EXTRACCIN.

Tomar algunas hojas verdes y tiernas de espinacas y lavarlas bien. 1. Separar los tallos y venas grandes de las hojas y picarlas. 2. Colocarlas en un vaso de precipitado de 250mLcon 50mL de agua hirviendo por dos minutos

3. Pasar el vaso a un bao helado y enfriar, descartar el agua.

4 . E xt r a e r l o s p i g m e n t o s d e l a s h o j a s c o n 5 0 m L d e u n a m e z c l a d e m e t a n o l 9 0 % y t e r d i e t l i c o 10%. Calentar un poco en bao mara por (5 min) 5 . R e p e t i r l a e x t r a c c i n c o n 5 0 m l d e m e t a n o l a l 70% y ter di etlico 30%. Calentar durante 5min. (Las hojas quedan incoloras).

6 . C a mb i a r l o s e xt r a c t o s o b t e n i d o s d e l o s p a s o s 5 y 6 en un embudo de separacin

7.

Aadir 50mL de ter de petrleo.

8.

A a d i r 5 0 m L d e s o l u c i n a c u o s a s a t u r a d a d e NaCl y agitar.

9.

Dejar separar las capas.

1 0 . Descartar la capa inferior.

1 1 . L a v a r l a c a p a s u p e r i o r c o n d o s p o r c i o n e s d e 50mL de agua destilada.

1 2 . V e r t e r l a c a p a ve r d e p o r l a p a r t e s u p e r i o r d e l embudo, a un matraz de base redonda. 1 3 . Evaporar a sequedad a menos de 40C bajo vaci ( E N C A S O d e detener aqu el experimento a l m a c e n a r e l e x t r a c t o e v a p o r a d o e n l a oscuridad).

PREPARACIN DE LA COLUMNA
1 . C o l o c a r u n t a p n d e l a n a d e vi d r i o o a l g o d n e n el extremo de la columna. 2 . E mp a c a r c u i d a d o s a m e n t e e l a z c a r g l a s s ( a r e n a d e m a r o N a C l ) , aadiendo esta con un embudo, cuidando de no forzar el empaque. La columna debe quedar de 20cm aproximadamente. 3 . CORRIMIENTO DE LA MUESTRA: 4 . 1 . L a mu e s t r a se s u s p e n d e c o n 0 . 5 ml d e t e r d e petrleo2 . Us a n d o l a s o l u c i n s u a ve . I n t r o d u c i r cuidadosamente la solucin de la muestra en lacolumna con una pipeta, y permitir que se formeuna estrecha zona inicial 3.La muestra que se adhiere a la parte superior einferior del tubo, se puede lavar con un poco deter de petrleo. No dejar secar 4 . D e s a r r o l l a r c o n N p r o p a n o l a l 0 . 5 % e n t e r d e petrleo5.Se puede acelerar el desarrollo aplicando unasuccin de 0.5 atm. Un flujo de 1 ml/ min, da buena separacin. RESULTADOS El corrimiento de la muestra para la separacin de los p i g me n t o s d e l a s c l o r o f i l a s s e d e s a r r o l l c o n N - propanol al 0.5% en ter de petrleo.Poco a poco se iban separando los pigmentos y estose observaba en la almina.S e i b a n s e p a r a n d o l o s p i g me n t o s e n s u s d i s t i n t a s tonalidades: abajo amarillo, verde, verde azulado yarriba quedaba de nuevo el amarillo Se obtuvieron los 4 tipos de clorofilas existentes eng r a n c a n t i d a d : 4 t u b o s d e xa n t o f i l a s , 2 t u b o s d e clorofila , 3 tubos de clorofila y 1 tubo completode ca L a s p r i m e r a s c l o r o f i l a s f o r m a d a s f u e r o n d e xantofilas: La primer capa formada fue de color amarillotransparente, despus la siguiente capa fue dec o l o r a ma r i l l o ve r d o s o , s e g u i d a d e u n ve r d e militar y por ltimo un color verde olivo.Las segundas clorofilas extradas fueron las clorofilas E l p r i m e r y s e g u n d o t u b o s e o b s e r va r o n d e u n c o l o r v e r d e a g u a ; esta fue la clorofila que se p r e s e n t e n m a y o r c a n t i d a d y e n l a m i s m a tonalidad.Las terceras clorofilas extradas fueron las clorofilas d e l a s q u e s e o b t u vi e r o n 3 t u b o s : e l p r i me r o ve r d e claro, el segundo verde amarillento y el ltimo verdeamarilloso.Por ltimo se obtuvo un tubo completamente lleno decarotenos en color amarillo. DISCUSIN DE RESULTADOS

Se hirvieron las hojas de la espinaca en agua paraquitar el almidn de las hojas; la extraccin de lasclorofilas se realiz con una mezcla de metanol yter dietlico en bao mara hasta quedar las hojasd e l a p l a n t a i n c o l o r a s , d e s p u s s e r e a l i z unae x t r a c c i n l q u i d o - l q u i d o e n u n e m b u d o d e separacin en s o l u c i n s a t u r a d a d e N a Cl ( p a r a evitar que se formaran emulsiones) y ter dietlicoe l cul extrae pigmentos, clorofilas y betacarotenos, por lo cul en este disolvente fue ene l q u e s e o b t u v i e r o n l o s p i g m e n t o s p a r a l a cromatografa posterior. Al realizar la cromatografa de adsorcin en el queeste medio fue la almina (fase estacionaria) y eleluyente la mezcla de N-propanol en ter dietlico,de manera que el eluyente comienz a bajar por lacolumna y los componentes de la mezcla fueronadsorbidos por la fase estacionaria con diferenteintensidad, de manera que el proceso de adsorcin-desorcin hiz que unos componentes avanzaranms rpidamente que otros. Aparecieron varias bandas de diferentes coloresq u e e s t u v i e r o n m s o m e n o s a l e j a d o s d e l a disolucin de N-propanol en ter de petrleo segnla mayor o menor solubilidad de los pigmentos endicha disolucin. Estas bandas tenan diferentegrosor, dependiendo de la abundancia del pigmentoen la disolucin. Las que tenan ms afinidad por eld i s o l v e n t e b a j a b a n m s r p i d o q u e l o s o t r o s pigmentos. 13

Las primeras clorofilas que se extrajeron fueron lasxantofilas, las cules son de color amarillo y olivo.Estas se obtuvieron en pequea cantidad cada unode sus coloraciones diferentes. Despus se obtuvo la clorofila

, la cul se obtuvoen mayor cantidad ya que esta es la que constituyeaproximadamente el 75% de toda la clorofila en las plantas verdes y es de color verde azulado. Seguida por la clorofila beta que fue la que se obtuvo ens e g u n d o l u g a r e n c a n t i d a d e n c o l o r v e r d e amarillento. Por ultimo se obtuvieron los carotenos que fueronde color amarillo ms intenso que las xantofilas ye s t o s s e o b t u vi e r o n a l f i n a l d e b i d o a q u e e r a n menos afines al disolvente empleado. CONCLUSIONES S e o b t u vi e r o n l o s p i g m e n t o s f o t o s i n t t i c o s d e l a clorofila, que son los que le dan color a las hojas de las plantas ya que la fotosntesis es un proceso que permitea l o s ve g e t a l e s o b t e n e r l a m a t e r i a y l a e n e r g a q u e necesitan para desarrollar sus funciones vitales, se llevaa cabo gracias a la presencia en las hojas y en los tallos jvenes de pigmentos, capaces de captar la energa lumnica.G r a c i a s a e s t a prctica, se logr observar como c a m b i a n l a s t o n a l i d a d e s de estos p i g m e n t o s fotosintticos que componen a las p l a n t a s y s e 3 encuentran en los cloroplastos de la clula vegetal y lesdan color al reflejar o transmitir la luz visible, ademsde que son los que constituye