Exploration du mtabolisme des lipides

I. Introduction
Les lipides appartiennent aux substances de lorganisme insoluble dans leau et solubles dans les solvants organiques. Elles sont formes dacides gras et dalcools.

A. Rle :
Structural : membrane cellulaire. Fonctionnel : Prcurseur de vitamine A, E, D, K. Energtique, il est responsable de 50 % de la production nergtique.

B. La rpartition dans lorganisme :

Systme nerveux central : phospholipides et glycrol au niveau de la myline et des membranes cellulaires Tissue adipeux : glycride et phospholipides Au niveau du plasma : trs peu dacides gras libre, des glycrides, des strides, et des phospholipides. Les lipides plasmatiques proviennent dun apport alimentaire et dune synthse endogne hpatique et adipeuse. Les lipides sont hydrophobes mais circulent dans le milieu aqueux ! Comment cest possible ? Cest grce aux lipoprotines.

II. lipoprotines
Les lipoprotines sont gnralement constitus de : Protines : apoprotines de plusieurs types. Lipides : phospholipides Cholestrol libre Cholestrol estrifi Triglycrides.

Les lments hydrophobes sont situs lintrieur. Les lments hydrophiles sont situs la priphrie. Les lipoprotines sont de quatre types dont chacun avec une constitution spcifique : Lipoprotines Triglycrides % 86 - 94 Cholestrol Cholestrol libre % 1 estrifi % 1-3 Phospholipides % 3-8 Apoprotine Type et % 1-2 AI, AII, AIV B48
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Chylomicrons

VLDL LDL HDL

55 65 8 12 63

67 5 10 35

12 14 33 40 14 18

12 18 20 25 20 30

5 10 B100, CI, CII, CIV 20 24 B100 45 50 AI, AII, CI, CII, CIII

Les lipoprotines sont classes selon leur densit en 4 types dont chacun est caractris par sa composition en cholestrol, triglycrides, phospholipides, et apoprotines. Pour les chylomicrons on a une prdominance de triglycrides et apoprotines de type AI Pour les VLDL ce sont toujours les triglycrides qui prdominent mais ce sont les apoprotines de type C qui sont les plus nombreuses. Pour les LDL on a une prdominance de cholestrol estrifi et apoprotine de type B100 Dans les HDL ce sont les apoprotines qui prdominent. Les apoprotines ont un rle la fois structural et mtabolique. Ex : Apo AI stimule la Lcithine cholestrol acyle transfrase. Apo CII stimule les LPL endothliales. LApo E est un ligand du rcepteur LDL et du rcepteur IDL.

A. Apport lipidiques
1) Exogne par lalimentation :
TG AG, Mono, Diglycrides, glycrol

Phospholipides

Absorption intestinale

Cholesterol: apport 2OO mg/j 2) Endogne: Adipocytes Acide gras libres qui sont transports par lalbumine vers le foie ou se fait la synthse des triglycrides
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Actyle CoA permet la synthse du cholestrol, environ 800 mg/j Les lipides vont sintgrer dans les lipoprotines qui assurent leur transport plasmatique.

B. Les lipoprotines riches en triglycrides :

Les Chylomicrons transportent les triglycrides exognes, ils sont synthtiss au niveau de la paroi intestinale. Les VLDL transportent les triglycrides endognes qui proviennent du foie et de lintestin.
Chylomicrons Cholestrol libre Triglycrides

Cholestrol estrifi

Acides gras libre

Glycrol

HDL

Foie

Muscle

Adipocytes

VLDL Triglycrides IDL Cholestrol libre Acides gras Foie Cholestrol estrifi Glycrol

Foie Muscle

LDL

HDL

50 % des chylomicrons sont limins en 30 min par un facteur clarifiant (LPL) Les VLDL sont transforms par les LPL en IDL (Apo E) qui se fixent sur les rcepteurs hpatiques lApo E (piration), 50% des VLDL sont limins en 6 12 heures.

C. LDL (Apo B100)

Ils sont chargs de cholestrol estrifi quils ramnent dans les tissus stridognique (surrnale et gonades) Ils sont reconnus par la cellule grce aux rcepteurs B/E (LDL et IDL)
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Le cholestrol libre Structure des membranes plasmiques Stock sous forme de cholestrol (acyle cholestrol Acyle transfrase, Acyle CoA) Il inhibe le HMG CoA rductase (enzyme cl de la synthse du cholestrol) Inhibe la synthse des rcepteurs Apo B/E Capt par les HDL et achemin vers le foie.

D. HDL
Au niveau des hpatocytes la synthse des HDL se fait par le cholestrol estrifi, ils senrichissent en cholestrol et phospholipide, on obtient alors des HDL riches en cholestrol et phospholipides qui subissent laction du LCAT pour se transformer en HDL3, ces derniers sont rceptrices de cholestrol libre qui est ensuite estrifi pour donner des HDL2 qui sont transportrices du cholestrol vers le foie ou il est chang avec les LDL et VLDL.
Triglycrides

HDL

LDL Cholestrol estrifi

Organes strogniques

Le foie

Cholestrol estrifi transfrase

E. Lipoprotine (a)
Apo (a) li par un pont disulfure lApo B100, elle est trs htrogne [Apo(a)]plas > 0,3 g/l cest un facteur de risque cardiovasculaire indpendant.

F. Lipoprotine X :
Elle se voit dans la Cholestrase (obstacle dans la voie biliaire)

G. Rgulation hormonale
Insuline Lipoprotines Foie

Tissu adipeux

Lipolyse Tissu priphrique

H. Exploration biologique
Les perturbations lipidiques gnrent des maladies cardiovasculaires premire cause de mortalit. HTA Tabagisme Obsit Terrain familiale Dyslipidmie : facteur de risque plus important. Dans les familles risque, le bilan lipidique doit se faire ds lenfance, pour les autres entre 18 et 25 ans En premire intention on fait le dosage des Triglycride, cholestrol total, cholestrol HDL, et on fait un examen de laspect du srum. En prsence danomalies, on procde un bilan orient, En plus, on peut procder ou excuter une lectrophorse de lipoprotines et dosage des Apoprotines, Apo B, Apo AI Lipoprotines (a). Facteurs de risque

1) Dosage des triglycrides :

Le sujet doit tre jeun depuis 12 heures. A partir de laspect du srum ou plasma on peut reconnaitre le lipoprotine en excs : Aspect opalescent : excs de VLDL. Aspect lactescent : chylomicrons. Aspect clair : le srum ou plasma est normal. Quand le prlevement est trouble, on le garde au rfrigrateur pendant 24 heures une temprature de 4. Sil reste homogne, on a un excs de VLDL. En cas de dcantation, on a un excs de chylomicrons. Mthodes de dosage :

Il existe des mthodes chimiques qui ne sont plus utilises maintenant Mthode enzymatique : Raction de Trinden : cest la raction la plus utilises.
Glycrol 3 phosphate Glycrol oxydase Phosphodihydroactone + H2O2 Phnol + 4 amino phenazone

Peroxydase Quinone Imine color (505 nm)

Raction de Kreltz :
ADP ATP

NADHH+

NAD+ Lactate LDH

PEP

Pyruvate

Remarque : Le dosage enzymatique par spectorflectomtrie utilisant loxydase peroxydase sur support solide est une mthode de plus en plus utilise. Valeurs de rfrence : Le taux des triglycrides dans le sont doit tre compris entre 0,5 et 1,5 g/l LHypertriglycridmie peut dpasser 10 g/l dans les cas suivant : Hypertriglycridmie familiale (risque de pancratite) Diabte. Obsit. IR. Alcooliques. Cholestase.

2) Dosage du cholestrol :
Le cholestrol estrifi constitue environ 70% du cholestrol de lorganisme, alors que le cholestrol libre ne constitue que 30% Le dosage se fait dans un srum ou plasma frais de prfrence. Lchantillon peut tre prserv 4 jours + 4C
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 2 3 mois environ 20C 1 an 70 C Le dosage se fait par plusieurs mthodes : CPG ou chromatographie sur phase gazeuse, cest la mthode de rfrence mais elle est non utilisable parce quelle ncessite un matriel consquent. La mthode enzymatique : Elle est base surtout sur lutilisation des deux enzymes : le cholestrol estrase et le cholestrol oxydase. On procde dabord la dnaturation des lipoprotines par un dtergent puis : Le chromogne le plus utilis est le phnol + amino 4 phenazone qui en lui ajoutant une molcule deau oxygn et sous laction dune peroxydase on obtient la quinone Imine color en rose dont labsorbance est calcul 540 nm. Le dosage peut aussi se faire par spectroreflctomtrie en chimie sche 600 nm.

3) Dosage du cholestrol HDL :

Avant de pouvoir doser le cholestrol HDL, on procde dabord au blocage des lipoprotines VLDL et LDL. Le blocage des VLDL et LDL se fait par prcipitation ou en ajoutant un complexe de polyanion-cation ou lacide phosphotungstique et MgCl2, on centrifuge et on obtient un surnageant sur lequel on dose les HDL et un prcipit de LDL et VLDL. On peut aussi utiliser des agents complexants dans un ractif R1 (sulfate da cyclodextrane et de dextrane), le ractif va complexer les LDL et VLDL et les chylomicrons. Ces complexes deviennent alors insensibles aux enzymes de R2. Les poly-anions synthtiques dans R1 qui sabsorbent slectivement sur VLDL et LDL donnent des complexes rsistant au dtergent de R2. Le dosage direct des HDL en bloquant les autres lipoprotines se fait alors avec des anticorps anti Apo B. Valeurs de rfrence : 0,42 g/l chez lhomme 0,5 g/l chez la femme.

Le rapport est utilis pour apprcier le risque cardio vasculaire, ce rapport doit tre infrieur 4,9 chez lhomme et 4,2 g/l chez la femme.

4) Dosage du cholestrol LDL :

Le dosage des LDL se fait par estimation avec calcul selon la formule de Friedewald:

La formule nest valide que si le taux des triglycrides est infrieur 3,5 g/l, sinon on procde au dosage exprimental. Dabord on utilise un dtergent qui solubilise VLDL et HDL quon traite par le cholestrol estrase et oxydase pour obtenir un produit inactif et incolore. Un autre ractif contenant un dtergent, un enzyme et un chromogne va permettre le dosage des LDL. Limmunoprcipitation des autres lipoprotines se fait alors grce des bulles latex recouvertes danticorps anti Apo K. Valeurs de rfrence : Cholestrol total : 1,6 2 g/l Cholestrol HDL : 0,35 0,5 g/l Cholestrol LDL : 1 1,6 g/l Hypercholestrolmie : Primaire : hypercholestrolmies Secondaires : Hypothyrodie. Cholestrase. Diabte. Obsit. Apport alimentaire excessif.

Hypocholestrolmie Dnutrition, malabsorption (maladie cliaque). Insuffisance hpato cellulaire. Hyperthyrodie. Affection familiale : dficit en LCAT, en Apo A, A btalipoprotinmie (dficit en Apo B).

5) Dosage des Apo Protines : Apo A1 et Apo B

Les dosages sont des dosages immunologiques avec des antisrums spcifiques : Immunoturbiromtrie et immunonephelomtrie. Immunodiffusion radiale, immunoenzyme.
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Les Apo CII et Apo E sont aussi dos par les techniques immunologiques Apo B : 0,6 1,4 g/l Apo A1 : > 1,1 g/l et la valeur de rfrence est situ entre 1,6 g/l et 2 ,5 g/l. Le rapport doit tre infrieur 1,5.

Quand la valeur des Apo B est leve on a une abondance de cholestrol LDL ce qui a un risque athrogne. Quand la valeur des Apo A1 est leve, on a un bon catabolisme du cholestrol, ca signifie une protection de lathrosclrose.

6) Dosage des lipoprotines a :

Le dosage se fait par les techniques immunologiques : immunonephelomtrie pour les lumires diffuses et immunoturbiromtrie pour les lumires transmises. La valeur des lipoprotines a doit tre infrieure 0,3 g/l parce que ce type de lipoprotines est extrmement athrogne. I.

Etude des lipoprotines :

On peut sparer les lipoprotines de trois manires diffrentes : On peut les sparer par prcipitation fractionne on utilisant du sulfate de dextrane haut poids molculaire ou le phosphotungstate. On peut aussi les sparer par lectrophorse, en utilisant une plaque couverte dun gel, qui permet de tamponner pH > 8,5, les protines sont alors chargs ngativement. Ils migrent ensuite et sont spars dans le gel selon leur forme et leur structure. On prend ensuite le gel quon sche et quon plonge dans le noir du soudan qui permet de rvler les diffrents constituants. Llectrophorse peut se faire sur le gel dagarose ou sur le gel de polyacrylamide. Les IDL migrent entre les LDL et VLDL. Les lipoprotines a migrent entre les LDL et VLDL. Le taux des lipoprotines a est augment dans les diabtes. Et finalement les lipoprotines peuvent tre spares par ultracentrifugation.

J. Les dyslipoprotinmies : 1) Hyperlipoprotinmies familiales :

Dans ces hyperlipoprotinmies, il y a deux types de classification : La classification internationale de Fredrickson en fonction de laspect lectrophortique La classification de Gennes selon le taux de cholestrol total et des triglycrides.

Classificatio Frquenc n de e Fredrickson

Aspect du srum

CT

TG

Classification de Gennes Hypercholestrolmies essentielles 1) Forme mineure : expression biologique permanente, manifestations cardiovasculaires occasionnelles 2) Forme majeure : xanthomatose tendineuse hypercholestrolmique familiale (XTHF) 3) Forme monstrueuse de XTHF Hyperlipidmies mixtes 1) Forme mineure: expression biologique permanente, quelques manifestations cardiovasculaires 2) Forme majeure avec ou sans xanthomatose Hypertriglycridmies majeures 1) Formes exognes dpendantes des graisses, lactivit des lipoprotines lipases est diminue 2) Formes endognes indpendantes des graisses, glucidodpendantes ou thanolodpendantes, lactivit des LPL est normale) 3) Formes exognes et endognes

IIa

Frquent

Clair

+++

Nul

IIb

frquent

opalescen t opalescen t

++

III

rare

++

++

Trs rare

Lactescen Norm t al ou + opalescen Norm t al ou +

+++

IV

frquent

++

rare

lactescen Norm t al ou +

+++

3 hyperlipoprotinmies reprsentent 99 % des cas : Hypercholestrolmie essentielle de type IIa : Elles sont dues une anomalie au niveau du gne du rcepteur B/E des LDL, ou une anomalie du gne de lApo B (site de fixation ou rcepteur). Elles ont comme consquence le fait que les LDL ne sont pas capts par les cellules, donc le taux du cholestrol total, celui du cholestrol LDL et des Apo B va augmenter, ce qui a un risque vasculaire important.

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 Hyperlipidmie mixte de type IIb : Il sagit dune augmentation de synthse de lApo B et des VLDL, ce qui cause une augmentation des LDL et du cholestrol total ainsi que des triglycrides mais sous linfluence des conditions dittiques. Le cholestrol total, les triglycrides, le cholestrol LDL, et les Apo B sont augments. Le cholestrol HDL et les Apo A1 sont gnralement diminus. Il y a un risque athrogne important. Hypertriglycridmie majeure de type IV : Elle est due une augmentation de la synthse hpatique des VLDL et un ralentissement de leur catabolisme. Les triglycrides augmentent. Le cholestrol HDL et Apo A1 diminuent. Le risque athrogne est important. Ce type dhypertriglycridmie est souvent associ une hyperinsulinmie, la rsistance linsuline serait lorigine de lhypertriglycridmie qui peut tre intensifie cause de facteurs dittiques comme les glucides, lalcool et lobsit.

2) Dautres dyslipidmies sont rares :

Lhyperalphalipoprotinmie (HDL) Le cholestrol HDL augmente et le cholestrol LDL diminue. Elle se transmet par transmission autosomique dominante. Les familles atteintes ont une grande longvit, parce quils ont un moindre risque cardiovasculaire. Lhypoalphalipoprotinmie : Diminution du cholestrol HDL et des Apo A1. Cest la maladie de Tangier : analphalipoprotinmie. Elle est autosomique rcessive. Elle est due une mutation du gne Apo A.

Le taux des lipoprotines a est augment, il devient suprieur 0,3 g/l ce qui augmente le risque athrogne. Hyperchylomicronmie (type I) Le taux des triglycrides devient beaucoup trop lev. Un dfaut de lipoprotines lipase. Un risque majeur de pancratite

3) Les hyperlipoprotinmies secondaires :

Au diabte pour les type IV ou IIb.
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A lobsit pour le type IV. Aux hyperinsulinmies pour les types IV et IIb A la cholestase pour les types IV, IIb, Lp(a). Au syndrome nphrotique IIb et IV. Aux hypothyrodies pour les types IIa et IIb. Iatrogne : Contraceptifs oraux : oestroprogestatifs. bloquant : augmentation des triglycrides. Diurtiques thiazidiques : augmentation du cholestrol total et du cholestrol LDL. Corticothrapie au long terme pour les types IIb et IV.

Dysglobulmie

K. Athrosclrose:
Lathrosclrose est une inflammation de lintima des artres de gros et moyen calibre, originaires de deux composantes : Une composante plasmatique (lipoprotines) Une composante cellulaire : cellules de la paroi : Cellules endothliales Cellules musculaires lisses. On assiste une infiltration de lintima par les LDL, leur concentration va alors augmenter et ils vont tre modifis. Une fois dedans ils font appel aux macrophages, ces derniers les reconnaissent grce aux rcepteurs scavenger, ils vont ensuit phagocyter les LDL modifi et se transformer en cellules spineuses. On assiste alors une libration de mdiateurs chimique qui seront responsable dun recrutement de macrophage et de lymphocyte. Ces derniers constituent une plaque qui gnre un soulvement de lintima entrainant une diminution du diamtre artriel => ischmie. Lobstruction totale est lorigine des infarctus.

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