[REGRESAR]

NATURALEZA MOLECULAR DEL GEN Y DEL GENOMA

Viviana Sabbatino- Andrea Lassalle- Gladys Glvez- Silvia Mrquez

INTRODUCCIN
Desde que el hombre se ha dedicado al cultivo o ha criado animales, resulta obvio que cada semilla o cada vulo fecundado ha de contener un plan o diseo para el desarrollo del organismo. En la poca moderna, la ciencia de la gentica se desarroll alrededor de la premisa de que existen unos elementos invisibles portadores de informacin, denominados genes, que son distribuidos a las clulas hijas cuando la clula madre se divide. Por consiguiente, antes de dividirse una clula debe de hacer una copia de sus genes para poder ceder a sus clulas hijas una coleccin completa de ellos. Los genes de los espermatozoides y de los vulos transmiten la informacin gentica de una generacin a la siguiente. Hacia finales del siglo XIX, los bilogos haban reconocido ya que los transportadores de la informacin hereditaria eran los cromosomas que resultan visibles en el ncleo cuando una clula comienza a dividirse. Pero la evidencia de que es el ADN de estos cromosomas la sustancia de la que estn formados los genes, se obtuvo mucho ms tarde a partir de estudios sobre microorganismos. Hasta entonces se haba credo que slo las protenas presentaban una complejidad conformacional suficiente como para ser portadoras de la informacin gentica. El modelo del ADN propuesto por Watson y Crick en 1953 brind una explicacin satisfactoria de la forma en que pueden operar los procesos relacionados con una molcula depositaria de la informacin gentica: el almacenamiento de informacin, su replicacin, su expresin, la mutacin y la recombinacin. El presente captulo tratar acerca de la naturaleza de los genes y su expresin en dos pasos: la transcripcin y la traduccin; asimismo nos ocuparemos de los mecanismos de regulacin que controlan la expresin gentica.

EL CONCEPTO DE GEN
El genoma es el conjunto de genes de una especie. Pero qu es un gen?. En principio es una unidad informativa discreta, responsable de una caracterstica transmisible, vg. el color de ojos, la textura de la semilla, la longitud del tallo. Este es el concepto mendeliano del gen, acuado en el siglo XIX, cuando an se desconoca su verdadera naturaleza qumica. Esta definicin del gen sigue siendo til en determinado contexto, con la salvedad de que hoy identificamos a dicha unidad de informacin con un fragmento de ADN localizado en determinado lugar de un cromosoma. Una segunda concepcin del gen surgi cuando los genetistas demostraron de forma concluyente que los genes especifican la estructura de las protenas

individuales. A principios de los aos 1950 se lleg a conocer la secuencia de aminocidos de la protena insulina y se descubri que cada protena consiste en una secuencia de aminocidos tpica, de la cual, se supuso, dependeran sus propiedades. Al mismo tiempo se correlacionaron mutaciones (alteraciones en la secuencia de nucletidos del ADN) con alteraciones de la secuencia de aminocidos en las protenas. Result evidente que la secuencia del ADN especifica, mediante algn cdigo, la secuencia proteica. Un gen es, entonces, una secuencia de ADN con la informacin necesaria para la sntesis de una protena particular. Dado que el ADN es una molcula relativamente inerte, su informacin se expresa indirectamente, a travs de otras molculas. El ADN dirige la sntesis de protenas y stas determinan las caractersticas fsicas y qumicas de la clula. Como ya adelantramos, las instrucciones genticas contenidas en el ADN se expresan en dos pasos. El primero de ellos, la transcripcin, consiste en la sntesis de ARN a partir del ADN. El ARN contiene toda la informacin de la secuencia de bases del ADN de la que ha sido copiado. El segundo paso de la expresin gentica es la traduccin, momento en el cual el ARN ejecuta las instrucciones recibidas cristalizndolas en la sntesis de una protena especfica. Existen diversos tipos de ARN: el ARNm (mensajero), el ARNr (ribosmico), el ARNt (de transferencia) y los ARN pequeos. De todos ellos, tan slo el ARNm es portador de informacin acerca de la secuencia aminoacdica de una protena; sin embargo todos ellos son transcriptos de ADN. Por lo tanto, resulta necesario revisar la segunda definicin del gen. Hoy se acepta que un gen es una secuencia de ADN transcripta que genera un producto con funcin celular especfica. Cabe aclarar, no obstante, que esta definicin no es completamente satisfactoria, en la medida en que existen regiones reguladoras de los genes, que no se transcriben, y otras regiones (llamadas intrones) que se transcriben pero se eliminan sin cumplir ninguna funcin aparente.

LA ORGANIZACIN DEL GENOMA

Con la excepcin de ciertos virus, que contienen un genoma de ARN, el resto de los genomas utiliza el ADN como depositario de la informacin gentica. Sin embargo, debemos sealar algunas diferencias significativas en cuanto a la organizacin del genoma en procariontes y eucariontes. En primer lugar, el ADN procarionte se presenta como una nica molcula circular, en tanto el ADN eucarionte es de estructura lineal. Adems las clulas eucariotas poseen usualmente ms de una molcula de ADN en sus ncleos. Cada molcula corresponde a un cromosoma, cuyo nmero es constante para todas las clulas de una misma especie (con excepcin de las gametas). El ADN eucarionte, por otro lado, se halla asociado ntimamente a diferentes protenas, entre las cuales las histonas juegan el papel ms importante en lo que respecta al empaquetamiento del ADN. Esta asociacin a histonas no se verifica en el ADN procarionte, por lo cual se lo ha denominado ADN desnudo. En las clulas eucariotas los cromosomas estn confinados en el compartimiento nuclear, donde

tiene lugar la transcripcin, mientras que la traduccin se localiza en el citoplasma; por lo tanto, ambos procesos se encuentran separados espacial y temporalmente. Esto permite que los transcriptos de ARN experimenten en el ncleo un proceso de maduracin previo a la traduccin. En las clulas procariotas, donde no existe la envoltura nuclear, el ADN est en contacto directo con el citosol, y los procesos de transcripcin y traduccin no se hallan separados en espacio ni en tiempo. Los ARNs no son sometidos a modificaciones postranscripcionales. Los eucariontes tienen genomas mucho ms grandes que los procariontes. Aunque el valor C (cantidad haploide de ADN de una especie) es muy variable entre los mismos eucariontes (ver tabla 1), es siempre notablemente mayor que el de los procariontes. No necesariamente un mayor valor C refleja una mayor complejidad gentica (vase en tabla 11.1 valores de Salamandra y Homo sapiens). En los procariontes se da una mxima economa de informacin: en casi todos los casos cada cromosoma contiene una sola copia de cualquier gen particular, y, con excepcin de las secuencias reguladoras y sealadoras, prcticamente se expresa todo el ADN. En cambio, en toda clula eucariota parecera haber un gran exceso de ADN, o por lo menos de ADN cuyas funciones se desconocen por completo. Por ejemplo, la estimacin del ADN innecesario en los seres humanos llega a ser tan elevada como el 95% del genoma.

EL CDIGO GENTICO
Hemos visto que los genes son segmentos de ADN situados en los cromosomas, que se comportan como unidades de transcripcin. Hemos sealado tambin que muchos de los ARN transcriptos son productos celulares finales con funcin propia (al margen de las modificaciones postranscripcionales que requieran para completar su maduracin), es decir que, en alguna medida, la transcripcin es un paso terminal de la expresin de ciertos genes. Sin embargo, sabemos que muchos otros genes contienen la informacin necesaria para especificar la secuencia de aminocidos de las tantas protenas que una clula es capaz de sintetizar. En estos casos, la transcripcin es tan slo el primer paso de la expresin gentica. Los ARN obtenidos, ARN mensajeros, son, como su nombre lo indica, meros transportadores de informacin que an debe ser decodificada, informacin que debe traducirse en la sntesis de una protena. La traduccin es el segundo paso de la expresin gentica.

Fig. 11.1 - Flujo de informacin gentica

De qu manera la estructura de una molcula de ARNm lleva implcita la informacin para construir una protena? La informacin reside en la secuencia de bases y est escrita en un cdigo propio al que llamamos cdigo gentico. Muchas de las caractersticas del cdigo gentico fueron anticipadas en forma terica a partir del descubrimiento del ARNm. Pero en el ao 1961, Nirenberg y Matthaei desarrollaron una tcnica que abri el camino para que en los siguientes cuatro aos el cdigo gentico fuera enteramente descifrado. Podemos pensar al cdigo gentico como un idioma. Los idiomas utilizan una cierta cantidad de letras, stas se combinan para formar palabras, y cada palabra tiene un significado, designa a un objeto particular. En el cdigo gentico estn presentes todos estos elementos: las letras son las 4 bases que forman las cadenas de ARN (A, U, C, G); las palabras son siempre agrupaciones de 3 letras o tripletes de bases, llamadas codones en la molcula del ARNm, y los objetos designados por dichas palabras son cada uno de los 20 aminocidos que componen las protenas. Por qu las palabras-codones se forman con 3 bases? Si cada palabra constara de 1 base, habra 4 palabras, y si se formara con 2, las palabras posibles seran 16. En ninguno de los casos alcanzaran para designar a todos los aminocidos. Pero se pueden obtener 64 combinaciones diferentes si las bases se combinan de a 3; 64 codones son ms que suficientes para nombrar a los 20 aminocidos. Cul es la funcin de los 44 codones restantes? As como en cada idioma existen palabras distintas con un mismo significado, el cdigo gentico emplea codones diferentes para nombrar a un mismo aminocido. La mayora de los aminocidos estn codificados por ms de 1 codn: existen codones sinnimos. La presencia de codones sinnimos en el cdigo gentico habla de una degeneracin, caracterstica que, lejos de resultar desventajosa, reporta a las clulas sus beneficios. Los codones sinnimos son muy similares entre s, por lo tanto la sustitucin de una sola base en un codn frecuentemente da por resultado otro codn que especifica al mismo aminocido. Por otra parte, aminocidos de propiedades semejantes son codificados por codones semejantes. Si en una protena se reemplaza un aminocido hidrfobo por otro de iguales caractersticas a consecuencia de una mutacin, las chances de que el cambio sea viable son mayores. Esta flexibilidad del cdigo no debe confundirse con ambigedad: el cdigo no es ambiguo, en tanto cada codn especifica a uno y slo a un aminocido. As no da lugar a error en el momento de ser traducido. Los codones que codifican aminocidos suman en total 61. Los 3 codones que no especifican ningn aminocido, UGA, UAG y UAA, actan como seales de terminacin en la traduccin o sntesis de protenas. Son llamados codones de terminacin o stop. La tabla del cdigo que se halla a continuacin es vlida para los seres vivos ms diversos: el hombre, las bacterias, las levaduras, las plantas. El cdigo gentico es universal, lo cual da prueba de que todos los organismos comparten un mismo origen. Una de las contadas excepciones a la universalidad del cdigo es el ADN mitocondrial, en el cual algunos codones son ledos de manera diferente.

TABLA 11.2 - Cdigo gentico SEGUNDA LETRA U UUU fenilalanina UUC fenilalanina U UUA leucina UUG leucina CUU leucina CUC leucina C CUA leucina PRIMERA LETRA CUG leucina AUU isoleucina AUC isoleucina A AUA isoleucina AUG metionina GUU valina GUC valina G GUA valina GUG valina EL MARCO DE LECTURA De qu manera se leen los codones durante la sntesis proteica? Consideremos la siguiente secuencia de bases de un ARNm: 5-----GUUCCCAUA----3 Si comenzamos la lectura en la G situada hacia el extremo 5, este mensaje podra ser traducido como una secuencia de tres aminocidos (las palabras del cdigo se leen de corrido, sin ningn signo de puntuacin entre ellas): Valina - prolina - isoleucina ACA treonina AAA lisina ACG treonina AAG lisina GCU alanina GCC alanina GAU aspartato GAC aspartato GGU glicina GGC glicina GGA glicina GGG glicina U C A G AGG arginina G CCA prolina CCG prolina ACU treonina ACC treonina CAA glutamina CGA arginina CAG glutamina AAU asparagina AAC asparagina CGG arginina AGU serina AGC serina AGA arginina A G U C A TERCERA LETRA UCA serina UCG serina CCU prolina CCC prolina UAA stop UAG stop CAU histidina CAC histidina C UCU serina UCC serina A UAU tirosina UAC tirosina G UGU cistena UGC cistena UGA stop UGG triptfano CGU arginina CGC arginina U C A G U C

GCA alanina GAA glutamato GCG alanina GAG glutamato

Cul sera la traduccin del mensaje si en cambio la lectura se iniciara en la primera U desde el extremo 5? fenilalanina - prolina Con este simple ejemplo resulta evidente que el sitio de inicio de la traduccin es de importancia capital para la correcta traduccin del mensaje. Qu determina que la lectura comience en el sitio correcto? Los ARNm portan un codn, el AUG (codifica metionina), que es interpretado por los ribosomas como codn de iniciacin. Este codn da el marco o cuadro de lectura que ser empleado de all en ms. En adelante, el ribosoma se desplazar a lo largo del ARNm en bloques consecutivos de tres bases, garantizando la lectura de los codones apropiados. Las mutaciones que implican ganancia o prdida de un nucletido resultan ms destructivas que las sustituciones, pues al modificar el marco de lectura, alteran por completo el mensaje. Por ltimo hemos de sealar que el cdigo es ledo sin solapamiento. Esto significa que cada nucletido del mensaje es utilizado como componente de un solo codn (aunque nuevamente existen excepciones).

Fig. 11.2 - Solapamiento del cdigo

Caractersticas del Cdigo Gentico

El cdigo gentico consta de 64 codones o tripletes de bases.61 codones codifican aminocidos. 3 codones funcionan como seales de terminacin. El cdigo no es ambiguo, pues cada codn especifica a un solo aminocido. El cdigo es degenerado, ya que un aminocido puede estar codificado por diferentes codones. Es universal, debido a que sus mensajes son interpretados de la misma forma por todos los organismos. Utiliza un marco de lectura establecido al inicio de la traduccin y no lo modifica. No se produce solapamiento de codones.

EL PROCESO DE LA TRANSCRIPCIN
La transcripcin consiste en la sntesis de ARN a partir de un molde de ADN. A continuacin realizaremos una descripcin general del proceso de transcripcin tomando en cuenta los aspectos comunes a la sntesis de los distintos tipos de ARN. La transcripcin, tanto en clulas procariotas como eucariotas, involucra la participacin de una enzima ARN polimerasa ADN dependiente. sta sintetiza una cadena de ARN cuyos inicio, terminacin y secuencia de bases vienen determinados por el propio gen. El primer paso de la transcripcin es la unin de la enzima ARN polimerasa a una regin del gen llamada promotor. El promotor es una secuencia especfica de bases con alta afinidad por la enzima, por lo que proporciona a la misma su sitio de unin al ADN. Es asimismo una seal que indica cul cadena se ha de transcribir. La transcripcin es asimtrica, pues usualmente slo se transcribe una de las dos cadenas que forman cada gen. La cadena que acta como plantilla es la cadena molde, negativa o no codificante; la hebra no transcripta, complementaria de la anterior, se denomina antimolde, positiva o codificante. La ARN polimerasa se desplaza sobre la cadena molde, recorrindola en direccin 3 => 5 o ro abajo y transcribindola a partir del nucletido que el promotor seala como punto de inicio de la transcripcin. Este nucletido se nombra +1 y los siguientes, ro abajo, siguen la numeracin correlativa (+2, +3, etc.). Partiendo desde el punto de inicio en la direccin contraria, es decir ro o corriente arriba, los nucletidos se numeran 1, -2, etc. La ARN polimerasa slo puede desplazarse y transcribir si previamente la doble hlice sufre un desenrollamiento y fusin (separacin de las cadenas complementarias por ruptura de los puentes de hidrgeno entre las bases). La misma enzima cataliza ambos procesos, generando hacia el extremo 3 una burbuja de transcripcin, un tramo de aproximadamente 12 nucletidos de longitud, en el cual las cadenas permanecen desapareadas. La burbuja de transcripcin aparenta avanzar ro abajo junto con la enzima, pues a medida que progresa la fusin por delante de ella, la doble hlice se recompone por detrs. La formacin de la burbuja causa una supertorsin o superenrollamiento de la doble hlice en los sectores ubicados hacia el extremo 5 del molde. Este fenmeno es corregido por la accin de una enzima topoisomerasa I.

Fig. 11.3 - Burbuja de transcripcin

Cuando el molde ya ha sido desapareado en la burbuja de transcripcin y expone sus bases, stas son reconocidas por la ARN polimerasa. A medida que la enzima lee la plantilla, coloca junto a cada base de la misma el ribonucletido trifosfato portador de la base complementaria. A los desoxirribonucletidos de A, T, C y G se le aparean, respectivamente, los ribonucletidos de U (recordemos que el ARN no contiene T), A, G y C mediante puentes de hidrgeno. Una vez ubicados los dos primeros ribonucletidos, la enzima cataliza la formacin del puente fosfodister entre ambos, inicindose la cadena de ARN.

Fig. 11.4 - Direccin de la transcripcin

El enlace fosfodister se produce entre el hidroxilo en posicin 3 del primer nucletido y el grupo fosfato interno, en posicin 5, del segundo. Un grupo pirofosfato de este ltimo es liberado como producto y escindido rpidamente en dos fosfatos por la accin de una pirofosfatasa. Dicha ruptura es tan exergnica que la reaccin inversa se torna prcticamente imposible. As, desde el punto de vista termodinmico, se favorece la sntesis de la nueva cadena. Por lo tanto, son los mismos sustratos los que, por estar trifosfatados, aportan la energa necesaria para su polimerizacin.

Fig. 11.5 - Incorporacin de ribonucletidos en el extremo 3' de ARN

Este procedimiento se repite tantas veces como nucletidos contenga el molde, de tal manera que el ARN va creciendo en forma antiparalela a aqul, es decir, desde su extremo 5 (el que qued libre en el primer nucletido) hasta su extremo 3 (que quedar libre en el ltimo nucletido aadido). La direccin de la sntesis del ARN es 5 => 3. Siempre los nucletidos recin incorporados al ARN forman una hlice corta ARN-ADN con su plantilla. Esta hlice hbrida es transitoria, pues conforme el polmero se alarga por su extremo 3, el extremo 5 se separa del molde, el cual vuelve a emparejarse con su hebra de ADN complementaria. La transcripcin concluye cuando la ARN polimerasa alcanza una seal (una secuencia especfica de bases del ADN) que acta como seal de terminacin. El producto obtenido, un ARN transcripto primario, resulta una copia complementaria y antiparalela de una regin del gen comprendida entre el punto de inicio y la seal de terminacin.

Fig. 11.6- ARN en distintos estadios de transcripcin sobreel mismo gen El transcripto primario repite la direccin y la secuencia (excepto porque lleva U en vez de T) de la hebra no copiada o antimolde, lo que justifica que a esta ltima se apliquen las denominaciones de hebra positiva o codificante. Es la cadena convencionalmente elegida para representar un gen. Cabe aclarar que al describir la transcripcin en forma general, hemos omitido la mencin de regiones reguladoras de los genes, bajo cuyo control se encuentran los acontecimientos analizados. Este aspecto del tema ser desarrollado ms adelante en el mismo captulo. En el siguiente cuadro resumimos los requisitos de la transcripcin:

 Una molcula de ADN molde, con regin promotora, que indica el inicio de la transcripcin, con secuencia de terminacin, que marca el fin del proceso, y un segmento que ser expresado. Una enzima ARN polimerasa que:

-reconoce las secuencias sealizadoras, -abre la hlice, -lee el molde (de 3a 5), -reconoce y ubica los sustratos complementarios, -polimeriza los sustratos(de 5a 3). Cofactores enzimticos de la ARN polimerasa: Mg++ o Mn++. Sustratos: UTP, ATP, GTP Y CTP. Una fuente de energa: los mismos sustratos. Una pirofosfatasa. Una topoisomerasa I.

Fig. 11.7 - El proceso de transcripcin

A partir de distintos genes se transcriben diferentes clases de ARN: ARN mensajero(ARNm),ARN de transferencia(ARNt),ARN ribosmico(ARNr),ARN pequeos nucleares y citoplasmticos (ARNpn/ARNpc respectivamente). Si bien el proceso transcripcional es bsicamente similar en procariotas y eucariotas, existen diferencias que detallaremos a continuacin: EUCARIOTAS PROCARIOTAS

1- La transcripcin es llevada a cabo por tres 1- La transcripcin es llevada a cabo por un tipos de enzima ARN polimerasa, cada una solo tipo de ARN polimerasa que sintetiza las especializada en la sntesis de los distintos tipos diversas clases de ARN. de ARN: La ARN pol. bacteriana es un complejo proteico La ARN polimerasa I transcribe genes del ADN oligomrico constituido por cinco subunidades. nucleolar que codifican para los ARNr 45S Excepto la subunidad sigma (), el resto conforma un ncleo enzimtico. Todo el complejo constituye una holoenzima capacitada La ARN polimerasa II transcribe genes del ADN no nucleolar que codifican para todos los para leer las secuencias promotoras. ARNm y para la mayora de los ARNpn. La ARN polimerasa III transcribe genes del ADN no nucleolar que codifican para los ARNt, los ARNr 5S,los ARNpc y para el resto de los ARNpn. 2- Las ARN polimerasas eucariotas no se unen al ADN molde en su sitio promotor si no estn presentes protenas denominadas factores basales de transcripcin. Estos son especficos de cada polimerasa y se encuentran en todos los tipos celulares. Las clulas eucariotas tambin cuentan con factores de transcripcin especficos los cuales relacionan a los factores basales con las regiones reguladoras de un gen. Los factores especficos controlan la tasa de transcripcin de los genes. Cada tejido presenta una combinacin particular de los mismos. 3- Cada ARN polimerasa reconoce una secuencia particular de nucletidos o seal para la transcripcin ,que es diferente para cada enzima. Por ejemplo la ARN polimerasa II, que trasncribe los genes que codifican para ARNm, reconoce varias secuencias de nucletidos en el promotor, entre las cuales se encuentran las secuencias llamadas caja TATA o caja Hogness-Goldberg, caja CAAT y GC. stas secuencias se encuentran "ro arriba" respecto del punto de inicio de la transcripcin. El reconocimiento de dichas secuencias por parte de la ARN polimerasa II y los factores basales 2- Si bien la ARN polimerasa bacteriana no requiere de factores de transcripcin, se considera a la subunidad s como un factor de inicio de la transcripcin, ya que el ncleo enzimtico despojado de la subunidad s no puede por s mismo leer adecuadamente las secuencias promotoras y efectuar la transcripcin.

3- La ARN polimerasa bacteriana tambin reconoce secuencias consenso indispensables para la unin de la holoenzima y la sealizacin del punto de inicio. Una de las secuencias ms conocidas es la caja TATAAT o caja Pribnow y TTGACA, ubicadas siempre ro arriba del punto de inicio de la transcripcin. -35 -10 +1 5' -----TTGACA----TATAAT----inicio--3' Promotor procariota

de transcripcin son prerequisitos para iniciar la copia del gen. Cabe destacar que las secuencias consenso que reconocen las distintas ARN polimerasas y sus correspondientes factores basales difieren en composicin y ubicacin dentro del gen, esto significa que no siempre se localizan delante del promotor. CAAT--GGGCCGGG--GGGCCGGG-TATA--inico Promotor eucariota Resumiendo, las principales diferencias en la transcripcin en clulas procariotas y eucariotas: Existe una sola ARN polimerasa procariota y tres ARN polimerasas eucariotas.

La ARN polimerasa procariota no requiere factores de transcripcin. Las eucariotas requieren la presencia de factores de transcripcin basales y su actividad es regulada por factores de transcripcin especficos. Las secuencias sealizadoras son diferentes.

LA MAQUINARIA TRADUCCIONAL
La traduccin implica el funcionamiento coordinado de un gran nmero de molculas entre las que se encuentran los distintos tipos de ARN. Una vez transcriptos cada ARN sufre una serie de modificaciones cuyas caractersticas difieren segn hablemos de clulas procariotas y eucariotas. Describiremos cada ARN en general y luego sus variantes en ambos tipos celulares.

ARNm (MENSAJERO)
Los ARNm son molculas lineales de cadena simple en donde residen las instrucciones para la elaboracin de un producto proteico. Los ARNm eucariotas y procariotas son esencialmente iguales en el sentido que presentan, una vez listos para la traduccin, una secuencia continua de codones que se extienden desde el principio al fin del mensaje gentico dictando con exactitud la secuencia lineal de aminocidos de una cadena polipeptdica en particular. Esta secuencia se lee en la direccin 5' 3'. El principio de la secuencia presenta un codn iniciador (casi siempre AUG), y el final de la secuencia o regin codificadora es un codn de terminacin o stop (UGA, UAA, UAG). Adems de la regin codificadora presenta sectores extra en los extremos 5' y 3' del mensajero denominados secuencias directora y seguidora respectivamente. Estas regiones no se traducen en protena aun cuando forman parte del ARNm transcripto del gen.

Fig. 11.8 - Correspondencia entre las regiones del gen eucariota, su transcripto maduro y la cadena polipeptdica

Existen diferencias entre los ARNm procariota y eucariota ARNm EUCARIOTA

1- La mayora de los ARNm eucariotas presentan la secuencia del mensaje interrumpida, es decir coexisten a lo largo de la molcula sectores que codifican para la protena llamados EXONES, con secuencias intercaladas sin informacin denominadas INTRONES (Fig. 12.9).

Fig. 11.9 - Estructura en mosaico del ARNm transcripto primario eucariota

2- Los ARNm transcriptos primarios sufren una serie de modificaciones antes de salir al citoplasma como ARNm maduro. Algunos cambios consisten en el agregado de molculas en los extremos 5' y 3' llamados capping y poliadenilacin. Capping: sta es la denominacin del proceso por el cual se adiciona en el extremo 5' del ARNm una molcula de 7 metil-guanosina (un nucletido metilado) a la que se conoce como cap (del ingls, capuchn). sta molcula se agrega al ARNm naciente cuando ste alcanza, aproximadamente, los 30 nucletidos de longitud. Por ser esta modificacin simultnea a la transcripcin se la considera co-transcripcional. La cap impide la degradacin del ARNm inmaduro por nucleasas y fosfatasas nucleares. Tambin participa en la remocin de intrones y en el inicio de la traduccin.

Fig 11.10- El agregado del cap

Poliadenilacin: Este proceso consiste en el agregado de alrededor de unas 250 adenosinas o cola poli A , en el extremo 3' del ARNm. El ARNm presenta una secuencia de nucletidos especfica AAUAAA conocida como seal de poliadenilacin. Una nucleasa corta al pre-ARNm a unos 20 nucletidos despus de la seal. Una vez liberado el pre-ARNm, la enzima poliA-polimerasa le agrega las adenosinas de a una por vez. Por otra parte la ARN pol II contina transcribiendo un tramo ms del molde, para finalmente disociarse del gen. Este ltimo tramo de ARN es totalmente infructuoso, pues resulta rpidamente degradado por nucleasas y fosfatasas. Las funciones de la cola poli A son: proteger el extremo 3' de la degradacin y ayudar a los ARNm a salir del ncleo. Carecen de cola poli A los ARNm de histonas, dado que como ya se mencion, no presentan la seal de poliadenilacin. Otra excepcin la ejemplifican algunos genes que presentan ms de una seal de poliadenilacin. Cuando as ocurre, el mismo gen puede ser transcripto en dos productos diferentes, dependiendo de cul sea la seal reconocida.

Fig. 11.11 - El agregado de la cola poli A

Otra modificacin significativa afecta a la secuencia codificadora, que sufre un acortamiento producto de la eliminacin de los intrones, quedando como producto final los exones empalmados en secuencia continua. Este tipo de procesamiento se llama empalme (splicing) y fue descubierto en 1977. Para que se lleve a cabo este tipo de maduracin del pre-ARNm se necesita una batera de ribonucleoprotenas nucleares: las RNPpn ( snRNP, del ingls, small nuclear ribonucleoprotein). Estas partculas ricas en uridinas y diversas protenas se denominan U1, U2, U4, U5, U6 y se combinan de a una por vez en los extremos de cada intrn (lindantes a sendos exones). El complejo resultante del ensamblado de las distintas RPNpn se denomina espliceosoma. La actividad enzimtica residira en los ARNpn del espliceosoma. stos seran los responsables de reconocer las secuencias sealizadoras de corte, escindir a los intrones y empalmar a los exones entre ellos, produciendo una molcula de ARNm maduro.

Mecanismo molecular del splicing

El corte de intrones y el empalme de exones deben ser muy exacto, pues de lo contrario un error pequeo, causara un corrimiento del marco de lectura del ARNm. Los intrones son clivados del transcripto primario por las RNPpn que reconocen cortas secuencias conservadas dentro del intrn y en los lmites con los exones. Estas secuencias, muy similares en todos los intrones estudiados, son:

Secuencia GU en el extremo 5' o sitio dador Secuencia AG en el extremo 3' del intrn o sitio aceptor

Secuencias conocida como sitio de ramificacin que se localiza en el interior del intrn

Estas secuencias participan en las reacciones de clivado y empalme que ocurren en dos etapas: En la primer etapa, una RNPpn reconoce al sitio dador y otra se enlaza al sitio de ramificacin. El extremo 5' es clivado y ligado a un nucletido(A) del sitio de ramificacin. En la segunda etapa, se da el reconocimiento del extremo 3 por parte de otra RNPpn y se produce el corte en el extremo 3' del intrn, seguido por el empalme de los dos exones. As se libera el ARNm maduro del espliceosoma. El intrn queda eliminado en forma de lazo y ser degradado posteriormente en el ncleo.

Fig. 11.12 - Accin del espliceosoma

Como citramos anteriormente, la presencia del capuchn en el extremo 5' es requerida para que las RNPpn trabajen, no as la cola poli A. 3- Los ARNm maduros son monocistrnicos, es decir el sector codificador dicta la secuencia para una sola cadena polipeptdica.

Fig. 11.13 - Estructura de la molcula de ARNm maduro eucariota

ARNm PROCARIOTA 1-Los ARNm procariotas presentan las secuencias codificadoras continuas, pues carecen de intrones. 2-No sufren modificaciones post-transcripcionales. 3-Muchos ARNm procariotas son policistrnicos, es decir que una sola molcula de ARNm contiene informacin para varias protenas. Este ARNm contiene codones para la terminacin y para la iniciacin de la traduccin entre las secciones codificadoras de protenas, de modo que se traduce como varias molculas de protena distintas.

Fig. 11.14 - Estructura de la molcula de ARNm procariota

ARNt (TRANSFERENCIA)
Los ARNt son molculas "adaptadoras" ya que interactan por un lado con la cadena polinucleotdica (ARNm) y por el otro con los aminocidos que formarn parte de la cadena polipeptdica, as alinean a los aminocidos siguiendo el orden de los codones del ARNm. Cada ARN t es una molcula de 70 a 93 ribonuclotidos. Enlaces puente hidrgeno entre sus bases repliegan la molcula dando origen a una disposicin espacial en forma de trbol (Fig.11.15). Cada brazo presenta una zona de doble cadena y un asa o bucle de cadena simple sin apareamiento de bases. Interacciones posteriores doblan la estructura de trbol formando una

"ele". Por qu existen 64 codones y aproximadamente 31 ARNt, si en la naturaleza hay 20 aminocidos ?

Existen 64 combinaciones posibles en que las 4 bases pueden ordenarse en tripletes o codones. De ellos, 3 son codones stop. Los 61 tipos restantes codifican para los 20 aminocidos, existiendo para varios de ellos codones sinnimos (ver tabla 11.2). Los anticodones de los ARNt reconocen a los codones del ARNm, sin embargo no hay 61 tipos distintos de ARNt porque no se requiere la complementaridad exacta entre los 3 nucletidos del codn y el anticodn. En muchos casos, mientras coincidan las 2 primeras bases del codn, hay suficiente "balanceo"en la tercera posicin para permitir el acoplamiento con ms de un tipo de nucletido en el anticodn, de manera que existen aproximadamente 31 tipos de ARNt.

Por ejemplo el aminocido fenilalanina es codificado por dos codones sinnimo: UUU / UUC. Sin embargo un solo anticodn AAG puede complementarse indistintamente con UUU y UUC, realizando el trabajo de llevar a la fenilalanina al ribosoma para ser incorporada a la cadena polipeptdica en formacin .

Todos los ARNt presentan un porcentaje significativo de bases poco frecuentes que surgen por modificacin post-transcripcional de los cuatro ribonucletidos estndar A, G, C y U (Fig. 11.16).

Fig. 11.15 - Estructura del ARNt

Fig. 11.16 - Bases raras en el ARNt

En esta molcula se distinguen bsicamente dos extremos: En el extremo 3' o extremo aceptor de la molcula se encuentra el trinucletido CCA que representa el sitio de unin donde se liga el aminocido. Esta unin es catalizada por una enzima aminoacil ARNt sintetasa especfica y apropiada para cada uno de los 20 aminocidos. En el otro extremo de la "ele" se localiza un triplete de nucletidos conocido como anticodn, cuya secuencia vara en cada tipo de ARNt. Cada anticodn es complementario de un codn del ARNm, aunque podra acoplarse a ms de un codn (sinnimo).

Por lo hasta aqu expuesto, podemos concluir que el ARNt debe poseer varias propiedades especficas:

Debe ser reconocido por una aminoacil ARNt sintetasa que lo una al aminocido correcto. Debe tener una regin que acte como sitio de unin para el aminocido.

Debe tener una secuencia complementaria (anticodn) especfica para el codn del ARNm correcto. Las modificaciones que sufren los pre-ARNt son semejantes en procariotas y en eucariotas en cuanto en ambos se producen escisiones y modificaciones qumicas, por ejemplo se elimina un dinucletido 3' del precursor y se agrega el triplete CCA a los ARNt que no poseen todava esta secuencia terminal. Tambin aparecen bases raras (Fig.11.16) por modificacin enzimtica de nucletidos estndar del ARNt precursor. Algunos genes para ARNt presentan un intrn que interrumpe la secuencia codificadora, l cual es removido post-transcripcin. (Fig.11.17)

Fig. 11.17 - Intrn en el ARNt

ARNr (RIBOSMICO)
Los ARNr, junto a protenas, son los componentes de los RIBOSOMAS. Los ribosomas y los ARNt intervienen en la traduccin de la informacin codificada en el ARNm por lo cual los primeros son considerados fbricas de protenas. Cada ribosoma consta de dos subunidades: la subunidad MAYOR y la subunidad MENOR (Fig. 11.18)

Fig. 11.18 - Modelo tridimensional del ribosoma bacteriano visto desde distintos ngulos

La subunidad mayor contiene una depresin en una de sus superficies, en la cual se ajusta la subunidad menor. El ARNm se inserta en el surco formado entre las superficies de contacto de las subunidades. (Fig. 11.19). Dentro de cada ribosoma hay dos huecos llamados sitios A (AMINOACDICO) y P (PEPTIDLICO), para el ingreso de los ARNt unidos a sus correspondientes aminocidos. (Fig. 11.20)

Fig. 11.19- Modelo de ribosoma que representa la ubicacin tentativa del ARNm y de la protena naciente

Fig. 11.20- Sitios aminoacdico y peptidlico del ribosoma

Las subunidades ribosmicas trabajan conjuntamente para la sntesis proteica. La subunidad menor aloja al ARNm sobre el cual se acomodan los ARNt para que puedan unirse los aminocidos que transportan. La subunidad mayor cataliza la unin peptdica de los aminocidos gracias a la accin de la peptidil transferasa ( enzima que forma parte de la estructura de esta subunidad). [1] Si bien cumplen idntica funcin, los ribosomas procariotas y eucariotas se diferencian en su tamao, coeficiente de sedimentacin [2] , y en el tipo y nmero de molculas de ARNr y protenas que los forman:

Fig. 11.21- Comparacin de las estructuraas de los ribosomas procariotas y eucariotas Todos los ARNr procariotas y eucariotas sufren modificaciones post-transcripcin. En eucariotas los ARNr 18S; 5,8S y 28S son transcriptos de un mismo gen que codifica para un pre-ARNr 45S. La sntesis del este transcripto primario se realiza en la zona fibrilar del nuclolo a partir de la ARN pol I. Una vez obtenido el largo transcripto primario, se eliminan las secuencias espaciadoras(tramos de ARN intiles para integrar la estructura ribosmica), las que sern degradadas por enzimas. Las secuencias resultantes utilizables de ARNr (28S, 18S y 5,8S) son metiladas y junto con ARNr 5S extranucleolar, se ensamblan a protenas importadas del citoplasma para conformar la subunidades ribosmicas (Fig. 11.22).

Fig. 11.22 - Procesamiento de los ARN 45S

Las subunidades ribosmicas en distintos estadios de ensamblaje, se localizan en la periferia del nuclolo, conformando la zona granular del mismo. Finalmente, las subunidades ribosmicas por separado y antes de completar sus respectivos ensambles, son exportadas al citoplasma a travs del complejo del poro, concluyendo el procesamiento de cada subunidad en el citosol. Respecto del ARNr 5S no transcripto en el nuclolo, una vez sintetizado se incorpora al resto de los componentes para conformar la subunidad mayor del ribosoma (Fig.11.23).

Fig. 11.23 - Ensamblaje de subunidades ribosmicas

LOS ARN PEQUEOS

Los ARN pequeos forman complejos con protenas especficas dando lugar a la formacin de partculas ribonucleoproteicas (RNP). Las RNP localizadas en el ncleo se denominan RNPpn: partcula ribonucleoproteica pequea ( sn RNP/s: small -pequea- /n: nuclear-RNP:ribonucleoproteica). Varios RNPpn conocidos como U1 a U6 participan en el procesamiento de los ARNm. Estas partculas forman un complejo multienzimtico denominado espliceosoma, encargado de realizar cortes y empalmes en los ARNm transcritos primarios (splicing) . Las RNP localizadas en citoplasma se denominan RNPpc: partcula ribonucleoproteica pequea citoplasmtica (scRNP/s: small/ c:cytosolic-citosol-/RNP:ribonucleoproteica). La funcin ms conocida de cualquier RNPpc es la que desempea el complejo ARN /protenas que componen la partcula de reconocimiento de la seal o SRP. Estas partculas participan en el reconocimiento de secuencias especficas de las protenas de secrecin, membranares y lisosomales, deteniendo su traduccin hasta que el ribosoma en donde se estn sintetizando se contacte con la membrana

del retculo endoplasmtico granular, en donde finalizan su traduccin.

EL PROCESO DE LA TRADUCCIN O SNTESIS PROTEICA

La sntesis proteica consiste en la traduccin de la informacin codificada en la secuencia de nucletidos del ARNm, en la secuencia correspondiente de aminocidos en una cadena polipeptdica. La sntesis proteica se lleva a cabo en los RIBOSOMAS y si bien en esencia es un proceso similar en todos los organismos, la maquinaria traduccional es ms compleja en eucariotas. La sntesis proteica incluye las siguientes etapas: 1. ACTIVACIN DE LOS AMINOCIDOS O AMINOACILACIN 2. TRADUCCIN DEL ARNm 1. ACTIVACIN DE LOS AMINOCIDOS Antes de la traduccin cada ARNt se engancha a su aminocido especfico. Esta reaccin de aminoacilacin es catalizada por las enzimas aminoacil ARNt sintetasas. Existen 20 tipos distintos de enzimas, una para cada aminocido. El proceso de aminoacilacin ocurre en dos etapas: a- En la primera fase se utiliza la energa de la hidrlisis del ATP para unir cada aminocido a un AMP, con un enlace de alta energa. Esta reaccin da origen a un complejo intermediario denominado aminoacil- AMP:

Fig. 11.24 - Etapa 1 de la aminoacilacin

b- Sin abandonar la enzima, se transfiere el aminocido del complejo aminoacil-AMP al ARNt especfico, con lo cual se origina la molcula final: AMINOACIL -ARNt

Fig. 11.25 - Etapa 2 de la aminoacilacin

En resumen, la aminoacilacin o activacin de los aminocidos tiene dos funciones :

1- proporcionar el primer paso en la traduccin del mensaje gentico a una secuencia de aminocidos ; 2- activar al aminocido antes de incorporarlo a la protena. El enlace entre el ARNt y el aminocido libera al hidrolizarse la energa necesaria para propulsar la formacin del enlace peptdico durante la traduccin. 2. TRADUCCIN El mecanismo por el cual se traduce el mensaje del ARNm puede describirse en tres etapas: Iniciacin Elongacin Terminacin En todas las fases se requiere la presencia de un complejo sistema de protenas citoplasmticas conocidas como factores de iniciacin, factores de elongacin y factores de terminacin respectivamente. Dichos factores son diferentes en procariotas y eucariotas aunque sus funciones son semejantes.

INICIACIN DE LA TRADUCCIN
En esta etapa se renen los componentes que constituyen el complejo de iniciacin, disparador de la sntesis proteica. El complejo est compuesto por una molcula de ARNm, una subunidad mayor, una subunidad menor, el ARNt iniciador (cargado con metionina en eucariotas y con Nformilmetionina en procariotas) y factores proteicos de iniciacin (IF) . Dicho complejo comienza a formarse cuando se acoplan a la subunidad menor el ARNm y el aminoacil ~ARNt iniciador. No est claro cual de las dos molculas se une primero la subunidad menor, pero ambas deben estar presentes antes que la subunidad mayor cierre el complejo originando un ribosoma completo y funcional (Fig. 11.26). La posible secuencia de acontecimientos durante la iniciacin de la traduccin en eucariotas es: 1. El aminoacil~ARNt iniciador se une a la subunidad menor, con gasto de GTP.

2. El ARNm se acopla a la subunidad menor , para lo cual debe ser previamente reconocida la cap y los nucletidos contiguos en el extremo 5' del mensaje. 3. La subunidad menor se desliza sobre el ARNm hasta localizar al codn de iniciacin AUG. Este modelo de seleccin propuesto para eucariotas difiere del modelo de emparejamiento descripto para procariotas, por el cual el acoplamiento de bases codn-anticodn iniciador se

producira por un emparejamiento de bases que preceden a AUG del ARNm con el extremo 3'del ARNr de la subunidad menor. 4. Una vez localizado y acoplado el anticodn al codn AUG del mensaje se establece la pauta de lectura correcta para el resto de los codones que contenga la regin codificadora del ARNm. 5. Finalmente se acopla la subunidad mayor, quedando el aminoacil ~ARNt iniciador en el sitio P del ribosoma. Como todas las cadenas polipeptdicas han sido iniciadas por un ARNt iniciador, todas las protenas recin sintetizadas tienen metionina (o N-formilmetionina en bacterias) como residuo amino terminal. En ambos casos la metionina inicial es eliminada por una aminopeptidasa especfica.

Fig. 11.26 - Fases de la etapa de iniciacin de la sntesis proteica

Cabe destacar que en eucariotas, en cuanto se han reconocido la cap y los nucletidos aledaos que preceden a AUG en el extremo 5' del mensaje, ningn otro codn AUG del ARNm ser utilizado como lugar de iniciacin, por lo tanto de cada molcula de ARNm se sintetiza una sola cadena proteica. Los ARNm eucariotas son monocistrnicos. (Fig. 11.13 ). En procariotas, dado que la secuencia de iniciacin puede aparecer varias veces a lo largo del mensaje, pueden originarse varias cadenas polipeptdicas a partir de un ARNm. La mayora de los ARNm procariotas son policistrnicos. (Fig. 11.14 ). En conclusin, tres clases de interacciones determinan el inicio de la sntesis proteica: Reconocimiento del codn de iniciacin AUG en la subunidad menor del ribosoma Acoplamiento de bases del codn AUG con el ARNt iniciador Acoplamiento de la subunidad mayor del ribosoma cerrando el complejo de iniciacin

Las principales diferencias en la iniciacin de la traduccin en procariotas y eucariotas son: Eucariotas Procariotas

Modelo de seleccin:

Modelo de emparejamiento:

La subunidad menor se desliza sobre el ARNm El acoplamiento de bases codn-anticodn hasta localizar al codn de iniciacin. iniciador se producira por un emparejamiento de bases que preceden a AUG del ARNm con el

extremo 3' del ARNr 16S de la subunidad menor. El ARNt iniciador transporta metionina. El ARNt iniciador transporta metionina formilada (N-formilmetionina).

Se requiere la presencia de cap en el extremo No existe cap. 5'. La secuencia de iniciacin aparece una vez a lo La secuencia de iniciacin puede aparecer varias largo del mensaje (ARNm monocistrnico). veces a lo largo del mensaje(ARNm policistrnico). Participan factores de iniciacin eIF Participan factores de iniciacin IF (I=iniciacin; F=factor) especficos de este tipo (e= eucariota;I=iniciacin;F=factor) especficos celular. de este tipo celular

ELONGACIN DE LA CADENA POLIPEPTDICA

El proceso de elongacin o crecimiento de la protena puede resumirse en tres etapas:

6.

Una molcula de aminoacil~ARNt ingresa al sitio A vacante del ribosoma (adyacente al sitio P que est ocupado) acoplndose por complementaridad de bases al segundo codn del ARNm expuesto en ese lugar. Esta reaccin requiere la intervencin de un factor de elongacin y GTP. (Fig. 11.27)

7.

El aminocido iniciador se desacopla del ARNt del sitio P, liberando energa que se utiliza en la formacin del enlace peptdico entre los dos aminocidos alineados (reaccionan el carboxilo del primer aminocido con el grupo amino del segundo aminocido). Esta reaccin es catalizada por una peptidil transferasa integrante de la subunidad mayor. Como consecuencia de esta reaccin el ARNt iniciador del sitio P queda sin aminocido y el dipptido resultante queda enganchado al ARNt del sitio A (peptidil ARNt).

8.

El nuevo peptidil ARNt del lugar A es translocado al lugar P cuando el ribosoma se desplaza tres nucletidos a lo largo de la molcula de ARNm. Esta etapa requiere energa y la presencia del un factor de elongacin. Como parte del proceso de translocacin la molcula libre de ARNt que se ha generado en el sitio P se libera del ribosoma, puesto que su lugar pasa a ser ocupado por el peptidil ARNt. As el sitio A, que se halla desocupado, puede aceptar una nueva molcula de aminoacil~ARNt, con lo cual se vuelven a iniciar los pasos anteriormente analizados.

Fig. 11.27 - Fases de la etapa de la elongacin de la sntesis proteica

Resumiendo, el ciclo de elongacin de la sntesis se caracteriza por: La unin del aminoacil-ARNt (reconocido por el codn) La formacin del enlace peptdico La translocacin del ribosoma

TERMINACIN DE LA SNTESIS PROTEICA

9.

La finalizacin de la sntesis proteica ocurre ante la llegada, al sitio A del ribosoma, de uno de los tres codones stop o de terminacin: UGA, UAG, UAA. stos son reconocidos por un factor de terminacin. La asociacin del codn stop con dicho factor modifica la actividad de la peptidil transferasa, la que adiciona agua al peptidil - ARNt en lugar de un nuevo aminocido.

10.

Como consecuencia de esta reaccin el polipptido se desacopla del ARNt, liberndose en el citoplasma. El ARNm se desacopla del ribosoma y se disocian las dos subunidades, las cuales podrn volverse a ensamblar sobre otra molcula de ARNm reinicindose el proceso de traduccin.

Fig. 11.28 - Fases de la etapa de terminacin de la sntesis proteica

Los acontecimientos que caracterizan a la terminacin de la sntesis son : El reconocimiento del codn stop La disociacin de las subunidades ribosmicas,el ARNm y la cadena polipeptdica.

EL COSTO ENERGTICO DE LA SNTESIS PROTEICA

La sntesis proteica requiere ms energa que cualquier otro proceso anablico. Para formar cada enlace peptdico se consumen tres enlaces de alta energa:

uno en la activacin del aminocido; otro en la unin del aminoacil ~ARNt a la subunidad menor del ribosoma; el tercero en la translocacin del ribosoma.

POLIRRIBOSOMAS En cuanto un ribosoma ha traducido una secuencia de aminocidos suficientemente larga como para dejar libre el extremo 5' del ARNm, un nuevo ribosoma puede iniciar la traduccin. Al grupo de ribosomas que traducen simultneamente el mismo mensaje se lo denomina polirribosoma o polisoma. Los ribosomas en esta unidad estructural operan independientemente sintetizando una cadena polipeptdica completa.

Fig. 11.29 - Esquema de un polisoma

DIFERENCIAS EN LA TRADUCCIN EN PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS

En eucariotas la envoltura nuclear y la maduracin que sufren los ARNm impiden su traduccin inmediata. El ARNm es "ledo" despus de que haya abandonado el ncleo a travs de los poros nucleares. La traduccin es por lo tanto post-transcripcional.

Fig. 11.30 - Transcripcin, maduracin y traduccin en eucariotas

Fig. 11.31 - Transcripcin y traduccin en procariotas

En procariotas la traduccin es simultnea a la transcripcin, esto es, mientras se est terminando de transcribir el extremo 3', el extremo 5' libre del ARNm se asocia a un ribosoma y al ARNt iniciador comenzando la traduccin. LA FIDELIDAD DE LA TRADUCCIN La precisin en la incorporacin de los aminocidos en la secuencia apropiada durante la sntesis proteica, depende bsicamente de dos mecanismos: La unin del aminocido a su ARNt correspondiente o aminoacilacin. En esta etapa la actividad correctora de las enzimas aminoacil - ARNt sintetasa minimizan los errores en la seleccin del aminocido correcto. Muchas enzimas tienen dos sitios activos distintos, uno que lleva a cabo la reaccin de carga, y otro que reconoce un aminocido incorrecto que se haya colocado en el ARNt y lo libera por hidrlisis. El apareamiento de bases codn - anticodn, donde una equivocacin en la correspondencia de nucletidos dara como resultado la incorporacin del aminocido incorrecto. En este punto de control participa un factor de elongacin que forma un complejo con el aminoacil ARNt y el GTP; este complejo y no el ARNt libre es el que se une al codn correspondiente en el ARNm. Recin despus del correcto apareamiento codn - anticodn, el factor se disocia posibilitando la unin del aminocido a la cadena polipeptdica. Este retraso en la unin del aminocido posibilita que se elimine el ARNt incorrecto, antes que el residuo aminoacdico que transporta pueda enlazarse a la protena en crecimiento.

REGULACIN DE LA EXPRESIN GENTICA Regulacin en procariotas: el opern

Las clulas procariotas pueden regular de varias formas la cantidad de protenas que van a ser sintetizadas. No obstante se considera que la expresin gnica est regulada principalmente a nivel de la transcripcin . La mayora de los procariotas, tales como Esclerichia coli, estn expuestos a una gran variedad de condiciones en su medio y exhiben una notable capacidad para adaptarse a las mismas, esto es consecuencia de una gran habilidad para regular la expresin de genes especficos que codifican aquellas molculas que responden a los estmulos de su entorno. As, esta capacidad de un organismo para regular la expresin de sus genes incrementa su aptitud para crecer y dejar progenie en cualquier tipo de condiciones ambientales. La sntesis de transcriptos de genes y protenas requiere un considerable gasto de energa. Si se "apaga" la expresin de estos genes (cuando sus productos no son necesarios). Un organismo puede evitar gastar energa o utilizarla en vas metablicas de molculas que maximicen la tasa de crecimiento en su medio circundante. Cules son los mecanismos por los cuales estos organismos regulan la expresin de genes en respuesta a cambios en el ambiente? En bacterias, los genes que codifican para la sntesis de enzimas que participan en una va

metablica, se agrupan en el cromosoma en un complejo denominado OPERN. Todos los genes del opern actan como unidades coordinadas mediante un mecanismo de control descripto por primera vez por Jacob y Monod en 1961. Un opern tpico consta de: Genes estructurales :son los genes que codifican para las enzimas de la va metablica. Tienen la particularidad de situarse prximos entre s, de manera tal que son transcriptos en una sola molcula de ARNm policistrnico. Cuando ste se traduce se obtienen las diferentes enzimas de la va metablica. Promotor: como analizramos anteriormente, es la secuencia de nucletidos del ADN en donde se une la ARN polimerasa para iniciar la transcripcin. Operador : es una secuencia de nucletidos que se interpone entre el promotor y los genes estructurales, en donde se inserta una protena reguladora denominada protena represora. La protena represora es codificada por el gen regulador, localizado en una regin distinta del cromosoma bacteriano, aguas arriba del sitio operador.

Fig. 11.32 - Esquema de los componentes de un opern

Uno de los ejemplos de opern ms conocido es el opern lac. Este es un conjunto de genes que intervienen en la utilizacin de la lactosa, por parte de la bacteria, como fuente de energa. Las tres enzimas que intervienen en la va de degradacin de la lactosa son: la enzima permeasa , la beta galactosidadsa y la transacetilasa. El opern lac est formado por tres genes estructurales dispuestos en serie(z, y, a). La trasncripcin de estos genes da origen a una molcula de ARNm que codifica para la tres enzimas que participan de la misma va metablica. En ausencia de lactosa el represor se enlaza al operador e impide a la ARN polimerasa insertarse en el sitio promotor con lo cual se interrumpe la transcripcin (Fig. 11.33) . El represor ejerce su influencia mediante control negativo, puesto su interaccin con el ADN inhibe la expresin del opern.

Fig. 11.33 - El opern lac inhibido

En presencia de lactosa, este disacrido se une a la protena represora, provocndole un cambio conformacional e incapacitndola para unirse al ADN del operador. En estas condiciones, se transcriben los genes estructurales, apareciendo en el citosol las enzimas que degradarn a la lactosa. En este ejemplo de opern el represor solo puede unirse al operador en ausencia del inductor (Fig.11.34).

Fig. 11.34 - El opern lac activado

El opern lac es un ejemplo de opern inducible, es decir aquel en el cual la presencia de una sustancia especfica (en este caso la lactosa) induce la transcripcin de los genes estructurales. El opern lac tambin se encuentra bajo control positivo. Este efecto se da cuando en el medio hay glucosa, as la bacteria metaboliza este monosacrido ignorando cualquier otra fuente de carbono disponible. Cuanto menor es la concentracin de glucosa en el medio, mayor es la concentracin de AMPc , el cual tiene influencia en el "encendido" del opern lac. El AMPc acta unindose a una protena fijadora de AMPc denominada CAP (protena activadora de catabolitos). Cuando la concentracin de este complejo es alta (pues el medio contiene poca glucosa), el CAP-AMPc se fija a un sitio especfico del promotor lac, aumentando la afinidad de la regin promotora para la ARN polimerasa, lo que estimula la transcripcin del opern (Fig. 11.35).

Fig. 11.35 - Control positivo CAP-AMPc

Por lo expuesto concluimos que: Para que se exprese el opern lac deben darse dos condiciones en el medio: que est presente la lactosa y que la concentracin intracelular de glucosa sea baja.

Existen otros tipos de operones en bacterias, como por ejemplo el opern triptofano, el que se caracteriza por ser un opern reprimible. El opern triptofano consiste en cinco genes estructurales que codifican para las enzimas involucradas en la biosntesis del aminocido triptofano. Dichos genes se agrupan en una unidad de transcripcin con un solo promotor y un operador. Un gen regulador se localiza fuera del opern y codifica para la sntesis de una protena represora. Esta protena difiere del represor lac en que se sintetiza en forma inactiva siendo incapaz de unirse al operador.

En ausencia de triptfano, la ARN polimerasa se une al promotor y transcribe los genes estructurales en un ARNm policistrnico. Esto es posible pues el represor inactivo no logra unirse por si solo al operador (Fig. 11.36).

Fig. 11.36 - El opern triptfano activado

En presencia de triptfano en el medio circundante, el aminocido (molcula denominada corepresor) se une a la protena represora constituyendo el complejo represor/co-represor. Dicho complejo reconoce a la zona operadora a la que se fija, impidiendo a la ARN polimerasa transcribir los genes estructurales (Fig. 11.37).

Fig. 11.37 - El opern triptfano inhibido

Con este mecanismo de regulacin la bacteria ahorra energa sintetizando triptfano solamente cuando esta sustancia esencial en su crecimiento, est ausente en el medio ambiente. COMPARACIN ENTRE EL OPERN LAC Y EL OPERN TRIPTFANO OPERN LAC OPERN TRIPTFANO

Opern inducible, se expresa en presencia de Opern reprimible, se expresa en ausencia de lactosa. triptfano.

La lactosa es el inductor El represor se sintetiza en forma activa. Acta solo Sus enzima participan en un va catablica

El triptfano es el co-represor El represor se sintetiza en forma inactiva. Acta en presencia del co-represor Sus enzima participan en una va anablica

REGULACIN EN EUCARIOTAS
Las clulas eucariotas presentan estrategias ms complejas que las bacterias para regular la actividad de sus genes. Los organismos eucariotas pluricelulares poseen el mismo genoma en todas sus clulas, sin embargo los distintos tipos celulares se diferencian entre s porque fabrican y acumulan distintos ARNm y por lo tanto distintas protenas . Por qu si el gen para la hemoglobina est presente en el genoma de una clula epitelial, no se encuentra esta protena ni su ARNm en el citoplasma de este tipo celular?. Cmo logran las clulas epiteliales mantener "apagado" el gen para la hemoglobina? . Para responder a estas preguntas debemos tener en cuenta no solo que el genoma eucariota es ms complejo que el procariota, sino que existen ms niveles en dnde ejercer el control de la expresin gnica. Cada etapa en el flujo de informacin propuesto por el dogma de la biologa molecular: "ADN ARN PROTENAS" puede ser regulada.

Si bien los mecanismos ms importantes de control son los que actan a nivel transcripcional, es importante destacar que pueden producirse regulaciones durante el procesamiento o maduracin del ARNm o bien controlando: su pasaje a citoplasma o su supervivencia en el citosol. En algunos casos los controles actan a nivel traduccional o regulando la actividad de la protena.

Desarrollaremos particularmente, aquellos mecanismos que operan a nivel transcripcional es decir en el comienzo de la sntesis del ARNm ya que actan sobre las secuencias reguladoras del gen.

Fig. 11.38 - Niveles de control de la expresin gnica

CONTROL TRANSCRIPCIONAL

A) Los factores de transcripcin y la expresin gentica:

Para la transcripcin de un gen eucariota se requiere: Una secuencia promotora o promotor: secuencias de nucletidos necesarias para la fijacin de la ARN polimerasa. Secuencias reguladoras: existen dos tipos

Intensificadoras (del ingls, enhancers):secuencias que estimulan la transcripcin y cuya localizacin puede ser a miles de nucletidos de distancia "ro arriba o abajo" del promotor. Silenciadoras (del ingls silencers) : secuencias que inhiben la transcripcin. Tambin pueden hallarse muy distantes del promotor. Factores basales de transcripcin: complejo proteico que interacciona con el sitio promotor. Son esenciales para la transcripcin pero no pueden aumentar o disminuir su ritmo. De esto se encargan: Factores especficos de la transcripcin: complejo de protenas reguladoras que pueden ser activadoras o represoras. Protenas activadoras : interaccionan con las secuencias intensificadoras del gen. Protenas represoras: interactan con las secuencias silenciadoras del gen.

Estas protenas reguladoras interactan con regiones especficas del surco mayor del ADN que corresponden a las zonas reguladoras del gen. La geometra de la molcula, y los diseos caractersticos de los factores de transcripcin (Fig. 11.39), posibilitan dichas interacciones las que se producen por uniones no covalentes del tipo puente hidrgeno, uniones inicas e hidrofbicas.

Fig. 11.39 - Ejemplos de diseos de factores de transcripcin

Para comprender el mecanismo por el cual los factores de transcripcin regulan la expresin de un gen eucariota, consideremos una analoga propuesta por Robert Tjian3 : " si el promotor fuese el encendido de un coche, los intensificadores seran el acelerador y los silenciadores los frenos, as las protenas activadoras pisaran el acelerador y las represoras pisaran el freno". Entonces, la transcripcin de un gen depende de la actividad conjunta de los factores de transcripcin unidos a las secuencias reguladoras. Cada gen tiene una combinacin particular de intensificadores y silenciadores. Dos genes distintos pueden compartir idnticas secuencias intensificadoras y silenciadoras, pero no existen dos genes que posean la misma combinacin de estas secuencias reguladoras. Las diferencias entre los distintos tipos celulares que comparten el mismo genoma se deben a que cada clula transcribe y expresa distintas protenas. Esto es consecuencia de que cada tipo celular contiene conjuntos de protenas reguladoras de la expresin de diferentes genes. Cmo logran los activadores y silenciadores regular la transcripcin si se encuentran a mucha distancia del promotor del gen ? La unin de los factores al sitio promotor provoca un cambio conformacional que pliega al ADN entre las secuencias reguladoras y promotora, formando un asa. Este plegamiento permite contactar a los factores especficos ,unidos a las regiones reguladoras con una o ms protenas "blanco" asociadas al complejo de transcripcin basal. Cuando esto ocurre, se estimula la transcripcin por parte de la ARN polimerasa la que se desplaza copiando la regin codificadora del gen.

As como los factores de transcripcin se asocian a las secuencias reguladoras, tambin se disocian. Dice Alberto Kornblihtt4: Debilidad, reversibilidad y especificidad de unin son

caractersticas primordiales de las interacciones entre molculas para producir efectos biolgicos. Una complicada red de interacciones entre macromolculas, principalmente del tipo ADN-protena y protena-protena, es la que enciende diferencialmente los genes en los distintos tipos celulares.

Fig. 11.40 - Interaccin entre los factores de transcripcin basales y especficos

B) La estructura de la cromatina y la expresin gentica

En cada tipo celular solo se expresan determinados conjuntos de genes mientras el resto del genoma se mantiene "silencioso". Se supone que el grado de compactacin de la cromatina desempea un importante papel en la expresin gnica. Existen dos tipos de cromatina: la eucromatina, transcripcionalmente activa, ms desplegada y la heterocromatina, transcripcionalmente inactiva, ms condensada. La transcripcin solo ocurre cuando el ADN est desplegado. Por lo tanto, las regiones de cromatina condensada y dispersa varan segn el tipo celular, reflejando, segn se cree, la sntesis de protenas diferentes por distintos tipos celulares, es decir: el gen para la hemoglobina estara en estado heterocromtico en la clula epitelial y por lo tanto no disponible para su expresin.

C) El grado de metilacin y la expresin gentica

En algunos eucariotas la presencia de grupos metilo (CH 3) en el gen afecta su expresin. La metilacin ocurre en la citosinas que forman parte del dinucletido -CG- dentro de secuencias especficas, con frecuencia localizadas dentro o prximas a la zona reguladora del gen. No todos los lugares CG estn metilados. La mayora de los genes que no se expresan estn metilados, mientras que en otra clula en donde esos genes se expresan se advierte una disminucin de sus niveles de metilacin. Por ejemplo, en las clulas de mujeres, el cromosoma X condensado (el corpsculo de Barr) presenta alto grado de metilacin en los CG de los promotores de los genes que porta, inactivando as esta parte del genoma.

CONTROL A NIVEL DEL PROCESAMIENTO DEL ARNm Se han descubierto formas de regulacin que implican el procesamiento del ARNm. En algunos casos un mismo gen produce una protena en un tejido y un tipo distinto de producto proteico en otro tejido. El mecanismo por el cual puede obtenerse de un mismo gen dos protenas relacionadas se denomina empalme alternativo. Este proceso consiste en unir covalentemente diferentes combinaciones de exones del pre-ARNm obtenindose dos ARNm maduros con distinta informacin y por lo tanto dos productos proteicos que difieren en uno o ms tramos de su secuencia aminoacdica.

Fig. 11.41 - Empalme alternativo

MECANISMOS DE CONTROL A NIVEL DE LA TRADUCCIN

Entre los ejemplos de mecanismos regulatorios de la traduccin o sntesis proteica, explicaremos cmo se modifica la tasa de traduccin del ARNm que codifica para la protena ferritina. Esta protena funciona capturando tomos de hierro del medio intracelular, ya que en estado libre, el hierro es txico para la clula. La traduccin del ARNm para la ferritina es regulada por una protena represora, la aconitasa, cuya actividad depende de la concentracin de hierro libre en el citosol. Cuando la concentracin intracelular de hierro es baja, la aconitasa se une a una secuencia nucleotdica especfica en el ARNm, llamada elemento de respuesta al hierro (ERH), provocando un plegamiento del mensaje a modo de bucle, que bloquea la traduccin (Fig.11.42). Cuando aumenta la concentracin de hierro en el citosol, ste se asocia a la aconitasa, la cual cambia su conformacin y pierde afinidad por el ERH. Una vez liberado el ARNm, comienza la sntesis de ferritina y su asociacin con el hierro intracelular.

Otro mecanismo importante es el control de la estabilidad del ARNm. Se conocen algunos casos en donde la integridad de la cola poli A es determinante para la supervivencia del mensaje. El acortamiento gradual de la cadena de adeninas por accin de nucleasas, reduce en algunos casos la vida media del ARNm.

Fig. 11.42 - Control de la traduccin del ARNm de la ferritina

MECANISMOS DE CONTROL DESPUS DE LA TRADUCCIN

La vida media de las protenas puede ser considerada una forma indirecta de la expresin gentica. Dos factores son determinantes de la vida media de una protena citoslica: su correcto plegamiento y la secuencia aminoacdica de su extremo aminoterminal. Desde el momento que una protena emerge del ribosoma citoslico, chaperonas moleculares de diversos tipos se unen a la cadena en sntesis, ayudndola a adquirir la conformacin nativa. Esta unin transitoria evita que las protenas recin sintetizadas alcancen espontneamente un estado de agregacin irreversible. Respecto del extremo aminoterminal, existen secuencias aminoacdicas estabilizadoras, que

aseguraran una vida media prolongada y otras desestabilizadoras, las cuales favoreceran la marcacin de las protenas en dicho extremo. Tal marcacin las conducira a su degradacin. Esto es conocido como la regla del aminoterminal. Si una protena adquiere un plegamiento anmalo, o se ha desnaturalizado, o bien su extremo aminoterminal es desestabilizante, entonces sta pasa a un proceso de ubiquitinizacin. La ubiquitinizacin consiste en la adicin de varias molculas de un polipptido bsico de 76 aminocidos, muy conservado evolutivamente: la ubiquitina. La va de la ubiquitina consta de varios pasos mediados por enzimas, que implican gasto de energa (ATP). Otra va compite con la ubiquitinizacin. Las protenas desnaturalizadas son conducidas por chaperonas moleculares hasta una chaperona oligomrica o chaperonina. stas pueden recuperar el plegamiento nativo de la protena, en tanto se unan a ella en una etapa previa o temprana de la ubiquitinizacin. En caso contrario, la protena ubiquitinizada, ser captada por un complejo enzimtico denominado proteasoma.

Fig. 11.43 - Accin de los proteasomas y chaperonas sobre las protenas citoslicas

Los proteasomas estn formados por ms de una docena de proteasas, que se organizan en

cuatro anillos apilados que delimitan un cmara central. En ambos extremos de este canal, se localizan sendos complejos regulatorios, formados por diferentes ATPasas, y varios sitios de reconocimiento de la ubiquitina. La protena ubiquitinizada es reconocida por la partcula regulatoria del proteasoma perdiendo su plegamiento por accin de las ATPasas, con gasto de energa. La protena desenrollada es translocada dentro de la cmara central, donde las proteasas la degradan. Se producen oligopptidos de aproximadamente 8 aminocidos de longitud. La partcula regulatoria libera la ubiquitina para ser nuevamente utilizada. Tanto la actividad de las chaperonas como la de los proteasomas, aunque contrarias en su accin, garantizan la calidad de las protenas presentes en el citosol.

RESUMEN DE LOS MECANISMOS DE REGULACIN GNICA EN EUCARIOTAS

Control transcripcional A- Factores de transcripcin B- Grado de condensacin de la cromatina C- Grado de metilacin Control procesamiento del ARNm Control transporte del ARNm Control traduccional Control ARNm de la degradacin Empalme alternativo Mecanismos que determinan si el ARNm maduro sale o no a citosol Mecanismos que determinan si el ARNm presente en el citosol es o no traducido del Mecanismos que determinan la supervivencia del ARNm en el citosol Mecanismos que determinan la activacin o desactivacin de una protena, como as tambin el tiempo de supervivencia de la misma.

Control de la actividad proteica

3 Robert Tjian ensea biologa celular y molecular en la Universidad de California , en Berkeley, desde 1979. 4 Alberto Kornblihtt es Doctor en Qumica y Licenciado en Biologa. Ensea Biologa Molecular en la
Facultad de Cs. Exactas y Naturales de la UBA.

AUTOEVALUACIN
1) Describa el proceso por el cual la informacin de un gen es transcripta y traducida a una cadena polipeptdica. Utilice para su descripcin los siguientes trminos: transcripcin, codn stop, anticodn, ARNt, codn, aminocido, codn iniciacin, ARNm, unin peptdica, ARN polimerasa, ribosoma, traduccin, gen.

2) La siguiente secuancia de un gen : CCAAAGGGAGCGCGGCAA, codifica para una corta cadena polipeptdica. Indique: a)la secuencia de bases del ARNm transcripto del gen b)la secuencia de aminocidos de la cadena polipeptdica resultante. (Utilice la tabla del cdigo gentico) 3) Qu sucedera en el funcionamiento del opern triptofano si se produjera: a)una mutacin en el gen regulador y la protena represora perdiera afinidad por el triptofano. b)una mutacin de la secuencia promotora y la ARNpol no puede unrsele. c)una mutacin en la secuencia operadora y el complejo represor-co-represor no puede unrsele. PREGUNTAS DE OPCIN MULTIPLE 1) Sus clulas epiteliales y musculares son diferentes porque cada clula: abcdcontiene diferentes clases de genes expresa diferentes genes contiene diferente nmero de genes ha sufrido diferentes mutaciones.

2) Cul de los siguientes mecanismos de regulacin gnica es comn en procariotas y eucariotas?: abcdel grado de condensacin del ADN la accin de protenas activadoras y represoras de genes la adicin de la cap y la cola poli A en el ARNm el sistema opern lac y triptofano

3) Es requisito para la transcripcin: abcduna ARNpol ribonuclesidos trifosfato un ADN molde todas son correctas

4) El sitio de unin de la ARN pol al molde de ADN se denomina: abcdregulador codificador operador promotor

5) Cul de los siguientes elementos participa tanto en la transcripcin procariota como eucariota?: abcdfactores de transcripcin basales ADN molde ARN pol II Factores de transcripcin especficos

6) Durante la traduccin, es caracterstico de la etapa de iniciacin el acoplamiento de: abcdel codn con el anticodn iniciador la subunidad mayor con la subunidad menor el ARNm con la subunidad menor todas son correctas

7) Cul de las siguientes enzimas participa en la activacin de los aminocidos?: abcdpeptidasa seal aminoacil ARNt sintetasa peptidil transferasa ARN polimerasa

8) En procariotas la traduccin es: abcposterior a la transcripcin y maduracin de los ARNm anterior a la transcripcin y maduracin de los ARNm simultnea a la transcripcin y maduracin de los ARNm

d-

simultnea a la transcripcin

9) Cul de la siguientes interacciones determina donde finaliza la traduccin de un mensaje?: abcdARNt y aminocido Codn stop y anticodn Codn stop y factor proteico Subunidad menor y ARNm

10) La energa necesaria para que se produzca la unin peptdica proviene de: abcduna molcula de GTP la unin del aminocido con el ARNr la unin del aminocido con el ARNt la unin del ARNt con el ARNr

11) El cdigo gentico es: abcddegenerado, ambiguo y solapado no degenerado, no ambiguo, no solapado degenerado, no ambiguo, no solapado degenerado, ambiguo, no solapado

12) Cul de las siguientes secuencias establece un orden decreciente de estructuras?: abcdgen- cromosoma- nucletido- codn cromosoma- gen- codn- nucletido nucletido- cromosoma- gen- codn gen- cromosoma- codn- nucletido

GLOSARIO
Aminocido: molcula orgnica que contiene nitrgeno como NH2 y un grupo carboxilo

COOH, unidos al mismo tomo de carbono. Son las unidades estructurales de las protenas. Aminoacil- sintetasa: enzima que cataliza la formacin de un complejo constituido por un aminocido activado y su ARNt especfico denominado: aminoacil-ARNt. Anticodn: En la molcula de ARNt, secuencia de tres nucletidos que es complementaria con el codn del ARNm . ARN monocistrnico: molcula de ARNm que codifica para una sola cadena polipeptdica. ARN policistrnico: molcula de ARNm que codifica para ms de una protena. ARN polimerasa: enzimas que catalizan la sntesis de ARN a lo largo de ADN durante la transcripcin. ARN: abreviatura de cido ribonucleico. ARNm: copia complementaria de la cadena codificadora del ADN, formada durante la transcripcin que contiene la informacin gentica codificada para la formacin de un polipptido durante la traduccin. ARNr: tipo de ARN componente de los ribosomas. Se transcribe a partir del ADN del nuclolo. ARNt: molcula de ARN que transporta al aminocido y lo acopla a un codn especfico en el ARNm durante la traduccin en el ribosoma. Cap o capuchn: molcula de 7 metil-guanosina (nucletido metilado) ,que se agrega en el extremo 5del ARNm por el proceso de capping. CAP:(protena activadora de catabolitos) protena reguladora de genes en procariotas que, en ausencia de glucosa, activa genes responsables de la degradacin de fuentes alternativas de carbono. Capping: modificacin post-transcripcional que sufren los ARNm eucariotas, consistente en el agregado de una molcula de 7-metil-guanosina en el extremo 5' del mensaje. Cdigo gentico: sistema de tripletes de nucletidos en el ADN y ARN que transportan informacin gentica; se lo denomina cdigo porque determina la secuencia de aminocidos de las molculas proteicas sintetizadas por el organismo. Codn de iniciacin: codn AUG del ARNm que marca el punto de inicio de la traduccin. Codn de terminacin: codones UAA,UAG y UGA que indican el final de la traduccin del mensaje gentico que especifica para una producto polipeptdico. Codn: tripletes de nucletidos de un gen (o de su transcripto de ARNm) que especifican lo 20 aminocidos y las 3 seales de puntuacin incluidas en el cdigo gentico.

cola Poli A: una secuencia de Adenosinas que se le une al ARNm en su extremo 3' durante el procesamiento del ARN, lo que le permite inhibir la degradacin e intensificar la traduccin. Cromatina: complejo de ADN, histonas y protenas no histnicas que se halla en el ncleo de las clulas eucariotas. Material del que estn formados los cromosomas. Dogma: punto capital de un sistema, ciencia, doctrina o religin, proclamado como cierto e innegable. El dogma de la Biologa Molecular postulaba el flujo unidireccional de la informacin gentica: ADN-ARN-protenas. Este postulado (mal llamado dogma, pues la Biologa es una ciencia abierta) sufri algunas modificaciones. Empalme (splicing): escisin precisa de las secuencias intercalares(intrones) de un transcripto primario de ARN, seguida por la unin de los exones dando origen a un ARN maduro funcional. Enlace peptdico: enlace covalente formado cuando el grupo amino de un aminocido se une al grupo carboxilo de otro aminocido adyacente en una reaccin de deshidratacin. Espliceosoma: un ensamblado complejo que interacta con los extremos de un intrn en el empalme. Trabaja en la liberacin de intrones y la unin de exones adyacentes. Eucromatina: regin de un cromosoma en interfase que se tie difusamente; la cromatina "normal" es lo opuesto a la heterocromatina ms condensada. Exn: regin codificadora de protenas de un gen eucaritico. Factores de elongacin: protenas citoplasmticas que llevan a los aminoacil-ARNt al ribosoma ,e intervienen en la translocacin que ocurre cuando el ribosoma se desplaza un codn en el ARNm. Factores de iniciacin: protenas citoplasmticas necesarias para la iniciacin de la traduccin que se asocian laxamente a la subunidad menor del ribosoma y se liberan una vez que sta se une a la subunidad mayor. Factores de terminacin: protenas citoplasmticas que reconocen a los codones de terminacin en el ARNm, promoviendo a la liberacin de la nueva protena y a la disociacin de las subunidades ribosmicas . Gen: secuencia de ADN transcripta que codifica un producto con funcin celular especfica. Genoma: todo el ADN contenido en un conjunto haploide de cromosomas. Heterocromatina: regin de un cromosoma que durante extraordinariamente condensada e inactiva transcripcionalmente. la interfase permanece

Intrn: segmento intercalar en el ADN no codificador de protenas en un gen eucaritico que se transcribe en ARN, pero no se traduce pues es eliminado antes que el ARNm maduro salga al citoplasma .

Nucletido: molcula compuesta por un grupo fosfato, un azcar de cinco carbonos(ribosa o desoxirribosa) y una base nitrogenada prica o pirimdica.Los nucletidos son la unidades estructurales de los cidos nucleicos. Operador: corta regin del ADN de un cromosoma bacteriano que controla la transcripcin de genes adyantes. Opern: en un cromosoma bacteriano, grupos de genes contiguos que se transcriben en una sola molcula de ARNm. Peptidil transferasa: enzima ribosmica que cataliza la formacin del enlace peptdico. Poliadenilacin: modificacin postranscripcional que sufren la mayora de los ARNm eucariotas, consistente en el agregado de una secuencia poliA(adeninas) en el extremo 3'del mensaje. Polisoma o polirribosoma: agregado de ribosomas que traducen simultneamente el mismo ARNm. Promotor: sitio del ADN en que se inserta la polimerasa de ARN para iniciar la transcripcin. Represor: protena que se une especficamente a una regin del ADN impidiendo la transcripcin de un gen adyacente. Ribosoma: estructura compleja formada por una subunidad mayor y una pequea, cada una compuesta por ARNr y protenas. Es el sitio de la traduccin en citoplasma, mitocondrias y cloroplastos. Ribozima: molcula de ARN con actividad cataltica. Secuencia consenso: secuencia de nucletidos conservada en el curso de la evolucin, que acta como seal de reconocimiento para una enzima. Sitio aminoacdico: sitio del ribosoma al que ingresan el complejo aminoacil-ARNt cuyo aminocido est a punto de ser agregado a la cadena polipeptdica en crecimiento. Sitio peptidlico: sitio del ribosoma que contiene al ARNt cuyo aminocido acaba de unirse a la cadena polipeptdica. Topoisomerasa II ( ADN girasa): Enzima que cataliza el superenrrollamiento negativo del ADN (desenrollado de la horquilla) utilizando ATP como cofactor como tambin relajar el superenrollamiento positivo. Traduccin: proceso por el cual los aminocidos se unen en una cadena polipeptdica en el ribosoma, de acuerdo con la secuencia de nucletidos del ARNm transcripto del gen. Transcripcin: proceso enzimtico en el cual la informacin contenida en una cadena de ADN se utiliza para especificar una secuencia de bases complementaria en una cadena de ARN. BIBLIOGRAFIA

1. Alberts, B et al;. (1996). Biologa Molecular de la Clula; 3ra Edicin; Ediciones Omega S.A. Barcelona. 2. Baldi, A.; Crespi, M.; Rosemblit, N.; (1988); Oncogenes y sus protenas codificadas Ciencia e Investigacin, pgs 4-19. 3. 4. Brock, T; (1997) Biology the Microorganisms; 8th Edition; Prentice Hall.NY. Brown, Kathryn; El negocio actual del genoma humano; Investigacin y Ciencia, 288:36-41.

5. Campbell, N; (1997) Biology; 4th Edition. the Benjamin Cummings Publishing Company, Inc. California 6. 7. Darnell, J.E.Jr; (1986); ARN. Investigacin y Ciencia, Noviembre 1986: 36-49. Ezzell, Carol; Ms all del genoma humano; Investigacin y Ciencia, 288: 48-53.

8. De Frutos, Rosa; (1996); Elementos transponibles de Drosophila .Investigacin y Ciencia, Junio 1996: 52-59. 9. De Robertis, E.; Hib, J.; (1998) .Fundamentos de Biologa Celular y Molecular; El Ateneo. Bs.As. 10. De Robertis(h); Hib; Ponzio.(1996).Biologa Celular y Molecular de De Robertis; 12 Edicin. El Ateneo. Bs.As. 11. Gardner, Simmons, Snustad; (1991)Principles of genetics; 8th edition; John Wiley and sons, Inc. 12. Harper, (1995) Manual de Bioqumica; Ediciones El Manual Moderno. 13. Karp, G.; (1998) Biologa Celular y Molecular;Ed. Mc Graw Hill Interamericana. Mxico 14. Kimball, J.; (1994) Biology; 6th ed.; Mc Graw Hill Professional Publishing. NY. 15. Kornblihtt, A. (2001) La Humanidad del Genoma , Encrucijadas UBA, Ao1, N 5: 8-21. 16. 16. Lowy, Siekevitz, Menninger, Gallant; (1991) Cell Structure and Function; Third edition; Saunders College Publishing;a division of Holt, Rinchart and Winston Inc.. 17. Moyzis, RK .El telmero humano. Investigacin y Ciencia; octubre 1991: 24. 18. Ochoa, S.; Leloir, y col.; (1986) Bioqumica y Biologa Molecular, Salvat. 19. Perucho, M.(1998) Cncer del fenotipo mutador de microsatlites. Investigacin y Ciencia 261: 46-55. 20. Pueyo de la Cuesta, Carmen ; (1998). Reparacin del ADN e inestabilidad del genoma Investigacin y Ciencia, 261:30-31.

21. Rennie, John; (1993); Los nuevos giros del ADN. Investigacin y Ciencia; 200: 68-75. 22. Ros, Azorn, Llebot, Garcia de la Mora, Genes y estilo (1991); Investigacin y Ciencia, 177: 34-36. 23. Smith and Wood; (1997) .Biologa Celular; Ed.Addison-Wesley, Iberoamericana S.A. 24. Smith and Wood; (1998) .Biologa Molecular y Biotecnologa; Ed.Addison-Wesley, Iberoamericana S.A. 25. Stansfield, W., (1992) Gentica; 3ra Edicin; Mc Graw Hill Interamericana. Mxico. 26. Stryer, L.;(1995) Bioqumica; Ed. Revert. Espaa. 27. Tjian, R.; (l995) .Mecanismos moleculares de control gnico. Investigacin y Ciencia, 223: 20-27. 28. Valpuesta, J.M., Llorca, O y Marco, S. (2000). Biologa de las chaperoninas. Investigacin y Ciencia. 282: 52-59. 29. Wickner, S; Mauruzi, M; Gottesman, S. (1999). Posttranslational Quality Control: Folding, Refolding and degrading Proteins. Science. 286: 1888-1893.

[1] Recientemente se ha propuesto que algunos ARNr tienen actividad cataltica, con lo cual la funcin enzimtica quedara a cargo de un ARNr (ribozima) y no de la protenas. [2] Coeficiente de sedimentacin o unidades Sverdberg (S) de sedimentacin: mide la velocidad con que sedimentan los ribosomas u otras partculas o molculas cuando se las ultracentrifuga.

[REGRESAR]

Secuencia Shine-Dalgarno
De Wikipedia, la enciclopedia libre Saltar a: navegacin, bsqueda

La secuencia Shine-Dalgarno es una secuencia de ARN mensajero propia de los transcritos de procariotas. Se trata de una secuencia situada unos 6 o 7 nucletidos antes del codn de

inicio de la traduccin, y regula la iniciacin de sta. Posee una secuencia consenso caracterstica: AGGAGG, que es complementaria a una zona del 3' del ARN ribosomal 16S (denominada secuencia anti-Shine-Dalgarno y que posee por tanto la forma UCCUCC). La interaccin de ambas secuencias posibilita la unin del ribosoma al 5' del ARN mensajero, lo que facilita el reconocimiento del codn de inicio y la subsiguiente sntesis proteica.1 La secuencia fue descrita por los investigadores australianos John Shine y Lynn Dalgarno en 1975.2 El mecanismo subyacente en la interaccin de esta secuencia con el componente de cido ribonucleico del ribosoma no es propio slo de procariotas, sino que se presenta en eucariotas e incluso en virus. En el caso de eucariotas, la secuencia difiere levemente y recibe el nombre de secuencia Kozak.3

Opern lac
De Wikipedia, la enciclopedia libre Saltar a: navegacin, bsqueda Este artculo o seccin necesita referencias que aparezcan en una publicacin acreditada, como revistas especializadas, monografas, prensa diaria o pginas de Internet fidedignas. Puedes aadirlas as o avisar al autor principal del artculo en su pgina de discusin pegando:

{{subst:Aviso referencias|Opern lac}} ~~~~

El opern lac es un opern requerido para el transporte y metabolismo de la lactosa en la bacteria Escherichia coli, as como en algunas otras bacterias entricas. Presenta tres genes estructurales adyacentes, un promotor, un terminador y un operador. El opern lac es regulado por varios factores, incluyendo la disponibilidad de glucosa y de lactosa. La regulacin gnica del opern lac fue el primer mecanismo regulatorio de la expresin gentica en ser elucidado, y es utilizado a menudo como un ejemplo clsico de la regulacin gnica en procariotas.

Contenido
[ocultar]

1 Antecedentes 2 Estructura y elementos del opern lac 3 Regulacin del opern lac 4 Represin catablica 5 Anlogos de la lactosa 6 Nomenclatura gentica o 6.1 Clasificacin de mutantes regulatorios o 6.2 Regulacin por AMP cclico 7 Enlaces externos

[editar] Antecedentes
Hasta el ao 1960 se pensaba que todos los moldes necesarios para la sntesis protica se encontraban en el RNA ribosmico (rRNA). Sin embargo, los pesos moleculares de las protenas varan hasta en dos rdenes de magnitud respecto de los pesos de los rRNA (5S, 16S, y 23S). Este hecho fue puesto de manifiesto por Franois Jacob y Jacques L. Monod, quienes ya predijeron la existencia del RNA mensajero (mRNA), el cual se sintetizara a partir de un DNA molde. Jacob y Monod decidieron estudiar la degradacin de la lactosa en E. coli, de la cual se saba que estaba controlada por tres enzimas cuyos genes se encuentran adyacentes en el cromosoma bacteriano. Una de estas enzimas era la -galactosidasa, que hidroliza la lactosa. Cuando cultivaban bacterias en glucosa como fuente de carbono podan observar cmo la concentracin de -galactosidasa era muy baja. Al sustituir glucosa por lactosa se observaba un rpido aumento en los niveles de -galactosidasa y de las otras dos enzimas. Al retirar de nuevo la lactosa, los niveles de las tres enzimas disminuan rpida y drsticamente. Este hecho sugera que los moldes para la sntesis de estas enzimas eran muy inestables, sintetizndose y degradndose rpidamente, lo cual no encajaba con la elevada estabilidad de los rRNAs. Tras analizar numerosos mutantes de E. coli que presentaban un control defectuoso en la induccin de estas enzimas (induccin en ausencia de lactosa, no induccin en presencia de lactosa,...) propusieron la existencia de un represor que, unindose a una secuencia operadora especfica del DNA (promotor), regulara la concentracin de mRNA.

Todos estos estudios, junto a los realizados por Andr Lwoff con el bacterifago , permitieron a Jacob y Monod proponer en 1961 una hiptesis unificadora para la regulacin gnica, llamada posteriormente modelo del opern. Dicho modelo propona la existencia de represores capaces de unirse a operadores en la secuencia del DNA, los cuales controlaban as la sntesis del mRNA. El mRNA sera una copia complementaria de la secuencia del DNA que codificaba una o varias protenas (segn si hubiera uno o ms genes). Al conjunto de genes contiguos ms los elementos reguladores que controlan su expresin se le denomin opern.

[editar] Estructura y elementos del opern lac

El opern lactosa presenta los siguientes elementos:

Genes estructurales: o Gen lac z: codifica la enzima -galactosidasa, que cataliza la reaccin de hidrlisis de la lactosa en glucosa ms galactosa. o Gen lac y: codifica la protena galactsido permeasa, cuya funcin es facilitar el transporte de la lactosa al interior de la bacteria colocndose en la membrana plasmtica de la bacteria y formando un carrier. o Gen lac a: codifica la enzima tiogalactsido transferasa, que cataliza la transferencia del grupo acetil del acetil Coenzima A al 6-OH de un aceptor tiogalactsido. Este gen no est relacionado con el metabolismo de la lactosa. Promotor: regin del DNA, precedente a los genes estructurales, que reconoce la RNA polimerasa para llevar a cabo la transcripcin. Operador: regin del DNA localizada entre el promotor y el comienzo de los genes estructurales, que es reconocida por la protena represora Lac I. Gen represor (lac I): codifica la protena represora Lac I, que reconoce la regin operadora, donde se une. Impide la transcripcin de los genes bajo el control de este promotor pero estimula la unin de la RNA polimerasa formando lo que se conoce como Complejos Cerrados. Cuando el represor se retire (en presencia de inductor que en este caso ser lactosa o IPTG), la RNA polimerasa estar lista para formar Complejos Abiertos y empezar la transcripcin.

La secuencia de ADN del opern lac de E. coli, el ARNm de los genes lacZYA, y el gen lacI estn disponibles en GenBank (view).

Estructura del opern lac.

[editar] Regulacin del opern lac

El opern lac se encuentra bajo un tipo de regulacin negativa, donde los genes pueden transcribirse siempre, salvo cuando la protena represora Lac I se encuentra unida a la regin operadora, por la cual presenta una elevada afinidad. En este caso, el promotor del gen lac I

es constitutivo, por lo que la protena Lac I se expresa permanentemente y permanece unida en forma de tetrmero a la zona operadora, impidiendo la transcripcin de los genes estructurales. La regulacin del opern funcionara de la siguiente forma:

En presencia de lactosa: la lactosa es el inductor del opern. Es capaz de unirse a la protena represora Lac I y generar un cambio conformacional que disminuye su afinidad por la regin operadora. De esta forma, la regin operadora queda libre, la RNA polimerasa puede transcribir libremente los genes estructurales y la -galactosidasa puede degradar la lactosa a glucosa ms galactosa. En ausencia de lactosa: en ausencia de inductor, la protena represora Lac I mantiene su elevada afinidad por la regin operadora, impidiendo que la RNA polimerasa transcriba los genes estructurales. De esta forma, el sistema permanece cerrado con el consecuente ahorro energtico para la bacteria.

Opern lac en detalle.

La verdadera molcula inductora del opern lac es la alolactosa, un ismero de la lactosa que se obtiene por una transglicosilacin llevada a cabo ocasionalmente por la -galactosidasa. El mRNA de los genes estructurales presenta una vida media de unos tres minutos, lo que permite que la induccin pueda revertirse rpidamente en ausencia de lactosa. Por ltimo, cabe destacar que el opern lac presenta una expresin basal, al igual que la mayora de los operones. Esto quiere decir que, en ausencia de inductor, el opern puede expresar los genes estructurales en muy baja concentracin y as mantener unas bajas concentraciones de -galactosidasa y de permeasa. La permeasa permitir que pueda entrar inicialmente la lactosa en la bacteria y la -galactosidasa permitir transglicosilar la lactosa y transformarla en alolactosa, el verdadero inductor del opern lac. A medida que entre ms lactosa en la bacteria, se irn expresando en mayor medida los genes estructurales.

[editar] Represin catablica

El opern lac presenta adems otro tipo de regulacin que viene mediada por el AMP cclico y la protena CRP (Protena Receptora de AMPc). A lo largo de todo su estudio, Jacob y Monod tambin pudieron observar cmo las bacterias eran capaces de seleccionar la fuente de carbono que utilizaban cuando tenan ms de una a su alcance. Este comportamiento era lgico desde el punto de vista del ahorro energtico, pero cmo hacan las bacterias para "elegir"?. Cuando las bacterias crecen en glucosa ms lactosa como fuentes de carbono, primero utilizan la glucosa y slo despus, tras haber agotado la glucosa, utilizan la lactosa, en lo que se denomina crecimiento diaxico. Adems, se puede observar que, a pesar de estar el inductor (lactosa) presente, no hay transcripcin de los genes estructurales del opern lac. La respuesta se encontr al observar que la transcripcin de los genes estructurales no dependa nicamente de la ausencia del represor Lac I en la regin operadora, sino que adems era necesario que se uniera la protena CRP ms AMPc alrededor de la regin -60, respecto del comienzo del gen lac Z. La protena CRP se encuentra en forma de dmero y solo es activa cuando lleva unido AMPc. El alto contenido de AMPc es debido a que en ausencia de transporte de glucosa al interior celular se aumenta la actividad de la adelinato ciclasa (enzima encargada de la sntesis de AMPc). Aquellos mutantes para la adenilato ciclasa (que no producen AMPc) o para la protena CRP presentaban niveles muy bajos de expresin de los genes del opern lac. Por lo tanto, sin CRP o sin AMPc el sistema permanecera cerrado. Esto unido al hecho de que la glucosa disminua los niveles de AMPc daba la explicacin por la cual la glucosa ejerca una represin por catabolito. Este tipo de represin se ha podido observar tambin en el opern de la arabinosa, de la galactosa, de la maltosa... De este modo, la presencia de glucosa inhibe de forma conjunta muchos operones que regulan la utilizacin de fuentes alternativas de carbono y energa, es decir, la represin catablica constituye un reguln

[editar] Anlogos de la lactosa

Se han encontrado una serie de molculas derivadas o anlogas de la lactosa, las cuales han sido de gran utilidad a la hora de trabajar con el opern lac en el laboratorio. La mayora de estos compuestos son galactsidos derivados de la lactosa, donde la glucosa ha sido sustituida por algn radical o grupo qumico. A continuacin se pueden observar los anlogos de lactosa ms representativos:

IPTG (isopropil--D-tiogalactsido): suele utilizarse como inductor artificial del opern lac, ya que es capaz de unirse al represor LacI, pero no es un sustrato para la -galactosidasa y no puede ser metabolizado por la bacteria. Adems, el IPTG es transportado eficientemente al interior de la bacteria en ausencia de la permeasa, con lo que su entrada es independiente de la expresin del gen lac y. Fenil-Gal (fenil--D-galactosa): es un sustrato de la -galactosidasa, pero no es un inductor del opern, ya que es incapaz de unirse al represor LacI. Esto hace que las cepas bacterianas silvestres sean incapaces de crecer cuando su nica fuente de carbono es fenil-gal. Slo aquellos mutantes donde se encuentre ausente el represor LacI podrn crecer en esta fuente de carbono. ONPG (orto-nitrofenil--D-galactopiransido): es un sustrato de la -galactosidasa que, al ser hidrolizado, produce un compuesto (ortonitrofenol) que presenta un intenso color amarillo. El ONPG es muy utilizado en los ensayos in vitro de -galactosidasa, en los que se puede obtener la concentracin de -galactosidasa en funcin de la intensidad del color amarillo, medida por absorbancia a una longitud de onda de 420 nm. X-gal (5-bromo-4-cloro-3-indolil--D-galactsido): es otro sustrato de la -galactosidasa que, al ser hidrolizado, produce un compuesto (indoxil) que en contacto con el aire se transforma en ndigo insoluble, el cual presenta un intenso color azul. Es utilizado como indicador de expresin de la -galactosidasa en colonias bacterianas creciendo en placa. Aquellas colonias que estn expresando la enzima se tornarn de un color azul ms o menos intenso en funcin de la cantidad de enzima que estn expresando. Alolactosa: es un ismero de la lactosa y es el verdadero inductor del opern lac. Mientras que la lactosa es galactosa-(1-4)-glucosa, la alolactosa es galactosa-(1-6)-glucosa. La lactosa, una vez en el citoplasma bacteriano, es transformada en alolactosa por la galactosidasa./

IPTG.

ONPG.

X-gal.

Alolactosa.

[editar] Nomenclatura gentica

Se utilizan cdigos de tres letras para describir los fenotipos de las bacterias. Ejemplos de esto son: Lac (capacidad de utilizar lactosa como fuente de carbono), His (capacidad de sintetizar el aminocido histidina), Mot (motilidad natatoria) y Str (resistencia al antibitico estreptomicina). En el caso de Lac, las cepas silvestres son Lac+, presentando la capacidad de utilizar lactosa como una fuente de carbono y de energa, y los mutantes Lac-, derivados de ellas que han perdido dicha capacidad y no pueden usar la lactosa. Generalmente, estas tres letras tambin son utilizadas (en minsculas e itlicas) para sealar los genes involucrados en un fenotipo particular, donde cada gen es distinguido por una letra adicional. Los genes lac que codifican para enzimas son lac z, lac y y lac a. El cuarto gen es lac I, que codifica para el represor Lac I del opern lac. Es posible distinguir entre genes

estructurales que codifican para enzimas, y genes reguladores que codifican para protenas que regulan la expresin gnica. El uso actual ampla la nomenclatura fenotpica para aplicarse a protenas: as, LacZ es el producto protico del gen lac z, es decir, la -galactosidasa. Varias secuencias cortas que no son genes tambin afectan la expresin gnica, incluyendo al promotor lac, lac p, y el operador lac, lac o. A pesar de no ser del todo riguroso, las cepas cuyo lac o se encuentra mutado son denominadas lac oc, por razones histricas.
[editar] Clasificacin de mutantes regulatorios

Uno de los avances conceptuales de Jacob y Monod fue el de reconocer la distincin entre sustancias regulatorios y los sitios donde ellas actan para cambiar la expresin gnica. Jacob, un ex-soldado, utiliz la analoga de un bombardero que liberara su carga letal al recibir una transmisin especial de radio, o una seal. Un sistema funcional requiere tanto de un transmisor en tierra como de un receptor en el aeroplano. Ahora bien, supngase que el transmisor que habitualmente se usa est roto. Podra hacerse funcionar este sistema introduciendo un segundo transmisor, funcional. En contraste, dijo Jacob, considere un bombardero con un receptor defectuoso. El comportamiento de este bombardero no puede ser cambiado por introduccin de un segundo aeroplano, funcional. Para analizar los mutantes regulatorios del opern lac, Jacob desarrollo un sistema en el cual una segunda copia de los genes lac (lacI con supromotor, y lacZYA con promotor y operador) podan ser introducidos en una nica clula. Se ensaya entonces el fenotipo regulatorio de un cultivo de tales bacterias, las cuales son diploides para los genes lac, pero en cualquier otro sentido normales. En particular, se determina si LacZ y LacY se producen incluso en la ausencia de IPTG. El experimento, en el cual tanto genes como grupos de genes se testean de a pares, es denominado un test de complementacin.

Este test se encuentra ilustrado en la figura (se omite lacA por razones de simplicidad). En principio, se muestran ciertos estados haploides (es decir, la clula slo tiene una nica copia de los genes lac). El panel (a) muestra represin, (b) muestra induccin por IPTG, y (c) y (d) muestran el efecto de una mutacin al gen lacI o al operador, respectivamente. En el panel (e) se muestra el test de complementacin para el represor. Si una copia de los genes lac lleva una mutacin en lacI, pero la segunda copia es del tipo salvaje para lacI, el fenotipo resultante es normalno se expresa LacZ sin IPTG. Se dice que las mutaciones que afectan al represor son recesivas para el tipo salvaje (y que el el tipo salvaje es dominante), y esto se explica por el hecho de que el represor es una pequea protena que puede difundir hacia el interior de la clula. La copia del opern lac adyacente al gen lacI defectuoso es apagado efectivamente por la protena producida por la segunda copia de lacI. Si el mismo experimento se lleva a cabo utilizando una mutacin en el operador, se obtiene un resultado diferente (panel (f)). El fenotipo de una clula que lleva un sitio de operador mutante y uno de tipo salvaje es que LacZ y LacY se producen incluso en la ausencia del inductor IPTG. La mutacin del operador es dominante. Cuando el sitio del operador donde el represor debe unirse est daado por mutacin, la presencia de un segundo sitio funcional en la misma clula no hace diferencia alguna a la expresin gnica controlada por el sitio mutante. Una versin ms sofisticada de este experimento utiliza operones marcados para distinguir entre las dos copias de los genes lac y mostrar que el/los genes no regulados son quienes se encuentran junto al operador mutante (panel (g)). Por ejemplo, supngase que se marca una copia con una mutacin que inactiva lacZ para que entonces slo se produzca la protena LacY, mientras que la segunda copia trae una mutacin que afecta lacY y slo puede producir

LacZ. En esta versin, slo la copia del opern lac adyacente al operador mutante se expresa sin IPTG. Decimos que la mutacin del operador es cis-dominante, si es dominante para tipos salvajes pero afecta slo la copia del opern inmediatamente adyacente a ella. Esta explicacin puede ser engaosa en un sentido importante, porque se deriva de una descripcin del experimento y luego explica los resultados en trminos de un modelo. Pero de hecho, es a menudo cierto que el modelo es planteado en primer lugar, y que luego se disea un experimento especficamente para comprobar la validez del mismo. Jacob y Monod imaginaron primero que debe haber un sitio en el ADN con las propiedades del operador, y luego disearon ensayos de complementacin para mostrar esto. La dominancia de los mutantes del operador sugiere tambin un procedimiento para selecccionarlos especficamente. Si se selecciona a los mutantes regulatorio de un cultivo de tipo salvaje utilizando fenil-Gal, como se describe anteriormente, las mutaciones del operador son raras comparadas con los mutantes del represor, debido a que el tamao objetivo es demasiado pequeo. Pero si, en vez de comenzar con una cepa que lleva dos copias de los genes lac (es decir, que sea diploide para lac), las mutaciones del represor (que an continuarn ocurriendo) no sern recobradas, ya que la complementacin por los genes de tipo salvaje confiere un genotipo salvaje, y por lo tanto dominarn las mutaciones de operador.
[editar] Regulacin por AMP cclico

El microorganismo experimental utilizado por Franois Jacob y Jacques Monod fue la bacteria comn de laboratorio, E. coli, pero muchos de los conceptos regulatorios bsicos que fueron descubiertos por Jacob y Monod son fundamentales para la regulacin celular en todos los organismos. La idea clave es que las protenas no se sintetizan cuando no se las necesita-- E. coli ahorra recursos celulares y energa evitando sintetizar las tres protenas Lac cuando no hay necesidad de metabolizar lactosa, como por ejemplo, cuando otros azcares como la glucosa, estn presentes. La pregunta clave era cmo controla E. coli ciertos genes en respuesta a sus necesidades metablicas? Durante la Segunda Guerra Mundial, Monod ensayaba los efectos de las combinaciones de azcares como fuente de nutrientes para E. coli. Descubri que las bacterias a las cuales se las cultivaba en un medio que contena dos azcares diferentes generalmente mostraban dos frases de crecimiento. Por ejemplo, si se les provea glucosa y lactosa, la primera sera metabolizada en primer lugar (fase de crecimiento I, vase la figura 2), y luego la lactosa (fase de crecimiento II). A este fenmeno se lo denomina diauxa.

Figura 2: La curva de crecimiento bifsica de Monod.

El metabolismo de la lactosa no ocurre durante la primera parte de la curva de crecimiento diuxico porque la -galactosidasa no se sintetiza cuando hay presentes tanto glucosa como lactosa en el medio. La explicacin a este hecho dependa de la caracterizacin de mutaciones adicionales que afectaran a otros genes lac que no fueran explicados por el modelo clsico. Se supo de otros dos genes, cya y crp, que estn mapeados lejos de lac, y cuando se encuentran mutados, resultan expresados a nivels ms bajos en presencia de IPTF, e incluso en una cepa mutante para el represor o el operador. El descubrimiento del AMP cclico en 1957 (en clulas eucariotas), y una dcada ms tarde en E. coli, llev a la demostracin de que los mutantes con uno de estos genes defectuosos podan recobrar su actividad por adicin de AMP cclico al medio. El gen cya codifica para la adenilato ciclasa, la cual produce AMP cclico. En un mutante para cya, la ausencia de AMP cclico hace unas diez veces ms lenta la expresin de los genes lacZYA. La adicin de AMP cclico corrige los bajos niveles de expresin de Lac caractersticos de los mutantes para cya. El segundo gen, crp, codifica para una protena llamada catabolite activator protein (protena activadora de catabolitos, o CAP, por sus siglas en ingls), o catabolite repressor protein (protena represora de catabolitos, o CRP, por sus siglas en ingls). [Es destacable que casi cuarenta aos despus, diferentes genetistas utilicen trminos diferentes para el mismo gen, segn cmo sea su sentimiento hacia los dos grupos que competan por el descubrimiento original.] Esta regulacin dual causa que la enzimas involucradas en el metabolismo de la lactosa sean fabricadas en pequeas cantidades en presencia tanto de glucosa como de lactosa (a veces llamada leaky expression, del ingls expresin con prdidas) debido a la inhibicin de la unin de LacI al operador por parte de la lactosa, pero a concentraciones de AMPc altas y en presencia de lactosa, siempre hay niveles altos de expresin (Fase II en la Figura 2). [Leaky expression] es necesaria, de modo tal de permitir el metabolismo de algo de glucosa luego de que la fuente de glucosa haya sido agotada, pero antes de que la expresin de lac haya sido completamente activada. En resumen:

En ausencia de lactosa, no hay produccin de enzima Lac (LacI est unido al operador). Cuando hay lactosa presente, pero tambin hay una fuente de carbono preferida en el medio (como la gluocsa), entonces slo una pequea cantidad de enzima se produce (LacI no est unido al operador). Cuando la lactosa es la fuente preferida de carbono (por ejemplo, en ausencia de glucosa) AMPc-CAP se unen al promotor y la produccin de la enzima Lac se maximiza.

Entonces, por qu hay un retraso entre las dos fases de crecimiento? En primer lugar, la protena regulatoria CAP debe ensamblarse sobre el opern lac, lo cual se traduce en un incremento en la produccin de ARNm de lac. A mayor cantidad de copias de ARNm de lac, mayor ser la cantidad de copias (ver traduccin) de LacZ (-galactosidasa para metabolizar lactosa) y LacY (lactosa permeasa para el transporte de la lactosa hacia el interior de la clula). Luego de una pausa necesaria para incrementar el nivel de las enzimas metablicas de lactosa, las bacterias entran en una nueva y rpida fase de crecimiento celular.

Dos enigmas de la represin de catabolitos relacionada a como el nivel de AMPc est en realidad acoplado a la presencia de glucosa y, en segundo lugar, por qu a las clulas debiera siquiera preocuparles. Luego de que la lactosa es clivada forma glucosa y galactosa (fcilmente conversible a glucosa). En trminos metablicos, la lactosa es tan buena fuente de carbono y energa como la glucosa. El nivel de AMPc est relacionado, no a la concentracin de glucosa intercelular, sino a la velocidad de transporte de glucosa, la cual influencia la actividad de la adenilato ciclasa. (Adems, el transporte de glucosa tambin lleva a la inhibicin directa de la lactosa permeasa.) Slo es posible especular acerca de por qu E. coli trabaja de esta manera. Todas las bacterias entricas fermentan glucosa, lo que sugiere que la encuentran frecuentemente. Es posible que una pequea diferencia en la eficiencia del transporte o el metabolismo de la glucosa vs. lactosa haga ventajoso para las clulas el regular al opern lac de esta manera.[cita requerida]

anterior

ir a "ndice"

ir a "Trabajos de biologa"

siguiente

TEMA 6: LA TRANSFERENCIA DE INFORMACIN CONTENIDO

TEMA 6: LA TRANSFERENCIA DE INFORMACIN 1. INTRODUCCIN. El dogma central de la Gentica Molecular.

2. REPLICACIN DEL ADN. Replicacin semiconservadora del ADN: experimento de Meselson-Stahl. Replicacin del ADN. 3. TRANSCRIPCIN: BIOSNTESIS DEL ARN. 4. TRADUCCIN: BIOSNTESIS DE PROTENAS. Descripcin y localizacin de los ribosomas. La sntesis de protenas (Sntesis de los aminoacil-ARN-t, iniciacin, elongacin y terminacin). Diferencias entre Diferencias entre la biosntesis de polipptidos en clulas eucariticas y en clulas procariticas. Regulacin de la sntesis de protenas. 5. EL CDIGO GENTICO. Caractersticas: universal y degenerado.

1. Introduccin En 1953 J.D. Watson y F.H.C. Crick postularon la estructura de doble hlice del ADN. Dicha estructura era acorde con la equivalencia molar de bases y con los diagramas de rayos X caractersticos del ADN. Pero adems indicaron la existencia de un mecanismo sencillo por medio del cual la informacin poda pasar de las clulas progenitoras a las clulas hijas. La hiptesis pronto fue desarrollada y extendida, hasta llegar a lo que Crick denomin dogma central de la Gentica Molecular: la informacin gentica fluye del ADN al ARN y de ste a las protenas. Posteriormente este enunciado ha sido modificado de la siguiente forma:

2. Replicacin del ADN a) Replicacin semiconservadora del ADN: experimento de Meselson-Stahl Desde el punto de vista gentico, la caracterstica ms sobresaliente de la hiptesis de Watson y Crick acerca de la estructura en doble hlice del ADN, era que las dos hebras del ADN eran complementarias, y que la replicacin de cada una de ellas da lugar a dos molculas de ADN dplex, cada una de las cuales contiene una hebra del ADN progenitor. Es lo que denominamos replicacin semiconservadora. Pero existen otras dos posibilidades de replicacin por las cuales obtendramos dplex de ADN hijos iguales a los del progenitor: la conservadora y la dispersora:

Meselson y Stahl trabajaron con E. coli y demostraron que su ADN se replicaba por el mecanismo semiconservador propuesto por Watson y Crick: 1) Cultivaron E. coli (varias generaciones) en un medio cuya nica fuente de N era NH4Cl marcado con el istopo pesado N15. 2) Continuaron el cultivo de esas E. coli marcadas con N15 en un medio con N14-NH4Cl normal como nica fuente de N (varias generaciones). 3) Extrajeron ADN de las muestras y determinaron la densidad de flotacin por centrifugacin en gradientes de densidad de CsCl.

Slo encontraron ADN con densidad de flotacin media (una hebra pesada y otra ligera) o con densidad de flotacin baja (dos hebras ligeras de nueva sntesi: la replicacin era, pues, semiconservadora. b) Replicacin del ADN Los estudios realizados acerca de la replicacin del ADN se deben al descubrimiento (en 1956, por Arthur Kornberg y cols.) de la enzima ADN-polimerasa I. La ADN-polimerasa I de E. coli cataliza la sntesis de los polmeros de ADN a partir de los cuatro desoxirribonuclesidos-5'-trifosfato, en presencia de Mg2+ y con eliminacin de pirofosfato: dNTP + (dNMP)n

W (dNMP)

n+1

+ PPi

El crecimeinto de la cadena se realiza en direccin 5' ===> 3'.

El ADN de doble hebra intacto no ceba la reaccin, a no ser que contenga mellas en alguna de sus dos hebras.

La enzima construye una hebra de ADN complementaria a la hebra patrn, como se muestra por el anlisis de la composicin de bases. Adems, otros anlisis han mostrado que la polaridad de la nueva hebra es opuesta a la de la hebra patrn, es decir, que se trata de una hebra antiparalela.

La ADN-polimerasa I presenta adems 2 actividades exonuclesicas (3'==>5' y 5 ==>3'), que ejercen funciones de "correccin de pruebas", al eliminar nucletidos no apareados. En la sntesis de ADN interviene adems otra enzima: la ADN-ligasa. Esta enzima repara las mellas que pueden existir en las hebras de ADN. La ADN-ligasa puede unir los extremos de 2 cadenas de ADN si son los dplex de una misma hebra complementaria.

Los mutantes deficientes en ADN-polimerasa I condujeron al descubrimiento de las ADN-polimerasas II, III y III*. sta, junto con la protena copolimerasa III*, constituye la forma responsable de la replicacin del ADN, mientras que la ADN-polimerasa I funciona como auxiliar, as como en la reparacin del ADN. Okazaki encontr que ambas hebras del ADN se replican formando cortos fragmentos, de hasta 2000 restos nucleotdicos, los cuales se unen por accin de una ADNligasa. Esos fragmentos se denominan fragmentos de Okazaki.

La replicacin del ADN requiere la participacin de protenas desenrolladoras y destorcedoras. Adems, dicha replicacin necesita ser cebada por la accin de la ARNpolimerasa-ADN-dirigida, que fabrica unos cortos tramos de ARN cebadores sobre los que se

construye el ADN; posteriormente, los ARN cebadores son escindidos y eliminados. Mientras que en los procariotas los fragmentos de Okazaki son de 1000 a 2000 nucletidos, en los eucariotas son mucho ms cortos (de 100 a 150 nucletidos). La hipottica secuencia de etapas en la replicacin del ADN quedara as: 1) Reconocimiento del punto de iniciacin. 2) Desenrollamiento del ADN. 3) Cebado por el ARN (de 50 a 100 restos) gracias a la accin de una ARNpolimerasa-ADN-dirigida. 4) Formacin de ADN sobre los ARN cebadores. 5) Eliminacin de los ARN cebadores. 6) Unin de los fragmentos de ADN: primero, las brechas que quedan entre los fragmentos de Okazaki se rellenan por accin de la ADN-polimerasa I, y los terminales 5' y 3' se "sueldan" por accin de la ADN ligasa. El ADN puede tambin ser sintetizado por la ADN-polimerasa-ARN-dirigida o transcriptasa inversa, presente en algunos virus de ARN cancergenos as como en clulas normales.

3. Transcripcin: biosntesis del ARN Los ARN son sintetizados por la ARN-polimerasa-ADN-dirigida a partir de los ribonuclesidos-5'-trifosfato. La ARN-polimerasa cataliza la reaccin, que se produce en presencia de Mg2+ y produce pirofosfato: NTP + (NMP)n (NMP)n+1 + PPi El funcionamiento de la ARN-polimerasa es similar al de la ADN-polimerasa, pero no necesita cebador. Desarrolla el proceso de sntesis en sentido 5' ===> 3'.

====>

Se ha comprobado que in vivo slo se transcribe un ahebra de ADN. La ARN-polimerasa requiere factores especiales para el reconocimiento del punto de iniciacin. El primer nuclesido-5'-trifosfato o nucletido iniciador es siempre el ATP o el GTP y se fija a la polimerasa para formar el complejo de iniciacin. Los ARN-m son modificados por el acoplamiento de una larga cola de poli A a su extremo 3'. Los ARN-r se generan a partir de una larga cadena precursora que finalmente es escindida para dar lugar a los ARN acabados. A partir de un solo gen pueden ser transcritas muchas cadenas de ARN simultneamente. El aspecto que presentan los genes nucleolares de un huevo de anfibio, que codifican el ARN-r, aparece reflejado en el siguiente dibujo:

Cada gen experimenta transcripcin en ARN-r y forma unas 100 hebras de ste simultneamente y a medida que las molculas de ARN-polimerasa se deslizan a lo largo del gen. Por ltimo hay que aadir que existen unas ARN-polimerasas-ARN-dirigidas, tambin conocidas por ARN-replicasas, que se forman en clulas bacterianas infectadas por virus-ARN. La ARN-replicasa requiere ARN como patrn y no funciona con el ADN. Pero adems, en contraste con las ADN- y las ARN-polimerasas, las ARN-replicasas exhiben especificidad de patrn (la ARN-replicasa inducida por el virus Q puede utilizar como patrn solamente el ARN del propio virus: no replica los ARN de la clula husped).

4. Traduccin: biosntesis de protenas a) Descripcin y localizacin de los ribosomas Los ribosomas son orgnulos de muy pequea dimensin (unos 180 en procariotas y 200-220 en eucariotas), formados por ribonucleoprotenas, y presentes en todos los tipos de clulas ya que son esenciales en la biosntesis de protenas. Estn formados por ARN-r y protenas (60-65% de ARN-r y 35-40% de proteinas). Son diferentes los ribosomas de clulas procariticas y los de clulas eucariticas. Aunque en ambos casos estn constituidos por 2 subunidades desiguales -una grande y otra pequea- que permanecen establemente unidas cuando en el medio hay una concentracin relativamente elevada de Mg2+. Hay que recordar que los ribosomas mitocondriales y los cloroplastidiales se

asemejan por sus caractersticas a los de procariotas:

Los ribosomas procariticos (70 S) pueden encontrarse libres en el citoplasma o asociados en forma de rosarios llamados polirribosomas o polisomas (constituidos por cierto nmero de ribosomas unidos a una nica molcula de ARN-m durante la sntesis de proteinas). Los ribosomas eucariticos (80 S) pueden encontrarse libres en el citoplasma o como polirribosomas, igual que los de procariotas. Pero tambin aparecen unidos a la superficie del retculo endoplasmtico rugoso, y en el ncleo celular (donde son sintetizados). Por ltimo, los ribosomas aparecen en el interior de cloroplastos y de mitocondrias de las clulas eucariticas. Pero estos ribosomas presentan un coeficiente de sedimentacin similar al de los ribosomas procariticos (70 S). b) La sntesis de protenas Para estudiar el proceso de biosntesis proteica, reconocemos 3 etapas: iniciacin, prolongacin y terminacin. Previamente a estas 3 etapas se producir la sntesis de los aminoacil-ARN-t. Se sabe que algunas de las protenas de los ribosomas tienen una funcin cataltica. La funcin del ARN-r no est todava clara. Pero parece que el conjunto de ARN-r-protenas que constituye los ribosomas acta como un sistema mecano-qumico que podemos incluir en el mismo tipo de bioestructuras que la actomiosina del msculo y los microtbulos de los flagelos eucariticos. Estudiaremos el proceso de traduccin en procariotas y sealaremos despus las diferencias con la traduccin en eucariotas.

*Sntesis de los aminoacil-ARN-t Previamente a la sntesis polipeptdica est la de los aminoacil-ARN-t a partir de aminocidos y ARN-t por accin de aminoacil-ARN-t sintetasas, cada una de las cuales es estrictamente especfica de un aminocido y de su correspondiente ARN-t. La reaccin que catalizan es: aminocido + ARN-t + ATP ======> aminoacil-ARN-t + AMP + PPi La estructura general de los aminoacil ARN-t resultantes es la siguiente:

*Iniciacin de las cadenas polipeptdicas La traduccin de los codones de ARN-m se desarrolla en sentido 5'==>3'. Dentro del ribosoma (en la subunidad mayor) se conocen 2 centros: 1) el centro peptidilo (o centro P) y 2) el centro aminoacilo (o centro A).

En procariotas, la sntesis de todas las protenas comienza con el aminocido metionina, codificado por el codn de iniciacin AUG. No entra como metionil-ARN-t sino como N-formil-metionil-ARN-t. Durante la sntesis proteica se da una continua disociacin de los ribosomas 70 S en sus subunidades 50 S y 30 S, y una tambin continuada reasociacin de las subunidades para dar ribosomas intactos. Esto se debe a que los ribosomas 70 S tienen que disociarse para que pueda empezar la sntesis. El ARN-m y el aminoacil-ARN-t no pueden unirse directamente a los ribosomas 70 S, sino que primero se unen a las subunidades 30 S, las cuales se combinan entonces con las 50 S. Es un proceso que comprende mltiples etapas y requiere la participacin de 3 protenas especficas, denominadas factores de iniciacin (IF-1, IF-2 e IF-3, de peso

molecular aproximado: 9000, 65000 y 21000, respectivamente). En primer lugar la subunidad 30 S forma un complejo con el IF-3, que entonces se une al ARN-m. A este complejo se le suma una molcula de IF-1. Entonces el f-Met-ARN-t y GTP se unen al IF-2 y el complejo resultante se enlaza al anterior (sub. 30 S, IF-3, ARN-m e IF-1), con lo que se forma el complejo de iniciacin. Despus, el complejo de iniciacin se combina con la subunidad 50 S y forma el ribosoma 70 S funcional. En este proceso se hidroliza el GTP a GDP + Pi, y los 3 factores de iniciacin (IF-1, IF-2 e IF-3) se disocian del ribosoma. *Prolongacin Tiene 3 etapas: a) Unin del aminoacil-ARN-t entrante: en la primera etapa se une el aminoacil-ARN-t entrante al centro aminoacilo (centro A) del complejo ribosmico 70 S completo: *Combinacin del GTP con una protena especfica: factor de prolongacin T (EF-T) que tiene 2 subunidades, una de las cuales se desprende. *Combinacin del complejo EF-T-GTP con el aminoacil-ARN-t. *Combinacin del complejo ternario con el ribosoma, de forma que el aminoacil-ARN-t se une -por el centro A- con su anticodn al codn correspondiente del ARN-m por puentes de H. En este paso el GTP se hidroliza a GDP + Pi. Sale el complejo EFT-GDP del ribosoma. b) Formacin del enlace peptdico: entre el grupo amino del aminoacil-ARN-t entrante en la etapa anterior y el carboxlico del f-Met-ARN-t, se establece un enlace peptdico. Esta reaccin es catalizada por la peptidil transferasa presente en la subunidad 50 S del ribosoma. El producto es un dipeptidil-ARN-t unido al centro A, mientras que el ARN-t descargado o libre permanece unido al centro P. La energa del enlace peptdico no se obtiene de ATP ni de GTP. Parece que se consigue de la ruptura del enlace ster de la N-f-Met con su ARN-t. Un proceso similar sucede en cada ciclo de la prolongacin. c) Transposicin: el ribosoma se traslada al nuevo codn del ARN-m y simultneamente cambia el peptidil-ARN-t desde el centro A al centro P. Este proceso -complejo- de transposicin se verifica segn una secuencia de etapas bien definida. Se requiere una proteina especfica denominada factor de prolongacin G (EFG) y GTP. 1) Se une EF-G a GTP, y el complejo EF-G-GTP al ribosoma. 2) Se hidroliza el GTP a GDP + Pi y con esa energa se traslada el ribosoma al nuevo codn, y cambia el peptidil-ARN-t del centro A al centro P.

*Terminacin de la cadena polipeptdica La terminacin de las cadenas polipeptdicas est sealizado por uno de los tres codones especiales de terminacin en el ARN-m. Cuando se ha unido ya el ltimo aminocido del polipptido, ste se encuentra todava unido por el grupo carboxilo terminal al ARN-t situado en el centro A del ribosoma. Intervienen entonces 3 proteinas especficas denominadas factores de liberacin (R1, R2 y R3). a) Los factores se unen al ribosoma y provocan un desplazamiento del polipeptidil-ARN-t desde el centro A al centro P. b) A continuacin se hidroliza el enlace ster con el ARN-t terminal -segn parece, por accin de la peptidil transferasa- de forma que queda la cadena polipeptdica libre. c) Una vez liberado el polipptido, el ltimo ARN-t y el ARN-m abandonan el ribosoma. El ribosoma 70 S libre se puede disociar en sus subunidades 50 S y 30 S por intervencin de uno de los factores de iniciacin especficos y empezar una nueva sntesis polipeptdica.

c) Diferencias entre la biosntesis de polipptidos en clulas eucariticas y en clulas procariticas El aminocido iniciador en eucariticas es metionina (en procariticas era N-formilmetionina). En ribosomas eucariticos los factores de prolongacin son EF1 y EF2 (no EF-TU y EF-TS de procariticos).

d) Regulacin de la sntesis de protenas Al estudiar el flujo de informacin desde el ADN a las protenas, nos planteamos el modo que tiene la clula de regular la sntesis proteica de forma que se sinteticen las clases de protenas correctas y en el nmero adecuado de ejemplares de cada una. As, en un ser tan elemental como la bacteria E. coli, que presenta unas 3.000 protenas diferentes: 1) al tener cada clula unos 15.000 ribosomas, podemos decir que de cada una de las 50 ms protenas ribosmicas habr unas 15.000 molculas; 2) de algunas enzimas de la va glucoltica pueden encontrarse por lo menos 100.000 ejemplares; 3) de la enzima -galactosidasa se hallan slo unos 5 ejemplares por clula. De esta forma, la bacteria tiene el adecuado nmero de enzimas para mantener las actividades fundamentales de autogobierno, y economiza el empleo de aminocidos para la sntesis de enzimas que utilizar menos. En los organismos eucariotas, la regulacin de la sntesis de protenas tiene otro papel fundamental: constituir el vehculo de diferenciacin de las clulas, ya que los distintos tipos de clulas de los organismos superiores poseen diversas ultraestructuras, distinta composicin molecular y diferentes funciones biolgicas (y algo similar sucede con los tejidos que constituyen). La biosntesis proteica se encuentra regulada, `por lo menos, a dos niveles distintos: el control de transcripcin (regulacin de la transcripcin de ADN para producir un ARN-m que codifique para una determinada protena o conjunto de protenas); y el control de traduccin (regulacin de la iniciacin y de la velocidad de sntesis de las cadenas polipeptdicas). Actualmente se admite la existencia de dos tipos de enzimas -y con ellos, tambin de protenas- que difieren en su estado natural y en su concentracin bajo distintas condiciones metablicas: las enzimas constitutivas y las inducibles. Las enzimas constitutivas son las que se forman a velocidades constantes y en cantidades tambin constantes, independientemente de cul sea el estado metablico del organismo. Forman parte de la maquinaria bsica y permanente de la clula. Un ejemplo de enzimas constitutivas son las enzimas de la va glucoltica. Las enzimas inducibles se encuentran normalmente en cantidades muy pequeas, pero pueden aumentar su concentracin hasta mil veces o ms cuando se hallan en presencia de su sustrato (particularmente cuando dicho sustrato es la nica fuente de C de la clula). Un ejemplo de enzima inducible es el de la -galactosidasa: las clulas del tipo salvaje de E. coli no utilizan lactosa si hay glucosa disponible (por eso slo contienen unas cinco molculas de -galactosidasa, suficientes para hidrolizar la lactosa a glucosa + galactosa); pero si se ponen esas clulas en un medio cuya nica fuente de C sea la lactosa, inicialmente no pueden aprovecharla, pero al cabo de uno o dos minutos reaccionan sintetizando -galactosidasa en grandes cantidades, de hasta 5.000 molculas por clula. Si a continuacin las clulas inducidas se transfieren a un medio con glucosa pero no lactosa, la sntesis de -galactosidasa cesa inmediatamente y la actividad galactosidsica disminuye rpidamente hasta su bajo nivel normal. La induccin enzimtica hace posible la economa del uso de aminocidos y de energa disponible: las enzimas inducibles se sintetizan slo cuando se necesitan. A veces una secuencia completa de enzimas es inducida en grupo (induccin coordinada), o reprimida como grupo (represin coordinada). Los conjuntos de genes para tales grupos de enzimas se denominan operones. Cada opern contiene, adems de los genes estructurales de las enzimas cuya sntesis controla, un gen regulador (que codifica para una protena represora) y un gen operador. La protena represora normalmente est unida al gen operador y evita la transcripcin de los genes estructurales. Pero en presencia del sustrato de la enzima inducible, el sustrato se une a la molcula represora y libera as al operador, con lo que los genes estructurales quedan disponibles para la transcripcin. Todo esto ha sido

estudiado en el opern lac, que controla la sntesis de la -galactosidasa y de otras dos enzimas relacionadas en E. coli.

Aunque el mecanismo explicado ahora acta en la transcripcin, y as sucede con la mayora de los mecanismos de regulacin de la expresin gentica (y resulta eficaz, pues la vida media de los ARN-m bacterianos es de unos 2 minutos), se cree que en ciertas circunstancias tambin se da una regulacin que acta sobre la traduccin. La regulacin de la expresin gentica en eucariotas es mucho ms compleja, ya que: muestran induccin enzimtica en presencia de sustratos especficos y de ciertas hormonas; intervienen mediadores como el AMP cclico y el GMP cclico; y tienen operones complejos.

5. El cdigo gentico Partiendo nicamente de consideraciones matemticas, hace ya mucho tiempo se consider la posibilidad de que cada aminocido estuviera codificado por un pequeo nmero de nucletidos consecutivos de la cadena de ADN. Como los nucletidos que se combinan en el ADN son solamente 4 (A, G, C y T), y los aminocidos proteinogenticos son 20, se necesitara ms de un nucletido para codificar cada aminocido. Y ms de 2, puesto que el nmero de variaciones con repeticin a las que daran lugar esos nucletidos tomados de 2 en 2 (es decir, el nmero de ordenaciones diferentes formadas por 2 nucletidos) sera slo 42 = 16. Por eso se concluy que los vocablos del cdigo de los aminocidos eran tripletes de nucletidos. Esta conclusin fue confirmada posteriormente mediante experimentos bioqumicos directos realizados con ribosomas. El nmero de tripletes diferentes posibles es de 43 = 64. Como son 20 los aminocidos posibles, el cdigo aminocido es degenerado: tiene mltiples vocablos de cdigo para todos los aminocidos, con excepcin del Trp y la Met. La degeneracin reside, generalmente, en la tercera posicin de su codn, esto es, en su extremo 3': el nucletido de esta posicin es mucho menos especfico que el primero y que el segundo.

La iniciacin de la cadena empieza en el codn AUG, que codifica a la Nformilmetionina, iniciadora en los procariotas, y a la metionina iniciadora en los eucariotas. Los tripletes UAA, UAG y UGA no codifican a ningn aminocido, pero constituyen seales de terminacin de cadena: probablemente el UAA sea el terminador de cadena normal. Los codones se leen a lo largo de la cadena del ARN-m en sentido 5' ==> 3'. Actualmente se considera que los vocablos del cdigo gentico que hemos visto antes son biolgicamente universales. El cdigo gentico es, casi con toda certeza, universal. La poca especificidad que hemos descrito para el tercer nucletido de los tripletes y la degeneracin del cdigo gentico ha dado pie a diversas hiptesis acerca de la evolucin del cdigo gentico. Una de esas hiptesis, por ejemplo, plantea la posibilidad de un cdigo de dobletes inicial seguido de "comas" que con el tiempo pasaran a ser smbolos del cdigo para permitir as la codificacin de ms aminocidos; esta hiptesis est de acuerdo con la degeneracin y la vacilacin de la posicin tercera del cdigo de tripletes actual.

ARN mensajero
De Wikipedia, la enciclopedia libre Saltar a: navegacin, bsqueda

El ARN mensajero (ARNm, o mRNA de su nombre en ingles) es el cido ribonucleico que contiene la informacin gentica procedente del ADN para utilizarse en la sntesis de protenas, es decir, determina el orden en que se unirn los aminocidos. El ARN mensajero es un cido nucleico monocatenario, al contrario que el ADN que es bicatenario. Todos los ARNm eucariticos son monocistrnicos, es decir, contienen informacin para una sola cadena polipeptdica, mientras que en los procariotas los ARNm son con frecuencia policistrnicos, es decir, codifican ms de una protena.1

Contenido
[ocultar]

1 Procesamiento del ARN mensajero en clulas eucariotas 2 ARN mensajero en clulas procariotas 3 ARN mensajeros monocistrnicos y policistrnicos 4 Referencias 5 Vase tambin 6 Enlaces externos

[editar] Procesamiento del ARN mensajero en clulas eucariotas

Estructura qumica de la caperuza o casquete.

El ARN mensajero obtenido despus de la transcripcin se conoce como transcrito primario o ARN precursor (pre-ARN), que en la mayora de los casos no se libera del complejo de transcripcin en forma totalmente activa, sino que ha de sufrir modificaciones antes de ejercer su funcin (procesamiento o maduracin del ARN). Entre esas modificaciones se encuentran la eliminacin de fragmentos (splicing), la adicin de otros no codificados en el ADN y la modificacin covalente de ciertas bases nitrogenadas. Concretamente, el procesamiento del ARN en eucariotas comprende diferentes fases:
1. Adicin al extremo 5' de la estructura denominada caperuza o casquete (o CAP, su nombre en ingls) que es un nucletido modificado de guanina, la 7-metilguanosina trifosfato, que se aade al extremo 5' de la cadena del ARNm transcrito primario (ubicado an en el ncleo celular) mediante un enlace 5'-fosfato 5'-fosfato en lugar del habitual enlace 3',5'-fosfodister.1 Esta caperuza es necesaria para el proceso normal de traduccin del ARN y para mantener su estabilidad; esto es crtico para el reconocimiento y el acceso apropiado del ribosoma. 2. Poliadenilacin: es la adicin al extremo 3' de una cola poli-A, una secuencia larga de poliadenilato, es decir, un tramo de RNA cuyas bases son todas adenina. Su adicin est mediada por una secuencia o seal de poliadenilacin (AAUAAA), situada unos 1130 nucletidos antes del extremo 3' original. Esta cola protege al ARNm frente a la degradacin, aumentando su vida media en el citosol, de modo que se puede sintetizar mayor cantidad de protena. 3. En la mayora de los casos, el ARN mensajero sufre la eliminacin de secuencias internas, no codificantes, llamadas intrones. Esto no ocurre en clulas procariontes, ya que estas no poseen intrones en su ADN. El proceso de retirada de los intrones y conexin o empalme de los exones se llama ayuste, o corte y empalme (en ingls, splicing). A veces un mismo transcrito primario o pre-ARNm se puede ayustar de diversas maneras, permitiendo que con un solo gen se obtengan varias protenas diferentes; a este fenmeno se le llama ayuste alternativo. Ciertas enzimas parecen estar involucrados en editar el RNA antes de su exportacin fuera del ncleo, intercambiando o eliminando nucletidos errneos. Por esto, es posible decir, que el plegamiento que sufre el ARNm momentos antes de la eliminacin de los intrones, le confiere una estructura secundaria que a su vez, perder en el momento en el que esos intrones, sean eliminados. 4. El ARN mensajero maduro es trasladado al citosol de la clula, en el caso de los seres eucariontes, a travs de poros de la membrana nuclear. 5. Una vez en el citoplasma, el ARNm se acoplan los ribosomas, que son la maquinaria encargada de la sntesis proteica. En procariontes, la unin de los ribosomas ocurre mientras la cadena de ARNm esta siendo sintetizada. 6. Despus de cierta cantidad de tiempo el ARNm se degrada en sus nucletidos componentes, generalmente con la ayuda de ribonucleasas.

[editar] ARN mensajero en clulas procariotas

El proceso de transcripcin y el de traduccin se realizan de manera similar que en las clulas eucariotas. La diferencia fundamental est en que, en las procariotas, el ARN mensajero no pasa por un proceso de maduracin y, por lo tanto, no se le aade caperuza ni cola, ni se le quitan intrones. Adems no tiene que salir del ncleo como en las eucariotas, porque en las clulas procariotas no hay un ncleo definido.

[editar] ARN mensajeros monocistrnicos y policistrnicos

ARNm monocistrnico: solo tiene un codn de inicio AUG, que es reconocido por los ribosomas para iniciar la traduccin, por lo que solo da lugar a una protena. Se dice que lleva la informacin de un nico gen. Habitual en eucariotas. ARNm policistrnico: tiene varios codones de inicio AUG (por lo que tambin harn falta varios codones de paro para detenerlos, a menos que tengan solapado el cdigo de lectura y vayan de 3 en 3, en cuyo caso un solo codn de paro podra detenerlos todos), por lo que da lugar a varias protenas. Se dice que lleva informacin de varios genes. Habitual en procariotas