Espectrometra ultravioleta-visible

La espectrometra ultravioleta-visible o espectrofotometra UV-Vis implica la espectroscopia de fotones en la regin de radiacin ultravioleta-visible. Utiliza la luz en los rangos visible y adyacentes (el ultravioleta (UV) cercano y el infrarrojo (IR) cercano. En esta regin del espectro electromagntico, las molculas se someten a transiciones electrnicas. Esta tcnica es complementaria de la espectrometra de fluorescencia, que trata con transiciones desde el estado excitado al estado basal, mientras que la espectrometra de absorcin mide transiciones desde el estado basal al estado excitado. APLICACIONES

La espectrometra UV/Vis se utiliza habitualmente en la determinacin cuantitativa de soluciones de iones metlicos de transicin y compuestos orgnicos muy conjugados. Soluciones de iones metlicos de transicin Las soluciones de iones metlicos de transicin pueden ser coloreadas (es decir, absorben la luz visible) debido a que los electrones en los tomos de metal se pueden excitar desde un estado electrnico a otro. El color de las soluciones de iones metlicos se ve muy afectado por la presencia de otras especies, como algunos aniones o ligandos. Por ejemplo, el color de una solucin diluida de sulfato de cobre es muy azul; agregando amonaco se intensifica el color y cambia la longitud de onda de absorcin mxima. Compuestos orgnicos Los compuestos orgnicos, especialmente aquellos con un alto grado de conjugacin, tambin absorben luz en las regiones del espectro electromagntico visible o ultravioleta. Los disolventes para estas determinaciones son a menudo el agua para los compuestos solubles en agua, o el etanol para compuestos orgnicos solubles. Los disolventes orgnicos pueden tener una significativa absorcin de UV, por lo que no todos los disolventes son adecuados para su uso en espectrometra UV. El etanol absorbe muy dbilmente en la mayora de longitudes de onda. La polaridad y el pH del disolvente pueden afectar la absorcin del espectro de un compuesto orgnico. La tirosina, por ejemplo, aumenta su mximo de absorcin y su coeficiente de extincin molar cuando aumenta el pH de 6 a 13, o cuando disminuye la polaridad de los disolventes. Aunque los complejos de transferencia de carga tambin dan lugar a colores, stos son a menudo demasiado intensos para ser usados en mediciones cuantitativas.

La ley de Beer-Lambert establece que la absorbancia de una solucin es directamente proporcional a la concentracin de la solucin. Por tanto, la espectrometra UV/VIS puede usarse para determinar la concentracin de una solucin. Es necesario saber con qu rapidez cambia la absorbancia con la concentracin. Esto puede ser obtenido a partir de referencias (las tablas de coeficientes de extincin molar) o, con ms exactitud, determinndolo a partir de una curva de calibracin. El espectrofotmetro UV/Vis puede utilizarse como detector para la Cromatografa Lquida de Alta Resolucin (CLAR). La presencia de un analito da una respuesta que puede ser proporcional a la concentracin. Para resultados precisos, la respuesta del instrumento al analito debe compararse con la respuesta a un estndar, lo que es muy similar al uso de curvas de calibracin. La respuesta (por ejemplo, el pico de altura) para un concentracin particular se conoce como factor de respuesta. LEY DE BEER-LAMBERT

La espectrometra UV-Vis se utiliza con mayor frecuencia en forma cuantitativa para determinar las concentraciones de especies absorbentes en solucin, usando la Ley de Beer-Lambert: donde A es la absorbancia medida, I0 es la intensidad de la luz incidente a una determinada longitud de onda, I es la intensidad de transmisin, L la longitud de ruta a travs de la muestra, y c la concentracin de las especies absorbentes. Para cada especie y longitud de onda, es una constante conocida como absortividad molar o coeficiente de extincin. Esta constante es una propiedad fundamental molecular en un solvente dado, a una temperatura y presin particular, y tiene como unidades 1/M * cm o, a menudo, U/M * cm. La absorbancia y extincin a veces son definidas en trminos de logaritmo natural en lugar de logaritmo de base 10. La ley de Beer-Lambert es til para la caracterizacin de muchos compuestos, pero no sirve como relacin universal para la concentracin y absorcin de todas las sustancias. En molculas complejas de gran tamao, como los tintes orgnicos (Xylenol Naranja o Rojo Neutro, por ejemplo), a veces se encuentra una relacin polinmica de segundo orden entre la absorcin y la concentracin. ESPECTROFOTMETRO ULTRAVIOLETA-VISIBLE

El instrumento utilizado en la espectrometra ultravioleta-visible se llama espectrofotmetro UVVis. Mide la intensidad de luz que pasa a travs de una muestra (I), y la compara con la intensidad

de luz antes de pasar a travs de la muestra (Io). La relacin I / Io se llama transmitancia, y se expresa habitualmente como un porcentaje (%T). La absorbancia (A) se basa en la transmisin: A = - log (%T) Las partes bsicas de un espectrofotmetro son una fuente de luz (a menudo una bombilla incandescente para las longitudes de onda visibles, o una lmpara de arco de deuterio en el ultravioleta), un soporte para la muestra, una rejilla de difraccin o monocromador para separar las diferentes longitudes de onda de la luz, y un detector. El detector suele ser un fotodiodo o un CCD. Los fotodiodos se usan con monochomadores, que filtran la luz de modo que una sola longitud de onda alcanza el detector. Las rejillas de difraccin se utilizan con CCDs, que recogen la luz de diferentes longitudes de onda en pxeles. Un espectrofotmetro puede ser nico o de doble haz. En un instrumento de un solo haz (como el Spectronic 20), toda la luz pasa a travs de la clula muestra. La Io debe medirse retirando la muestra. Este fue el primer diseo, y todava est en uso en la enseanza y laboratorios industriales. En un instrumento de doble haz, la luz se divide en dos haces antes de llegar a la muestra. Un haz se utiliza como referencia, y el otro haz de luz pasa a travs de la muestra. Algunos instrumentos de doble haz tienen dos detectores (fotodiodos), y el haz de referencia y el de la muestra se miden al mismo tiempo. En otros instrumentos, los dos haces pasan a travs de un bloqueador que impide el paso de un haz. El detector alterna entre la medida del haz de muestra y la del haz de referencia. Las muestras para espectrofotometra UV-Vis suelen ser lquidas, aunque la absorbancia de los gases e incluso de los slidos tambin puede medirse. Las muestras suelen ser colocadas en una clula transparente, conocida como cubeta. Las cubetas suelen ser rectangulares, con una anchura interior de 1 cm. Esta anchura se convierte en la longitud de ruta, L, en la Ley de Beer-Lambert. Tambin se pueden usar tubos de ensayo como cubetas en algunos instrumentos. Las mejores cubetas estn hechas con cuarzo de alta calidad, aunque son comunes las de vidrio o plstico. El cristal y la mayora de los plsticos absorben en el UV, lo que limita su utilidad para longitudes de onda visibles. ESPECTRO ULTRAVIOLETA-VISIBLE

Un espectro ultravioleta-visible es esencialmente un grfico de absorbancia de luz frente a una longitud de onda en el rango del ultravioleta o la luz visible. Este espectro puede ser producido directamente con los espectrofotmetros ms sofisticados, o bien pueden registrarse los datos de una sola longitud de onda con los instrumentos ms simples. La longitud de onda se representa con el smbolo . Del mismo modo, para una determinada sustancia, puede hacerse un grfico

estndar del coeficiente de extincin () frente a la longitud de onda (). Este grfico estndar sera efectivamente "la concentracin corregida" y, por tanto, independiente de la concentracin. Para una sustancia determinada, la longitud de onda en la cual se produce el mximo de absorbancia en el espectro se llama max, y se pronuncia "lambda-max". Las reglas de Woodward-Fieser son un conjunto de observaciones empricas que pueden utilizarse para predecir max, la longitud de onda de la absorcin UV-Vis, para compuestos orgnicos conjugados como dienos y cetonas. Las longitudes de onda de los picos de absorcin pueden correlacionarse con los tipos de enlace en una determinada molcula, y son valiosos para determinar los grupos funcionales dentro de la molcula. La absorcin UV-Vis no es, sin embargo, una prueba especfica para ningn compuesto determinado. La naturaleza del disolvente, el pH de la solucin, la temperatura, la concentracin de electrolitos, y la presencia de sustancias interferentes pueden influir en los espectros de absorcin de los compuestos, as como las variaciones en la anchura de la hendidura (ancho de banda efectivo) en el espectrofotmetro.

Espectroscopia ultravioleta-visible Saltar a: navegacin, bsqueda La espectroscopia ultravioleta-visible o espectrofotometra ultravioleta-visible (UV/VIS) es una espectroscopia de fotones y una espectrofotometra. Utiliza radiacin electromagntica (luz) de las regiones visible, ultravioleta cercana (UV) e infrarroja cercana (NIR) del espectro electromagntico. La radiacin absorbida por las molculas desde esta regin del espectro provoca transiciones electrnicas que pueden ser cuantificadas. La espectroscopia UV-visible se utiliza para identificar algunos grupos funcionales de molculas, y adems, para determinar el contenido y fuerza de una sustancia. Se utiliza de manera general en la determinacin cuantitativa de los componentes de soluciones de iones de metales de transicin y compuestos orgnicos altamente conjugados. Se utiliza extensivamente en laboratorios de qumica y bioqumica para determinar pequeas cantidades de cierta sustancia, como las trazas de metales en aleaciones o la concentracin de cierto medicamento que puede llegar a ciertas partes del cuerpo. Contenido [ocultar]

1 Introduccin 2 Principio fsico

3 Modos de excitacin electrnica

o o o

3.1 Transiciones 3.2 Transiciones n 3.3 Transiciones n y

4 El espectrofotmetro ultravioleta-visible
o

4.1 Ley de Beer-Lambert

5 Caractersticas del sistema 6 Consideraciones generales 7 Espectroscopia de Reflectancia Difusa (DRIFTS)

o

7.1 Ventajas y desventajas del DRIFTS

8 Enlaces externos 9 Referencias

[editar] Introduccin Una diferencia obvia entre ciertos compuestos es su color. As, la quinona es amarilla; la clorofila es verde; los 2,4-derivados del dinitrofenilhidrazona de aldehdos y de cetonas se extienden en color de amarillo brillante a de color rojo oscuro, dependiendo de la conjugacin del enlace doble; y el aspirin es descolorido.

Longitud de onda: se define como la distancia entre los picos adyacentes y puede ser medida en metros, centmetros, o nanometros ( meters).

Frecuencia: es el nmero de ondas por ciclos usualmente sus unidades estn dadas en Hertz que son ciclos por segundos (Hz).

La luminiscencia ocurre debido a la emisin de luz por una sustancia determinada y esto ocurre cuando un electrn regresa a su estado inicial despus de haber sido excitado y libera una energa como un fotn. Podemos encontrar tres tipos de nombres para la espectroscopia de luminiscencia, para diferentes tcnicas:

Espectroscopia de fluorescencia molecular Espectroscopia de fosforescencia molecular Espectroscopia de quimiluminiscencia

[editar] Principio fsico El principio de la espectroscopia ultravioleta-visible involucra la absorcin de radiacin ultravioleta visible por una molcula, causando la promocin de un electrn de un estado basal a un estado excitado, liberndose el exceso de energa en forma de calor. La longitud de onda ( ) comprende entre 190 y 800 nm. La luz visible o UV es absorbida por los electrones de valencia, stos son promovidos a estados excitados (de energa mayor). Al absorber radiacin electromagntica de una frecuencia correcta, ocurre una transicin desde uno de estos orbitales a un orbital vaco. Las diferencias entre energas varan entre los diversos orbitales. Algunos enlaces, como los dobles, provocan coloracin en las molculas ya que absorben energa en el visible as como en el UV, como es el caso del caroteno. Cuando un haz de radiacin UV-Vis atraviesa una disolucin conteniendo un analito absorbente, la intensidad incidente del haz (Io) es atenuada hasta I. Esta fraccin de radiacin que no ha logrado traspasar la muestra es denominada transmitancia (T) (T = I/Io). Por aspectos prcticos, se utizar la absorbancia (A) en lugar de la transmitancia (A = -logT), por estar relacionada linealmente con la concentracin de la especie absorbente segn la Ley de Beer-Lambert: A = lc ( : coeficiente de absortividad molar, l: camino ptico, c: concentracin de la especie absorbente). [editar] Modos de excitacin electrnica Cuando un fotn UV-Visible de energa adecuada incide en una especie absorbente, un electrn es promovido desde su estado fundamental a un estado electrnico excitado. En absorcin UVVisible, pueden observarse las distintas transiciones electrnicas: [editar] Transiciones <150 nm . Este tipo de transiciones se dan sobre todo en hidrocarburos que nicamente poseen enlaces C-H o C-C. La energa requerida para que tenga lugar esta transicin es relativamente grande, perteneciente a la regin espectral denominada ultravioleta de vaco. [editar] Transiciones n entre 150-200 nm . Correspondientes a hidrocarburos que poseen tomos con pares de electrones no compartidos (electrones de no enlace). La energa necesaria para que se produzca esta transicin sigue siendo alta (aunque menor que en las ) perteneciendo stas a la regin espectral UV Lejano. [editar] Transiciones n y

entre 200-700 nm. La mayora de las aplicaciones de espectroscopia UV-Visible estn basadas en transiciones que ocurren en esta zona. Se requiere que las especies participantes aporten un sistema de electrones (grupos cromforos: compuestos con insaturaciones, sistemas aromticos multicclicos, etc.). Las energas de excitacin en las transiciones son medianamente altas,

correspondiendo a la regin UV Lejano y Prximo, mientras que las n son considerablemente menores, correspondiendo a la regin visible del espectro. En espectroscopia UV-Vis se irradia con luz de energa conocida suficiente como para provocar transiciones electrnicas, es decir promover un electrn desde un orbital de baja energa a uno vacante de alta energa. Transiciones electrnicas posibles entre orbitales n: orbital que contiene par de electrones no compartidos (ejemplo en : O, N, Cl) Las transiciones ms favorecidas son entre el orbital ocupado de energia ms alta (HOMO) y el orbital desocupado de energia ms baja (LUMO) el espectrometro UV-Vis registra las longitudes de onda donde se registra absorcin y cuantifica la absorcin. El espectro se registra como absorbancia (A) Vs. longitud de onda (), las bandas del espectro UV son anchas por que incluyen la estructura fina de transiciones vibracionales y rotacionales de menor energa. [editar] El espectrofotmetro ultravioleta-visible El espectrofotmetro es un instrumento que permite comparar la radiacin absorbida o transmitida por una solucin que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia. Todas las sustancias pueden absorber energa radiante. El vidrio, que parece ser completamente transparente, absorbe longitudes de onda que pertenecen al espectro visible; el agua absorbe fuertemente en la regin del IR. La absorcin de las radiaciones UV, visibles e IR depende de la estructura de las molculas, y es caracterstica para cada sustancia qumica. El color de las sustancias se debe a que absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y slo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbida. Esta espectrofotometra utiliza radiaciones del campo UV de 80 a 400 nm, principalmente de 200 a 400 nm (UV cercano) y de luz visible de 400 a 800 nm, por lo que es de gran utilidad para caracterizar las soluciones en la regin ultravioleta-visible del espectro. Se rige por una ley muy importante: la ecuacin de Beer-Lambert. [editar] Ley de Beer-Lambert Una expresin para la ecuacin de Beer-Lambert es la siguiente:

Donde: es el rango de luz captado por el tubo de fotocolorimetra,

es el rango de luz que sale del tubo de fotocolorimetra y que va a llegar a la celda fotoelctrica donde es captada y medida es la capacidad de captacin del haz del campo electromagntico, es la longitud del tubo de fotocolorimetra, en cm. es la concentracin de la muestra ya ubicada en el tubo de fotocolorimetra. La ley de Beer permite cuantificar la concentracin de una muestra por UV, tambin puede ser expresada de la siguiente manera:

donde: es la Absorbancia es el Coeficiente de extincin (Caracterstico de cada sustancia). es el Largo del paso de la cuba (cm). es la Concentracin (moles/l). La zona de longitudes de onda que se registra en un espectro UV-Vis es de entre 200 y 800 nm. En esta zona no absorben dobles ni triples enlaces aislados . Slo van absorber enlaces pi conjugados y heterotomos con pares de electrones no compartidos (O, N), como los grupos cromforos. [editar] Caractersticas del sistema

Las muestras en solucin se ponen en una pequea celda de Si. Se utilizan dos lmparas: una de H o deuterio para la regin UV, y una de W / halgeno para la regin visible Se utiliza tambin una celda de referencia que contiene slo solvente. La luz pasa simultneamente por la celda de muestra y la celda de referencia. El espectrmetro compara la luz que pasa por la muestra con la que pasa por la celda de referencia. La radiacin transmitida es detectada y el espectrmetro obtiene el espectro de absorcin al barrer la longitud de onda de la luz.

[editar] Consideraciones generales

La espectroscopia ultravioleta-visible es la ms limitada para la informacin de compuestos. Los compuestos que tengan un cromforo o instauraciones son visibles en esta regin. Un cromforo es cualquier grupo de tomos que absorben luz independientemente de que presente color o no, aunque tambin puede presentar un grupo auxcromo que es el que amplia la conjugacin de un cromforo mediante la comparticin de electrones de no enlace. La mxima absorcin se debe a la presencia de cromforos en una molcula. Este tipo de espectroscopia sirve principalmente para el anlisis de compuestos aromticos y cidos carboxlicos ( y ) insaturados.

Para el anlisis de catalizadores suele utilizarse una variante de esta espectroscopia llamada espectroscopia de reflectancia difusa (fsica)#Reflexi.C3.B3n difusa. [editar] Espectroscopia de Reflectancia Difusa (DRIFTS) La reflectancia difusa tiene lugar en todas las direcciones como consecuencia de los procesos de absorcin y dispersin como se muestra en la figura, y predomina cuando los materiales de la superficie reflectante son dbiles absorbentes a la longitud de onda incidente y cuando la penetracin de la radiacin es grande en relacin a la longitud de onda. [editar] Ventajas y desventajas del DRIFTS Ventajas

Preparacin mnima muestra. Posibilidad anlisis mayora materiales no reflectores, incluyendo materiales muy opacos o poco absorbentes. Anlisis de superficies irregulares y materiales duros. Alta sensibilidad (pocos ppm).

Desventajas Adems de los problemas de la reflexin en la superficie nos encontramos con otros problemas:

Est limitada principalmente a muestra en polvo. Si la muestra contiene agua y debido al calentamiento producido por el rayo de luz infrarrojo, sta se puede evaporar dando lugar a vapor de agua que causa fuertes interferencias en el espectro. El llenado de la celda es poco reproducible sobre todo cuando se quiere trabajar en anlisis cuantitativo.