SISTEME DISPERSE FENOMENE DE TRANSPORT MOLECULAR

Funcionarea normal a sistemelor biologice, sisteme deschise din punct de vedere termodinamic, presupune un permanent schimb de substan ntre diversele compartimente proprii ale sistemului, dar i ntre sistem i mediul nconjurtor. Fenomenele de transport de substan reprezint forma cea mai concret a interaciei dintre sistem i mediu. Prin transportul din afar spre interior (influx) are loc intrarea n sistem (de ex. celula) a substanelor necesare derulrii proceselor metabolice, iar prin transport dinspre sistem n afar (eflux), sunt eliminai produii de catabolism sau alte tipuri de compui (produi de secreie, molecule semnal etc). Difuziunea n orice sistem termodinamic, forele termodinamice sunt reprezentate de gradieni adic variaia parametrilor intensivi de stare pe o anumit distan. Aceste fore genereaz fluxuri termodinamice, adic fenomene de transport, deplasri de materie sau energie. Printre parametrii intensivi ce caracterizeaz cantitativ starea unei sistem dispers sunt concentraia (activitatea) i cantitatea de sarcina electric (concentraia normal). Orice gradient de concentraie ce survine ntr-un sistem dispers va genera flux de substan. Un gradient de sarcin electric (potenial electric) va genera flux de particule ncrcate electric (ioni) sau sarcini elementare. Fluxurile aprute au tendina de a egala diferenele acestor parametri intensivi, sistemul evolund spontan de la o stare mai ordonat spre una mai dezordonat, cu entropie mai mare. Starea de entropie maxim corespunde strii n care toi parametri intensivi sunt constani n timp i n spaiu. Procesul spontan de egalare a concentraiilor ntre dou regiuni ale unei soluii moleculare, ntre care se realizeaz transportul, se numete difuziune. Difuziunea reprezint procesul de ntreptrundere a moleculelor unei substane printre moleculele altei substane, ca urmare a agitaiei termice. Acest fenomen se cuantific prin spaiul parcurs pe o anumit direcie ntr-un timp dat de ctre particulele transportate i prin viteza de difuziune, exprimat la rndul ei prin numrul de particule difuzate n unitatea de timp printr-o suprafa S considerat perpendicular pe direcia gradientului. Fick a artat c viteza de difuziune este direct proporional cu suprafaa prin care se produce difuziunea i cu gradientul de concentraie:
dm dc = DS dt dx

unde D reprezint coeficientul de difuziune, care caracterizeaz capacitatea de difuziune a sistemului respectiv, dc/dx reprezint gradientul de concentraie. Coeficientul de difuziune reprezint cantitatea de substan care difuzeaz n unitatea de timp prin unitatea de suprafa, la un gradient egal cu unitatea. D se exprim n m2/s. Pentru ap el este 2.410-8 m2/s. In practic se utilizeaz ca unitate de msur i cm2/s. D este de ordinul 10-5 cm2/s pentru soluii reale, de 106 cm2/s pentru soluii coloidale liofobe i 10-7 cm2/s pentru soluii macromoleculare. 1

D variaz direct proporional cu temperatura i invers proporional cu volumul, respectiv masa particulelor care difuzeaz. Pentru substane micromoleculare i pentru coloizi cu form sferic, D scade cu creterea diametrului particulei conform relaiei lui Einstein:

D=

KT 6 r

unde K este constanta lui Boltzmann (1,3810-23 J/K), T este temperatura absolut, este vscozitatea mediului (Ns/m2), iar r este raza particulei. Din aceast relaie rezult c viteza de difuziune este proporional cu temperatura absolut T i invers proporional cu vscozitatea. Acest ultim aspect explic de ce difuzia ntr-un gel sau solid este mult mai lent dect ntr-un fluid (lichid sau gaz). Semnul (-) n legea lui Fick semnific tocmai scderea concentraiei pe direcia de transport, sensul preponderent al difuziunii fiind de la concentraie mai mare la concentraie mai mic. Transportul de substan duce la modificarea concentraiei n timp n fiecare punct al spaiului ocupat de ansamblul soluie-solvent. Aceasta se exprim prin a doua lege a lui Fick:
dc d 2c = D 2 dt dx

Fenomenul de difuziune este ntlnit la toate strile de agregare, viteza de difuziune scznd de la gaze la solide. S considerm un gaz i un lichid ntr-o cuv nchis. Moleculele de lichid trec n stare de vapori i, n acelai timp, moleculele de gaz intr n lichid unde se dizolv. Aceast dizolvare este cu att mai mare cu ct presiunea a gazului este mai mare. La echilibru, volumul de gaz, v, dizolvat n condiii standard (0 1 atm) ntr-un C, volum V de lichid este dat de legea lui Henry: v = s pi V unde pi este presiunea parial a gazului la echilibru (atm), iar s este coeficientul de solubilitate a gazului. Acesta din urm scade cu temperatura i se exprim n lgaz/llichidatm. Prin fierbere sunt eliminate toate gazele din lichid. n cazul unui amestec de gaze, cantitatea de gaz dizolvat n unitatea de volum de lichid este proporional cu presiunea parial a gazul de la suprafaa lichidului. Astfel, n prezena unui lichid, fiecare gaz din amestec se dizolv ca i cnd s-ar afla singur. Difuzia prin membrane O membran reprezint, n mod abstract, acea limit de separare dintre regiunile heterogene ale unui sistem dispers. Membrana separ deci regiuni caracterizate de proprieti (concentraie, potenial electric) diferite. Astfel, membranele reprezint n general un obstacol n calea difuziei, jucnd rol de mediatori ai fenomenelor de transport.

Membrana se comport diferit n funcie de natura substanelor angajate n traversarea ei. Deosebim astfel, urmtoarele tipuri de membrane: membrana permeabil permite trecerea n aceeai msur a moleculelor de solvent i a celor de solvit. Are rolul unei simple rezistene n calea transportului de substan; membrana inegal permeabil permite trecerea solventului i diferiilor solvii ns cu viteze diferite; membrana selectiv membrana este permeabil pentru anumite molecule de solvit i impermeabil pentru altele; membrana semipermeabil permeabil pentru solvent dar impermeabil pentru moleculele de solvit. membrana natural (biologic) este membrana selectiv-inegal-permeabil (impermeabil pentru coloizi i macromolecule i inegal permeabil pentru ap i cristaloizi electrolii)

Dac difuzia se realizeaz printr-o membran, viteza de difuziune se exprim prin relaia:
dm = P S p c dt

unde P este coeficientul de permeabilitate a membranei, Sp reprezint suprafaa porilor membranari, c diferena de concentraie de-o parte i de cealalt a membranei. Coeficientul de permeabilitate se exprim n m/s sau cm/s. Dac considerm membrana o faz distinct n cadrul sistemului dispers, atunci fenomenul de transport dintr-o parte n alta presupune implicit dizolvarea substanei transportate n faza membranei (lichid sau solid). Permeabilitatea membranei pentru un solvent este definit prin: P= D x

unde este coeficientul de partiie i reprezint raportul dintre solubilitatea substanei transportate n membran i solubilitatea n soluie, x este grosimea membranei, iar D reprezint coeficientul de difuzie liber (n lipsa membranei). Permeabilitatea unei membrane depinde de natura substanei ce difuzeaz i de natura i starea membranei. Aceste mrimi se pot calcula dac se msoar fluxurile de substan. Desigur, pentru calcul este nevoie s se cunoasc suprafaa de schimb i diferena de concentraie. Cele mai moderne metode de msurare a fluxurilor se bazeaz pe folosirea izotopilor radioactivi, determinnduse cu precizie valoarea coeficienilor de permeabilitate pentru diferite membrane i substane. Osmoza Dac dou soluii cu solvent comun de concentraii diferite sunt desprite printr-o membran semipermeabil (impermeabil pentru solvii), are loc un fenomen de difuzie a moleculelor de solvent, fenomen numit osmoz.
3

Cel mai simplu dispozitiv pentru evidenierea i msurarea presiunii osmotice este osmometrul. El este alctuit dintr-un vas n form de plnie ntoars acoperit n partea inferioar cu o membran semipermeabil, care se umple cu o soluie de electrolit n ap. Plnia se introduce ntr-un alt vas ce conine ap distilat (prez. curs). Se remarc o cretere a coloanei de lichid din vasul n form de plnie. Are loc un proces de deplasare a solventului din vasul 1 n vasul 2, ca i cum ar tinde s dilueze soluia, transportul solvitului fiind imposibil. Datorit procesului, crete volumul de soluie din vasul 2 i lichidul urc n ramura vertical. Presiunea exercitat de coloana de lichid la echilibru reprezint presiunea exercitat de soluie, numit presiune osmotic:

=gh
unde r este densitatea soluiei, g acceleraia gravitaional, iar h nlimea coloanei de lichid din vasul 2. Creterea de presiune n vasul plnie este datorat prezenei moleculelor de solvit n concentraie mare i imposibilitii acestora de a traversa membrana. Din acest motiv, ele devin particule osmotic active, adic generatoare de presiune osmotic. Pentru soluii reale diluate, presiunea osmotic respect urmtoarele legi: 1. La temperatur constant, presiunea osmotic este direct proporional cu concentraia molar a soluiei: = kT c unde kT este o constant. 2. La concentraie molar constant, presiunea osmotic este direct proporional cu temperatura la care se face determinarea: = kC T unde kC este o constant. Cnd variaz i c i T, presiunea osmotic este direct proporional cu produsul lor:

=kcT
unde constanta k se aproximeaz prin R, constanta gazelor perfecte, egal cu 8.31 kJ/kmolK. Concentraia molar se poate exprima prin: c = n V

unde n este numrul de moli, iar V volumul. Astfel presiunea osmotic devine:

=
sau:

n RT V

V = n R T

Aceast relaie exprim legea Vant Hoff. Din relaie se vede c valoarea presiunii osmotice, la o anumit temperatur, nu depinde de natura substanei dizolvate, ci numai de concentraia molar a acesteia, adic de numrul de molecule de solvit
4

din unitatea de volum. Presiunea osmotic este presiunea pe care trebuie s o exercitm asupra unei soluii pentru ca potenialul termodinamic (presiunea) s recapete valoarea pe care ar fi avut-o solventul pur. Presiunea osmotic se msoar ca orice presiune in N/m2, atmosfere etc. Soluia care conine un numr de particule osmotic active egal cu numrul lui Avogadro (NA = 6,0231026 molecule/kmol), se numete soluie osmolar (concentraie 1 osmol/l). Un osmol, reprezint cantitatea de substan care prin dizolvare n ap formeaz un numr de particule osmotic active egal cu NA. In cazul n care substana dizolvat este alctuit din molecule mici nedisociate, concentraia osmolar se confund cu cea molar. Presiunea osmotic a unei soluii osmolare la 0 este 22,4 atm. La concentra ii molare i temperaturi egale, C presiunea osmotic a dou soluii diferite (avnd solvent comun) este aceeai. Asemenea soluii se numesc izotone. Puse n contact prin intermediul unei membrane semipermeabile ele se caracterizeaz prin absena fluxului de solvent prin membran. Mediul cu presiune osmotic mai mic se numete hipotonic fa de cel cu presiune osmotic mai mare, iar acesta hipertonic fa de cel cu presiune osmotic mai mic. Puse n contact prin intermediul unei membrane semipermeabile, ntotdeauna apare un flux de solvent dinspre mediul hipotonic spre cel hipertonic. Legile osmozei se aplic numai n cazul soluiilor ideale, iar n cazul soluiilor reale numai la diluii mari (concentraii mici). n cazul soluiilor de electrolit, legea lui Vant Hoff se modific prin introducerea unui factor de corecie (indicele de disociere i), dependent de gradul de disociere () al electrolitului:

V = inRT
unde i = 1 + , (pentru molecule care pot disocia n doi ioni), iar este raportul dintre numrul de molecule disociate i numrul total de molecule dizolvate (discutat la primul curs despre solutii). Ecuatia lui Nernst In sistemele compartimentalizate prin membrane, o anumit specie de ioni se va deplasa n interiorul sistemului dintr-un compartiment n altul, pn cnd suma dintre energiile electric i chimic (potenialul electrochimic) corespunztoare acelei specii devine zero. Pentru compartimentul 1 (prez. curs), potenialul chimic al unui solvit este:
1 Wch = 0 + RT ln

c1 c0

unde 0 este potenialul chimic standard al unui solvit aflat n concentraie de 1 mol/l de soluie la 25 (are valori n tabele pentru diferite sp ecii moleculare), C iar c0 este concentraia unitate (1 mol/l soluie). Reamintim c, la soluiile nediluate se folosete activitatea n locul concentraiei.

Pentru compartimentul 2 avem: Deci: Wch = RT ln

2 Wch = 0 + RT ln

c2 c0

c c2 . Cum Wch + Wel = 0, obinem: RT ln 2 = zFE sau: c1 c1 E = c RT ln 1 zF c2

Aceasta este relaia lui Nernst ce exprim valoarea diferenei de potenial ce se stabilete ntre compartimentele separate de membran, funcie de concentraia unei singure specii ionice care a atins echilibrul electrochimic. Echilibrul Donnan n sistemele alctuite din compartimente separate de membrane cu permeabilitate diferit fa de particulele dizolvate (ioni cristaloizi sau coloidali), starea de echilibru termodinamic este atins atunci cnd, de-o parte i de cealalt a membranei, concentraiile ionilor dizolvai se gsesc n echilibru electrochimic, numit echilibru Donnan. La echilibru, conform legii Nernst: E2 E1 =
RT c1 ln zF c 2

unde z este valena ionului, F numrul lui Faraday, R constanta gazelor perfecte, T temperatura absolut, E1, E2 potenialul electric de-o parte si de alta a membranei, c1, c2 concentraia speciei de ion de-o parte i de alta. Relaia este valabil pentru fiecare specie de ioni n parte, oricare este valena acestora:
[ A ]1 RT [C + ]1 RT E2 E1 = ln ; E2 E1 = ln zF [C + ]2 zF [ A ]2

sau:

[C + ]1 [ A ]2 = [C + ]2 [ A ]1

care reprezint relaia echilibrului Donnan n cazul cel mai simplu, cnd de o parte i de cealalt a membranei sunt doar dou specii de electrolii: unii pozitivi (cationi C+) i ceilali negativi (anioni A). In general, raportul ionilor este respectat cu condiia ca s se in seama de valena ionului, de exemplu:
[ Na + ]1 [Ca 2+ ]1 = [ Na + ]2 [Ca 2+ ]2
1/ 2

[Cl ]2 = [Cl ]1

Dac ntr-unul dintre compartimentele separate de membran exist macromolecule dizolvate sub form de polielectrolii disociai (soli), deci ncrcate electric, prezena acestora determin o repartiie inegal a ionilor de electrolit difuzibili de o parte i de alta a membranei, stabilindu-se n final echilibrul de membran Donnan.
6

Presiunea coloid-osmotic S considerm dou compartimente 1 i 2 separate printr-o membran selectivsemipermeabil, care permite trecerea ionilor i apei, dar nu i a coloizilor i a macromoleculelor. Datorit condiiei de echilibru electrostatic, sarcinile electrice de semn contrar trebuie s fie n numr egal n cele dou compartimente: [Na+]1 = [S-]1 + [Cl-]1 Deci: [Na+]1 > [Cl-]1 i: [Cl-]1 < [Cl-]2 Rezult: [Na+]1 > [Na+]2 Anionul coloidal [S-], nedifuzibil, pare s mping de cealalt parte a membranei ionul cristaloid de acelai semn i s atrag pe cel de semn contrar. Datorit prezenei polielectrolitului disociat (anionul coloidal), o parte din ionii mici se vor comporta ca nedifuzibili prin membrana semipermeabil i vor determina apariia unui exces de presiune osmotic pe care o denumim presiune coloid-osmotic sau oncotic. In cazul unei celule separat de exterior printr-o membran selectivsemipermeabil, s notm cu cS i cel concentraiile iniiale ale solului (anionul coloidal) i, respectiv ale electrolitului. Iniial, distribuia ionilor este diferit. In starea final de echilibru, concentraia total a ionilor de Na+ i Cl- care au ptruns din exterior n interior prin membran o vom nota cu x. Conform echilibrului de membran Donnan:
2 cel c S + 2cel

[Na+]2 = [Cl-]2

x(c S + x ) = (cel x )

sau

x=

Definim coeficientul de repartizare q a electrolitului pe cele dou pri ale membranei, raportul dintre concentraia extacelular i cea intracelular a electrolitului:

q=

[NaCl ]e [NaCl ]i

cel x cel = 1 x x

Substituind pe x cu valoarea gsit din echilibrul Donnan, obinem:

q = 1+
Se pot face urmtoarele observaii:

cS cel

Electrolitul se repartizeaz totdeauna inegal n cazul echilibrului de membran, deoarece q > 1; astfel, concentraia electrolitului cu greutate molecular mic din soluia exterioar este totdeauna mai mare dect concentraia sa n soluia interioar (unde se afl anionul coloidal); Dac concentraia electrolitului macromolecular (anionul coloidal) este foarte mic, iar concentraia cel este mare, adic cS << cel , atunci:
x cel si q 1 2 7

ce presupune ca electrolitul cu greutate molecular mic se repartizeaz practic uniform de ambele pri ale membranei.

Dac, concentraia electrolitului cristaloid este este foarte mic n comparaie cu cS, adic cS >> cel :
2 cel x 0 si q cS

nseamn c aproape ntreaga cantitate de electrolit cristaloid rmne n afara membranei, n soluia exterioar. Dac s-a introdus n prealabil n interior, la echilibru, practic, se va gsi aproape n totalitate n afar. Astfel, electrolitul macromolecular (electrolitul coloidal) nu numai c nu permite o repartiie uniform a electrolitului cu greutate molecular mic, dar l va respinge totdeauna n afara membranei, ctre soluia exterioar. Aceast eliminare este cu att mai puternic cu ct concentraia macromoleculei (coloidului) este mai mare, iar concentraia soluiei de electrolit este mai mic. O consecin important ce decurge de aici este c presiunea osmotic din afara celulei va fi ntotdeauna mai mare dect n celul. Diferena, pe care am numit-o presiune oncotic sau coloid osmotic, dei limitat comparativ cu valoarea presiunii osmotice, este extrem de important n asigurarea proceselor de schimb membranar. Inegalitatea concentraiei ionilor cristaloizi de cele dou pri ale membranei antreneaz i apariia unei tensiuni electromotoare (potenial de membran) care poate fi pus n eviden prin electrozi corespunztori. Msurarea presiunii osmotice Pentru determinarea presiunii osmotice a substanelor cu masa molecular mare sunt utilizate osmometre de diferite tipuri, n genul celui prezentat anterior (osmometrul), unde vasul 2 este pus n legtur cu un manometru. Aceasta este o metod static, care se bazeaz pe msurarea direct a presiunii hidrostatice necesare realizrii echilibrului osmotic. La soluii reale, care conin substane cu masa molecular mic, presiunea osmotic se poate determina indirect, prin metoda crioscopic. Se tie c temperatura de congelare a soluiei este totdeauna mai mic dect a solventului pur. Conform legii lui Raoult, scderea temperaturii de congelare este proporional cu concentraia molar a soluiei:
= kCr c

unde kCr reprezint constanta crioscopic i este caracteristic solventului. Ea este numeric egal cu scderea temperaturii de congelare a unei soluii ideale osmolare (1 osmol/l). Pentru ap kCr = 1,86 O solu ie osmolar C. apoas nghea la -1,86 C.
, innd cont c presiunea kCr osmotic a unei soluii ideale molare este kT = 22,4 atm, obinem formula de calcul a presiunii osmotice:

Din prima lege a presiunii osmotice: = kT c i c =

kT 22.4 = 12 (atmosfere) k Cr 1.86

Determinnd , putem afla i concentraia osmolar a soluiei (exprimat n osmoli/l):

c= k Cr

Un procedeu similar este metoda ebulioscopic, n care se msoar ns diferena dintre temperatura de fierbere a soluiei i cea a solventului pur, deoarece aceast diferen depinde direct proporional de concentraia osmolar printr-o constant ebulioscopic. Aprecierea calitativ a presiunii osmotice a unei soluii se poate face prin metoda biologic ce const n umrirea modului n care se comport hematiile introduse n soluia investigat. Dac hematiile se umfl i se sparg (hemoliz), aceasta nseamn c presiunea osmotic a soluiei este mai mic dect cea a plasmei sanguine, adic soluia este hipotonic. Dac hematiile se zbrcesc micorndu-i volumul, soluia este hipertonic, iar dac dimensiunile hematiilor rmn nemodificate, soluia este izotonic. Transportul apei n organism Aflat n cantitate cea mai mare n compoziia esuturilor i organelor, apa va juca un rol major n toate procesele de schimb dintre celule i mediul extracelular sau dintre compartimentul vascular i cel interstiial. Deplasarea apei este asigurat prin dou tipuri de fenomene fizice: 1. osmoza determinat de variaia concentraiei particulelor osmotic active (ioni). Plasma sanguin are o presiune osmotic de 7.6 atm la 37C. La aceasta contribuie toate particulele osmotic active dizolvate n plasm, inclusiv macromoleculele. Contribuia acestora (presiunea coloid osmotic) reprezint numai 0.5 % adic 28 mmHg (1 atm = 760 mmHg). Fluxul de ap va depinde de diferena de presiune osmotic dintre compartimente, iar aceast este de fapt, presiunea oncotic (). 2. ultrafiltrare determinat de presiunea efectiv din compartiment (vas de snge, interstiiu etc). La nivelul capilarelor, diferena de presiune efectiv (pe), adic diferena dintre presiunea din vas i cea din teritoriul extravascular, este redus, ajungnd la captul arterial la 32 mmHg, iar la cel venos scznd pn la 12 mmHg. La aceste valori, devine extrem de important influena presiunii oncotice (), care rmne constant pe toat lungimea capilarului, determinnd sensul de transport al apei prin endoteliul capilar (fig. prez. curs). Astfel, la captul arterial, unde pe > are loc un proces de ultrafiltrare prin care apa, mpreun cu moleculele i ionii dizolvai, va fi mpins spre spaiul interstiial, iar la captul venos, unde pe < , predomin procesul de osmoz, prin care apa se rentoarce n vas mpreun cu produii rezultai n urma proceselor celulare. Apariia edemelor (acumulare de ap n spaiul interstiial) poate avea deci dou mecanisme: 1. creterea presiunii de ntoarcere venoas staza cardiac (crete pe)
9

2. scderea presiunii oncotice prin reducerea concentraiei de proteine serice edemul renal din insuficienta renal cu eliminare renal de proteine sau edemul caectic (carenial) prin deficit sever de aport alimentar de proteine. Meninerea formei celulare este influenat de diferena de presiune osmotic dintre celul i soluie. Introducerea hematiilor n mediu hiperosmotic duce la piederea de ap din celul cu zbrcirea formei (ratatinare). Dac mediul extern este hipoton, atunci apa intr n celul producndu-se umflarea acesteia. Pentru o anumit valoare a presiunii osmotice se poate declana liza prin oc osmotic a membranei cu distrugerea celulei. Astfel, prin rezistena la ocul osmotic se poate testa fragilitatea membranelor celulare. Funcia renal de filtrare a produilor toxici din snge este un proces dependent de presiunea hidrostatic din capilare, care depinde la rndul ei de presiunea arterial. n capilarul renal presiunea este aproximativ 60% din presiunea arterial, adic aproximativ 60 mmHg (pC). La nivelul glomerulului renal se produce un proces de ultrafiltrare la o presiune de: pUFG = p - pCB - = 17 (8) mmHg unde p = 60 (58) mmHg, = 28 (35) mmHg este diferena de presiune osmotic, iar pCB = 15 (15) mmHg este presiunea hidrostatic din capsula Bowman, la capatul aferent, respectiv eferent al capilarului renal (in parantez). Se realizeaz astfel un debit de urin primar de 150 170 l/zi. Filtrarea glomerular este abolit la o presiune arterial mai mic de 55 mmHg. Blocajul renal este extrem de periculos deoarece determin acmularea de produi toxici precum ureea. Prin dializ se poate realiza filtrarea sngelui de produii toxici ca urmare a unui proces de difuzie printr-o membran selectiv artificial.

10