CROMATOGRAFIA EM COLUNA A cromatografia em coluna costuma ser citada como o mais antigo procedimento cromatogrfico.

Foi descrito pela primeira vez pelo botnico russo M. S. Tswett, que o utilizou para o isolamento dos pigmentos existentes nas folhas verdes dos vegetais. Consiste em uma coluna de vidro, metal ou plstico, preenchida com um adsorvente adequado. O adsorvente pode ser colocado na coluna diretamente (seco) ou suspendido em um solvente adequado (geralmente o prprio eluente a ser usado no processo de separao). Os principais adsorventes normalmente utilizados so a slica gel, a alumina, o carbonato de clcio, o xido de magnsio, o carvo ativado, a sacarose e o amido, entre outros. A substncia a ser separada ou analisada colocada na coluna pela parte superior e o eluente vertido aps, em quantidade suficiente para promover a separao. A coluna pode ser um simples tubo de vidro, aberto em ambas as extremidades, ou semelhante a uma bureta. Em alguns casos aplica-se vcuo pela parte inferior da coluna ou uma ligeira sobrepresso pela parte superior da mesma. Quando a amostra a ser cromatografada possui cor, pode-se visualizar as diferentes zonas coloridas descendo pela coluna, que so recolhidas, separadamente, pela extremidade inferior. Quando a amostra no possui cor, recolhem-se vrias fraes iguais de eluente, testando-as quanto presena ou no de substncias dissolvidas atravs do uso de reveladores adequados (luz UV, reveladores qumicos, etc.). Um exemplo de aplicao da cromatografia em coluna a separao dos pigmentos do espinafre.

A cromatografia (do grego :chroma, cor e :"grafein", grafia) envolve uma

srie de processos de separao de misturas. A cromatografia acontece pela passagem de uma mistura atravs de duas fases: uma estacionria (fixa) e outra mvel. A grande variabilidade de combinaes entre a fase mvel e estacionria faz com que a cromatografia tenha uma srie de tcnicas diferenciadas.

Teoria da cromatografia
Cromatografia uma tcnica de separao de misturas e identificao de seus componentes. Esta separao depende da diferena entre o comportamento dos analitos entre a fase mvel e a fase estacionria. A interao dos componentes da mistura com estas duas fases influenciada por diferentes foras intermoleculares, incluindo inica, bipolar, apolar, e especficos efeitos de afinidade e solubilidade.

Analogia
Uma analogia que as vezes til a suposio da mistura de abelhas e moscas passando sobre uma flor. As abelhas sero atradas pela flor e sero separadas das moscas por esta atrao. Se observarmos esta passagem sobre a flor, as moscas iro passar antes seguidas pelas abelhas. Nesta anologia, as abelhas e as moscas so os analitos, as flores representariam a fase estacionria e o ar onde as duas espcies passam seria a fase mvel. A chave da separao est na diferena de afinidade entre o analito, a fase mvel e a fase estacionria. O observador seria representado pelo detector usado em uma srie de formas de cromatografia. Todavia os valores determinados podem sofrer mudanas. Pode se ter dois tipos a fase estacionaria e a fase de absoro do procedimento citado.

Histria
Foi o botnico russo, Mikhail Semenovich Tswett quem inventou a primeira tcnica cromatografica em 1900 durante suas pesquisas sobre a clorofila. Ele usou uma coluna de absoro lquida contendo carbonato de clcio para separar pigmentos de folhas de plantas. O mtodo foi descrito em 30 de dezembro de 1901 no 11o Congresso de Mdicos e Naturalistas em So Petersburgo. A primeira publicao feita foi em 1903. Ele usou pela primeira vez o termo cromatografia em uma publicao em 1906 no jornal de botnica alemo, Berichte der Deutschen Botanischen Gesellschaft. Em 1907, demonstrou sua cromatografia para a Sociedade Botnica Alem. Em 1952, Archer John Porter Martin e Richard Laurence Millington Synge ganharam o Prmio Nobel de Qumica pela inveno da cromatografia de partio.[1] Desde ento, a tecnologia tem avanado rapidamente. [editar]Termos

usados na cromatografia

Analito a substncia a ser analisada posteriormente, aps a separao com o processo de cromatografia.

[editar]Classificao [editar]De

das tcnicas cromatogrficas

acordo com o sistema cromatogrfico

Em Coluna

[editar]De

Cromatografia lquida Cromatografia gasosa Cromatografia supercrtica

Planar Centrfuga (Chromatotron) Cromatografia em camada delgada (CCD) Cromatografia em papel (CP)

acordo com a fase mvel

Utilizao de gs

[editar]De

Cromatografia gasosa (CG) Cromatografia gasosa de alta resoluo (CGAR)

Utilizao de lquido Cromatografia lquida clssica (CLC) Cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE)

Utilizao de gs pressurizado Cromatografia supercrtica (CSC)

acordo com a fase estacionria

Lquida Slida

Quimicamente ligadas

[editar]De

acordo com o modo de separao

Por adsoro Por partio Por troca inica Por afinidade

[editar]Principais

tcnicas cromatogrficas
de adsoro

[editar]Cromatografia

Neste processo, o de mais ampla utilizao, duas substncias so ligadas por uma interface onde no ocorre solubilizao. A faseestacionria slida e a fase mvel pode ser lquida ou gasosa. Baseia-se nas atraes eletrostticas ou dipolares da superfcie da fase estacionria pelas molculas da substncia a separar. [editar]Cromatografia

de partio

A fase estacionria lquida. Este processo baseado na diferente solubilidade dos componentes da mistura nas duas fases lquidas. [editar]Cromatografia

planar

Na cromatografia planar, tambm chamada de camada fina, ou TLC ("Thin Layer Chromatography"), a fase estacionria, por exemplo alumina ou slica, suportada sobre uma placa plana ou nos poros de um papel. Nesse caso, a fase mvel desloca-se atravs da fase estacionria, slida e adsorvente, por ao da capilaridade ou sob a influncia da gravidade. til em separao de compostos polares. Encontra-se bastante difundida devido sua facilidade experimental e ao seu baixo custo. [editar]Cromatografia em papel (CP)

Fases da Cromatografia em Camada Delgada.

Ou PC, do ingls "paper chromatography". uma tcnica de partio, utiliza dois lquidos, ou misturas de lquidos, um atuando como fase mvel (eluente) e outro, suportado sobre papel, atuando como fase estacionria. Ocorre a reteno das substncias devido s diferentes afinidades para com as fases estacionria e mvel. Utiliza-se papel normal ou papel de filtro (mais utilizado) como suporte da fase estacionria. Exemplificando: a mistura aplicada no papel e mergulhada na mistura das fases lquida e estacionria. A tira de papel de suporte colocada em um cuba contendo o eluente. Esta fase mvel (solvente) sobe por capilaridade e arrasta a substncia pela qual tem mais afinidade, separando-a das substncias com maior afinidade pela fase estacionria. Como a maioria das substncias separadas so incolores, utiliza-se um revelador. As manchas podem ser reveladas por meio de luz UV, vapores de iodo, solues de cloreto frrico e tiocianoferrato de potssio, fluorescncias, radioatividade, etc. [editar]Cromatografia

em coluna

Cromatografia em Coluna.

a tcnica de separao cuja fase estacionria acontece dentro de um tubo. Utiliza-se uma coluna de vidro aberta na parte superior e munida de uma torneira na extremidade inferior, por onde sai o lquido (eludo). Dentro da coluna encontra-se a fase estacionria constituda por um enchimento slido no caso da cromatografia de adsoro, ou por uma fase lquida no caso da cromatografia de partio. A fase mvel lquida em ambos os casos.A ordem das substncias depender da sua polaridade. [editar]Cromatografia

de leito mvel

A cromatografia de leito mvel verdadeiro (True moving bed, TMB) uma forma de transformar a cromatografia de leito fixo num processo contnuo em contracorrente, e desta forma maximizar as taxas de transferncia de massa entre fases. Nesta tcnica, o absorvente move-se no sentido oposto ao do eluente com uma velocidade compreendida entre as velocidades de migrao dos dois componentes.

Referncias
1. Nobelprize.org: The Nobel Prize in Chemistry 1952

[editar]Ligaes

externas

Qumica Nova Na Escola nmero 7, maio de 1998 (http://sbqensino.foco.fae.ufmg.br/uploads/K8/IY/K8IYg8H9w8MzVTIEuoauRA/atual.pdf)

Cromatografia em Coluna (C)

Bruna Ferreira Silva. Larissa Carvalho Silva.

Orientador: Prof. Dr. Luciano Morais Lio. Acadmicos: Eli Silveira Ales Jnior. Goinia, de maio de 2009.

Ser abordada neste relatrio a aula de Cromatografia em Coluna tendo como adsorvente slica em gel; aula realizada no dia 27 de abril de 2009 sob a orientao do Prof. Dr. Luciano Morais Lio.

Introduo:

Cromatografia uma tcnica utilizada para analisar, identificar ou separar os componentes de uma mistura. A cromatografia definida como a separao de dois ou mais compostos diferentes por distribuio entre fases, uma das quais estacionria e a outra mvel. Introduzida pelo pesquisador russo Michael Tswett em 1906, quando separou clorofila de uma mistura de pigmentos de plantas, atravs de uma coluna cheia de carbonato de clcio em p, fazendo a lavagem com ter de petrleo. Conforme a amostra descia pela coluna, apareciam bandas separadas e cores distintas. Palavra de origem grega, onde cromo significa cor e grafia significa escrita, ou seja escrita em cores. Mas a cromatografia pode separar os componentes sem nenhum aparecimento de cor.

A cromatografia preliminarmente uma ferramenta analtica para a separao de misturas, combinada com anlises qualitativas e quantitativas das substncias separadas. uma poderosa e muito usada tcnica de separao dos componentes de uma amostra.

Os componentes das amostras so distribudos entre duas fases, uma das quais permanece estacionria, enquanto a outra elui entre os interstcios ou sobre a superfcie da fase estacionria. O movimento da fase mvel resulta numa migrao diferencial dos componentes da amostra. O mecanismo envolvido nesta migrao diferencial vai depender do tipo da fase mvel e estacionria utilizado. Pela escolha apropriada da fase fixa e da fase mvel, alm de outras variveis, pode-se fazer com que os componentes da mistura sejam arrastados ordenadamente. Aqueles que interagem pouco com a fase fixa so arrastados facilmente e aqueles com maior interao ficam mais retidos.

Os componentes da mistura adsorvem-se com as partculas de slido devido a interao de diversas foras intermoleculares. O composto ter uma maior ou menor adsoro, dependendo das foras de interao, que variam na seguinte ordem: formao de sais > coordenao > pontes de hidrognio > dipolo-dipolo > Van der Waals.

Dependendo da natureza das duas fases envolvidas tem-se diversos tipos de cromatografia:

- slido-lquido (coluna, camada fina, papel);

- lquido-lquido;

- gs-lquido.

Os mtodos cromatogrficos possuem uma faixa de aplicao ilimitada. Podem ser usadas para separao de molculas menores, como H2 e D2, at as maiores, como protenas etc. Quantidades na ordem de picogramas podem ser separadas e detectadas por cromatografia gasosa combinada com espectrometria de massa, e quantidades em multigramas podem ser separados e isolados por mtodos de coluna preparativa.

A cromatografia em coluna uma tcnica de partio entre duas fases, slida e lquida, baseada na capacidade de adsoro e solubilidade. O slido deve ser um material insolvel na fase lquida associada, sendo que os mais

utilizados so a slica gel (SiO2) e alumina (Al2O3), geralmente na forma de p. A mistura a ser separada colocada na coluna com um eluente menos polar e vai-se aumentando gradativamente a polaridade do eluente e conseqentemente o seu poder de arraste de substncias mais polares. Uma seqncia de eluentes normalmente utilizada a seguinte: ter de petrleo, hexano, ter etlico, tetracloreto de carbono, acetato de etila, etanol, metanol, gua e cido actico.

O fluxo de solvente deve ser contnuo. Os diferentes componentes da mistura mover-seo com velocidade distintas dependendo de sua afinidade relativa pelo adsorvente(grupos polares interagem melhor com o adsorvente) e tambm pelo eluente. Assim, a capacidade de um determinado eluente em arrastar um composto adsorvido na coluna depende quase diretamente da polaridade do solvente com relao ao composto.

medida que os compostos da mistura so separados, bandas ou zonas mveis comeam a ser formadas; cada banda contendo somente um composto. Em geral, os compostos apolares passam atravs da coluna com uma velocidade maior do que os compostos polares, porque os primeiros tm menor afinidade com a fase estacionria. Se o adsorvente escolhido interagir fortemente com todos os compostos da mistura, ela no se mover. Por outro lado, se for escolhido um solvente muito polar, todos os solutos podem ser eludos sem serem separados. Por uma escolha cuidadosa das condies, praticamente qualquer mistura pode ser separada

Outros adsorventes slidos para cromatografia de coluna em ordem crescente de capacidade de reteno de compostos polares so: papel, amido, aucares, sulfato de clcio, slica gel, xido de magnsio, alumina e carvo ativo. Ainda, a alumina usada comercialmente pode ser cida, bsica ou neutra. A alumina cida til na separao de cidos carboxlicos e aminocidos; a bsica utilizada para a separao de aminas.

Materiais e Mtodos:

Materiais Coluna cromatogrfica, algodo, funil, bquer, pipeta, slica-gel em p, ter de petrleo, acetona, amostra (maceramento de folha em acetona resultando em uma mistura de cor verde).

Mtodos Em uma coluna cromatogrfica contendo um pequeno algodo na ponta mediu-se 5 cm de slica-gel em p e transferiu-se a slica para um bquer. Por ser conhecida a polaridade dos solventes que sero utilizados, a slica foi misturada em ter de petrleo, que menos polar que a acetona e ser o primeiro solvente a ser utilizado no procedimento de separao. Com a ajuda de um funil, a slica foi colocada na coluna cromatogrfica e o excesso de ter de petrleo foi retirado. Utilizando uma pipeta colocou-se a amostra dentro da coluna de forma a no criar rachaduras. Abriu-se novamente a ponta da coluna at que a amostra estivesse toda em contato com a slica (sem haver lquido sobrando sobre o final da coluna).

Lentamente adicionou-se o ter de petrleo at a visualizao de duas fases distintas. A fase amarela foi descendo enquanto a verde permanecia no topo da coluna. Aps observar essa separao das fases encheu-se a coluna com ter de petrleo e colheu-se toda a fase amarela da amostra em um bquer, restando somente a fase verde no topo da coluna. Removeu-se tambm o restante de ter de petrleo que restou na coluna.

Ao incio da eluio com acetona a coluna criou rachaduras em seu interior e para removlas colocou-se algodo umedecido com clorofrmio por fora da coluna, cobrindo todos os pontos de rachadura. O clorofrmio esfria o ar presente na coluna facilitando sua retirada (diferena de presso a presso da coluna sobre a rachadura maior). Aps a coluna voltar a ficar uniforme continuou-se a adio de acetona at a coleta de toda banda verde em outro bquer.

Resultados e Discusso:

O mtodo de cromatografia de coluna permitiu a separao de duas bandas visveis do extrato de folhas, a banda amarela que uma mistura de carotenos e a banda verde que uma mistura de clorofilas, devido interao de cada banda com o solvente. A banda amarela interagiu com o ter de petrleo, pois ela mais apolar do que a banda verde. A banda verde interagiu com a acetona, pois ela era mais polar.

Os aspectos que alteram a eficincia de uma coluna cromatogrfica so o empacotamento da slica-gel que compe a coluna e a aplicao da mistura sobre a coluna. O empacotamento deve ser o mais uniforme possvel, sem a presena de bolhas e rachaduras no interior da coluna, pois estas atrapalham a separao das bandas. A aplicao da mistura sobre a coluna deve ser pequena para que as bandas possam se separar completamente antes que a coluna termine.

Concluso:

A separao de misturas contendo substncias com diferentes polaridades atravs da cromatografia de coluna eficiente, pois possvel separar completamente essas substncias devido sua interao com o solvente utilizado. Elas devem ser analisadas posteriormente para que haja certeza de que existe somente aquele determinado composto da mistura. Isso pode ser feito atravs da cromatografia de camada delgada.

Bibliografia:

Disponvel em: <http://ubeExperimental 164.pop.com.br/repositorio/48/meusite/qorganica

ECO-QUMICA, Portal de Qumica e Meio Ambiente Qumica Fcil Qumica Orgnica experimental/cromatografia.htm>. Acessado em 30/04/2009.

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