TECNICAS DE SIEMBRA

La siembra de microorganismos puede realizarse en medios lquidos o en medios slidos. En la siembra en medios lquidos, para la inoculacin se utilizar asa estril si el medio de partida es slido, o pipeta estril (Pasteur o graduada) si es lquido. En la siembra en medios slidos, se tienen dos casos: Cuando se parte de otro medio slido, se utiliza el asa de platino normal para siembra en placa o tubo inclinado y el asa recta para siembra en picadura en tubos rectos o, en general, cuando se quiere introducir el microorganismo en el seno del medio de cultivo slido. Cuando el medio de partida es lquido, se puede pasar al medio slido con un asa de platino calibrada, con la que se extiende la muestra directamente, o con pipeta (Pasteur o graduada), depositando la muestra que luego se extender sobre la placa con un asa de Digralsky. O con una varilla doblada.

TIPOS DE SIEMBRA:
Nota: En toda realizacin de siembra se debe tener en cuenta las siguientes consideraciones: Esterilizar el asa o aguja de siembra antes y despus de la siembra del microorganismo. Crear un ambiente estril donde realizar la siembra. Por ejemplo: el radio de esterilidad del mechero. Y mantenerse dentro de ese radio para evitarla contaminacin de la muestra. No abrir completamente las placas ni los tubos y cerrarlos inmediatamente despus de terminar la siembra. EN PLACA POR VERTIDO: Esta tcnica se realiza mediante los siguientes pasos: 1. Se vierte una alcuota (1 ml) de la muestra sobre la placa petri estril y se aade directamente el medio de cultivo en estado lquido. 2. Homogeneizar perfectamente bien la muestra antes de que solidifique el medio.

3.

Sellar y rotular las placas e incubarlas a temperatura adecuada por 48 a 72 horas para observar los crecimientos de microorganismos.

EN PLACA POR EXTENSION: Esta tcnica se realiza mediante los siguientes pasos: 1. La muestra (0.1 ml o menos) se pipetea sobre la superficie de la placa con agar (slido). 2. Esterilizar el asa de vidrio. 3. La muestra se extiende uniformemente sobre la superficie del agar usando un asa de vidrio estril. 4. se deja incubar a 35 C durante 24 a 48 horas y realizar el conteo de colonias.

EN PLACA POR ESTRIAS: Esta tcnica se realiza mediante los siguientes pasos:

1. Esterilizar el asa de siembra en la llama del mechero de algodn. 2. Introducir la punta del asa de siembra dentro del cepreo y coger un poco de muestra. 3. Deslizar el asa de siembra en forma de estras como se muestra en la figura (d), de modo que se forme el primer grupo de estras. 4. Continuar dibujando los grupos de estras de la forma en que se indica en la figura de (d) hasta formar 4 grupos de estras distribuidos como los lados de un cuadrado. 5. Nota: No abrir la placa completamente y mantenerla cerca del radio de inocuidad de un mechero para evitar la contaminacin del cultivo. 6. Guardar en la incubadora a temperatura optima de crecimiento.

EN TUBO MEDIO LQUIDO: Para sembrar un microorganismo en un medio liquido, seguir los siguientes pasos: 1. Esterilizar el asa de siembra al fuego del mechero de alcohol, as como la boca del tubo en donde se realizara la siembra por medio de un flameado. 2. Con el asa asptica, transferir una muestra del tubo que contiene el microorganismo que se quiere sembrar al tubo con medio de cultivo estril. 3. Sumergir el asa en el lquido y agitar para desprender y diluir la muestra.

4. Cerrar inmediatamente el tubo y guardar en la incubadora a temperatura optima de crecimiento.

EN TUBO MEDIO SEMISOLIDO: Este medio semislido contiene una proporcin de agar-agar menor que los medio slidos. Para sembrar un microorganismo en un medio semislido, seguir los siguientes pasos: 1. Esterilizar el hilo de siembra al fuego del mechero de alcohol, as como la boca del tubo en donde se realizara la siembra por medio de un flameado. 2. Tomar una muestra con el hilo de siembra. 3. Introducir el hilo de siembra de manera vertical hasta el fondo del tubo que contiene el medio de cultivo estril para realizar la inoculacin. 4. Retirar el hilo de siembra por la misma trayectoria que se sigui para realizar la siembra. 5. Cerrar el tubo y guardar en la incubadora a temperatura optima de crecimiento.

EN TUBO MEDIO SOLIDO: Para sembrar un microorganismo en un medio slido, seguir los siguientes pasos: 1. Esterilizar el asa de siembra al fuego del mechero de alcohol, as como la boca del tubo en donde se realizara la siembra por medio de un flameado. 2. Coger una muestra del microorganismo que se quiere sembrar. 3. Introducir el asa de siembra dentro del tubo inclinado. 4. La siembra se puede realizar de dos maneras: a. Siembra a profundidad.- consiste en introducir una aguja de siembra, con la muestra del microorganismo, de manera vertical dentro del agar solido. b. Siembra sobre la superficie de agar.- consiste en colocar la muestra, usando una aguja o asa de siembra, sobre la superficie inclinada en el fondo del tubo, y dibujar un zigzag de adentro hacia afuera. 5. Retirar el asa de siembra, cerrar el tubo con la tapa rosca y llevar a la incubadora a temperatura optima de crecimiento.

http://www.scribd.com/doc/14173131/5-Tecnicas-Basicas-Para-El-Cultivo-de-Microorganismos www.ocw.espol.edu.ec/facultad-de-ingenieria-en-mecanica-y-ciencias-de-laproduccion/microbiologia/2907/186149/PRACTICA_2.doc