FOLOSIREA METODELOR CROMATOGRAFICE N ANALIZA DROGURILOR

FOLOSIREA METODELOR CROMATOGRAFICE N ANALIZA

DROGURILOR
Drogurile cel mai des ntlnite n traficul ilicit sunt : canabisul , heroina i cocaina importate ilegal din locurile unde se produc, precum i L.S.D-ul i amfetaminele, fabricate chiar n rile productoare. Indiferent de rezultatele obinute prin folosirea metodelor prezumtive, organele judiciare sunt obligate s dispun efectuarea analizelor tiinifice de laborator pentru a confirma identitatea substanelor ori produselor descoperite. Aceasta deoarece, dei toate testele menionate anterior reaciile de culoare, precipitare sunt folosite n ntreaga lume, ele nu le pot nlocui pe cele efectuate n laboratoarele specializate, singurele care constituie probe i pot constitui temei pentru trimiterea n judecat i condamnarea faptuitorilor. Drogurile trimise la laboaratoarele de specialitate sunt examinate, in mod obinuit, prin cromatografie, n vedera determinrii naturii i puritii lor. Cele mai fecvent utilizate metode cromatografice, n analiza stupefiantelor i toxinelor sunt: cromatografia pe strat subire TLC, caromatografia de gaze - GC, i cromatografia de lichide de nalt performan- HPLC. Metodele cromatogtafice sunt, de fapt, metode de separare i dei selectivitatea lor nu atinge un procent foarte ridicat, ele au un rol deosebit, mai ales atunci cnd sunt utilizate n combinaie cu unele tehnici de mare selectivitate, cum ar fi cele spectrometrice. De asemenea nu trebuie omis faptul c rezultatele ce se obin au valoare limitat, mai ales datorit prezenei n substana examinat a unor constituieni ce pot interfera n analiz. Dar potrivit opiniei specialistilor, procedeele cromarografice de separare sunt indispensabile n analiza amestecurilor complexe de stupefiante, informaiile de detaliu privitoare la constituienii minori oferind posibiliti sporite de evaluare a substanelor sau produselor descoperite.

Cromatografia pe strat subire

De la nceput trebuie precizat faptul ca cromatografia pe strat subire este o tehnica de separare, in conditii bine controlate, ea poate conduce att la identificarea cat i la cuantificarea drogurilor. Pe de alt parte, este de reinut c utilizarea unei astfel de metode nu d rezultate n cazul tuturor stupefiantelor, ci numai n cazul opiului (bineneles si n cazul derivatilor si ) i canabisului. n cazul opiului i derivailor din opiu se folosesc plci cu silicagel ,,G pe suport de aluminiu sau stic avnd grosimea de 250 m, iar ca revelator se utilizeaz o solulie de iodoplatinat de potasiu. Solventii cei mai frecvent folositi sunt: toluen aeeton-, etanol amoniac 25%- (n raportul- 45/45/7/31), acetat de etil metanol amoniac 25% (in raportul 85/10/5) i metanol amoniac 25% (in raportul 99/1).

La analiza cannabisuiui se lucreaz pe aceleai plci, reactivul de vizualizare fiind ns o solutie de Fast Blue B. Salt, iar ca solventi sunt folositi: toluen eter de petrol ori eter etilie (80/20) sau eter de petrol- eter etilic (50/50) Dup cum este cunoscut, analiza cromatografica pe strat subtire se bazeaza pe coeficientul de repartitie diferit al unei substane care trebuie examinat ntre dou faze: faza staionar depus pe suportul de sticl sau de aluminiu-placa cromatografic i faza mobil solvent ori amestecuri de solveni-aleas n concordan cu natura substanei ce urmeaz a fi analizat. Raportul dintre distanta de migrare a unui component i cea a solventului RF este caracteristic fiecrei substante, dac se mentin aceiasi parametri de lucru. Tehnica de lucru este urmtoarea: cu ajutorul unei micropipete, amesteeul ce trebuie analizat este spotat la 2 mm de la unul din capetele placii cromatografice (cea care va fi introdus n ameatecul de solventi), n 5-6 puncte situate la aceeai nlime i la distan egal ntre ele. Anterior, placa cromatografic- acoperit cu silicagel ,,G2 trebuie s fie activ, acest lucru realizndu-se prin mentinerea ei n etuv, la temperatur de 105C, pe o durat de 30 minute. Dup uscarea spoturilor, placa este introdus n cuva de developare, n care s-a introdus in prealabil o cantitate de solvent (de regul solventul se introduce n cuv cu aproximativ o or nainte de introducerea plcii cromatografice, permind astfel saturarea atmosferei din cuv cu vaporii solventului). n continuare se acoper cuva i se permite migrarea pe o distan de 15 cm de la linia de start a amestecurilor de analizat, n medie circa 30-40 de minute, dup care se scoate placa i se marcheaz frontul solventului, examinandu-se placa n radiaii UV. Se marcheaz eventualele spoturi observate. Placa este lsat s se usuce i apoi este pulverizat cu reactivii alei pentru vizualizare. Se las din nou placa s se usuce reexaminndu-se att n lumin natural, ct i n radiaii U.V i notndu-se spoturile observate. De asemenea se noteaz culorile spoturilor obinute, cu reactivii de vizualizare utilizai. Dup aceasta se trece la determinarea valorilor RF (factorului de retentie) pentru fiecare component separat din substana analizat si se fac raporturile, att cele dintre distantele de la punctul de spotare pan la centrul petei ce corespunde fiecrui element separat, cat i cele de la punctul de spotare i nlimea frontului solventului. Identificarea orientativ a componenilor separai se face cu ajutorul valorilor RF obtinute reinndu-se i culorile rezultate din tratarea cu reactivi de vizualizare, prin compararea acestora cu datele similare furnizate de cataloage i literatura de specialitate. Pentru precizare se repet analiza de data aceasta spotndu-se pe aceeai plac cromatografic i substana de analizat, dar i unele probe martor cunoscute (aceste probe martor au n conditiile de

lucru folosite valori RF apropiate de cele ale componenilor separai din substana supus analizei). n final identificarea devine posibil prin examinarea celei de-a doua plci cromatografice i compararea valorilor RF ale probelor martor cu cele ale componenilor necunoscui. Cromatografia pe strat subre dei este n primul rnd o tehnic de separare, prezint o serie de avantaje fa de cromatografia de gaze i fa de cromatografia de lichide de nalt performan. Dintre avantaje, amintim: aparatura folosit este simpla, iar pretul de cost sczut; rapiditatea n efectuarea determinrilor, nemaifiind necesar intrarea n regim a aparatelor. posibilitatea lucrrii simultan pe mai multe probe inclusiv pe probele martor; mare flexibilitate in alegerea fazelor staionare i mobile; cantitatea mica de soluie spotat; analizele pot fi pstrate ca probe martor att ct este necesar, cromatografia pe strat subire neridicnd probleme de stabilitate termic sau volatilitate. Aceast metod este mereu mbuntit, progrese considerabile nregistrndu-se pe linia sistemelor de solveni i vizualizarea compuilor pe plcile cromatografice, determinrilor de ordin cantitativ, analizelor de cromatografie pe strat subite de nalt performan si developri bidimensionale. Dar, aa cum rezult din literatura de specia1itate i practica curent a laboratoarelor de toxicologie nici un sistem nu este capabil de o rezolutie suficient pentru separarea tuturor stupeflantelor. De exemplu, nici un sistem nu este capabil s realizeze separarea opioizilor, cocainei i anestezicilor locale. Din acest motiv, cromatograflia pe strat subtire trebuie urmat de alte tehnici care s confirme rezultatele. Altfel spus, cu excepia opiului i derivalor si i a canabisului aceast metoda nu poate fi utilizata ca singur criteriu ana1tic.

Cromatografia de gaze
Deriumit i cromatografie n faz gazoas sau gaz-cromatografie, aceasta este una dintre cele mai moderne i valoroase metode de separare. Ea presupune transformarea componilor substantei sau produsului ce urmeaz a fi analizat n gaze sau vapori, care sunt transportai de un gaz inert printro coloan cromatografic. Identificarea substantelor analizate se face la iesirea din coloan prin intermediul unui detector, rezultatul aprnd sub forma unei cromatograme. Stupefiantele sunt analizate prin timpii de retenie relativi i prin valorile raspunsurilor primite de la detectori. In ultimul timp, prin introducerea n calculator a datelor referitoare la timpii de

retentie relativi si ariile picurilor, exist posibilitatea comparrii automate a acestora cu valorile nregistrate anterior n urma analizelor fcute pe amestecuri standard. Specialitii recomand ca tolerantele fixate pentru comparatii s fie suficient de mici, pentru a reduce la minimum riscul unei identificri false (aa numitul fals pozitiv) dar i n acelai timp suficient de mari pentru a preveni erorile de nedepistare (ceea ce n limbajul de specialiate este denumit fals negativ). Folosirea cromatografiei de gaze n analiza opiozilor ridic serioase probleme datorate, in mare msur polaritii foarte ridicate a acestor compui.Obstacolul poate fi depit prin derivatizare, aceast operaie avnd ns efect asupra timpului de efectuare a analizei. Expenientele recente n domeniu au demonstrat c denivatizarea cu N, O- bis trimetilsiliacetamid sau bis-trimetilsilil-2,2,2-trifluoracetamid conduce la o separare eficient a tuturor compuilor din opiu. i analiza heroinei prin cromatografia de gaze ridic probleme deosebite datorate transacetilrii ntre morfin i diacetilmorfin. n prezent pentru prevenirea transacetilrii se ncearc gsirea unor ageni de blocare. De asemenea, interferenta adulterantilor n determinare fac problematic metoda gazcromatografic n cazul cocainei. Pentru obtinerea unor rezultate concludente, i la cocain este absolut necesar derivatozarea. Datorit instabilittii compuilor trecui prin coloan, cromatografia de gaze nu este satisfctoare n cazul L.S.D ului i a cannabisului. n schimb ea d rezultate bune i este folosit cu succes n analiza derivailor barbiturici. Folosirea acestei metode acolo unde ofer rezultate prezint avantaje concretizate n: preul echipamentelor relativ mic; creterea preciziei i operativitii prin recurgerea la un autoinjector; cantitile foarte mici de substan de ordinul nanogramelor necesare analizei; posibilitatea cuplrii gaz-cromatografelor cu un spectrometru de mas, fapt ce conduce la creterea calitativ a analizei. In afara analizrii stupefiantelor propriu-zise cromatografia de gaze i gsete domeniul de aplicare i in analiza celorlalte substane sau produse toxice n special a pesticidelor. Metoda gaz-cromatografiei este suseeptibil de mbuntiri, experientele recente viznd perfecionarea coloanelor prin introducerea coloanelor capilare, a fazelor stationare, utilizarea unor deteetori de sensibiiitate mai mare, gsirea unor noi metode de derivatizare, stabilirea unor conditii optime pentru determinri cantitative cat mai precise, precum i utilizarea analizei comparatorii pentru determinarea amprentei chimice a substanei supuse analizei.

Cromatografia de 1ichide de inalt performan

Aceasta metod este caracterizat printr-o sensibilitate superioar cromatografiei pe strat subtire. n principiu, functionarea se face ntr-o coloan sub presiune, urnplut cu un absorbant silice sau alumin, n care sunt injectate preparatele din substan ce urmeaz a fi identificat. La ieirea din coloan, elementele specifice sunt detectate prin diverse proedee fizieo-chimice. Cu siguran cromatografia de lichide de nalt frecven este metoda cea mai precis i sigur n analiza stupefiantelor, cu ajutorul ei find bine separate opiaceele, cocaina. (chiar nsoit de alte anestezice locale) amfetaminele halucinogene, derivaii barbiturici cannabisul. Trebuie facut ns precizarea c amfetarninele, derivatii barbiturici i cocaina prezint proprieti favorabile de detecie prin cromatografia de gaze, motiv pentru n analiza L.S.D.-ului, a psilocinei i a cannabisului. De exemplu, L.S.D.-ul este foarte bine separat dac se folosete o coloan de silice Sil-X i sistemul de solventi acetonitril (40%-) i eter izopropilic (60%) ori o colon de silice de tip Sferisorb cu faza mobil 0,01 M perelorat de amoniu n mentol. Pentru o mai bun separare a cannabistilui literatura de specialitate recomand utilizarea unei coloane de tip Sfenisorb S 50 DS i faza mobil acid sulfuric 0,02M/metanol/acetonitril (7/8/9). Prezentarea succint a metodelor cromatografice de analiz conduc la concluzia c fiecare dintre acestea au valoare limitat, ceea ce presupune utilizarea mai multor tehnici de acest gen, cu sisteme de solventi i faze stationare cat mai diferite. care n cazul unor astfel de substane, cromatografia de lichide de nalt performan este mai rar utilizat. Ea este ins extrem de utiizat

Bibliografie

Poroch Maria - Depistarea i analiza drogurilor