REVISO ANLISE DE CABELO: UMA REVISO DOS PROCEDIMENTOS PARA A DETERMINAO DE ELEMENTOS TRAO E APLICAES Dirce Pozebon, Valderi

L. Dressler e Adilson J. Curtius Depto. de Qumica - Universidade Federal de Santa Catarina - 88040-900 - Florianpolis - SC Recebido em 17/9/98; aceito em 18/2/99

HAIR ANALYSIS: A REVIEW ON THE PROCEDURES FOR THE DETERMINATION OF TRACE ELEMENTS AND APPLICATIONS. Aspects related to the quality of human hair analysis are presented, such as sample collection, sample preparation, determination of trace elements and application examples. Also the hair morphology, the importance of this analysis and its uses and meanings are discussed. Keywords: human hair analysis; quality control; trace elements.

HISTRICO Os resultados da primeira anlise de cabelo foram publicados por Hoppe em 1858, que determinou As no cabelo de cadveres exumados 11 anos aps o sepultamento. Aproximadamente 100 anos aps, em 1954, Goldblum determinou anfetamina em plos de cobaia. Mas, com relao determinao de drogas no cabelo, a publicao que realmente mudou a situao foi a de Baumgartner que, em 1979, determinou a concentrao de opiceos no cabelo humano, atravs de extrao com metanol e deteco por RIA (Radioimunoensaio)1. Em 1945, Flesch j havia proposto que o cabelo poderia ser usado como material de bipsia para a determinao de elementos trao presentes no corpo humano, j que o cabelo funciona como um rgo excretor (o menor deles)2. Mas durante as dcadas seguintes as anlises de sangue e urina3 tiveram a preferncia, sendo que na dcada de 1930 iniciou-se a era da medicina industrial3, ou seja, o diagnstico de doenas atravs de exames laboratoriais. Nos anos 60, a utilidade da anlise de cabelo foi redescoberta por pesquisadores da rea de nutrio, e na dcada seguinte foram realizados vrios simpsios a respeito do assunto e livros foram publicados3. Merece citao a investigao sobre a morte de Napoleo Bonaparte na qual, atravs da anlise do seu cabelo por NAA (Anlise por Ativao Neutrnica), foram verificadas sucessivas exposies ao As. Foi observada a presena de As no cabelo de Napoleo Bonaparte quando foram analisados diferentes segmentos do mesmo fio de cabelo. Foi concludo que o As ligou-se irreversivelmente com as protenas do cabelo, cujo crescimento dirio do folculo foi 0,35 mm, fazendo com que a distribuio do elemento ocorresse de forma segmentada. Assim, as diferentes exposies de Napoleo Bonaparte ao As puderam ser registradas atravs do cabelo. A partir desta idia, o cabelo foi tambm utilizado para comprovar a contaminao com Hg na populao de um vilarejo do Iraque, onde o trigo utilizado para o po era tratado com fungicida base de compostos mercuriais2. Com o desenvolvimento e amadurecimento de novas tcnicas analticas na dcada de 1980, principalmente a espectrometria de absoro atmica com atomizao eletrotrmica (ETAAS), a espectrometria de emisso atmica com plasma indutivamente acoplado (ICP-AES) e a espectrometria de massa com plasma indutivamente acoplado (ICP-MS)) surgiram novas perspectivas relacionadas anlise de cabelo3,4. Nos ltimos anos, houve grande desenvolvimento nesta rea, porque a deteco de elementos trao pode ser feita com certa facilidade, o que levou a certos exageros e supervalorizao da anlise de cabelo. Em muitos casos, alguns profissionais da rea nutricional, sem experincia
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clnica, passaram a fazer diagnsticos baseando-se na concentrao dos elementos encontrados no cabelo das pessoas e iniciaram a terapia. Redes de laboratrios comerciais foram criadas em diversos pases e a anlise de cabelo passou a ser feita em grande escala, de maneira semelhante com o que feito com amostras de minerais e gros. Atualmente, nos laboratrios os valores obtidos na anlise so comparados aos valores estocados no computador (por exemplo, valores mdios para determinado elemento e faixa de concentrao considerada normal no cabelo, em relao idade) e a terapia recomendada3. Desde 1854 e at o presente, a anlise de cabelo foi algumas vezes glorificada, algumas vezes condenada, algumas vezes aceita e algumas vezes no aceita1. Atualmente existem muitos dados disponveis na literatura, mas existe muita controvrsia quanto aceitao destes dados. Isto se deve discrepncia dos resultados, devido dificuldade de se diferenciar entre contaminao exgena e endgena, diferentes procedimentos de coleta e preparo da amostra. Alm disso, outros fatores contribuem, quais sejam: sexo, raa, hbitos alimentares, localizao geogrfica do indivduo e caractersticas morfolgicas do cabelo. O problema da anlise do cabelo humano no a anlise em si, j que esta pode ser executada sem muita dificuldade; o problema est relacionado com as caractersticas do cabelo humano, falta de procedimentos de anlise padronizados e controle de qualidade da anlise2,5-10. FINALIDADES Segundo alguns autores, o cabelo um dosmetro biolgico, filamento de registro ou espelho do ambiente onde o indivduo foi exposto2. Isto porque se houver considervel exposio a determinado elemento qumico e droga, por contaminao externa ou atravs da ingesto, aps um certo perodo a substncia estar presente no cabelo11-14. A determinao de elementos trao no cabelo no apenas um meio de se avaliar a exposio atual, mas tambm tem potencial para avaliar e reconstruir episdios passados relevantes sade, mesmo que a ao j tenha cessado11. A anlise de cabelo bastante utilizada em criminalstica (na Europa, para identificar criminosos, atravs da anlise do DNA e morfologia), toxicologia, meio ambiente medicina do trabalho (para avaliar a exposio a metais pesados) e nutrio. A concentrao de elementos trao no cabelo utilizada na comunidade paramdica para avaliar distrbios de aprendizagem, emocionais e nutricionais; na comunidade mdica para avaliar doenas e distrbios metablicos, onde muito controvertida a validade no diagnstico clnico, sendo mais aceita quando utilizada para confirmar alguma hiptese2,8,9,11,15-18.
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Em muitos casos, a anlise de cabelo o nico recurso para comprovar o uso de drogas no caso de pessoas j falecidas, com o objetivo de se descobrir a causa da morte. Pode ser utilizada para avaliar o consumo de drogas em centros de reabilitao, reaver carteira de motorista apreendida (Alemanha) e solicitada a candidatos a empregos importantes (USA)11. At o momento, a anlise de cabelo no popularmente aceita, mas grandes avanos acontecem todos os anos5,6,8,9,16,18-23. Com relao ao controle de qualidade da anlise, materiais so certificados, procedimentos padro de coleta e preparo da amostra so adotados, e estudos so feitos tambm no sentido de diferenciar as contaminaes endgena e exgena. Na rea mdica, a controvrsia ainda grande (entre a medicina tradicional e a ortomolecular), com novas propostas surgindo no sentido de se avaliar a metabolizao de drogas utilizadas como medicamentos, atravs da anlise de cabelo. Neste sentido, Willians et al.24 realizaram estudos com carbamazepnicos utilizados para tratamento da epilepsia, objetivando demonstrar que se a mesma dose do frmaco for administrada durante um certo tempo, a sua incorporao no cabelo deve ser relativamente constante, desde que no haja outros fatores que afetem a farmacocintica da mesma. E se a absoro for regular no cabelo, tambm o ser no plasma do sangue. Segundo os autores, a anlise de cabelo pode ser utilizada na medicina teraputica, onde medicamentos so s vezes receitados pelo mtodo de tentativas. Principalmente porque informaes retrospectivas do comportamento da droga podem ser obtidas atravs da anlise de cabelo. No Brasil, atualmente, a anlise de cabelo solicitada principalmente por mdicos da rea da medicina ortomolecular, para avaliar o estado nutricional (elementos essenciais presentes em baixa ou alta concentrao) e possveis contaminaes por metais pesados. Citam-se como exemplo os elementos Cr, Co, Cu, Mn, Mo, Ni, Se, Sn, V e Zn que so essenciais ao organismo, mas se estiverem presentes em excesso podem provocar vrias doenas ou at mesmo a morte2,25. O contrrio tambm pode ocorrer se no estiverem presentes em quantidades suficientes para o organismo. Elementos tais como Tl, As, Sb, Bi e Hg no so essenciais26, sendo sempre indesejveis em qualquer concentrao. A anlise de elementos trao no cabelo utilizada pelo fato de que a concentrao dos elementos no cabelo indica a concentrao dos mesmos no organismo. A partir disto, dietas so recomendadas, substncias contendo os elementos que esto abaixo da concentrao limite no organismo so prescritas, ou a eliminao dos metais pesados do organismo feita por quelao25. Quantidades muito baixas destes elementos estaro sempre presentes no organismo em decorrncia da alimentao e poluio ambiental. Pode-se afirmar que quase todos os elementos estveis da tabela peridica esto presentes no cabelo2,6, a menos que o metabolismo celular exclua alguns deles. Um nmero grande de elementos (mais de 50), representando todos os grupos de elementos da tabela peridica, j pode ser detectado no cabelo e a concentrao medida por tcnicas analticas atualmente disponveis. O teor de cinzas do cabelo menor que 1%, indicando uma baixa quantidade minerais. Os constituintes maiores so protenas (80 %), gua (15 %) e lipdios2,27. Elementos presentes no cabelo, tais como, Ca, O, Mg, Na, K e Cl so considerados macrominerais; enquanto que, por exemplo, Fe, Zn, Cu, Mn, I, Cr, Se e Mo so considerados elementos trao25. MORFOLOGIA DO CABELO HUMANO E ABSORO DE ELEMENTOS O cabelo, alm de ser um adorno, tem a funo de proteger a cabea dos raios solares, o que feito atravs da melanina presente nele, a qual tambm responsvel pela sua colorao. O cabelo possui receptores nervosos que funcionam como sensores, os quais o levam a aumentar a proteo da cabea quando necessrio27.

O cabelo humano um filamento queratinizado que cresce a partir de cavidades em forma de sacos chamados folculos (Fig. 1). Estes folculos estendem-se desde a derme at a epiderme atravs do extrato crneo. Cada folculo um rgo em miniatura que contm componentes glandulares e musculares. O dimetro de um fio de cabelo humano varia de 15 a 120 m, dependendo da raa2,3,27. O cabelo basicamente composto por trs camadas: cutcula (camada externa composta por vrias subcamadas separadas por um complexo de clulas endocutcula, epicutcula e exocutcula); crtex (principal componente do cabelo, formado por um conjunto de clulas cilndricas denominado de matriz, local onde fica situada a queratina e outras protenas) e medula (camada mais interna do folculo) que em alguns tipos de cabelo pode no estar presente)2,3,7. Em intoxicaes severas por metais pesados, tais como Tl e Pb, a cutcula pode mostrar-se danificada3.

Figura 1. Equema de um corte do couro cabeludo: a) extrato crneo; b) epiderme; c) glndula cebcea; d) glndula ecrina; e) derme; f) vasos sangneos; g) folculo; h) papila; i) grnulos de melanina; A) zona de diferenciao e sntese biolgica; B) zona de queratinizao e C) Regio do cabelo permanente. Baseada na ref. 27.

Uma protena de forma espiralada (a -queratina) que d sustentao ao cabelo, a qual fica imersa na matriz que composta por clulas proteicas ricas em tirosina e S. Cortes histolgicos demonstraram alta atividade de metais pesados neste local. Atravs de anlise por difrao de Raios-X pode ser observado que 30% da estrutura do cabelo cristalina, enquanto que 70% amorfa (peptdeos de conformao no definida). A estrutura morfolgica do cabelo e sua composio qumica evidenciam que pouco provvel que haja uma distribuio uniforme de elementos trao no mesmo, havendo regies onde a incorporao maior3. A absoro dos elementos d-se a partir da raiz (na regio da papila - Fig. 1), cuja quantidade incorporada depende da concentrao instantnea dos fluidos biolgicos circundantes (sangue, linfa e fluido extra-celular). Um perodo de aproximadamente 30 dias decorre entre a absoro e o equilbrio no cabelo. As formas de como ocorre a incorporao de elementos trao no so ainda bem elucidadas. O modelo mais simples assume que a incorporao endgena ocorre de maneira passiva, ou seja, por gradientes de concentrao. Cada folculo possui seu prprio ciclo de desenvolvimento, que compreende trs fases3,27,28: 1. Angena. a fase do desenvolvimento e do crescimento do cabelo, sendo que a papila (situada na poro inicial da raiz do cabelo) do folculo est em ntimo contato com os vasos sangneos, onde substncias presentes nos fluidos circulantes so absorvidas pelo cabelo. Elementos trao que circulam pelos fluidos do corpo podem incorporar-se ao cabelo continuamente durante seu crescimento, e assim ento a variao da concentrao de determinado elemento durante os diferentes perodos pode ser medida. A maioria

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dos elementos qumicos liga-se irreversivelmente aos grupos SH dos aminocidos enxofrados (absoro endgena). Nos indivduos sem problemas de alopcia, ou distrbios advindos de doenas do couro cabeludo ou contaminao com metais pesados3,7,26, 85% dos cabelos esto nesta fase de desenvolvimento. 2. Catgena. Esta fase transitria dura apenas algumas semanas, onde o cabelo pra de crescer e no h mais irrigao sangnea (o cabelo morre). No indivduo so e sem alopcia, 1% dos cabelos esto nesta fase. A morte do cabelo tambm ocorre quando a contaminao com metais pesados, tais como Tl, Cd e Hg alta3. 3. Telgena. Nesta fase o cabelo cai, sendo empurrado por um novo folculo que nasce no mesmo local. A contaminao exgena do cabelo pode ocorrer atravs do arraste de substncias externas (poeira, fumaa, cosmticos, suor e sebo provindos das glndulas sebceas e ecrinas que lanam seus produtos sobre a epiderme) pela gua, uma vez que o cabelo hidrfilo. Os elementos trao presentes na gua iro fixar-se queratina do cabelo, ou em alguns casos especficos, membrana das clulas 2,3,8,9,28. Partculas de poeira contendo quantidades significativas de elementos trao podem tambm ficar retidas entre as vrias camadas da cutcula atravs de interaes eletrostticas3,7, principalmente quando esta estiver danificada. A estrutura da camada eletrnica externa de cada elemento determina o tipo de ligao (diferentes concentraes em diferentes camadas do cabelo, mais ou menos fortemente ligados). Estas diferentes formas de ligao podem levar a diferentes perdas no processo de lavagem nos diversos meios, o que leva a diferentes resultados para uma mesma amostra23. Provavelmente, este seja o principal motivo do descrdito com relao determinao da concentrao de minerais presentes no cabelo, a ponto de serem encontradas citaes no sentido de que seria mais racional analisar os diferentes reagentes e solventes utilizados para a lavagem do cabelo do que o prprio cabelo17. A incerteza a respeito dos mecanismos de incorporao de elementos trao no cabelo e, s vezes, a falta de correlao entre a concentrao deles nos rgos internos e cabelo tambm so motivos de descrdito16. A presena de determinado elemento no cabelo indica que houve absoro e exposio do indivduo a este elemento, mas difcil diferenciar entre exposio exgena e endgena, uma

vez que a queratina pode combinar-se com elementos de fontes exgenas e endgenas2,3. Nveis de Concentrao de Macrominerais e Elementos Trao No possvel falar-se em valores normais para estes elementos, mas em faixas de concentrao consideradas normais, pois conforme j citado, so muitos os fatores que contribuem para que ocorram diferentes concentraes no cabelo de determinada populao (idade, hbitos alimentares, localizao geogrfica, sexo, ocupao, etc.). Conforme pode ser observado na Tabela 1, as faixas de concentrao so amplas para alguns elementos, sendo estas apresentadas a partir de dados citados na literatura. O excesso de elementos txicos que acompanha o envenenamento por metais pesados ou a deficincia de micronutrientes associada a dietas pobres podem levar a um desvio dos valores considerados normais, para uma determinada populao. Na Tabela 2 so mostradas as consequncias advindas da falta ou excesso de alguns elementos. Vantagens da Anlise de Cabelo O cabelo uma matriz mais simples que o sangue e a urina, cuja anlise bastante utilizada para verificar uma possvel intoxicao, ou diagnosticar doenas. Alm disso, a anlise do cabelo ainda mais fcil porque o analito est presente em concentrao mais alta do que no sangue e urina2,3,9. O cabelo um material biolgico atrativo por causa da simplicidade de amostragem (facilidade de coleta, sem traumas e sem dor), estocagem, transporte e manuseio. Alm disso, um material bastante estvel que no precisa ser mantido sob refrigerao, tampouco necessita de preservantes2,9,26,27. Isto, por exemplo, facilita a avaliao de uma populao inteira de determinado local que est sendo contaminada atravs da gua ou poluentes industriais8,11. Apesar de todas as controvrsias existentes, a determinao de elementos trao no cabelo humano importante nas cincias biolgicas, mdicas, criminais e ambientais, j que o cabelo representa uma matriz biolgica interessante para estudo na rea orgnica e inorgnica. Conforme j citado, muito til para avaliar o consumo e metabolismo de drogas na rea mdica e criminal, onde at hoje dada maior credibilidade aos resultados da anlise do cabelo. Na Tabela 3 so mostradas as vantagens da anlise do cabelo para avaliar o consumo de drogas, em relao anlise de urina3,11,13,24.

Tabela 1. Concentraes normais para elementos trao e macronutrientes no cabelo humano. Adaptado de 20. Elemento Ag Al As B Ba Br Ca Cd Cl Co Cr Cs Cu Fe Ga Hg I K Li a: mg/g; b: ng/g Concentrao, g/g 0,16 - 0,70 0,10 - 36 0,03 - 25 0,88 - 0,98 0,76 - 1,41 2- 35 0,17 - 4,69 a 0,04 - 5,3 0,12 - 14 0,07 - 1,7 0,08 - 2,50 0,05 - 1 6,0 - 293 10 - 900 1 -250 0,3 - 12,2 0,03 - 4,2 4 - 700 9 -460 b Elemento Mg Mn Mo Na Ni Pb Pd Pt Rb S Sb Se Sn Sr Ti V Zn P Concentrao, g/g 1,49 - 567 0,04 - 24 0,03 - 2,16 0,02 - 2,02 0,002 - 4,05 0,004 - 95 < 0,02 0,05 0,06 - 5,34 733 0,05 - 0,06 0,002 - 6,6 0,036 - 8,30 1,7 - 860 0,13 - 12 0,04 - 160 53,7 - 327 88,9 - 773

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Tabela 2. Consequncias advindas da intoxicao ou falta de alguns elementos. Adaptada de 10 e 25. Elemento Sb As Be Cd Pb Hg Se Tl B Ca Mg Cu Cr Mn Efeitos A infeco aguda leva a vertigens, dores abdominais, nuseas, vmito, rinite, bronquite e danos ao fgado e rins. A intoxicao resulta em necrose do fgado, hepatite, encefalite, nefrite, degradao dos nervos e rins. A inalao crnica freqentemente ocasiona perda de peso, dor nos ossos e articulaes, febre, distrbio das funes do fgado e bao e leses na pele. Ocasiona perda de peso, hemorragia, rinofaringite, fibrose dos brnquios, efizema pulmonar e danos ao fgado e rins. Causa danos ao sistema nervoso central, crebro, rins e sistema reprodutor. Causa danos ao fgado, rins e sistema nervoso central (SNC). A intoxicao causa danos aos rins, SNC e crebro. A insuficincia reduz a proteo contra toxicidade do Hg e Cd. Causa hemorragia gastrointestinal, neurite, necrose do fgado, delrio e coma. Colapso do sistema respiratrio e SNC. A intoxicao ocasiona nuseas, dermatite e vmito. A deficincia causa problemas dentrios, irritabilidade, osteosporose, insnia e depresso. A falta ocasiona excessiva sensibilidade ao rudo, insnia, tremores, aumento da presso sangnea, irritabilidade, espasmos musculares e transpirao excessiva. A falta causa crie dentria, infeco, enfraquecimento dos ligamentos, anemia e sangramento das gengivas. A falta causa hipoglicemia. A falta ocasiona a reduo de acar no sangue, problemas nos ligamento e m funcionamento do sistema reprodutivo.

Tabela 3. Vantagens da anlise de cabelo em relao anlise de urina. Adaptada de 11. Urina Informao a respeito de um curto perodo de tempo de uso da droga (1-3 dias). No consegue quantificar o uso contnuo. No relaciona com passado. Pode ser uma prova evasiva. Pode no comprovar as evidncias. Cabelo Informao por um perodo maior (meses a anos). Quantifica a extenso do uso. Relaciona com o passado. Pode comprovar o uso. Comprova as evidncias.

DETERMINAO DE ELEMENTOS TRAO Coleta Na maioria dos casos deseja-se avaliar o estado atual do indivduo, e assim deve-se coletar o maior nmero possvel de folculos na fase de desenvolvimento (angena), porque a papila est em ntimo contato com o resto do organismo, atravs da circulao do sangue, linfa e fluido extra-celular2,3,27. A amostra deve ser coletada na nuca, na regio logo acima do pescoo. Este local de coleta j padronizado porque menos susceptvel contaminao externa, tambm porque quase sempre existe cabelo nesta regio em indivduos calvos. Coletam-se segmentos entre 0 e 10 mm de distncia do couro cabeludo, o que poder fornecer informaes quanto exposio que ocorreu antes da amostragem, do 7o ao 21o dia, uma vez que a variao da concentrao de determinado elemento no cabelo somente evidente dias aps a sua presena no sangue. Normalmente so coletados 2 a 3 g de cabelo, sendo para tal recomendado o uso de luvas e tesouras de polietileno, ou titnio, ou ao inoxidvel, ou tntalo (se for de metal os xidos devem ser removidos). Aps a coleta o cabelo deve ser guardado em bolsa de plstico ou frasco de polietileno secos e limpos, e posteriormente mantido em local limpo e seco2,7,8,9,31. Cabelos de diferentes pigmentaes (naturais) do mesmo indivduo devem ser coletados separadamente, uma vez que a ab-

soro dos elementos pode variar conforme a sua pigmentao2,7. Por outro lado, cabelos coloridos artificialmente ou submetidos a outros tipos de tratamento no devem ser coletados, porque podem estar altamente contaminados com determinado elemento de difcil remoo no processo de lavagem, ou o tratamento dado ao cabelo pode remover elementos da estrutura do cabelo o que leva a valores de concentrao artificialmente baixos7. Embora o cabelo seja mais susceptvel contaminao pelo meio ambiente e tratamento com cosmticos, ele ainda preferido em relao aos plos de outras partes do corpo porque menos afetado pela excreo natural. Porm, plos de outras partes do corpo podem ser teis para distinguir entre contaminao exgena e endgena9. Uma ficha informativa com diversos dados e hbitos do doador deve ser preenchida no momento da coleta9,18. Lavagem da Amostra de Cabelo O cabelo destinado anlise deve ser lavado para a remoo de partculas de poeira, suor, gordura, etc.6,9. Quando se deseja determinar o contedo total de determinado elemento presente no cabelo, uma simples lavagem em banho ultra-som j pode ser suficiente5. Porm, na maioria dos casos, deseja-se saber apenas a concentrao de elementos provindos da absoro endgena, onde o processo de lavagem torna-se a etapa mais importante da anlise. Existem elementos que so fortemente ligados ao cabelo (por exemplo, Hg e Cu3,13) e mtodos efetivos de lavagem precisam

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ser otimizados. Cargnello et al.23 investigaram a eficcia de alguns procedimentos de lavagem do cabelo, que so normalmente utilizados. Atravs das tcnicas Microscopia Eletrnica de Varredura (SEM) e Espectrometria de Raios-X de Energia Dispersiva (XES), os autores verificaram as partculas sobre a superfcie do cabelo e determinaram a concentrao de alguns elementos atravs da tcnica Microscopia Protnica de Varredura Nuclear acoplada Espectrometria de Emisso de Raios-X Induzidos por Prtons (PIXE). Eles constataram que os fragmentos de sujeira que ainda permanecem no cabelo aps a sua lavagem, tm o potencial de falsificar os resultados da anlise de elementos trao, tais como Fe, Pb, Cu e Al, que esto presentes no cabelo em concentraes da ordem de g/g. Isto pode contribuir significativamente para a grande variao dos valores reportados como normais por diferentes laboratrios10, sendo a situao mais crtica para elementos presentes no meio ambiente em concentraes altas (por exemplo, o Al); menos crtica para elementos presentes na amostra na ordem de %, como o caso do S. De maneira geral, nenhum procedimento padro de lavagem pode ser prescrito, devendo-se sempre buscar aquele que remova os contaminantes externos, sem extrair os elementos incorporados no cabelo durante seu crescimento. O mtodo apropriado deve ser escolhido de acordo com o grupo especfico de elementos, cujas concentraes no cabelo deseja-se medir5,7,9. Atualmente, o mtodo de lavagem desenvolvido pelo IAEA (International Atomic Energy Agency) utilizado em muitos laboratrios1,2,5,23,30,31. Este mtodo consiste em lavar-se 0,5g de cabelo sucessivamente: 1 vez com acetona, 3 vezes com gua e 1 vez com acetona; entre cada lavagem deixar o cabelo

recoberto com o solvente, temperatura ambiente e sob agitao, decantando o lquido entre cada lavagem; deixar o cabelo secar durante a noite envolvido em papel filtro de grau cromatogrfico. Borella et al.5, utilizando este mtodo de lavagem, verificaram que as concentraes de Cd e Se no cabelo aumentaram aps a lavagem com acetona, indicando que esta proporcionou a contaminao (neste caso reagentes mais puros poderiam ser empregados). Neste mesmo estudo eles verificaram tambm que o EDTA muito agressivo e remove elementos da estrutura do cabelo, tais como Ca, Cu, Mg, Zn, Cr e Pb, sendo por isto no recomendado. Na Tabela 4 so indicados diferentes procedimentos de lavagem. Solubilizao da Amostra e Tcnicas de Medida A amostra deve ser pesada seca (ao ar ou em estufa), em p ou em segmentos to curtos quanto possvel. A quantidade pesada deve ser representativa, sendo dependente da(s) tcnica(s) de medida utilizada(s) e da concentrao aproximada do analito na amostra. Antes da retirada da alquota a ser pesada, a amostra deve ser homogeneizada por agitao 2,5,7,8,16. A digesto cida a mais utilizada, em copo aberto ou fechado. A hidrlise alcalina raramente empregada para a determinao de compostos inorgnicos no cabelo, sendo mais frequentemente empregada para a determinao de compostos orgnicos7. Entretanto, a dissoluo com hidrxido de tetrametilamnio (TMAH) tem a vantagem de minimizar a perda de elementos volteis41, sendo bastante adequado para a anlise de cabelo por ETAAS, ETV-ICP-MS e ETV-ICP-AES.

Tabela 4. Mtodos de lavagem de cabelo para a determinao de elementos trao. Procedimento (sequencial)/Reagente 1x (uma vez) com Triton X-10; 1x com gua bidestilada; secagem temperatura ambiente. 1x com lauril sulfato de sdio a 1%; 1x com gua bidestilada; secagem temperatura ambiente. 1x com EDTA a 5 %;1x com gua bidestilada; secagem temperatura ambiente. 4x com uma mistura acetona/metanol durante 20 min.;1x com gua bidestilada; secagem temperatura ambiente. Mtodo IAEA. 4x com gua bidestilada em banho de ultra-som. 1x com mistura 1:1 de clorofrmio e etanol ultrapuros em banho de ultra-som: 1x com etanol ultrapuro durante 20 min.; 1x com clorofrmio ultrapuro; 1x com gua ultrapura durante 20 min. 1x com uma mistura 3:1 de ter etlico e acetona; secagem a 85oC; 1x com soluo de EDTA a 5% durante; 1x com gua bidestilada; secagem em estufa a 85oC. 1x com n-hexano; 1x com soluo de lauril sulfato de sdio a 1% em gua ultrapura; em banho de ultra-som: 1x com lauril sulfato de sdio a 0,1% em gua; 6x com gua pura. em banho ultra-som com soluo de detergente no inico a 1%; centrifugao a 1500 rpm; 3xcom gua destilada-desionizada; secagem em estufa a 37oC. 2x com com soluo de Snoop a 10%; 3x com gua; 1x com soluo de EDTA a 10 %; 3x com gua. 2x com soluo de Snoop a 10%; 3x com gua fria; 1x com gua fervente; 3x com gua fria 1x com heptano; 3x com etanol a 95%; 3x com gua durante. 1x com dietileter; 1x com Triton X-100; 2x com gua bidestilada; secagem em estufa a 110oC. 1x com detergente e posteriormente 3x com gua destilada; secagem a 40oC. 1x com acetona; 1x com ter dietlico anidro; 1x com acetona; 1x com soluo de lauril sulfato de sdio a 1%, em banho-maria a 30oC; 3x com gua desionizada; 1x com acetona; secagem em estufa a 60oC. 1x com hexano; 3x com soluo etanol-gua 95:1; 3x com gua desionizada; secagem em estufa a 60oC. lavagem com detergente e gua. 2x com soluo de lauril sulfato de sdio a 1% em gua; 3x com gua desionizada; secagem a 60oC. 1x com mistura ter dietlico: acetona (1 + 3); secagem a 85oC; 1x com soluo de EDTA a 5%; 1x com gua bidestilada e secagem 105oC. vrias vezes com gua da torneira; 1x com etanol; 1x com soluo de detergente neutro a 1%; 3x com gua destilada; 5x com gua bidestilada e secagem a 105oC. com ter dietlico em extrator Soxlet e secagem ao ar. 1x com soluo de detergente neutro a 50oC; 1x com metanol e secagem ao ar. 1x com benzeno; 1x com acetona; 2x com ter dietlico; uma vez com gua e secagem ao ar. Ref. 5 5 5 5 1,5,23, 30,31 5 23 23 9 32 33 29 29 29 6 34 35 35 8 35 36 37 38 39 40

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Os cidos comumente utilizados so HNO3, HCl, H2SO4, HClO4 e HF, conforme pode ser observado na Tabela 4. O HClO4 utilizado, principalmente, para digerir a matria orgnica e o HF para eliminar a slica. Nos procedimentos mais recentemente utilizados em diversos laboratrios, h uma tendncia de fazer a digesto da amostra de cabelo em frasco fechado e em forno de microondas36. Sendo utilizado forno de microondas, dependendo da quantidade de cabelo a ser digerida, basta adicionar somente HNO3 e H2O2. Com este mtodo de digesto, as quantidades de reagentes que precisam ser adicionadas so menores, o que minimiza os problemas de contaminao. Este procedimento deveria sempre que possvel ser buscado, tendo-se em vista que a soluo resultante fornece um espectro mais limpo, ou seja, menor presena de ons poliatmicos se as medies das concentraes dos elementos pesquisados forem feitas por ICP-MS41,42. Tambm no so introduzidos os ons Cl- e SO4- que interferem em ETAAS43,44. Pelo fato da digesto ser mais rpida, os ciclos de aquecimento podem ser repetidos at completa digesto da amostra. Independentemente do uso ou no de microondas, a digesto em frasco fechado diminui o risco de contaminao e a perda de elementos volteis. O uso de HClO4 deve sempre que possvel ser evitado por analistas inexperientes, tendo-se em vista que o mesmo potencialmente explosivo se for levado secura . Nos exemplos mostrados a seguir, pode-se notar que este cido bastante utilizado, s vezes, por desconhecimento das suas caractersticas. Por outro lado, o HF incoveniente para o manuseio, porque ataca o vidro. De qualquer forma, o procedimento de digesto da amostra de cabelo deve ser otimizado de acordo com a tcnica de medida a ser utilizada. Assim, por exemplo, no h necessidade de se digerir totalmente a matria orgnica se forem utilizadas as tcnicas ETAAS, ETV-ICP-MS e ETV-ICPAES, porque a mesma ser eliminada na etapa de pirlise. Porm, se a soluo da amostra for introduzida diretamente num plasma de Ar, por exemplo em ICP-MS, podero ser obtidos resultados incorretos, uma vez que a presena de C afeta a ionizao do analito45,46. O cabelo pode ser tambm facilmente analisado sob a forma de suspenso (slurry)47-50 ou diretamente32, onde a preparao da amostra rpida e menos sujeita contaminao. Neste caso uma pequena quantidade da amostra moda em moinho de bolas de Zr ou cermica32,47-50, com ou sem a presena de nitrognio lquido. Alguns mg da amostra so suficientes para a suspenso, a qual pode ser preparada diretamente no prprio copo do amostrador automtico47 . Para a estabilizao da suspenso normalmente so adicionados agentes tixotrpicos (Triton X-100, glicerol, entre outros)47-50 . O maior inconveniente destes mtodos que o processo de moagem pode contaminar a amostra. Melhores resultados podem ser obtidos se a amostra for apenas parcialmente digerida com pequena quantidade de HNO3 e H2O2 e aquecida por um curto perodo de tempo e/ou submetida agitao em banho ultrasom. Neste caso a amostra no precisa ser moda, mais os fios de cabelo devem ser o mais curto possvel. A contaminao ser tambm menor se agentes tixotrpicos no precisam ser adicionados (por causa da impureza dos reagentes), o que ocorre quando uma sonda ultra-snica estiver acoplada ao amostrador automtico. As tcnicas mais adequadas para a anlise direta de suspenses so ETAAS, ETV-ICP-MS e ETVICP-AES, porque no apresentam problemas tais como o entupimento do nebulizador e carregamento excessivo da chama ou plasma com a matriz da amostra e solvente, alm de eliminar adequadamente a matriz. A sensibilidade tambm melhor quando a vaporizao eletrotrmica utilizada, o que importante quando se deseja medir a concentrao de elementos presentes em baixa concentrao (Co, V, Ag, Au, Tl, Sb, Cd, entre outros)32,47-50. A anlise de cabelo sob a forma slida interessante porque o nico tratamento que precisa ser dado

amostra a sua lavagem. Assim, Miekeley et al 51. determinaram Hg em cabelo atravs da introduo de 5-20mg de cabelo num forno de combusto acoplado a ICP-MS, onde somente o vapor do elemento foi introduzido no plasma. O LD obtido foi 1,9ng/g para 10mg de amostra. Sob este aspecto a anlise por NAA tambm vantajosa, pois a amostra analisada sob a forma slida. Atravs desta tcnica, Mitiko et al.52 desenvolveram um mtodo para a derminao simultnea de Al, As, Br, Ca, Cd, Cl, Co, Cu, Fe, Hg, K, Mg, Mn, Na, Sb, Sc, Se, V e Zn, onde foram obtidos resultados exatos e precisos na anlise de amostras reais e amostras certificadas. De maneira geral, as tcnicas mais utilizadas para a anlise de cabelo na dcada de 70 foram FAAS3 e NAA. Na dcada seguinte, ICP-AES4,36 e ETAAS30,31,38,41 foram as mais usadas. Na dcada de 80 foi desenvolvida a tcnica de ICPMS 53, consolidada no incio da dcada atual, que juntamente com ICP-AES so hoje as mais utilizadas para anlises de rotina 54, devido capacidade multielementar de anlise, ampla faixa de concentrao dinmica e boa velocidade analtica. Alm disso, atravs delas, muito maior o nmero de elementos que podem ser detectados e a sua concentrao medida, se comparadas com ETAAS e FAAS. Entretanto, a tcnica de ICP-MS tem sido pouco utilizada, provavelmente porque uma tcnica ainda nova e tambm sofisticada, onde recursos humanos adequadamente treinados e capacitados no esto ainda amplamente disponveis. Alm disso, pelo fato da maioria dos elementos pesquisados no cabelo estarem presentes em aprecivel concentrao, os limites de deteco obtidos em ICP-AES j so suficientes para um grande nmero de elementos4. Vasconcellos et al.55,56 estudaram a contaminao com Hg por ndios da amaznia, sendo a especiao do elemento feita atravs de coluna de troca inica e deteco por CVAAS. Nestes trabalhos os autores verificaram que os ndios do parque nacional do Xingu, apresentavam alto teor do elemento no cabelo, devido, principalmente, ingesto de peixes provenientes dos rios locais, os quais so contaminados com Hg. Entretanto os ndios no apresentavam qualquer sintoma, porque a maior parte do Hg estava na forma metilada, a qual atxica. Atravs de um estudo interlaboratorial, os autores observaram tambm que populaes, supostamente no expostas ao Hg, apresentavam diferentes concentraes de Hg no cabelo, em distintas regies do Brasil. Num dos estudos realizados por Miekeley et al.54, foram analisadas amostras de cabelo de 1091 pessoas, por ICP-AES e ICP-MS. Algumas destas amostras foram propositadamente enviadas a quatro laboratrios estrangeiros, cujos servios so normalmente utilizados pela comunidade mdica brasileira. Os autores observaram fortes discrepncias entre os resultados, atribuido como principal fator a insuficiente sensibilidade da tcnica de ICP-AES para vrios elementos, a qual utilizada pela maioria dos laboratrios. Para determinar a concentrao de elementos tais como Hg, V, Sb, Ge, As, Se, etc, tcnicas mais sensveis devem ser usadas (por exemplo, CVAAS, HGFASS, ETAAS e ICP-MS), as quais raramente so citadas pelos laboratrios comerciais. Por outro lado, observaram concordncia dos resultados obtidos para aqueles elementos que podem ser adequadamente analisados por ICP-AES. Assim sendo, Miekeley et al. 54 concluram que muitos resultados e LDs obtidos por estes laboratrios, por ICP-AES, no so corretos. Concluram tambm que em alguns destes laboratrios no h total preocupao quanto a certas interferncias espectrais observadas em ICP-AES. Outras tcnicas adequadas so tambm empregadas, conforme pode ser observado na Tabela 5, mas estas proporcionam menor velocidade analtica em anlises de rotina. Tcnicas no destrutivas, tais como, PIXE23 XRF14,23,33, NAA16,18,40 tm sido mais utilizadas para a certificao de materiais e outros trabalhos de pesquisa relacionados tambm estrutura do cabelo.

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Tabela 5. Mtodos de digesto, preparao de suspenso e tcnicas de medida para a determinao de elementos trao em cabelo. Procedimento; Reagente(s) -digesto em frasco Kjeldahl; HNO3 e HCLO4 -digesto em forno de microondas; HF, HNO3 e H2O2 -digesto em frasco Tecator DS 20; HNO3 e HClO4 -digesto em frasco fechado; H2O2 e HNO3 -digesto em copo aberto; HNO3 -anlise de suspenso (moagem em nitrognio lquido) -anlise direta da suspenso; glicerol -digesto em forno de microondas; HNO3 e H2SO4 -digesto em frasco fechado; HNO3 e HClO4 -digesto em forno de microondas; HNO3, HCl e HF -digesto em tubo de polietileno fechado (em banho-maria); HNO3 -digesto em frasco fechado (em estufa a 90oC); TMAH a 5% -digesto em copo aberto; KMnO4, H2SO4 e hidroxilamina -TMAH 25% -digesto parcial com HNO3 70% m/v -dissoluo em HNO3 e HClO4 -aquecimento por infra-vermelho; HNO3 e HClO4 -digesto em forno de microondas; HNO3 -digesto em clula de quartzo sob radiao ultra-violeta; HClO4 e H 2O2 Tcnica/Analito ETAAS, FAAS/ Ca, Mg, Cr, Cu, Se, Zn, Cd, K, Pb ICP-AES/ Al, As, Ca, Cd, Co, Cr, Cu, Fe, mg, Mn, Mo, Ni, P, Pb, Se, Ti, V, Zn HGFAAS/ As FAAS, XRF, ICP-AES, NAA/ No indicado ETAAS/ Se ETV-ICP-AES/ Zn, Mn e Mg ETASS/ Mn, Pb, Cd CVFAAS/ Hg FAAS, ETAAS, CVFAAS/ Hg, Cd, Cr, Pb, Zn ICP-AES/ Al, Cu, Fe, Mn, Zn FAAS Cu, Zn, Mg FAAS, ETAAS/ Al, Cu, Zn DPSV/ Sb ETAAS/ Si, Co, Ni, Cr, Fe FAAS, ETAAS/ Mn, Fe, Cu, Zn, Cd ETAAS/ Zn ASV/ Pb CVAFS/ Hg Polarografia/ Zn, Pb, Cu Ref. 5, 29 9

8 7 34 32 47 13 30 57 35 35 39 38 21, 38 38 58 59 37

Tabela 6. Comparao dos limites de deteco, em g/L. Adaptado de 56 e 63. Elemento Ag Al As B Ba Be Bi Cd Co C Cu Fe Hg Li Mn Ni Pb Sb Se Si Sn Sr Ti Tl U V Cr P ETAAS 0,005 0,04 0,2 20 0,1 0,01 0,1 0,003 0,01 0,02 0,02 1 0,05 0,01 0,1 0,05 0,2 0,2 0,2 0,02 1 0,1 0,2 0,01 30 ICP-AES 1 4 20 2 0,1 0,06 20 1 2 50 0,9 1 20 0,9 0,4 4 20 60 60 3 40 0,05 0,5 40 10 2 2 30 ICP-MS <0,01 0,1 0,07 0,1 0,01 <0,01 0,003 0,06 <0,001 0,05 2 <0,01 0,04 0,04 0,03 0,06 0,04 1 1 0,05 0,02 0,4 0,06 0,002 0,03 0,05 1 INAA 20 3 90 0,6 20 0,05 150 30 7 60 0,1 1 20 250 0,2 0,8 1 FAAS 0,9 30 100; 0,02a 700 8 1 20; 0,02 a 0,5 6 1 3 200; 0,008b 0,5 1 4 10 30 70; 0,02a 100 2 50 9 10000 40 2 50000

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Cont. Tabela 6. Elemento S Mg K Au W Te Zn Mo a: HGFAAS; b:CVFAAS Por muitos anos, a NAA foi a tcnica favorita para a determinao de elementos trao no cabelo. Esta tcnica normalmente requer a mnima preparao da amostra (lavagem, secagem e encapsulamento) e permite a determinao simultnea de vrios elementos, sendo mais isenta contaminao. Entretanto, o espectro para alguns nucldeos somente pode ser obtido aps algumas horas, ou dias, de irradiao da amostra40. Isto diminui a velocidade analtica, no sendo muito adequada para anlises de rotina60. Uma outra desvantagem a sensibilidade inadequada para alguns elementos13. A digesto seguida da determinao multielementar por ICPAES ou ICP-MS a rota mais comum e mais rpida de se obter a mxima informao a respeito de uma amostra41. A tcnica ICP-AES permite a determinao de elementos tais como Cu, Fe, Ca, Mg, Zn e etc, enquanto que a tcnica de ICP-MS mais adequada para a determinao de elementos em baixas concentraes (V, Cr, Tl, Pb, etc). Na Tabela 7 so mostrados os LDs de vrios elementos presentes no cabelo 30,32,38,47,59,61, com as respectivas tcnicas de medida. O LD definido por 3s/m, onde s desvio padro de 10 leituras consecutivas do branco e m a declividade da curva analtica (obtida por adio de analito ou calibrao externa)47. O limite de quantificao (LQ) obtido sob as mesmas condies de obteno do LD, porm levado em conta a massa da amostra utilizada para a anlise, sua diluio e presena de interferentes que podem aumentar o sinal do branco e/ou diminuir o sinal do analito, Os LDs e LQs de uma tcnica podem variar, dependendo do mtodo de introduo da amostra (nebulizao pneumtica ou ultrassnica, injeo em fluxo - FIA-, vaporizao eletrotrmica ETV, etc.), separao da matriz/pr-concentrao do analito, tipo de instrumento, limpeza da vidraria e pureza dos reagentes utilizados. Conclui-se que h discrepncia entre resultados obtidos na anlise da mesma amostra de cabelo, bem como as faixas de concentraes consideradas normais para uma mesma populao. Isto ocorre, principalmente, porque mtodos padres de coleta, lavagem e preparo da amostra no so sempre seguidos, tampouco otimizados. Grande parte do problema, possivelmente, poderia ser resolvido atravs de programas interlaboratoriais e de controle de qualidade, alm de levantamento de dados em relao s caractersticas da populao atendida. Assim, por exemplo, a concentrao de determinado elemento considerada normal no cabelo de uma determinada populao, pode no ser normal para outra. Alm disso, os profissionais das diferentes reas envolvidas precisam interagir entre si para a troca de informaes teis, o que pode levar a uma melhoria da qualidade da anlise de cabelo. Entretanto a anlise de cabelo bem aceita em toxicologia, poluio ambiental e criminalstica, provavelmente porque neste caso as contaminaes endgena e exgena so mais facilmente distinguidas. Alm disso, a presena de drogas no cabelo (derivados do pio e cocana) dificilmente poder ser confundida com contaminao exgena. Tabela 7. Limites de deteco (LD) para cabelo. Adaptado de 30,32,38,47, 54,59 e 61-63. Elemento Zn Mn Mg Hg Hg Hg Cd Cd Cd Cr Cr Pb Pb Zn Pb Cd Zn Cu Hg Cu Pb Zn Al Mg Si Co Ni Cr Bi Fe Mn Ag Ag Ag As As Au Au Bi Bi Co Co Ge Ge Mo Mo Ni NI Sb Tcnica de medida ETV-ICP-AES ETV-ICP-AES ETV-ICP-AES CVAAS ICP-AES ICP-MS ETAAS ICP-AES ICP-MS ICP-AES ICP-MS ICP-AES ICP-AES DPASV CVAFS ETAAS ICP-AES ICP-MS ICP-AES ICP-MS ICP-AES ICP-MS ICP-AES ICP-MS ICP-AES ICP-MS ICP-MS ICP-MS ICP-MS ICP-AES ICP-AES ICP-MS ICP-AES LD, g/g 0,4 - 0,8 0,2 - 0,3 1,4 - 6,6 0,5 0,8 0,005 0,08; 0,03* 0,04 0,006 0,14 0,01 0,003 1,8 26 0,04 0,02 0,02 0,02 2 pg 0,3 0,1; 0,05 10 0,3 0,1 1 0,1 0,5 0,1 0,3 0,2 0,03; 0,04* 0,05 0,02 0,001 0,2 0,04 0,4 0,001 0,8 0,001 0,12 0,001 0,8 0,001 0,16 0,003 0,3 0,001 1,2 ETAAS 0,004 0,05 0,1 0,2 0,1 0,01 0,04 ICP-AES 50 0,08 50 4 20 50 1 5 ICP-MS 0,2 <0,001 0,007 <0,001 <0,01 0,02 INAA 3000 1 3 2 FAAS 0,1 2 6 1000 20; 0,02a 0,8 30

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Cont. Tabela 7. Elemento Sb Se Se Sn Sn Th Th U U * anlise de suspenso REFERNCIAS 1. Sachs, H.; Forensic Sci. Int. 1997, 84, 7. 2. Chatt, A. e Katz, S. A.; Hair Analysis, Applications in the Biomedical and Environmental Sciences, VCH Publishers, New York, 1988. 3. Bencze, K.; Fresenius, J. Anal. Chem. 1990, 337, 867. 4. Caroli, S.; Spectrochim. Acta 1988, 43(B), 371. 5. Borella, P.; Rovesti, S., Caselgrandi, E; Bargellini, A.; Mikrochim. Acta 1996, 123, 271. 6. Gordus, A.; J. Radioanal. Chem. 1973, 15, 229. 7. Bencze, K.; Fresenius J. Anal. Chem. 1990, 338, 58. 8. Bozsai, G.; Microchem. J. 1992, 46, 159. 9. Caroli, S.; Senofonte, O.; Violante, N.; Fornarelli, L.; Powar, A.; Microchem. J. 1992, 46, 174. 10. Katz, S. A.; Katz R. B.; J. Appl. Toxicol., 1992, 12, 79. 11. Arnold, W.; Sachs, H.; Fresenius J. Anal. Chem. 1994, 348, 484. 12. Bermejo Barrera, A. M.; Rossi, S. S.; Forensic Sci. Int., 1995, 70, 203. 13. Wilhelm, M., Mller, F.; Idel, H.; Toxicol. Lett. 1996, 88, 221. 14. Toribara, T. Y.; Jackson, D. A.; Clin. Chem. 1982, 28/4, 650. 15. Combs, D. K.; J. Anim. Sci. 1987, 65, 1753. 16. Toro, E. C.; Goeij, J. J. M.; Bacso, J.; Cheng, I-d; Kinova, L.; J. Radioanal. And Nucl. Chem. 1993, 167, 413. 17. Klevay, M. L.; Bistrian, B. R.; Fleming, C. R.; Am. J. Clin. Nutr. 1987, 46, 233. 18. Iyengar, V.; Woittiez, J.; Clin. Chem. 1988, 34/3, 474. 19. Quevauviller, P.; Maier, E. A.; Vercoutere, K.; Muntau, H.; Griepink, B.; Fresenius J. Anal. Chem. 1992, 243, 343. 20. Caroli, S.; Coni, A. A. E.; Petrucci, F.; Senofonte, O.; Violante, N.; Crit. Rev. Anal. Chem. 1994, 24, 363. 21. Salmela, S.; Vuori, E.; Kilpi, J.; Anal. Chim. Acta 1981, 125, 131. 22. Stone, S. F.; Backhaus, F. W.; Byrne, A. R.; Gangadharan, S.; Horvart, M.; Kratzer, K.; Parr, R.; Schladot, J. D.; Zeisler, R.; Fresenius J. Anal. Chem. 1995, 352, 184. 23. Cargnello, J. A.; Powell, J. J.; Thompsom, P. H.; Crocker, P. R.; Watt, F.; Analyst 1995, 120, 783. 24. Willians, J.; Patsalos, P. N.; Wilson, J. F.; Forensic Sci. Int. 1997, 84, 113. 25. Passwater, R. A. e Cranton, E. M.; Trace Elements, Hair Analysis and Nutrition, Keats Publishing Inc., New Canaan, CT, USA, 1983. 26. Ciszewski, A., Wasiak, W. and Ciszewska, W.; Anal. Chim. Acta 1997, 343, 225. 27. Robbins, C. R.; Chemical and Physical Behavior of Human Hair, 3nd ed. Springer-Verlag, New Iork, 1994. Tcnica de medida ICP-MS ICP-AES ICP-MS ICP-AES ICP-MS ICP-AES ICP-MS ICP-AES ICP-MS LD, g/g 0,005 1,5 0,05 0,03 0,03 0,4 0,001 0,6 0,001

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