IDENTIFICACIN, SNTESIS Y CRIBADO BIOLGICO DE NUEVAS CABEZAS DE SERIE A TRAVS DE UNA APROXIMACIN DE DISEO RACIONAL DE FRMACOS PARA EL ANTAGONISMO

DE BRADICININA COMO ESTRATEGIA TERAPUTICA ANTIASMTICA

Investigadores principales: Dr. Juan Jess Prez Gonzlez Escola Tcnica Superior d'Enginyeria Industrial UPC Dr. Josep Castells Boliart Institut Universitari de Cincia i Tecnologia. Mollet Duracin: 3 aos

1. Resumen El objetivo del presente estudio ha sido la identificacin de nuevas cabezas de serie no peptdicas para el antagonismo del receptor B2 de la bradicinina. La bradicinina (BK) es una hormona peptdica lineal constituida por nueve aminocidos con secuencia Arg1-Pro2-Pro3-Gly4Phe5-Ser6-Pro7-Phe8-Arg9. La bradicinina es liberada en respuesta a estados inflamatorios, traumas, quemadas, shocks, alergias y algunas enfermedades cardiovasculares. Esta hormona influye en el tono vascular y la permeabilidad, y acta disminuyendo la presin sangunea. Los efectos inflamatorios de la BK son mediados a travs de receptores acoplados a protenas G, los receptores de la cininas B1 y B2. Diferentes pptidos con actividad agonista y antagonista han sido descritos ltimamente en la bibliografa cientfica, siendo el compuesto HOE140 (Icatibant) el antagonista peptdico ms efectivo del receptor B2. Los efectos de carcter antiinflamatorio de los antagonistas del receptor B2 de la BK han sido demostrados en ensayos clnicos, indicando que estos compuestos podran ser altamente beneficiosos en la terapia del asma. El proyecto se ha desarrollado siguiendo una estrategia combinada de modelado molecular y sntesis qumica. Partiendo del farmacforo para el antagonismo del receptor B2 de la BK obtenido en un estudio previo llevado a cabo por nuestro grupo, se han diseado hasta cuatro bibliotecas combinatorias focalizadas. La diversidad de las quimiotecas virtuales ha sido explorada in silico, para seleccionar el grupo de compuestos ms pequeo que, cumpliendo los requerimientos estructurales definidos por el farmacforo, ofrezcan la mxima diversidad estructural. Estos compuestos fueron sintetizados y determinada su afinidad con el receptor B2 de la BK. Con los resultados de actividad obtenidos se ha ido mejorando la hiptesis farmacofrica inicial de reconocimiento hacia el receptor B2 y se han 2

buscado nuevas estructuras qumicas en bases de datos comerciales. Todo este proceso ha permitido la identificacin de tres molculas con perfil antagonista que pueden considerarse como nuevas cabezas de serie con potencial aplicacin en el tratamiento del asma.

2. Resultados A lo largo del presente proyecto se disearon cuatro bibliotecas combinatorias focalizadas. Las tres primeras fueron diseadas basndonos en el farmacforo de tres puntos correspondiente a la unin con el receptor B2 desarrollado en el grupo de modelado molecular (1), y que corresponde a una revisin del que ya habamos publicado anteriormente (2). Las tres primeras se disearon de forma secuencial a lo largo de los dos primeros aos del proyecto. Las estructuras de estas quimiotecas fueron diseadas de forma que existiese un grupo aromtico, tal como precisa el farmacforo y dejando a su vez dos puntos de diversidad en la biblioteca, como se muestra en la figura 1.

quimioteca 1

quimioteca 2

quimioteca 3

Figura 1. Estructura de las tres quimiotecas diseadas a partir del farmacforo de reconocimiento en el receptor B2 de bradicinina. Donde R1 y R2 representan las posiciones de diversidad de la quimioteca.

El anlisis de diversidad de las diferentes quimiotecas generadas permiti seleccionar un total de 24 compuestos, que se enviaron a un laboratorio externo para su evaluacin farmacolgica. Desafortunadamente, estos compuestos no presentaron ningn antagonismo hacia el receptor B2. Paralelamente, con el objetivo de disponer de mayores oportunidades de hallar nuevas molculas bioactivas, se procedi al cribado virtual de varias quimiotecas comerciales. Dicho cribado se llev a cabo empleando como plantilla los requerimientos estructurales impuestos por el farmacforo anteriormente mencionado. El proceso permiti refinar el farmacforo en trminos de definicin de los puntos farmacofricos y asimismo del tipo de estructuras qumicas que lo cumplen. En total se seleccionaron 34 compuestos, que fueron evaluados por un laboratorio externo. De todos ellos, el compuesto UPCBK029 mostr una actividad antagonista hacia el receptor B2 dentro del rango micromolar. A partir de este primer hit, se dispuso de una idea ms precisa de los requerimientos de reconocimiento del receptor B2. Bsicamente, hallamos que aunque la hiptesis farmacofrica era correcta, deba existir un impedimento estrico que impona la restriccin de que las estructuras para cumplir los tres puntos sean angulares (tipo bumern) y no triangulares como inicialmente pensbamos. Con este conocimiento, por una parte se dise la cuarta biblioteca combinatoria focalizada, y tras el anlisis de diversidad, de la misma sintetizamos y ensayamos cuatro compuestos nuevos con resultados negativos. Por otra parte, se efectu una bsqueda de compuestos anlogos al hit UPCBK029 en las bases de datos de estructuras qumicas del programa SciFinder Scholar y, con posterioridad, en las bases de datos de los proveedores IBS y TimTec. Se hallaron 357 4

compuestos anlogos, de los que se seleccionaron 18 aplicando criterios de cumplimiento farmacofrico y despus de analizar la diversidad qumica del conjunto restante. En los ensayos de competicin con un antagonista de B2 se identific que dos de estos compuestos mostraban antagonismo dentro del propio rango micromolar que el compuesto original, UPCBK029. Estos tres compuestos que presentan un EC50 del orden de 30 M tendran que permitir llegar a una cabeza de serie a corto plazo.

3. Relevancia y posibles implicaciones clnicas de los resultados finales obtenidos La bradicinina es un pptido proinflamatorio de la familia de las cininas que interviene en su respuesta a travs del receptor B2. En condiciones patofisiolgicas, la bradicinina desencadena mltiples efectos propios de enfermedades respiratorias, como el asma o la rinitis: la contraccin del msculo liso, un incremento de la permeabilidad vascular y de la secrecin mucosa, as como la estimulacin de los nervios colinrgicos y sensitivos. La relacin entre las enfermedades respiratorias y la bradicinina fue puesta de manifiesto a travs de un estudio que revel que la inhalacin de bradicinina causaba broncoconstriccin en personas asmticas. Posteriormente, se comprob que la exposicin a agentes alergnicos provoca elevados niveles de cininas, tanto a nivel nasal como de bronquios. Adems, se comprob que la broncoconstriccin inducida por la bradicinina es inhibida por la accin del antagonista HOE140, un antagonista peptdico selectivo del receptor B2 (3).

Con el fin de hallar nuevas terapias para el tratamiento de diferentes patologas asociadas al receptor B2, se han desarrollado antagonistas peptdicos y no peptdicos capaces de bloquear la accin de la bradicinina. Entre los antagonistas peptdicos del receptor B2 destaca el ya mencionado HOE140, un antagonista de segunda generacin menos susceptible a la digestin enzimtica que los antagonistas peptdicos que se haban desarrollado con anterioridad, ya que contiene aminocidos no naturales en su secuencia aminoacdica. En la actualidad est aprobado para su comercializacin para el tratamiento del angioedema hereditario agudo. Otros antagonistas peptdicos destacados son MEN16132 y B-9430. Se han diseado asimismo antagonistas no peptdicos con una elevada afinidad por el receptor que presentan mejores propiedades como frmacos. Se han desarrollado diferentes grupos de antagonistas no peptdicos que se hallan en fase clnica. Algunos de ellos han demostrado ser efectivos en modelos animales de broncoconstriccin y de inflamacin de las vas respiratorias, como el grupo de antagonistas descubiertos por investigadores de Fujisawa FR173657 y FR184280, as como los compuestos LF 16-0687 (Anatibant) y MEN16132 (3). Estos compuestos, aunque an no existen datos sobre su eficacia en humanos, son potencialmente adecuados como futuros agentes teraputicos para enfermedades respiratorias de tipo inflamatorio (3). Los compuestos descritos en la bibliografa, como se ha mencionado antes, no presentan an las propiedades ptimas para convertirse en frmacos y, en especial, sus estructuras son muy parecidas entre s, por lo que es probable que tengan perfiles muy parecidos. An es necesario, por tanto, el desarrollo de nuevas estructuras antagonistas de este receptor. Los tres nuevos compuestos antagonistas surgidos como fruto de este trabajo de investigacin, abren camino hacia una nueva familia de compuestos con capacidad de regular la activacin

del receptor B2 y, de este modo, a una posible futura aplicacin en el tratamiento de enfermedades respiratorias como el asma o la rinitis.

4. Publicaciones 1. Corcho, F. Computational Studies on the Structure and Dynamics of Bioactive Peptides. Tesis doctoral UPC, Barcelona 2004. 2. Filizola M, Llorens O, Carteni-Farina M and Perez, JJ. New Insights into the Conformational Requirements of B2 Bradykinin Antagonism. Bioorg. Med. Chem., 1998. 6 ,1491-1500 3. Abraham, W.M., M. Scuri, and S.G. Farmer. Peptide and non-peptide bradykinin receptor antagonists: role in allergic airway disease. Eur J Pharmacol, 2006. 533, 1215-21.