MICROPROPAGACIN DE VENUS ATRAPAMOSCAS (DIONEAE MUCSIPULA) A TRAVS DE LA TCNICA DE EMBRIOGNESIS INDIRECTA.

ALEJANDRA CARDONA GAVIRA ESNEIDER DURANGO MURILLO MELISA PATIO ARBOLEDA HADALUZ PULGARN TABORDA PABLO ALEJANDRO TORRES ESTRADA WILLIAM ENRIQUE PREZ CAMPO ROBINSON SALAZAR DAZ

Biotecnologa Catalina Beltrn lzate Institucin Educativa Colegio Loyola Para La Ciencia Y La Innovacin Medelln 2012

NDICE

Nombre de la investigacin _______________________________________ 3 Resumen _____________________________________________________ 3 Introduccin ___________________________________________________ 3 Perturbacin de la onda _________________________________________ 12 Superposicin de la onda ________________________________________ 12 Trayectoria de indagacin _______________________________________ 12 Recorrido de las trayectorias de indagacin__________________________ 13 Reflexin de la onda ____________________________________________ 13 Bibliografa ___________________________________________________ 13 Agradecimientos_______________________________________________ 13 Anexos ______________________________________________________ 14

NOMBRE DE LA INVESTIGACIN
Micropropagacin de Venus Atrapamoscas (Dioneae muscipula) a travs de la tcnica de embriognesis indirecta.

RESUMEN
Para propagar la especie Dionaea muscipula mejor conocida como Venus atrapamoscas, la cual es una planta carnvora, el grupo de investigacin Wavevorous ha decidido experimentar por medio de biotecnologa vegetal la micropropagacin de esta planta mediante el medio de cultivo Murashige y Skoog (MS) empleando el regulador de crecimiento Acido Giberlico (AG) distinguiendo diferentes proporciones para as determinar la que ofrezca mejores resultados y realizar una estandarizacin del protocolo de micropropagacin; una de las principales razones para hacer esto es la evidente escasez de esta planta en la ciudad de Medelln, adems de que es y puede utilizarse de forma ornamental y facilitara el proceso de cultivo para futuras investigaciones o experimentos sobre ella.

INTRODUCCIN
Antecedentes: En el proyecto Rapid in vitro multiplication of Drosera Burmanii Vahl.: A vulnerable and medicinally important insectivorous plant1 el grupo observ todo un proceso experimental. En este proceso el grupo ha identificado elementos importantes a tener en cuenta como la adiccin de azucares, pruebas con pH, cultivo en medio MS. En cuanto al cultivo en medio MS, en su proyecto, este grupo ha probado con concentraciones de 1/2, 1/3, 1/4 y una medida bsica; la concentracin que mejor ha actuado ha sido la de 1/4. Luego han probado en diferentes concentraciones de azucares con lo cual al obtenido el mejor resultado al utilizar un 3%. Incluso se realizaron experimentos con cambios en el pH han notado que entre menos pH hay son menos los brotes adems indican en su investigacin que han visto resultados similares en otros tipos de plantas carnvoras. Por ltimo hablan del uso de quinina y el BAP en los que plantean que el mejor uso es en proporciones de (1.0 y 2.0 mg L-1) Marco terico o conceptual

SISTEMA DE CULTIVO IN VITRO La expresin cultivo in vitro de plantas, significa cultivar plantas dentro de un frasco de vidrio en un ambiente artificial. Esta forma de cultivar las plantas tiene dos caractersticas fundamentales: la asepsia (ausencia de grmenes, etc.), y el control de los factores que afectan el crecimiento. El avance alcanzado por las ciencias biolgicas ha permitido en los ltimos aos el estudio detallado de las plantas tanto a nivel celular como molecular, y en condiciones de laboratorio es posible actualmente reproducir todos los factores que puedan incidir en el crecimiento y desarrollo de las plantas. Este principio general se aplica tambin al cultivo in vitro de plantas. Haberlandt, un cientfico alemn, postul a principios del siglo pasado que las plantas eran capaces de reproducir su crecimiento a partir de clulas aisladas, originando la hiptesis de la totipotencia celular en plantas. Sin embargo, este investigador no pudo demostrar en forma prctica su hiptesis, debido a que la mayora de los componentes complejos que integran los medios de cultivo actuales todava no haban sido descubiertos. Sera recin en la dcada del 50 cuando se determina la importancia del balance hormonal en las plantas, con el descubrimiento de las hormonas vegetales ms usadas en la actualidad.

Reproducir en condiciones de laboratorio todos los factores que conforman el ambiente de la planta en la naturaleza es tcnicamente muy complejo. Por esa razn se realiza una simplificacin de la realidad escogiendo aquellos factores que se puedan mantener controlados. Cuando no se realiza el estudio con todo el ser vivo sino con solamente una parte del mismo, se utiliza el trmino explante para indicar la parte del rgano tejido vegetal que se cultiva in vitro. A la dificultad de reproducir las condiciones naturales en condiciones de laboratorio, se debe aadir en este caso la dificultad de suministrar al explante todo aquello que antes obtena del sistema completo. En resumen, el cultivo in vitro de plantas es una tcnica que exige un control especfico del ambiente, tanto fsico como qumico, en el que se sita al explante. Conviene, por tanto, conocer cules son los principales factores que conforman dicho y que debern ser controlados.

La micropropagacin o propagacin clonal, es una de las aplicaciones ms generalizadas del cultivo in vitro, a travs de la micropropagacin, a partir de un fragmento (explante) de una planta madre, se obtiene una descendencia uniforme, con plantas genticamente idnticas, denominadas clones. El explante ms usado para los procesos de propagacin in vitro son las yemas vegetativas de las plantas. Los frascos que contienen las plantas se ubican en estanteras con luz artificial dentro de la cmara de crecimiento, donde se fija la temperatura en valores que oscilan entre los 21 y 23C, adems de controlar la cantidad de horas de luz. Por su parte, el medio de cultivo se compone de una mezcla de sales minerales, vitaminas reguladores

de crecimiento, azcar, agua y agar. La composicin del medio depende de la especie vegetal y de la etapa del proceso de micropropagacin. Con finalidad puramente descriptiva se puede clasificar los principales factores no biolgicos que afectaran al desarrollo del cultivo in vitro, incluyendo: Ambiente qumico Composicin del medio de cultivo pH

Ambiente fsico temperatura luz y fotoperiodo humedad

Dentro del proceso de micropropagacin diferenciamos varias fases o etapas: 0: Seleccin y Preparacin de la planta madre 1: Desinfeccin de las yemas de la planta y/o desinfeccin de semillas 2: introduccin del material seleccionado in vitro 3: Multiplicacin de brotes 4: Enraizamiento 5: Aclimatacin

Esta secuencia de etapas abarca el ciclo completo de la multiplicacin de plantas in vitro; puede ser aplicada a diferentes especies vegetales, en cada caso se podrn incluir simplificaciones o cambios de acuerdo a las caractersticas de las plantas, pero en trminos generales son comunes al proceso de propagacin in vitro. FASE 0: PREPARACIN DE LA PLANTA MADRE Para poder establecer el cultivo en condiciones de asepsia, se deben obtener explantescon un nivel nutricional y un grado de desarrollo adecuado. Para obtener estos explantes es recomendable mantener a las plantas madre, es decir la planta donadora de yemas, durante un perodo de tiempo que puede oscilar entre unas semanas o varios meses en un invernadero bajo condiciones controladas. En ese ambiente se cultiva la planta en condiciones sanitarias ptimas y con un control de la nutricin y riego adecuados para permitir un crecimiento vigoroso y libre de enfermedades. FASE 1: DESINFECCIN DEL MATERIAL VEGETAL Una vez elegida la planta madre, se extraern los fragmentos a partir de los cuales se obtendrn los explantes. Los explantes pueden ser yemas, trozos de hojas, porciones de races, 5

semillas, etc. Antes de extraer los explantes se har una desinfeccin de los fragmentos de planta madre para eliminar los contaminantes externos. Los contaminantes ms comunes son los hongos y las bacterias que habitan en forma natural en el ambiente. Una vez desinfectado el material vegetal, se debe mantener en condiciones de asepsia. A efectos de obtener las condiciones de asepsia, se trabajar en cabinas de flujo laminar para extraer los explantes a partir del material vegetal. Estos explantes se introducirn en un tubo de cultivo conteniendo medio de iniciacin para poder controlar la sanidad y la viabilidad, luego de realizar la desinfeccin del material con hipoclorito de sodio (agua clorada comercial), pura o diluida durante un perodo de 5 a 15 minutos, seguido por 3 a 4 enjuagues en agua esterilizada. FASE 2: INTRODUCCIN DEL MATERIAL IN VITRO Luego de la desinfeccin superficial, las semillas o las yemas dependiendo del material seleccionado, se ponen en medio de cultivo estril. En un perodo de una semana o quince das, comienza el proceso de germinacin o regeneracin de nuevos tejidos vegetales, iniciando el ciclo de cultivo in vitro. FASE 3: MULTIPLICACIN DE LOS BROTES Durante esta fase se espera que los explantes que sobrevivieron la FASE 1 y 2 originen brotes (de procedencia axilar o adventicia) con varias hojas. En la base de cada hoja hay una yema que se desarrollar luego de ser puesta en contacto con el medio de cultivo. Peridicamente estos nuevos brotes se deben subcultivar en un nuevo medio mediante divisiones y resiembras en tubos de cultivo u otros recipientes adecuados. Estas operaciones se realizan en la cmara de flujo laminar o en un lugar aislado que nos permita mantener las condiciones de asepsia. De esta forma aumenta el nmero de plantas en cada repique o divisin de las plantas. El nmero de plantas que se obtiene depender de la especie vegetal y de las condiciones del medio de cultivo. El nmero de plantas que se obtiene por la va de la micropropagacin permite alcanzar incrementos exponenciales, considerando que todos los factores que afectan el crecimiento hayan sido optimizados. FASE 4: ELECCIN DE UN MEDIO DE ENRAIZAMIENTO DE LOS EXPLANTOS Para enraizar los explantes se utilizan principalmente plantines individuales de un tamao aproximado de 2 centmetros. Los brotes obtenidos durante la fase de multiplicacin se transfieren a un medio libre de reguladores de crecimiento o que solo contenga hormonas del tipo auxinas. Algunas especies de plantas no necesitan pasar por esta etapa y emiten sus races en el mismo medio de cultivo donde desarrollan yemas nuevas, por lo tanto el proceso de multiplicacin y enraizamiento transcurren en forma simultnea. FASE 5: ACLIMATACIN DE LOS EXPLANTOS ENRAIZADOS Los explantes recin enraizados son muy sensibles a los cambios ambientales, de manera que el xito o el fracaso de todo el proceso depende de la aclimatacin. En esta etapa las plantas 6

sufrirn cambios de diferente tipo que permitirn la adaptacin de las mismas a vivir en condiciones naturales. En el momento en que se extraen los explantes o plantines enraizados de los frascos, estn poco adaptados a crecer en un invernculo, ya que estos explantes han enraizado y crecido en ambientes con una humedad relativa muy elevada y generalmente tienen estomas (estructuras responsables de regular la transpiracin y prdida de agua en la planta) que no son completamente funcionales frente a descensos de la humedad relativa, y por lo tanto demasiado lentos para evitar la desecacin del explante. Por otra parte, crecer en ambientes tan hmedos tambin suele implicar la falta de una cutcula con cera bien desarrollada, que representa la barrera fsica para evitar la prdida de agua a lo largo de toda la superficie de la planta. La siguiente lista presenta una comparacin de las caractersticas de una planta en condiciones de laboratorio (in vitro) respecto a una planta en condiciones naturales (in vivo): In vitro In vivo Realiza fotosntesis Crecimiento en condiciones no controladas Exposicin a los patgenos y grmenes del ambiente Humedad relativa variable Estomas funcionales Presencia de pelos radiculares Presencia de cera en la cutcula No realiza fotosntesis Crecimiento en condiciones controladas Crecimiento en condiciones de asepsia Alta humedad relativa Estomas no funcionales Ausencia de pelos radiculares Ausencia de cera en la cutcula

Los plantines enraizados, deben ser aclimatados a las condiciones de humedad del invernadero disminuyendo progresivamente la humedad relativa e incrementando progresivamente la intensidad de luz. Estos plantines se plantarn en contenedores (almacigueras) cubiertos por un plstico, para mantener la humedad relativa elevada. La eleccin de un sustrato con buenas caractersticas fsicas, es clave para el xito de esta etapa. Para el trasplante, elegimos un sustrato suelto, poroso, con mezcla de arena turba, cscara de arroz quemado, para permitir un desarrollo y crecimiento de races muy rpido. Las mezclas son diferentes y muy variadas de acuerdo a la especie con la que estamos trabajando. Luego de retirar cuidadosamente el agar de las races para evitar daarlas, los

Plantines se enjuagan y se colocan en almacigueras con la mezcla de sustratos seleccionada y cubiertos con nylon. Todos los das se debe controlar el nivel de humedad en las almacigueras. Si es necesario, se aplica un riego con una pulverizadora manual, para mantener un ambiente hmedo a nivel del sustrato. A los 15 das del trasplante, se puede comenzar a levantar la cobertura de nylon en las horas de menor calor (temprano en la maana o en la ltima hora de la tarde). Al comienzo las plantas se dejan media hora por da destapadas. A la semana siguiente se dejan destapadas durante una hora. Al mes del trasplante, se dejan tapadas durante la noche y si hay crecimiento de nuevas hojas, las plantas pueden permanecer destapadas. Las condiciones del cultivo in vitro, generan cambios en algunos aspectos anatmicos y fisiolgicos de las plantas, por esta causa, durante la aclimatacin, los cambios deben ser muy graduales, para minimizar el estrs y tener mayor tasa de sobrevivencia.2 VENUS ATRAPAMOSCAS Lineo le puso el nombre de Diana, diosa griega del amor y de la belleza. Se localiza en Carolina del Norte (EEUU) y suele ser la preferida de la gente y la ms conocida tambin. Con buenos cuidados llegan a vivir 25 aos. Las Plantas Carnvoras son un grupo diferente dentro del Reino Vegetal. Sus formas extraas, su alimentacin a base de insectos y sus estrategias para capturarlos son sencillamente fascinantes. En realidad la gran mayora de especies slo comen insectos, solo alguna especie puede alimentarse de lagartijas y pequeos roedores. Por esta razn, dej de llamrseles "plantas insectvoras" y pas a denominarse "plantas carnvoras". La mayora viven en terrenos pobres en alimento, de ah que desarrollaran mtodos para atrapar animales y completar as sus necesidades nutritivas asimilando alimento desde sus hojas/trampas. TRAMPAS DE CAPTURA Es en forma de cepo bilobulado, y se encuentra en el extremo de cada hoja. Al sentir que el insecto vibra en el interior de la trampa se dispara como una trampa para osos, cerrando en 0,1 segundos aprox. Las trampas llegan a tener unos 40 a 50mm cuando la planta es adulta, esto vara segn las tcnicas de cultivo y ubicacin geogrfica. Si tocamos las trampas se dispararan y no capturaran nada, esto es muy perjudicial para la planta. Cada trampa tiene una vida til, que ronda el ciclo cierre-apertura 3 veces cuando atrapa algn insecto, y 6 veces cuando se cierra sin atrapar nada. El cierre continuo de las trampas har que la planta se debilite y muera. No debe estar comiendo todo el tiempo, la planta atrapa sola. Con un insecto cada 10 das alcanza. Sus hojas carnosas son la fuente principal para generar fotosntesis, no deben cortarse o daarse mientras estn activas. Segn la poca del ao estas son ms anchas o ms alargadas. Una vez secas es conveniente retirarlas manualmente, esto es una tarea suave, si las hojas no se desprenden naturalmente se pueden cortar con una tijera filosa. Este procedimiento va a prevenir la formacin de hongos. RIEGO El agua adecuada es: Agua destilada o desmineralizada - Agua de lluvia - Agua que cae del 8

aire acondicionado. Se riegan por el "mtodo de la bandeja" en lugar de echar el agua desde arriba, se coloca agua en la bandeja que se entrega con las plantas. Consiste en poner la maceta dentro de la bandeja y colocar de 1 a 2 cm de agua en la bandeja. El sustrato hace de esponja e ira absorbiendo el agua desde abajo. No regar desde arriba. En Primavera-Verano: debe tener disponible constantemente agua en la bandeja de riego. En Otoo-Invierno: una vez que absorbi todo el agua de la bandeja, dejar sin agua 2 das y colocar nuevamente. Aunque por momento no estar encharcada nunca debe secarse por completo el sustrato. DONDE UBICARLAS Pueden ir tanto en interior como exterior. Adentro debe ser al lado de una ventana donde reciba buena luz y un poco de sol directo suave. Afuera debe estar debajo de un techo o reparo, para evitar la lluvia directa. No debe estar expuesta a corrientes de aire, calefaccin cerca o aire acondicionado. TEMPERATURAS ADECUADAS - HIBERNACION Primavera-Verano: son plantas muy resistentes, soportan altas temperaturas siempre y cuando tengan agua disponible en la bandeja de riego y no estn expuestas al sol directo. OtooInvierno: con el fro entran en un perodo de hibernacin, durante el cual la planta no crecer y tendr muy poco movimiento. En esta poca es conveniente ubicarlas en un lugar donde reciban la temperatura natural de invierno (menores a 15C), pueden estar afuera bajo techo o adentro en un lavadero o patio sin calefaccin. Si por razones geogrficas el invierno no es fro, es conveniente colocarlas durante 2 meses en la parte inferior del refrigerador (heladera) para simular un invierno fro. El no cumplimiento del proceso de letargo - hibernacin tendr consecuencias muy desfavorables o mortales para la planta. VELOCIDAD DE CRECIMIENTO El cultivo se realiza desde semillas y su crecimiento desde pequeas es muy lento. Al nacer, la primera hoja ya genera una pequea trampa que es capaz de atrapar pequeos insectos generados en la humedad del sustrato, su alimentacin no es muy ineficiente durante esta etapa. Recin al ao, cuando generan trampas que pueden atrapar un insecto del tamao de un mosquito, su crecimiento se acelera gracias a los nutrientes asimilados en sus cepos. A los dos aos sus trampas llegan al centmetro de largo y a los tres aos ya podemos considerarla una planta joven-adulta. Florecen al partir del tercer al quinto ao de vida. No se auto polinizan, para que las semillas sean frtiles debe haber un plantel floreciendo al mismo tiempo para intercambio de polen. Hay que tener en cuenta que solo crecen en la poca clida del ao, pues durante la poca fra, la planta esta hibernando y acumulando energa en sus races. La planta llega a los 35/40 de dimetro a los 7 aos de vida. TIPOS DE PRESAS Esta especie atrapa a cualquier insecto que se pose o pase por sus trampas atrado por el 9

nctar y color que generan. Desde araas, moscas, hormigas, lagartijas, etc. Si bien atrapa todo tipo de insectos algunos le son perjudiciales y pueden llegar a secar la trampa que los captur. Una vez que se cierra no se abrir hasta digerirlo. SUSTRATO y MACETAS TRANSPLANTE Pueden trasplantarse cada ao desde pequeas y cada 2 aos a partir del 3 ao de vida, la tierra a utilizar se llama sustrato, y es una mezcla de distintos componentes. No se debe utilizar tierra comn ni ningn otro componente que no est especificado. Las macetas deben ser plsticas. DATOS UTILES No exponer al sol directo fuerte - No es necesario proveerles insectos, si se desea debe drsele insectos vivos. No son venenosas ni peligrosas para mascotas ni nios - No tocar las trampas y cerrarlas en forma artificial, esto daar a la planta en forma peligrosa. No regarse nunca con agua corriente, de pozo ni mineral. No agregar ningn tipo de fertilizante o abono. No exponer a insecticidas o productos agresivos. Al cambiarla de hbitat o transportarla la Planta sufre un Shock natural que dura unos das, hasta que se adapta nuevamente; puede perder velocidad y energa.3 CIDO GIBERLICO El cido giberlico (o giberelina A3, AG, y AG3 es una fitohormona hallable en plantas. Su frmula qumica es C19H22O6. Cuando purificada, es un polvo cristalino blanco a plido amarillo, soluble en etanol y algo soluble en agua. El AG, cido giberlico es una simple giberelina, promoviendo crecimiento y elongacin celular. Afecta la descomposicin vegetal y ayuda a su crecimiento si est en bajas proporciones, aunque eventualmente la planta desarrolle tolerancia al compuesto. Este cido estimula a las clulas de las semillas germinantes a producir molculas de ARN mensajero (ARNm) que codifican las enzimas hidrolticas. El cido giberlico es una muy potente hormona cuya presencia natural en plantas controla su desarrollo. Sabindose de su poder regulatorio, las aplicaciones de muy bajas concentraciones pueden resultar en profundos efectos,mientras que muy altas pueden dar el efecto opuesto. Se lo usa generalmente en concentraciones de 0,01 a 10 mg/L . El AG fue primero identificado en Japn en 1935, como un subproducto metablico del fitopatgeno Gibberella fujikuroi, que enferma al arroz; la variedad fujikuroi de plantas infectadas desarrolla bakanae, causndole un exagerado crecimiento, por lo que la planta se muere por no autosoportarse su propio peso. Las giberelinas tienen un nmero de efectos sobre el desarrollo vegetal: Estimulan rpido crecimiento de tallos 10

Inducen divisiones mitticas en las hojas de algunas especies Incrementan la tasa de germinacin de semillas

El AG se usa a veces en laboratorio y en invernculo para acelerar la germinacin de semillas que de otro modo permaneceran endormancia. Es muy usado en la industria de las vides como la hormona inductora de la produccin de ms largos sarmientos, especialmente Sultanina (variedad sin semilla), y en Okanagan se lo usa en la industria de los cherries como regulador de crecimiento.4 Situacin problema: El problema que el grupo pretende solucionar es poder introducir esta especie al sistema de cultivo de tejidos in vitro dado a las propiedades ornamentales que la especie presenta, el grupo procurar llegar hasta la etapa de aclimatacin, en la cual se evaluar en nivel de adaptabilidad de las plntulas obtenidas in vitro. El grupo Wavevorous tiene como finalidad realizar un cultivo in vitro con la especie Venus Atrapamoscas (Dionaea muscipula) que hace parte de las plantas carnvoras, este proyecto es hecho con el propsito de estandarizar un mtodo para su multiplicacin por medio de la experimentacin a travs del medio de cultivo MS en diferentes proporciones. Una de las razones que influyeron en la decisin de trabajar con esta especie, es que en la ciudad de Medelln es un poco escasa y utilizando este mtodo buscamos su propagacin para evitar la extincin de la misma, adems esta es un planta ornamental que ayuda a que aumente el inters de la poblacin por esta especie. Objetivos General Estandarizar un procedimiento para la micropropagacin de la planta Venus Atrapamoscas (Dionaea muscipula) utilizando diferentes protocolos de desinfeccin y diferentes concentraciones de reguladores de crecimiento.

Especficos Establecer un protocolo de desinfeccin para el explante de la Venus Atrapamoscas utilizando hipoclorito de sodio y alcohol para liberar de patgenos la muestra. Evaluar los reguladores de crecimiento que se deben agregar al medio de cultivo para obtener brotes y continuar con el sistema de cultivo in vitro. Evaluar los reguladores de crecimiento que ayuden a la multiplicacin de la Venus Atrapamoscas para adquirir una mayor cantidad de las mismas. . Extraer los explantes del medio de cultivo in vitro para proceder a su enraizamiento por medio de reguladores de crecimiento.

Hiptesis: La implementacin de diferentes cantidades de cido giberlico como regulador de crecimiento a la micropropagacin de la planta carnvora Venus Atrapamoscas (Dionaea 11

muscipula) y NaCl (Hipoclorito de sodio) y alcohol como mtodo de desinfeccin del explante ayudara a que la misma planta estando en el sistema tenga las vitaminas necesarias para sobrevivir adems de lograr un control asptico de plagas o patgenos que quieran daar la planta.

PERTURBACIN DE LA ONDA
Cmo influye la concentracin de hipoclorito de sodio y alcohol en la desinfeccin del explante y la concentracin de AG: cido giberlico en la multiplicacin in vitro de Venus atrapamoscas (Dionaea muscipula)?

SUPERPOSICIN DE LA ONDA
El problema que el grupo pretende solucionar es poder introducir esta especie al sistema de cultivo de tejidos in vitro dado a las propiedades ornamentales que la especie presenta, el grupo procurar llegar hasta la etapa de aclimatacin, en la cual se evaluar en nivel de adaptabilidad de las plntulas obtenidas in vitro. El grupo Wavevorous tiene como finalidad realizar un cultivo in vitro con la especie Venus Atrapamoscas (Dionaea muscipula) que hace parte de las plantas carnvoras, este proyecto es hecho con el propsito de estandarizar un mtodo para su multiplicacin por medio de la experimentacin a travs del medio de cultivo MS en diferentes proporciones. Una de las razones que influyeron en la decisin de trabajar con esta especie, es que en la ciudad de Medelln es un poco escasa y utilizando este mtodo buscamos su propagacin para evitar la extincin de la misma, adems esta es un planta ornamental que ayuda a que aumente el inters de la poblacin por esta especie.

TRAYECTORIA DE INDAGACIN
Desinfectar el explante de la Venus Atrapamoscas extrado de un medio natural por medio de NaOCl (Hipoclorito de sodio) y alcohol para poder empezar a desarrollar el sistema de cultivo in vitro. Inducir callos a los explantes retirados de dicha planta ya puestos en sistema de cultivo in vitro por medio de reguladores de crecimiento para seguir con el proceso de micropropagacin. Multiplicar el explante de la Venus Atrapamoscas que se encuentran en sistema de cultivo in vitro por medio de reguladores de crecimiento para obtener mayor cantidad de las mismas. Enraizar los explantes de Venus atrapamoscas ya retirados del sistema de cultivo in vitro utilizando reguladores de crecimiento para lograr una adaptabilidad de la misma en el exterior.

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RECORRIDO DE LAS TRAYECTORIAS DE INDAGACIN

Especificacin de la diferencia entre lo diseado y lo recorrido. Si lo hay.

REFLEXIN DE LA ONDA
Breve resumen de los resultados, conclusiones e impactos sociales, econmicos y acadmicos entre otros.

BIBLIOGRAFA
1. Kottapalli Jayaram and M.N.V.Prasad. Rapid in vitro multiplication of Drosera indica L.: a vulnerable, medicinally important insectivorous plant. [Versin electrnica] Volume 1, Number 2 (2007), 79-84, DOI: 10.1007/s11816-007-0014-7. Resumen recuperado el 6 de abril del 2012 de la base de datos SpringerLink http://www.springerlink.com/content/33v23j68t474w8h5/. 2. Propagacin de plantas por cultivo in vitro: una biotecnologa que nos acompaa hace mucho tiempo. (s.f). recuperado el 18 de abril del 2012 de, http://www.inia.org.uy/publicaciones/documentos/lb/ad/2004/ad_382.pdf 3. DIONAEA MUCIPULA (Venus atrapamoscas). (s.f). Recuperado el 27 de marzo del 2012 de, http://www.neocultivos.com/pdf/Plantas_Carnivoras_Venus_Dionaea_neocultivos.pdf 4. WIKIPEDIA. cido giberlico. (s.f) Recuperado el 9 de abril del 2012 de, http://es.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido_giber%C3%A9lico Bibliografa consultada Dr. Laurent Legendre. IN VITRO CULTURE OF PINGUICULA AND DROSERA. (s.f). Recuperado el 17 de abril del 2012 de, http://www.pinguicula.org/pages/culture/in_vitro.htm Toscano G. Jarvis Yamith; Siabatto F. Helbert David. Medio de cultivo in vitro para la micropropagacin de la planta insectvora Drosera colombiana. (s.f) Recuperado el 15 de abril del 2012, del sitio web de Revistas de la Universidad Nacional de Colombia (Acta Biolgica): http://www.revistas.unal.edu.co/index.php/actabiol/article/view/27461#

AGRADECIMIENTOS
Mencin al final del documento, del nombre de instituciones o personas que hayan hecho sugerencias o proporcionado asesora y ayuda.

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ANEXOS

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