio da gua destilada, a soluo permaneceu amarela, contudo, houve formao de precipitado.

DETERMINAO FOTOCOLORIMTRICA DE PROTENAS 3.15 EXPERIMENTO 1 TESTE DE BIURETO

Os valores de Absorbncia em 545 nm contra o tubo B (branco) e os valores obtidos foram registrados na seguinte tabela:

Tubos 1 2 3 4 A

Concentrao de protena (mg/mL) 1,25 2,50 3,75 5,0 1,903

Absorbncia 0,113 0,320 0,305 0,385 0,171

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C/A=F (1,25+2,50+3,75+5,0)/(0,113+0,305+0,320+0,385) 12,5/1,123=F F=11,131

A partir da frmula apresentada acima, foi encontrado o fator 11,131, o qual foi utilizado no clculo da concentrao da amostra desconhecida, que est representado abaixo, e que obteve como resultado a concentrao 1,903 mg/mL. Os tubos ganharam colorao azulada, sendo esta mais intensa nos tubos em que continham soluo de protena.

F x Absorbncia A= Concentrao A 11,131 x 0,171= Concentrao A Concentrao A= 1,903mg/mL

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4. DISCUSSO

TAMPES E pH 4.1 EXPERIMENTO 1 FUNCIONAMENTO DOS TAMPES

Sabe-se, que por definio, soluo tampo um tipo de sistema aquoso que resiste a mudanas no pH perante adies de pequenas quantidades de cido ou base fortes. A gua destilada isenta de ons livres, sendo assim ao se medir o pH dos tubos de ensaio 1 e 3, nos quais havia apenas gua destilada e indicador universal, era esperado um pH igual a 7 (neutro). Ao se medir o pH da soluo tampo, que se encontrava nos tubos 2 e 4, verificou-se um pH igual a 8, portanto, esta uma soluo constituda por cido fraco e base conjugada. Quando a soluo bsica foi adicionada aos tubos 1 e 2 e o pH destes foi novamente medido, observou-se, no tubo 1, um pH igual a 10, fato este que j era esperado, pois com a adio da base ocorreu uma retirada de prtons do meio, o que causou um aumento no valor do pH, tornando a soluo mais bsica. J no tubo 2, o pH manteve-se igual a 7, pois houve dissociao do cido presente no tampo, que reps a maior parte dos prtons que se associaram com a base, o pH desta soluo poderia ter aumentado, contudo seria um aumento muito menor do que o observado no tubo 1. Com a adio da soluo cida nos tubos 3 e 4, a medio do pH indicou, no tubo 3, um pH entre 4 e 5, pois a adio de prtons soluo tornou-a mas cida. J no tubo 4, a medio do pH indicou um valor entre 6 e 7, pois quando se adiciona prtons soluo tampo, esta reage atravs de sua base conjugada, que se associa aos prtons adicionados. Apesar de a maior parte dos prtons se associarem base conjugada do tampo, uma pequena parte ainda fica livre, o que poderia causar uma pequena queda no pH da soluo, contudo a queda observada foi bem menor do que a queda observada na soluo desprovida de tampo (tubo 3).

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4.2 EXPERIMENTO 2 CAPACIDADE DE TAMPONAMENTO DA SALIVA

O pH salivar padro fica em torno de 6,8 e 7,2. Ao se medir o pH da saliva do integrante do grupo, verificou-se que este se encontrava entre 7 e 8, portanto, pode-se dizer que este se encontrava dentro da mdia padro. Aps a ingesto do suco de limo, sendo que o pH padro deste fica em torno de 2, verificou-se que o pH salivar do integrante do grupo passou para 5, adquirindo, portanto, carter cido. sabido que em um pH abaixo de 6 a capacidade tamponante da saliva no eficaz, pois sabe-se que o funcionamento de um tampo mais efetivo quando as concentraes de cido e base conjugados so iguais e devido a grande adio de cido (suco de limo) tem-se como resultado uma grande quantidade de cido conjugado e pouca quantidade de base conjugada. Passados 20 minutos, novamente foi realizada a medio do pH que teve como resultado um valor entre 7 e 8, portanto a saliva passou para um carter neutro/bsico, fato este que ocorreu porque quando se ingere algo muito cido, as glndulas salivares so estimuladas a secretar uma grande quantidade de saliva, o que fez com que o pH desta se normalizasse. 4.3 EXPERIMENTO 3 FORA INICA DOS TAMPES

Ao se acrescentar o indicador universal soluo tampo presente no tubo 1, com o auxlio do pHmetro, verificou-se um pH igual a 8,30, fato este evidenciado tambm pela colorao da soluo neste tubo que era azulada. No tubo 2, ao se adicionar gua destilada soluo tampo, o pHmetro indicou praticamente o mesmo valor de pH, sendo este igual a 8,25. O fato da soluo encontrada no tubo 2 permanecer basicamente com o mesmo valor de pH do tubo 1, mesmo aps a adio da gua destilada, se d porque a auto-ionizao da gua representa uma contribuio desprezvel para a concentrao dos ons hidrognio e hidroxila de uma soluo, pois esta forma nmeros iguais destes ons.

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4.4 EXPERIMENTO 4 CAPACIDADE TAMPONANTE COM PROPORES SAL/CIDO CONSTANTES

O fato de a soluo tampo presente no tubo 1 no estar diluda fez com que as adies de cido sulfrico no influenciassem muito na alterao do pH, ou seja, foi mantida a eficincia do tampo. Contudo, devido a soluo presente no tubo 2 estar diluda, esta apresentava uma concentrao de cido conjugado muito maior do que a de base conjugada devido a pequena dissociao caracterstica do cido fraco do tampo. Com a constante adio de cido sulfrico, esgotou-se basicamente toda a base conjugada do tampo, e quando os prtons adicionados no encontraram mais bases as quais poderiam se associar ocorreu uma queda acentuada de pH, ou seja, esse sistema no se comportava mais como um tampo. 4.5 EXPERIMENTO 5 CAPACIDADE TAMPONANTE COM PROPORESS SAL/CIDO VARIVEIS

A partir dos valores de pH terico obtidos atravs da equao de HendersonHasselbalch, possvel afirmar que o tubo com maior poder tamponante era o tubo 1, pois um sistema tampo tem sua eficincia mxima quando existem, simultaneamente, concentraes iguais de cido e base conjugados (50% de cido conjugado e 50% de base conjugada). Quando a soluo apresenta as mesmas concentraes de cido e base conjugados tem-se o valor do pH igual ao valor do pKa (pH=pKa). A soluo contida no tubo 1, possua, portanto, um pKa igual a 4,8 e portanto funcionaria como um tampo efetivo entre pH 3,8 e pH 5,8. Apesar das adies de cido e base aos tubos 1A e 1B, eles mantiveram sua faixa de pH dentro da faixa de pH do funcionamento efetivo do tampo. J nos outros tubos (2A, 3A e 4A), devido presena de grande concentrao de base que se uniu aos prtons adicionados atravs da soluo cida, no houve uma queda significativa no pH. Contudo, nas adies da soluo bsica, aos tubos 2B, 3B e 4B, observou-se uma grande elevao no pH devido baixa concentrao de cido na soluo. Portanto, nestes tubos o sistema no se comportava como tampo.

27

SEPARAO ASCENDENTE

DE

AMINOCIDOS:

CROMATOGRAFIA

EM

PAPEL

4.6 EXPERIMENTO 1 CROMATOGRAFIA DE PAPEL ASCENDENTE

Houve pouco deslocamento de solvente e pequena formao de mancha prpura na tira em que foi aplicada Glicina (o papel chamado Fase Estacionria do experimento), pois esta polar e o solvente, (chamado Fase Mvel do experimento) apolar no havendo muita interao entre os dois ao coloclos em contato, a pouca interao ocorrida devese ao fato de que a Fase Estacionria (papel cromatogrfico) tambm polar assim como a Glicina. J na tira em que foi aplicada Leucina houve uma grande interao, pois como sabese, a Leucina apolar assim como o solvente. Na tira em que foram aplicadas as duas solues (Glicina e Leucina) obtevese resultados medianos em relao s outras duas tiras de papel, pois houve a mistura de substncias polares com apolares, enquanto o papel cromatogrfico e a Glicina so polares, a Leucina e o solvente so apolares, formando manchas mdias (em relao as formadas nas outras tiras) e descontnuas. O uso da Ninidrina essencial para evidenciar aminocidos, pois ela reage com os grupos amino livres das solues.

REAES DE CARACTERIZAO DE AMINOCIDOS E PRECIPITAO DE PROTENAS 4.7 EXPERIMENTO 1 EXISTNCIA DE AMINOCIDOS SULFORADOS

A mudana na colorao da substncia do tubo 1, ocorreu em funo da oxidao da cistena (aminocido presente na albumina), na qual, a cadeia lateral polar possui um tomo de enxofre que reage com cido actico e hidrxido de sdio, sendo que esta cadeia eletricamente neutra em pH neutro, e constituda por um grupamento SH (tiol), que reagiu com outros grupos de cistena para a formao de pontes dissulfeto (-S-S-). J no segundo tubo a substncia permaneceu incolor devido

28

ao fato de que neste tubo havia apenas gua destilada e alguns reagentes, que no causaram nenhuma transformao aparente.

4.8 EXPERIMENTO 2 REAO DE MILLON

Na tirosina que mais forte que um lcool aliftico (termo referente a ausncia de um anel benznico ou estrutura relacionada), portanto, sua cadeia lateral pode perder um prton. Quando aquecido o tubo 1, o qual continha a protena, observou-se que a substncia adquiriu uma colorao alaranjada/salmo, devido ao fato de que o aquecimento dos fenis presentes na tirosina fez com que estes sofressem nitrao, tendo havido desnaturao da protena. J no tubo 2 a substncia permaneceu incolor pelo fato de que a reao de Millon positiva s ocorre em protenas que contm tirosina, contudo, neste tubo s havia gua destilada e o reativo de Millon. 4.9 EXPERIMENTO 3 REAO DE HOPKINS-COLE

No tubo 1, no qual havia protena, a mudana da colorao da soluo para um tom violeta e a formao de um anel, ocorreu pelo fato de que a soluo protica utilizada continha triptofano, que na reao de Hopkins-Cole reage com o cido glioxlico e graas a atuao do cido sulfrico concentrado forma compostos de colorao violeta em sua interface. J no segundo tubo a formao do anel e a mudana na colorao da substncia no foram observadas, pois a reao ocorre somente na presena de protenas que contm triptofano, sendo que neste tubo havia apenas gua destilada, o reativo de Hopkins-Cole e cido sulfrico concentrado. 4.10 EXPERIMENTO 4 REAO DE SAKAGUSHI

No primeiro tubo, no qual havia protena, a substncia adquiriu colorao avermelhada, devido a presena de arginina na soluo protica, que contm produtos da substituio das guanidinas que quando administrados com -naftol e hipoclorito de sdio do uma colorao vermelha soluo. J no segundo tubo, como havia apenas

29

a gua e os reagentes a substncia apresentou uma colorao amarela, pelo fato de que no havia protena para que houvesse reao. 4.11 EXPERIMENTO 5 REAO DA NINIDRINA

A reao da Ninidrina ocorre por causa da presena do grupo amino livre nas solues utilizadas, havendo esse grupamento, h a formao de um composto roxo, que pode ser mais ou menos intenso dependendo das concentraes dos aminocidos presentes, sendo esta uma reao positiva (geral). J no tubo 2, ocorreu a formao de um composto amarelado, o que indica que a reao foi negativa (especfica), pois envolve apenas o grupo que caracteriza o aminocido, como por exemplo a hidroxiprolina. 4.12 EXPERIMENTO 6 PRECIPITAO POR SAIS NEUTROS

A adio da soluo de Cloreto de magnsio ocasionou a precipitao de protena, devido ao fato de a concentrao do sal ter adquirido um valor muito elevado, havendo uma conseqente diminuio na solubilidade dessa protena. Portanto, a precipitao de protena ocorreu por remoo de gua de hidratao das molculas proticas. Ao se misturar a soluo presente no tubo, observou-se que esta adquiriu um aspecto gelatinoso, aspecto esse que possivelmente foi adquirido pela quebra das interaes protena-protena. J com a adio de gua observou-se o desaparecimento total dos filamentos proticos, pois foi devolvida gua de hidratao para as molculas proticas. 4.13 EXPERIMENTO 7 PRECIPITAO POR SAIS DE METAIS PESADOS

O proteinato de ferro formado devese ao aumento de cargas negativas na superfcie da protena, favorecendo assim a ligao com os ons positivos, evidenciando que o pH est acima do ponto isoeltrico da protena. Portanto a precipitao no possvel com o pH abaixo do ponto isoeltrico com sais, podendo

30

ocorrer apenas se houver a adio de cidos fortes. Quando h a mudana de pH e PI o precipitado pode ser ressolubilizado, como no experimento com a adio de gua destilada. 4.14 EXPERIMENTO 8 PRECIPITAO POR CIDOS FORTES

A adio da soluo cido pcrico soluo de protena, resultou em um aumento de sua carga positiva, havendo, portanto, interao entre as solues. Contudo, com a adio de gua soluo protica, formou-se precipitado, pois esta adio fez com que a protena atingisse um pI de 4,7. O PI indica um pH no qual a molcula protica se encontra eletricamente neutra e no qual h precipitao de protenas, pois nele a solubilidade da protena menor do que em outros valores de pH.

DETERMINAO FOTOCOLORIMTRICA DE PROTENAS 4.15 EXPERIMENTO 1 TESTE DE BIURETO

O reativo de biureto uma soluo de sulfato de cobre (CuSO 4) e tartarato duplo de sdio e potssio (KNaC4H4O6). Esse reativo utilizado na identificao de compostos proticos, pois as ligaes existentes na molcula de biureto so semelhantes s ligaes peptdicas na formao de protenas. O espectrofotmetro um aparelho capaz de medir a quantidade de luz que absorvida em um composto, sendo que se o composto medido for incolor a absorbncia sera igual a zero, ou seja, o aparelho s traz resultados em presena de cor, fator necessrio para que seja possvel a absoro de luz.

31

5. CONCLUSO

TAMPES E pH 5.1 EXPERIMENTO 1 FUNCIONAMENTO DOS TAMPES

A partir deste experimento, ficou provada a eficincia do funcionamento de um sistema tampo prevenindo variaes do pH em um sistema. 5.2 EXPERIMENTO 2 CAPACIDADE DE TAMPONAMENTO DA SALIVA

A realizao deste experimento evidenciou que a eficincia do funcionamento de um tampo restrita a um certo limite nas quantidades de cido ou base adicionadas a este sistema. Portanto, um tampo s eficiente dentro de pequenas adies de cido ou base fortes. 5.3 EXPERIMENTO 3 FORA INICA DOS TAMPES

A partir da realizao deste experimento, ficou claro que a presena de gua em uma soluo seja esta cida ou bsica, influencia o seu pH e conseqentemente tambm altera sua capacidade tamponante. 5.4 EXPERIMENTO 4 CAPACIDADE TAMPONANTE COM PROPORES SAL/CIDO CONSTANTES

A realizao deste experimento novamente provou que a ao e/ou eficincia de um tampo restrita a uma faixa de pH na qual as concentraes de cido e base conjugados devem ser suficientes para compensar adies de base ou de cido.

32

5.5 EXPERIMENTO 5 CAPACIDADE TAMPONANTE COM PROPORESS SAL/CIDO VARIVEIS

A partir deste experimento, ficou provada a definio da regio de maior eficincia de um sistema tampo que determinada pelo pKa de seu cido fraco, no caso deste experimento o cido actico. Ficou claro, novamente, que as concentraes do cido e base conjugados so fundamentais para a maior eficincia de um tampo.

SEPARAO ASCENDENTE

DE

AMINOCIDOS:

CROMATOGRAFIA

EM

PAPEL

5.6 EXPERIMENTO 1 CROMATOGRAFIA DE PAPEL ASCENDENTE

A cromatografia em papel ascendente tem como objetivo separar os componentes de uma mistura para que estes possam ser analisados e caracterizados de acordo com suas caractersticas qumicas. Neste experimento realizouse a separao de misturas de aminocidos, isso possvel, pois o grupo R dos aminocidos se relaciona de forma diferente com solventes (Fase Mvel do experimento). Dessa forma foram evidenciadas algumas propriedades dos aminocidos e assim pdese caracterizlos de acordo com sua polaridade. No caso, atravs do Rf (Relao com a Frente) que sabese a polaridade, quanto maior mais apolar e quanto menor mais polar, portanto a Glicina a mais polar, em segundo lugar tmse a mistura de Glicina e Leucina e a mais apolar a Leucina de acordo com os clculos realizados no experimento. Concluise que os dados obtidos no experimento foram os esperados. Um dos motivos pelo qual o solvente percorre o papel cromatogrfico rea do papel, que sendo menor que a rea do tubo calibroso, segundo a frmula da presso atmosfrica Presso = Fora/ rea, quanto menor a rea do papel menos fora este aplicar sobre o solvente o que ajudar na subida deste pelo papel.

33

REAES DE CARACTERIZAO DE AMINOCIDOS E PRECIPITAO DE PROTENAS 5.7 EXPERIMENTO 1 EXISTNCIA DE AMINOCIDOS SULFORADOS

Pela realizao deste experimento, foi evidenciada a formao das pontes dissulfeto entre aminocidos detentores de cadeias constitudas por grupamentos SH (tiol). 5.8 EXPERIMENTO 2 REAO DE MILLON

Atravs da realizao deste experimento, ficou evidente que apenas as protenas que contm tirosina do positiva a reao de Millon. 5.9 EXPERIMENTO 3 REAO DE HOPKINS-COLE

A partir deste experimento, foi evidenciado o fato de que a reao de HopkinsCole s ocorre na presena de protenas que contm triptofano. 5.10 EXPERIMENTO 4 REAO DE SAKAGUSHI

Pela realizao deste experimento, foi evidenciado o fato de que a reao de Sakagushi ocorre apenas em meio a arginina. 5.11 EXPERIMENTO 5 REAO DA NINIDRINA

Os resultados obtidos na experincia foram os esperados. A formao de compostos de cor roxa/ violeta chamamse reaes positivas ou reaes gerais, pois ocorrem sempre que h a relao de Ninidrina com grupamentos carboxila ou amina. Quando h a formao de compostos amarelados, sinal de que a reao ocorrida foi

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negativa ou especfica, isso significa que ocorre apenas entre a Ninidrina e o grupo que caracteriza o aminocido, como por exemplo, a prolina ou hidroxiprolina. 5.12 EXPERIMENTO 6 PRECIPITAO POR SAIS NEUTROS

A realizao deste experimento tornou evidente certas caractersticas proticas, cuja principal foi a solubilidade de protenas em meio salino, ou seja, foi observado que a solubilidade das protenas influenciada pela composio do meio aquoso. 5.13 EXPERIMENTO 7 PRECIPITAO POR SAIS DE METAIS PESADOS

Os ons positivos de metais causaram a precipitao de proteinato de ferro. Quando o pH est acima do ponto isoeltrico precipitao mais intensa, a redissoluo do precipitado pode ocorrer pela mudana do pH e do ponto isoeltrico (PI) da protena, e pela decomposio do proteinato de ferro. Concluindose que o ocorrido no experimento saiu de acordo com o esperado. 5.14 EXPERIMENTO 8 PRECIPITAO POR CIDOS FORTES

A partir deste experimento, ficou evidente a influencia do PI (ponto isoeltrico) na solubilidade das protenas.

DETERMINAO FOTOCOLORIMTRICA DE PROTENAS 5.15 EXPERIMENTO 1 TESTE DE BIURETO

Os compostos formados nos tubos ganharam colorao azulada, ora por causa da adio do Reativo de Biureto, ora por causa da adio da soluo padro de albumina 5mg/mL. A cor adquirida pelos compostos faz com que seja possvel a medio da absorbncia pelo espectrofotmetro, com o uso da tabela desse medidor

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de absorbncia e das frmulas deste experimento, foi possvel encontrar o valor da concentrao da amostra desconhecida mostrando a potencialidade do teste de Biureto para a determinao fotocolorimtrica de protenas e mostrar que a concentrao de protena nos compostos diretamente proporcional absorbncia do mesmo. Dessa forma, conclui-se que os resultados obtidos foram os esperados.

36

6. BIBLIOGRAFIA

CAMPBELL, M. K. Bioqumica. 3.ed. Porto Alegre: Artmed Editora, 2000.

MARZZOCO, A. & TORRES, B. B. Bioqumica Bsica. 3.ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2007.

NELSON, D. L. & COX, M. M. Lehninger Princpios de Bioqumica. 4.ed. So Paulo: Sarvier, 2006.

SARDELLA, A & MATEUS, E. Curso de Qumica: Qumica Geral. 21.ed. So Paulo: Editora tica, 1995.

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