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CHIMIE
PHYSIQUE
Biotechnologies et bioprocds
Introduction
SANTE
BIOLOGIE
Patrice BACCHIN
Enseignant Chercheur Procds de Sparation et Membranes
Universit Paul Sabatier Laboratoire de gnie Chimique 31 062 TOULOUSE Cedex 9 Tel : 05 61 55 81 63 Fax : 05 61 55 61 39 Email : bacchin@chimie.ups-tlse.fr Web : http://lgc.inp-toulouse.fr http://www.patricebacchin.fr
Partie 1 : Biotechnologies
Quoi ? Pourquoi ? Comment ? Avec quoi ? Dfinition Enjeux Dmarche Matriel biologique
Gnralits : Quoi ?
Dfinition OCDE : lapplication de la science et de la technologie aux organismes vivants et dautres matriaux vivants ou non vivants, pour la production de savoir, biens et services
volution naturelle de la biologie et de lingnierie possible grce aux nouvelles techniques (chromatographie, lectrophorse, mthodes optiques, ) et lexplosion de connaissances sur le fonctionnement de la cellule et du matriel biologique
OCDE : Organisation de coopration et de dveloppement conomiques
Gnralits : Pourquoi ?
Pour rechercher les causes des maladies, concevoir, tester et produire des mdicaments spcifiques ou des dispositifs bio-mdicaux Pour mettre au point des procds, de traitement ou de recyclage innovants (techniques de bioremdiation) Pour mettre au point des capteurs de ltat de lenvironnement, de sa pollution par des substances chimiques. Pour produire dans le domaine de l'agriculture, au travers en particulier des OGM Pour dvelopper des alternatives nergtiques notamment par la production de biogaz et dalcool
Mthode de production douce plus conome en nergie et moins polluante
Gnralits : Comment ?
Des moyens matriels : Systme de production grande chelle de produit dintrt : mtiers de la recherche, du dveloppement et de la production
Des connaissances : un socle pluridisciplinaire : biologie, microbiologie, biologie molculaire, chimie, biochimie, physique biophysique, gntique, l'informatique.
CHIMIE
PHYSIQUE
SANTE
BIOLOGIE
Levures
10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8 10-9 10-10 1 mm eucaryotes 1 m procaryotes virus protines molcules atomes
Bactries (0,1-5 m)
1 nm
Enzyme ADN
E+S
K-1
ES
k2
E+P
d [P ] vmax [S ]0 v= = [S ]0 + K m dt
Si Km >> [S] Si Km << [S] -> raction dordre 1 -> raction dordre 0
vmax = k 2[E ]0
k 1 + k 2 Km = k1
Exercices
Si vmax=100 mol.ml-1.s-1 et Km = 2mM, quelle est la vitesse de la raction quand [S]=20 mM ?
V=91mol.ml-1.s-1
On trouve les vitesses de raction suivantes pour diffrentes concentrations en substrat : 1 2 4 8 [S]0 (mM) v (mol.ml-1.s-1) 12 20 29 35 Dterminer les constantes de raction de Michalis-Menten
Vmax=51 mol.ml-1.s-1 et Km=3,2 mM
12 40
Les virus bactriophages sattaquent aux bactries (il existe un phage pour un type de bactrie) : vecteurs de clonage pour insrer de l'ADN dans les bactries. Un agent antimicrobien performant (pourra terme remplacer les antibiotiques)
Saccharomyces cerevisiae
Respiration anarobie
C6H12O6 + 12 KNO3 -> 6 CO2 + 6 H20 + KNO2 + 429 Kcal 25 ATP - > Rdt 1 ATP = 7,3 Kcal 1 cal = 4,186 J (SI)
Exercice
On dispose de 100L de jus de fruit dont la concentration massique en glucose est gale 53.2 g/L .
Quel est le volume de CO2 libr lors de la fermentation alcoolique de ce jus de fruit ? Calculer le degr dalcool obtenu aprs fermentation ?
Degr dalcool : titre volumique qui est le rapport entre le volume d'alcool pur contenu dans le liquide et le volume total (la densit 20 C de lthanol est de 0,791)
Des Biotechnologies
Quoi ? Pourquoi ? Comment ? Avec quoi ? Dfinition Enjeux Dmarche Matriel biologique + Des bioprocds
Bioprocds
Le principe de lusine cellulaire Une histoire dans le temps Une implantation dans lespace Un cur : le bioracteur De la qualit grande chelle Une usine dans un environnement Quelques exemples de bioprocds
Substrat
Le bioprocd permet de faire fonctionner le biocatalyseur avec un contrle fin des conditions
Usine cellulaire
10-100 mL
10-100 L
10-100 m3
Un cur : le bioracteur
Impurets Produits
Bioracteur
Dchets
Le cur : Le bioracteur
Bioracteur : terme gnrique driv du vocabulaire du gnie chimique dsignant des rcipients dans lesquels se droulent une raction (bio)-chimique. Ce terme de bioracteur regroupe les fermenteurs (terme ancien) et cytoculteur (terme plus rcent).
B
BioCatalyseur
Dgradation du Substrat Multiplication des cellules -> formation de la Biomasse Production de Produits mtabolites
Un cur batch
les bioracteur fonctionnant en discontinu ou en batch ne sont pas aliments en continu en substrat : le substrat (solide ou liquide) est introduit au dbut de la raction : traitement par lot ("batch " en anglais)
inoculum
Substrat
Formation de la Biomasse
Un cur continu
Le bioracteur fonctionnant en continu est aliment en continu en substrat : le substrat (en solution) est introduit tout au long de la raction avantages : la transformation des substrats
peut se poursuivre indfiniment et l'appareillage est utilis plein temps (intrt conomique) Substrat
Produits
en pratique :
alimentation en substrat et un soutirage du milieu un mme dbit (pour que le volume reste constant) est utilis durant des priodes plus ou moins longues : un fonctionnement sur des temps longs peut engendrer la modification du matriel biologique (mutation de microorganismes, dnaturation donc inactivation des protines, ...)
Un cur semi-continu
Le bioracteur fonctionnant en semicontinu (ou en batch aliment ou fed batch) sont partiellement aliments : le substrat est introduit tout au long de la raction mais sans qu'il y ait soutirage du milieu -> le volume augmente Avantages : permet daugmenter le volume
au fur et mesure de la croissance de la biomasse
X=X0 2n Si G est le temps de gnration (temps ncessaire au doublement de la population) : n=t/G X=X0 2t/G
Ln(X) = ln(X0) + ln(2).t G taux de croissance (nprien) (h-1) ou vitesse spcifique de croissance t Ln X Croissance exponentielle de la biomasse
(h-1)
Exercice
Le temps de gnration est de 20 minutes pour Escherichia coli. On place une bactrie dans des conditions idales de culture.
Calculer le nombre de bactries prsentes au bout de 12h Calculer le taux de croissance nprien
Sol : t=4,7 h
conditions d'obtention de cultures pures. Le suivi des conditions de culture est essentiellement empirique : Dbut de la microbiologie industrielle. Clostridium (anarobiose stricte) de l'actone et du butanol utiliss pour la fabrication d'explosifs.
1915 : durant la premire guerre mondiale Weizman russit faire produire par un
6m
L? 200 m3
contrle du pH en ligne rgulation PID des paramtres Des modles de bioraction servent de guide pour le suivi et le pilotage du bioracteur et permettent de dtecter des dviations du comportement normal.
AMM
bioprocds
+
procds
(mlange, sparation) +
services
(fourniture dnergie, deau de refroidissement, stockage) +
station dpuration
+
administration
Une culture industrielle : la qualit du travail industriel accompli (prvention des accidents, suivi qualit, respect de lenvironnement) peut tre atteste par la certification de linstallation aux normes ISO 9000.
La bactrie bactrie actique (acetobacter aceti) est aussi responsable de la piqure actique des vins
www.itv-midipyrenees.com/.../piqure-acetique.php
http://acces.inrp.fr/eduterreusages/nappe/html/Ressources/les%20stationsdepuration/lesstationsdepuration
Il est aussi possible de produire des plantes transgniques (OGM) dite Bt produisant la toxine dans leurs tissus ariens (feuilles et tige). -> Problme daccumulation de Bt dans le milieu naturel
La voie enzymatique est une voie possible et prometteuse pour laborer des bio-carburants partir de la biomasse.
Organisation de lUE
Organisation gnrale
Equipe pdagogique
P. Bacchin, C. Causserand, P. Gros, JP. Souchard, T. Tzedakis, P. Vicendo
12 h cours 18 h TD
Cours/TD tudes de cas
18 h TP
Projet Comment produit-on ?
Outils :
Guide mthodologique de recherche et de traitement de l'information scientifique et technique http://sup.ups-tlse.fr/abcdoc/rechercher-traiterinformation/index2.html Fiche : Recherche en bibliothque, Mthode du classeur, Raliser un diaporama Bibliothque Outil informatique pour les diaporamas
Rfrences
Ren Scriban, Biotechnologie, Tec&Doc Lavosier, 1999 Grard Coutouly, Biotechnologies : la part industrielle, Dossier CRDP Alsace, 2005 (tlchargeable sur http://www.crdpstrasbourg.fr/sciences/biotech/
Colin Ratledge, Bjorn Kristiansen, Basic biotechnology, Cambridge University Press, 2006