Estudio microbiolgico de los productos cosmticos durante su uso por los consumidores: riesgos para la salud y la eficacia del

preservativo
los sistemas de R. Campana, Scesa C, V. Patrone, Vittoria E. y W. Baffone Istituto di Scienze Tossicologiche, Igienistiche ed Ambientali, Universita `di Urbino" Carlo Bo ", Urbino, Italia Introduccin La contaminacin de los microorganismos en los cosmticos puede provocar un deterioro del producto y, cuando patgena, representan un grave riesgo sanitario para los consumidores de todo el mundo (Beck y Lorenzoni, 1995;. Behravan et al 2005). Encima los ltimos 30 aos, la aplicacin de Good Manufacturing Prcticas ha sido la base para la mejora de la industria Los anlisis de control de calidad. Para este propsito, el Reino Farmacopea de los Estados (USP), prueba de lmites microbianos ofrece varios mtodos para la determinacin del total recuento microbiano de las bacterias, levaduras y mohos (Anon 2006). En particular, la USP especifica cuatro indicadores bacterianos (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella spp. y Staphylococcus aureus) mientras que la europea Farmacopea establece los anlisis adicionales para determinar los niveles de enterobacterias (Anon 1998). A pesar de estas directrices, la contaminacin microbiana sigue siendo uno de las principales causas de retirada de productos en el mundo, en particular, en los pases tropicales en desarrollo (Okeke y Lamikanra 2001). Por lo tanto, es importante mejorar el sistema de conservacin (Farrington et al 1994;. Linter y Genet 1998) con el fin de inhibir el crecimiento de contaminantes microorganismos durante la fabricacin, almacenamiento y utilizar por los consumidores, tambin mediante el uso de envases no invasiva (Brannan y Dille 1990). La Ley 713/86 italiano y el Reglamento 76/768 europea estn siendo modificados para adaptarse a la europea Directiva 2003/15/CE sobre el perodo despus de abrir de los productos cosmticos. Por lo tanto, de acuerdo con el Palabras clave cosmticos, riesgo para la salud, en el uso de la contaminacin, conservante sistema. Correspondencia Wally Baffone, Istituto di Scienze Tossicologiche, Igienistiche ed Ambientali, Universita `di Urbino" Carlo Bo ", Via S. Chiara 27, 61029 Urbino, Italia. E-mail: baffone@uniurb.it / 1517 2005: recibi el 22 de diciembre de 2005 revisado y aceptado 28 de marzo 2006

doi: 10.1111/j.1472-765X.2006.01952.x Resumen Objetivo: Evaluar la contaminacin microbiana de 91 cosmticos (23 emulsiones o / w, 47, 21 tensiolytes pastas acuosas) en tres estados diferentes de uso (intacto, en uso, terminando producto) y la eficacia de proteccin de los sistemas conservantes ms frecuentemente utilizado en las formulaciones cosmticas analizados. Mtodos y resultados: Recuento total de bacterias de aislamiento y la identificacin de cepas patgenas se realizaron en los cosmticos recogidos.Sobre 106% de tensiolytes (135% espuma de bao, champ 67%, 10% de los jabones lquidos) estaban contaminadas por Staphylococcus warneri, Staphylococcus epidermidis y Pseudomonas putida. La eficacia de los sistemas conservantes de dos productos cosmticos, probado contra el estndar de microorganismos (Staphylococcus aureus ATCC 4338 y Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027) y dos cepas de cosmticos en este estudio (S. epidermidis y P. putida), satisfecho de los cosmticos, artculos de tocador y perfumes Criterios de la Asociacin y la Farmacopea Oficial italianos, mientras que slo una prueba cosmtica respetado el criterio de Desafo prueba rpida. Conclusiones: Los productos cosmticos contaminados son relativamente poco comunes, pero algunos productos, que no pueden suprimir el crecimiento de varios microorganismos, representan un peligro potencial para la salud. Importancia e Impacto del estudio: La prueba de provocacin se puede realizar no slo durante la preparacin del sistema conservante en los cosmticos intactos, pero tambin se utiliza para evaluar la eficacia de proteccin durante su uso. Letters in Applied Microbiology ISSN 0266-8254 2006 a legislacin en vigor, el objetivo de este estudio fue evaluar la posible contaminacin microbiana de cosmtico varios productos en tres estados diferentes de su uso (intacto, en uso, terminando el producto). Adems, la eficacia de proteccin de los sistemas de conservacin, los ms frecuentemente utilizados en la analizaron las formulaciones cosmticas, tambin se evalu utilizando tres pruebas de provocacin microbiolgicos. Materiales y mtodos Los productos cosmticos Noventa y un productos cosmticos disponibles comercialmente (23 emulsiones o / w, 47, 21 tensiolytes pastas acuosas) en tres estados diferentes de uso, el producto intacto (a el momento de la compra), el producto en uso (despus de 14 das de uso) y el producto final (despus de su uso, despus 30 das), fueron recogidas y analizadas a fin de verificar el grado de contaminacin microbiolgica posible

durante su uso por los consumidores. Las especies microbianas investigados son: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella spp., S. aureus y enterobacterias, como lo sugiere USP y EP. Los consumidores, seleccionados al azar entre los estudiantes de la Universidad de Urbino, le dio una alcuota (1 ml de producto lquido o 1 g de pasta) de la cosmtica producto, se recogi en un tubo estril, en los tres estados mencionados anteriormente. Adems, cada consumidor dio la descripcin esttica (etiquetas e ingredientes), que permite una comparacin de los sistemas conservantes. Los anlisis microbiolgicos como el recuento total de bacterias y el aislamiento e identificacin de bacterias fueron realiz en las alcuotas recogidos cosmticos. El anlisis microbiolgico Recuento total de bacterias Las muestras recogidas de los productos cosmticos (intacto, en uso y terminando producto) se analizaron para la determinacin del recuento total de bacterias. Cada muestra, diluida en serie (De 10) 1 a 10) 4 ml de clulas) 1) en tampn fisiolgico y oportunamente, se homogeneiz, se extendi sobre triptona de soja Agar (TSA; Oxoid, Miln, Italia) y se incubaron a 37 C? Las placas se observaron despus de 24 h, y despus de 5 das y el nmero de unidades formadoras de colonias (UFC ml) 1) fue determinada. Cada ensayo se realiz por duplicado. Medios de comunicacin y el aislamiento de microorganismos patgenos Para determinar la presencia de microorganismos patgenos, 1 ml de cada 10) 1 muestras diluidas se extendi sobre manitol sal agar (Oxoid), McConkey (Oxoid) y cetrimida agar (Oxoid) para permitir el crecimiento de Staphylococcus spp., enterobacterias y Pseudomonas spp. respectivamente. Las placas fueron incubadas a 37 C durante 24 h. Los aislamientos fueron identificados por pruebas bioqumicas convencionales (Barrow y Feltham 1993; Murray et al. 1995). Laboratorio de mtodos de ensayo de eficacia (pruebas de provocacin) Las pruebas de provocacin, las siguientes pruebas CTFA (cosmticos, artculos de tocador and Fragance Association, Inc. 2001), FUI prueba (Farmacopea Oficial Italiana: Anon, 1994), y el Challenge Test Rpido (ECA) (Cagliani et al. 1990), fueron realiz en dos productos cosmticos, una crema corporal y un bao de espuma, seleccionado entre los cosmticos ensayados, que contiene la misma mezcla de conservantes (fenoxietanol, metilparabeno, etilparabeno, butilparabeno, propilparabeno, isobutylparaben) que difieren slo por la presencia de imidazolidinil urea en la crema para el cuerpo. Sin inocular muestras de cada cosmtico sirvi como control. CTFA prueba Dos cepas de referencia, S. aureus (ATCC 4338) y

P. aeruginosa (ATCC 9027), y dos aislados del productos analizados, Pseudomonas putida y Staphylococcus epidermidis, se utilizaron para realizar la prueba CTFA, con ligera modificacin. Los cultivos se mantuvieron en TSA y transferido dos veces en caldo de soja Triptona (TSB, Oxoid) (inculo 10%) a 37 C durante 24 h. La ltima transferencia fue la suspensin del inculo (106 ml de clulas) 1). En el momento de cero, cuatro muestras (50 g) de cada ensayo fueron productos inocularon respectivamente con ml 01 de cada suspensiones de inculo. Las muestras se agitaron y se mantuvo a habitacin temperatura (RT). Despus de un tiempo de contacto de 0, 3, 7, 14, 21 y 28 das, 1-ml alcuotas fueron retirados y se coloca sobre 9 ml de medio de caldo neutralizante Leethen (Difco, Miln, Italia) (Nostro et al., 2002). La viabilidad celular se determin por el mtodo de recuento en placa de TSA y UFC fueron contados despus de 24 h de incubacin a 37 C. Todas las determinaciones se realizaron por duplicado. Una reduccin en el nmero de cada microorganismo de 999% por 7 das fue necesario a fin de que la formulacin para pasar la prueba. FUI prueba Los mismos microorganismos se utilizaron en el FUI prueba. Los cultivos, mantenidos en TSA (Oxoid), fueron transferido en TSB (Oxoid) y se incubaron a 37 C a llegar a un OD610 013-018, correspondiente a 108 ml de clulas) 1 (medido por sprectrophotometer). Cuatro muestras (20 g) de los dos productos de ensayo fueron inocularon respectivamente con ml 01 de cada suspensiones bacterianas. Las muestras inoculadas, despus de agitar, se mantuvieron a temperatura ambiente, despus de un tiempo de contacto de 0, 2, 7, 14 y 28 das de desafo, alcuotas de muestra (1 ml) fueron eliminado y se contaron de acuerdo con el mtodo descrito supra (Nostro et al. 2002). El criterio de aceptacin para la prueba era un FUI logartmica (log10) reduccin de 3 de los microorganismos viables por el 7 da del desafo. Ensayo de incitacin rpida (slo para bacterias Gram-negativas) Una porcin 50-g de los dos mencionados productos cosmticos fueron desafiados con 0,1 ml de suspensin de caldo que contiene ms de 106 clulas ml) 1 de bacterias Gram-negativas (P. putida aislado de nuestros productos cosmticos y el cepa de referencia de P. aeruginosa ATCC 9027). Veinte gramos de los dos productos de ensayo se diluyeron con el fin de obtener tres concentraciones finales: 100%, 90% y 80% de el producto. Alcuotas (1 ml) se retiraron de cada concentracin de las muestras despus de 24 horas y 7 das a partir de desafo y contado de acuerdo con el mtodo descrito anteriormente

(Nostro et al., 2002). El criterio de aceptacin se establece como sigue: i el producto que muestra ms de 102 UFC ml) despus de un 24 horas de desafo, tanto en el producto sin diluir y en el producto diluido, se considera una alta contaminacin riesgo del producto; ii si una disminucin progresiva en los valores CFU en la diferente diluciones (al menos el 80% de dilucin) despus de 24 h, y ausencia de crecimiento bacteriano despus de 7 das de desafo Se observ, el producto se considera un medio-bajo riesgo de contaminacin del producto; iii en ausencia completa de crecimiento bacteriano despus de 24 h, y 7 das de desafo en todas las diluciones, el producto es considera bien conservado. Los anlisis estadsticos Prueba exacta de Fisher P se realiz para evaluar la estadstica importancia en la reduccin de crecimiento bacteriano por el tres pruebas de provocacin utilizado. Resultados La contaminacin microbiolgica de 91 productos cosmticos, en tres estados diferentes de uso (intacto, en uso, poniendo fin a producto) se evalu. Los resultados de esta primera fase de la investigacin se reportan en la Tabla 1. Como se muestra, no se observ contaminacin en O / W emulsiones y en pastas acuosas, mientras que entre el 47 tensiolytes, espuma de bao 135% (3/22), champ% 67 (1/15) y 10% jabones lquidos (1/10) result contaminada, la presentacin de cuentas totales que oscilan entre los 102 y 1 3 104 UFC ml) 1. En todos los casos la contaminacin fue encuentra en los productos finales, mientras que en un caso era observ en el producto en uso, as. Las especies aisladas Se identificaron como Staphylococcus warneri (dos casos), S. epidermidis (dos casos) y P. putida (un caso). Tabla 1 muestras contaminadas, la cuenta total de bacterias y especies bacterianas recuperadas de varios productos cosmticos en tres estados de uso (A, intacto producto; B, en el uso del producto; C, terminando producto), subdividido en la base de su riesgo de contaminacin Tipo de producto cosmtico de las muestras N de cierre / contenedores Muestras positivas de n (%) Recuento total de bacterias (UFC ml) 1) A B C A B C especies aisladas Alto riesgo de contaminacin emulsiones o / w Jarrones Mascarilla capilar 3 0 0 0 0 0 0 0 Jarrones Crema para el cuerpo 4 0 0 0 0 0 0 0 Dimetro de orificio amplio 2 0 0 0 0 0 0 0 Dispensador de 2 0 0 0 0 0 0 0

Floreros de crema para la cara 8 0 0 0 0 0 0 0 Jarrones de mano crema 1 0 0 0 0 0 0 0 Afeitar Jarrones crema 1 0 0 0 0 0 0 0 Purificacin dimetro locin orificio estrecho 1 0 0 0 0 0 0 0 Locin solar dimetro del orificio estrecho 1 0 0 0 0 0 0 0 Tensiolytes Bao de espuma de dimetro del orificio Amplio 8 0 0 1 (45) 0 0 1 103 S. warneri Dimetro del orificio estrecho 11 0 0 1 (45) 0 0 1 102 P. putida Dispensador de 3 0 0 1 (45) 0 0 6 102 S. epidermidis Dimetro del orificio de champ Broad 4 0 1 (67) 1 (67) 0 4 103 3 104 S. epidermidis Dimetro del orificio estrecho 11 0 0 0 0 0 0 0 Dispensador de jabn lquido 10 0 0 1 (10) 0 0 1 102 S. warneri Riesgo de contaminacin media: pastas acuosas Tubos de dentfrico 21 0 0 0 0 0 0 0

La eficacia de los sistemas conservantes, ensayada por desafo pruebas recomendadas por la CTFA, FUI y la ECA, es indican en las Tablas 2-4. Una reduccin 9999% en el nmero de clulas bacterianas (P <001) se observ despus de 7 das en los dos productos cosmticos probados de acuerdo con el procedimiento CTFA (Tabla 2), de manera similar, una reduccin logartmica de 3 (p <001) por el sptimo da en que se observ en los dos cosmticos probados, conforme a lo solicitado por el procedimiento FUI (Tabla 3). La rpida disminucin de la carga bacteriana, observada por P. putida y P. aeruginosa ATCC 9027 (Tabla 4) despus del 1 de y 7 das (p <001) de desafo en los tres utilizados diluciones de espuma de bao, identificar este producto como medio baja contaminacin producto de riesgo, de acuerdo con el criterio de la ECA. Por otro lado, en el cuerpo crema P. aeruginosa ATCC 9027, frente a P. putida, mostr UFC valores de ms de 102 UFC ml) 1 en el sin diluir, en el producto 90% y 80% diluida despus de 1 y 7 das de desafo, por lo que este producto puede ser considerado como un la contaminacin de productos de alta riesgo. Discusin El nivel de contaminacin microbiolgica en una estril producto, tales como formulaciones cosmticas, se hace evidente en las normas Lmite microbiano (Farmacopea Oficial Italiana: Anon 1994; cosmticos, artculos de tocador y perfumes Association, Inc., 2001). Estos valores deben mantenerse en los productos durante su uso, a pesar de la inevitable contaminacin por los usuarios, mediante la adicin de un conservante adecuado de los productos que garantiza el control del crecimiento microbiano incluso antes de que se comercializan (Linter y Genet 1998). Sin embargo, hay la escasa informacin en la literatura respecto a la eficacia de sistemas conservantes contenidos en los productos cosmticos para

controlar la contaminacin microbiana de estos productos durante su uso por los consumidores (Farrington et al 1994.; Okeke y Lamikanra 2001). De conformidad con la Directiva 2003/15/CE Europea que obliga a las industrias de cosmticos para firmar el mensaje de apertura de fecha de vencimiento de los productos cosmticos, en una primera fase Tabla 2 El porcentaje de reduccin del nmero de clulas bacterianas de crema para el cuerpo y las muestras de espuma de bao evaluado por la prueba CTFA Las cepas CTFA de prueba (% de reduccin) Inculo (UFC ml) 1) 0 h 3 das 7 das * 14 das 21 das 28 das Cosmticos ensayados: crema para el cuerpo S. aureus ATCC 4338 1 106 5000 9999 9999 9999 9999 9999 S. epidermidis 1 106 8000 9999 9999 9999 9999 9999 P. aeruginosa ATCC 9027 2 106 6000 9000 9999 9999 9999 9999 P. putida 2 106 9000 9999 9999 9999 9999 9999 Cosmticos ensayados: espuma de bao S. aureus ATCC 4338 1 106 2000 9990 9999 9999 9999 9999 S. epidermidis 1 106 8000 9999 9999 9999 9999 9999 P. aeruginosa ATCC 9027 2 106 7500 9999 9999 9999 9999 9999 P. putida 2 106 8000 9999 9999 9999 9999 9999 * Reduccin de> 999% conforme a lo solicitado por el procedimiento de CTFA en comparacin con el inculo (P <001). Tabla 3 Los recuentos medios en UFC ml) 1 para las muestras del cuerpo de espuma de crema y bao evaluada por FUI prueba Las cepas FUI prueba Inculo 0 h 2 das 7 das * 14 das 28 das Cosmticos ensayados: crema para el cuerpo S. aureus ATCC 4338 108 9 1 104 1 101 1 101 1 101 101 1 S. epidermidis 1 108 3 105 1 101 1 101 1 101 1 101 P. aeruginosa ATCC 9027 2 108 2 106 2 105 2 103 1 101 1 101 P. putida 2 108 3 105 1 101 1 101 1 101 1 101 Cosmticos ensayados: espuma de bao S. aureus ATCC 4338 1 2 108 106 1 101 1 101 1 101 1 101 S. epidermidis 1 108 4 106 1 101 1 101 1 101 1 101 P. aeruginosa ATCC 9027 2 108 1 106 1 101 1 101 1 101 1 101 P. putida 1 2 108 106 1 101 1 101 1 101 1 101 * Factor de reduccin logartmica de 3 de microorganismos viables, conforme a lo solicitado por el procedimiento FUI en comparacin con el inculo (P <001).
de nuestro estudio se investig la contaminacin microbiolgica de 91 productos cosmticos (O / W emulsiones, tensiolytes y pastas acuosas), disponible comercialmente, en tres diferentes estados de uso (intacto, en uso, el producto final). Los productos examinados intactos no mostr la contaminacin bacteriana,

mientras que las especies difundidas en el aire, suelo y agua, tales como Staphylococcus spp. y Pseudomonas spp., se tensiolytes recuperados en el en uso y que termina, que en un caso evidenciado valores CFU ms que el estndar lmite microbiano. La fuente probable de estos microorganismos es de las manos de los usuarios, como las cremas hidratantes son a menudo utilizada despus o independiente de lavado. La recuperacin de estas especies potencialmente patgenas en los tensiolytes examinados sugiri que el sistema de conservacin no era eficaz. Sin embargo, los sistemas conservantes de los tensiolytes no difieren sustancialmente de la utilizada en el sistema emulsiones, de modo que la contaminacin podra ser debido a su diferente Las formulaciones que podran haber parcialmente inactivados el sistema conservante. Adems, las emulsiones contener varias sustancias (agentes activos de superficie, bio-mimticos fosfolpidos) que pueden contribuir a travs de un sinrgico mecanismo para mejorar la conservacin de los productos (Nostro et al. 2002). En cuanto a la segunda parte de la investigacin, el conservante sistemas de las dos cosmticos probados, una combinacin de metilparabeno y propilparabeno, mostr duradero actividad antimicrobiana, la satisfaccin de la CTFA y FUI criterios. Sin embargo, cuando la ECA se utiliz, el cuerpo crema de no respetar el criterio sugerido por este procedimiento, debido a la resistencia intrnseca de P. aeruginosa a una amplia variedad de agentes antimicrobianos. Sobre la base de nuestros datos, apoyada por el uso de un solucin neutralizante que evit la eventual presencia de falsos positivos, la mayora de los productos cosmticos probados no representan un riesgo para el consumidor durante su uso. Sin embargo, la recuperacin de las especies patgenas de alguna tensiolytes en el uso y en productos terminados, aunque en un nmero limitado de casos, nos llev a suponer que la prueba de provocacin debe realizarse no slo durante el preparacin del sistema conservante en el cosmtico intacto productos, sino tambin debe ser utilizado para evaluar el proteccin eficacia de estos sistemas durante su uso, como recomendados por la Directiva 2003/15/CE Europea. Referencias Anon (1994) Farmacopea Ufficiale della Repubblica Italiana, Novena edicin, Supl. III. pp 67-71. Roma: Istituto Poligrafico e Zecca dello Stato. Anon (1998) Farmacopea Europea. Estrasburgo, Francia: Farmacopea Europea Secretara. Anon (2006) EE.UU. Convencin de la Farmacopea. Rockville, MD: EE.UU. Farmacopea. Barrow, G. y Feltham, R. (1993) Manual de Cowan y Steel para la identificacin de bacterias mdicos, EDN tercero. Cambridge: Cambridge University Press. Becks, V. y Lorenzoni, N. (1995) Pseudomonas aeruginosa brote en una unidad neonatal de cuidados intensivos: un posible vnculo con locin para las manos contaminadas. Am J Infect Control 23, 396-398. Behravan, J., Bazzaz, F. y Malaekeh, P. (2005) Encuesta de contaminacin bacteriolgica de las cremas cosmticas en Irn (2000). Int J Dermatol 44, 482-485.

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de cremas hidratantes de la piel y lociones, distribuidos en un pas tropical en desarrollo. J Appl Bacteriol 91, 922-928. Contaminacin durante su uso cosmtico R. Campana et al. Compilacin de los 306 de 2006 La Sociedad de Microbiologa Aplicada, Letters in Applied Microbiology 43 (2006) 301-306