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BIOTECNOLOGIAAPLICAO INDUSTRIAL DA MICROBIOLOGIA

ProfMSc Louremi Bianchi Gualda de Souza


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BIOTECNOLOGIA
MICRORGANISMOS importncia: Doenas Respostas Imunolgicas Reciclagem da matria Produo de alimentos Pesquisas na engenharia gentica Aplicaes industriais dos microrganismos Biotecnologia Perdas econmicas deteriorao

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Biotecnologia
Biotecnologia aplicao da tecnologia em sistemas vivos qualquer tcnica que utilize um organismo vivo para sintetizar um produto til ou uma reao qumica desejvel Amplamente difundida explorao da tecnologia do DNA recombinante construindo microrganismos que sintetizam novos produtos Microrganismos alterados transformam materiais em substncias novas transformam resduos poluentes substncias inofensivas at teis

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CLONAGEM DO DNA

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Microbiologia Industrial
Milhares de produtos comercialmente importantes sintetizados pela manipulao de m.o alimentos at vacinas, agentes teraputicos. So classificados: classificados 1. Clulas microbianas podem ser utilizadas como suplemento alimentar ou como agente imunizante para prevenir doenas. 2. Macromolculas enzimas sintetizadas por m.o 3. Produtos metablicos primrios elaborados por m.o vitaminas essenciais para o crescimento celular 4. Produtos metablicos secundrios antibiticos

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Microbiologia Industrial
Categorias de processos industriais para a sntese de produtos microbianos: 1. Produo de substncias qumicas farmacuticas antibiticos, drogas esterides, insulina, interferon produzidos por bactrias geneticamente construdas. Produo de antibiticos como: penicilina (Penicillium chrysogenum) , griseofulvina, cefalosporina Vitaminas riboflavina, esterides, cido ctrico (Aspergillus niger) , e inmeros outros produtos. Algumas sp so alucingenas so extradas de certos fungos a psilocibina retirada do Psilocybe mexicana ; LSD (dietilamina do cido lisrgico), preparado a partir da ergotamina, que um alcalide extrado do fungo Claviceps purpurea, causador do esporo do centeio 2. Produo de substncias qumicas de valor comercial solventes, enzimas, matria- prima para sntese industrial de outras substncias.
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3. Produo de suplementos alimentares produo em massa de leveduras, bactrias, algas a partir de meios com sais de nitrognio inorgnicos e outros nutrientes fornecem tima fonte de protena e outras substncias teis suplemento alimentar homem e animais 4. Produo de bebidas alcolicas cerveja, vinho, saqu, destilados (aguardentes) Ex. Etanol (Saccharomyces cerevisiae) usado como combustvel nos automveis, como solvente e desinfetante,

Microbiologia Industrial

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Microbiologia Industrial
5. Produo de vacinas (agentes imunizantes) clulas microbianas, partes, produtos bacterianos so obtidos em escala utilizados para produo de vacinas

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Microbiologia Industrial
6. Produo de microrganismos para ser utilizados como inseticidas (biocidas) controle de insetos que destroem plantas pode ser realizado mediante aplicao de m.o conhecidos que atuam como inseticidas Ex. sp do gnero Bacillus B. larvae, B.popillae, B. thurigiensis produzem uma protena cristalina letal para larvas de mariposas, borboletas, lagartas atacam repolho e outras plantas. Importncia agrcola e ecolgica mantm equilbrio, decompondo restos vegetais, degradando substncias txicas, auxiliando as plantas a crescerem e se protegerem contra microrganismos patognicos, insetos-pragas da agricultura ou herbvoros "inseticidas microbianos" .
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Microbiologia Industrial
7. Aplicaes na minerao e na indstria de petrleo procedimentos microbiolgicos recuperao de metais e minrios de baixa qualidade e melhoram a recuperao de leo a partir dos mananciais 8. Culinria cogumelos de chapu usados em sopas, pizzas e nos strogonoffs (Pleurotus , Agaricus). 9. Fabricao de alimentos balas e doces enzimas tipo celulases, quitinases, proteases, amilases e muitas outras de valor industrial.

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Microbiologia Industrial
10.Panificao (Saccharomyces cerevisiae) 11. Fabricao e maturao de queijos (Penicillium e Aspergillus )como o gorgonzola, o camembert (veios azuis- Penicillium gorgonzola ) e o roquefort (leite de ovelha-mofo Penicillium roqueforti , 12. Alimentos exticos orientais molho de soja, entre muitos outros produtos.

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Caractersticas essenciais de um processo microbiolgico industrial


MICRORGANISMO: Vrus Bactria Fungo Alga Protozorio

SUBSTRATO Incorporado ao meio de cultura

RECUPERAO E PURIFICAO DO PRODUTO Produto do metabolismo Clulas microbianas Frao das clulas

RESDUOS OU MATERIAIS DE EXCREO

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Biotecnologia
Microrganismo habilidade em decompor ou deteriorar materiais couro, produtos txteis, madeira, papel, metais, placas de circuitos eletrnicos, equipamentos ticos Aspecto positivo da deteriorao biorremediao degradao de poluentes acumulados no ambiente
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Biotecnologia
Microrganismos geneticamente modificados otimiza a produo de uma substncia desejada ou degrada compostos txicos. possvel Transferncia de genes especficos de uma clula para outra ou transferir genes de clulas de plantas ou de animais para uma bactria ou levedura gerando compostos teis, avanos considerveis na medicina (insulina) e outras reas da biotecnologia Futuro descobertas novos produtos agrcolas, alimentcios, monitoramento de produtos de excreo e qualidade ambiental, matrias-primas para a indstria qumica, novos produtos farmacuticos , controle de doenas infecciosas.

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Biotecnologia
Produtos da degradao microbiana ocorre larga escala depende das caractersticas: m.o, substrato,meio de cultura, produto da degradao M.o utilizado em processos de degradao deve ser capaz: converter uma grande proporo do substrato para o produto desejado Caractersticas estveis Crescer rpida e vigorosamente No deve ser patognico Meio de cultura + substrato deve ser: barato e disponvel (soro de indstrias de laticnios,dejetos lquidos produzidos durante cozimento da madeira para manufaturao de papel

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Deve existir um mtodo eficiente para recuperar e purificar em grande escala produto final formado pelas atividades metablicas dos m.o. fermentaes industriais tanques com capacidade de 189.500 l. Ex. produtos industriais obtidos a partir da degradao microbiana de um substrato vinagre, cido lctico, lcool, bebidas alcolicas.

Biotecnologia

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lcool e Bebidas Alcolicas


Etanol (lcool etlico) solvente matria-prima laboratrio e indstria qumica Utilizam qualquer CH Leveduras + Se utilizar fermentvel como
matria-prima para

substrato Milho, beterraba, batata, uva Fermentao alcolica

amido de milho precisam ser hidrolisados: com enzimas malte de cevada ou bolores ou aquecimento do material na presena de cido

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lcool e Bebidas Alcolicas


Cepas de levedura Saccharomyces cerevisae e outras sp utilizadas produo de etanol Escolha da cepa: Deve crescer bem Produzir grande quantidade de etanol Apresentar alta tolerncia ao produto sintetizado
(enzimas da levedura) Glicose Etanol +Dixido de carbono (CH fermentvel)
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lcool e Bebidas Alcolicas


Etanol componente de bebidas alcolicas M.o necessrios elaborar vinho, cerveja Matria prima inicial + espcies de leveduras podem variar so os fatores que influenciam a reao bioqumica

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Funo das leveduras na produo de bebidas alcolicas


Produto M.O Mtodo de preparao Malte de cevada e amido + gua morna aps converso enzimtica do amido mosto filtrado fervido fermentado com a levedura Fatores que influenciam a reao Processo aerbico estgios iniciais e depois ANAE. T 8-12C, pH inicial 5,0-5,4 e final 4,0-4,8 Fermentao 5-9 dias Funo da levedura Converte acar em lcool e CO2, produz alteraes em protenas e outros constituintes secundrios que modificam o sabor

CERVEJA Saccharomyces cerevisae ou S. carlsbergensi

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Funo das leveduras na produo de bebidas alcolicas


Produto M.O Mtodo de preparao Melao+ 1214% de acar fermentvel; sulfato de amnia e ocasionalmente fosfatos adicionados como nutrientes destilado aps fermentao Fatores que influenciam a reao pH timo 4,04,7; T inicial 21C aumentando at TC final de 35,5C, a fermentao dura 3-7 dias Funo da levedura O acar convertido em lcool que ento removido por destilao

RUM

Saccharomyces Cerevisae e outras leveduras

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Funo das leveduras na produo de bebidas alcolicas


Produto M.O Mtodo de preparao Pasta de cereal cozida, sacarificada com turfa de malte e fermentada destilado e envelhecido em barril de carvalho por pelo menos 3 anos Fatores que influenciam a reao pH timo 4,05,0; T inicial 26C fermentao completa em 72horas Funo da levedura Produz lcool e subst. Congneres (cidos, steres, vrios lcoois) que reagem com o malte para dar sabor escocs caracterstico

Usque escocs

Saccharomyces Cerevisae ou levedura especial

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Funo das leveduras na produo de bebidas alcolicas


Produto M.O Mtodo de preparao
Pasta de malte consistindo em milho (51%) geral/ com centeio, cozido e sacarificada com malte e fermentada, destilado com teor alcolico entre 110 e 130, envelhecido em barris de carvalho.

Fatores que influenciam a reao pH timo 4,05,0; T inicial 26C fermentao completa em 72horas

Funo da levedura Produz lcool e subst. Congneres (cidos, steres, vrios lcoois) que reagem com o malte para dar sabor bourbon caracterstico

Usque bourbon

Saccharomyces Cerevisae

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Funo das leveduras na produo de bebidas alcolicas


Produto M.O Mtodo de preparao
Mosto de uva com concentrao de acar superior a 22%, a massa sulfitadapara reduzir a taxa de fermentao. A fermentao primria sucedida por um perodo de armazenament o p/ o envelhecimento

Fatores que influenciam a reao


Processo aerbio nas etapas iniciais, depois predomina ANAE TC abaixo de 29,4C, varia com as condies locais, amostra de levedura e tipo de vinho. Ferm:7-11 dias

Funo da levedura
Converte acar em lcool e produz alteraes nos constituintes secundrios que modificam o aroma e o bouquet; a quantidade de lcool varia de acordo com o tipo de vinho

VINHO

Saccharomyces ellipsoideus e vrias outras sp Amostra especial de levedura ou leveduras presentes na uva

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Vinagre
Vinagre vem da palavra francesa vinaigre = vinho cido Converso ETANOL VINHO CIDO ACTICO Diferenas entre os vrios tipos tipo de material contendo CH suco de fruta, xarope contendo acar ou substncia amilcea hidrolisada. Bactrias cepas do gnero Acetobacter Equipamento especial soluo alcolica acidificada pela adio de cido actico + nutrientes especiais acetobactrias oxidam certa quantidade de lcool em cido actico Processo aerbio TC mantida 15-34C (TC tima para o Acetobacter crescer)
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cido Ltico
Produto industrial importante derivados vrias aplicaes Lactato de clcio tratamento de deficincia de clcio Lactato de ferro Tratamento de anemia Butil lactato solvente de verniz Lactato de sdio plastificante e umectante Substncias carboidratada amido ( milho, batata), melao, soro de laticnios podem ser utilizadas para a produo de cido ltico Qualquer amido deve ser hidrolisado a glicose por meio do tratamento com cidos ou enzimas
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cido Ltico
Soro produto residual de laticnios manufaturados queijo, manteiga utilizado produo de c. ltico barato e eficiente para crescimento de bactrias soluo aquosa + acar do leite (lactose) + substncias nitrogenadas ( vitaminas) e sais
LACTOSE + H2O
Enzima (lactase)

Glicose+ Lactose

sistema de enzima

cido Ltico

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cido Lctico
Lactobacilos adequados Lactobacillus bulgaricus Tanque de fermentao cultivo em leite desnatado estril, pasteurizado, soro cultura tanque de fermentao TC 43C (inibe outros m.o) adiciona pasta de cal (neutraliza a acidez) fermentao completa em 2 dias ferve coagula as protenas microbianas que so recuperadas em um filtro e processada suplemento alimentar animais filtrado (contm lactato de clcio solvel) concentrado, purificado.

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Produtos de Sntese Microbiana

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Produtos de Sntese Microbiana


Variedade produtos industriais elaborados atividade biossinttica dos microrganismos

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Produtos industriais obtidos por degradao microbiana

Produto

Microrganismo
Bactrias

Aplicao
Solventes, produo de subst. qumicas Solvente, umectantes, intermedirio qumico Interm prod. c. Isoascrbico (isovit.C) Prod. c. ascrbico Alimentos, bebidas, cosmticos... Alimentos, comp. limpeza Resinas acrlicas (prod.) Idem + ag.umectantes

Acetona e butanol Clostridium acetobutylicum e outros 2,3-butanediol c. 2cetoglucnico Sorbose c. Ctrico c. Glucnico c. Itacnico c. fumrico Bacillus polymyxa, Enterobacter aerogenes Pseudomonas sp Gluconobacter oxydans Fungos Aspergillus niger Aspergillus niger Aspergillus terreus Rhizopus nigricans

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Penicilina
1941 no havia industrializao 10 anos aps 344milhes de dlares/ano 1990 meio bilho de dlares Descoberta Alexander Fleming 1927 2 guerra produo em escala Penicillium chrysogenum melhor sp produtora de penicilina linhagem original de Fleming produzia menos de 2mg do antibitico por litro de meio de cultivo Melhoramento gentico (raios X e luz ultra violeta cepas mutantes 60mg/litro at atingir o valor de 7g/litro 50g/litro

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Penicilina

Peniciliana antibitico lactamico usado no tratamento de infeces bacterianas GP

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Penicillium chrysogenum

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Produo de Penicilina

Farelo Meio+ extrato de milho, lactose, sais Esterilizado CULTURA Penicillium chrysogenum

Farelo

FERMENTADOR

Filtro: remoo do miclio fngico

Recuperao da Penicilina
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Precipitao Redissoluo Filtrao

Produo de Penicilina

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Enzimas
Fungos e bactrias sintetizam e secretam enzimas industrialmente teis Aspergillus, Penicillium, Mucor, Rhizopus secretam enzimas teis no processamento de uma variedade de produtos Enzimas amilase, invertase, protease, pectinase

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Enzimas industriais
Enzima
AMILASE

Funo
Catalisa a hidrlise do amido para dextrinas e acares

Aplicao industrial
Preparo de adesivos e colas confere caracterstica como peso e brilho para tecidos e papis, clareamento de sucos de frutas, produo de substncias farmacuticas, etc. Preparo de doces recheados com creme e na produo de xaropes que no cristalizam

INVERTASE Catalisa a hidrlise do dissacardeo sacarose aos monossacardeos glicose e frutose

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Enzimas industriais
Enzima
PROTEASE

Funo
Mistura de enzimas que degradam protenas

Aplicao industrial
Curtimento do couro conferindo textura mais refinados (antes esterco), clareamento de protenas que turva a cerveja, componente de detergente de lavanderia

PECTINASE Catalisa a hidrlise de Utilizada no clareamento de pectinas (polissacardeos sucos de frutas, macerao de plantas (afrouxamento) da fibra de linho para produo de tecido

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Enzimas industriais
Enzima Estreptoquinase Fonte microbiana Bactrias Streptococcus sp. Aplicaes Tratamento de pacientes que sofreram ataque cardaco Reaes Ativa enzima que dissolve a fibrina de cogulos sanguneos Converte glicose em frutose

Glicose isomerase

Streptomyces sp; Produo de xaropes com Bacillus sp. teor de frutose

DNA Thermus polimerase aquaticus

Reao de Mediadora na polimerizao em formao de cadeia (PCR) pares de base entre nucleotdeos Livres e os nucleotdeos de DNA ligados

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Enzima Lipase

Fungos Rhizopus sp

Enzimas industriais
Aplicaes Aromatizante em alimentos, melhoramento da ao clarificante dos detergentes Digestivo

Reaes Hidrolisa lipdeos a glicerol e cidos graxos

Celulase Glicose oxidase

Trichoderma reesi Aspergillus sp, Penicillium sp

Hidrolisa celulose a celobiose

Remove glicose Oxida glicose a dos ovos antes cido glucnico do resseca/o, remove o O2 de alimentos enlatados, refrigerantes, cerveja, fitas teste controle de diabetes

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Imobilizada
ENZIMA + MATERIAL SLIDOmaterial inerte(papel, lascas de madeira, prolas de cermica ou vidro, reinas de trocas inicas)

Transformao de produto Comercialmente desejvel

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Microrganismos sintetizam aa a partir compostos nitrogenados inorgnicos (Sulfato de amnia) c. glutmico, lisina, triptofano so produzidos industrialmente por m.o

Aminocidos

Produo de c. glutmico
c. glutmico (utilizado como condimento que acentua o sabor na forma de glutamato monossdico (GMS) Corynebacterium glutamicum + meio de cultura ( CH, peptona, sais inorgnicos, biotina (vit) Produz c. glutmico industrial

c a -cetoglutrico +NH3 +NADH2 c. glutmico c. L-glutmico +NAD++ H2O


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desidrogenase

Produo de Lisina
Lisina suplemento de protenas vegetais utilizadas como alimento Cepa mutante Corynebacterium glutamicum produo comercial
c. Diaminopimlico (DAP) DAP DESCARBOXILASE + L-lisina +CO2

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Produtos industriais da sntese microbiana dos antibiticos e das enzimas


Produto Dextrana Resina de Xantana caroteno Vitamina B12 M.O-Bactrias Aplicao
Leuconostoc mesenteroides Xanthomonas campestris Estabilizante alimentos, substituto plasma sanguneo Estabilizante e emulsificante em alimentos

BlaKeslea trispora Pigmento amarelo p/ alimentos Streptomyces olivaceus; Propionibacterium freudenreichii Anemia perniciosa, suplemento alimentar de animal e outros alimentos Intensifica o aroma de alimentos

c. 5-inosnico e Corynebacterium glutamicum c. 5-guanlico

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Produtos industriais da sntese microbiana dos antibiticos e das enzimas


Produto Riboflavina cido giberlico M.O- Fungos
Eremothecium ashbyl Fusarium moniliforme

Aplicao
Suplemento vitamnico

Promove o crescimento de plantas, especialmente de brotos de semente

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PRODUTOS FARMACUTICOS
Obtidos a partir da Engenharia Gentica

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Biotecnologia aplicao indstria farmacutica produo de drogas teraputicas tratamento de doenas Material gentico m.o pode ser alterado fornecendo novas habilidades bioqumicas ao organismo novas substncias Produo Insulina humana E. coli 1982 1 produto geneticamente construdo Hormnio de crescimento humano Interferons classe de ptns proteo de cels contra infeces a durao de infeco viral, incidncia de ataque de esclerose mltipla, atividade antihumoral

PRODUTOS FARMACUTICOS

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Ativador tecidual de plasminognio ataques cardacos Interleucina-2 promove a ativao e multiplicao de leuccitos e a habilidade do hospedeiro para resistir a infeco Renina humana facilita a proteo da humana angiotensina II P sangunea e o batimento cardaco Anticorpo monoclonal previne a rejeio de transplante renal Eritropoetina estimula a produo de eritrcitos e hemoglobina

PRODUTOS FARMACUTICOS

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PRODUTOS PARA IMUNIZAO

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PRODUTOS PARA IMUNIZAO


Antgenos microbianos uso em vacinas microbianos Novas vacinas a partir de tcnicas engenharia gentica Ex. Hepatite humana tipo B, Febre aftosa do gado Anticorpos antitoxina tetnica, botulnica, Ig contra raiva Ex. produtos microbianos sintetizados para comrcio e utilizados em vacinas para imunizao ativa Vacinas: Tuberculose, Rubola, Poliomielite, Coqueluche, febre tifide, difteria, Meningite meningoccica, pneumonia pneumoccica, Influenza....

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CONTROLE DE INSETOS

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Controle de Insetos
Hoje preocupao utilizao indiscriminada substncias qumicas sintticas controle de insetos Substncias qumicas acumulam-se no solo, contaminam lenis de gua efeitos adversos meio ambiente Bioinseticidas inseticidas qumicos sintetizados microrganismos ou m.o infectam e matam insetos De que maneira? secretam protenas ou causam doenas nos insetos. Entomopatgenos grupo de m.o que causam doenas nos insetos vantagens: 1. Patognicos para insetos inofensivos para as plantas e animais 2. Perigo de resduos qumicos eliminado

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Controle de Insetos
Ex. Bacillus thuringiensis, B. popilliae, B. lentimorbus Bacillus thuringiensis produz protena txica larvas de insetos (mariposa, larva do repolho, lagarta) aplicada por pulverizao ou spray B. popilliae,B. lentimorbus causa doena leitosa larvas (besouro japons) morrem esporos liberados no solo permanecem anos Pesquisas sementes so pulverizadas antes do plantio outros o gene da sntese da toxina transferido para a planta.
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RECUPERAO DE MATRIA PRIMA

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Recuperao da matria prima

Bactrias autotrficas Thiobacillus thiooxidans T. ferroxidans Cultivadas presena de metais de minrios ferro, cobre, zinco Produzem cidos, causam oxidao do minrio precipitao do metal processo denominado de LIXIVIAO melhora recuperao de metal a partir do minrio no causa poluio da atmosfera

Existem bactrias que degradam compostos sulfurados do carvo para compostos hidratados poluio da emisso sulfurosa resultante da combusto de carvo vegetal
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Acidithiobacillus ferrooxidans Bastonetes Gran-

Acidoflico (pH: 1.0 a 4.0) Quimiolitotrfico (fixa CO2 atravs do Ciclo de Calvin) Fonte de energia (Fe2+ e formas reduzidas de enxofre, incluindo sulfetos metlicos) Habitat natural (gua cida de mina)

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LIXIVIAO Indireta de Urnio

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Lixiviao de cobre

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Petrleo
Microrganismos esto relacionados: Formao de petrleo muitos sedimentos marinhos so clulas microbianas mortas transformaes bioqumicas formao do petrleo Extrao de petrleo solo+ regio petrolfera metano+ etano culturas de m.o que utilizam hidrocarbonetos como fonte de carbono de m.o no solo sugere presena de petrleo Recuperao de petrleo Bactrias inoculadas em depsito de leo armazenado nas rochas produzem cidos dissolvem a formao rochosa liberaria o leo mais fcil do solo. Derramamento de leo Pseudomonas putida degrada o leo do meio ambiente

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Derrames de leo e petrleo no meio ambiente

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Deteriorao microbiana
Papel celulose, cola, casena Papel substrato para os m.o Tecidos algodo, linho, l, seda fungos Madeira ,Borracha, Metais, Vidro (lentes manchadas), superfcies pintadas (fungos) Nenhum material resiste a deteriorao microbiana

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Biorremediao
Tecnologia que utiliza agentes biolgicos microrganismos para remover poluentes txicos do ambiente solo e gua Que tipos de microrganismos? Microrganismos do prprio ambiente ou geneticamente construdos Para que so utilizados? Remoo do leo bruto aps derramamento do leo, decomposio de poluentes txicos especficos
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SELEO DE MICRORGANISMOS BIODEGRADADORES DE

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Para cada tipo de contaminante, indicam-se espcies diferentes de microorganismos para o processo de biorremediao.

Contaminante
Anis aromticos

Espcie utilizada
Pseudomonas, Achromobacter, Bacillus, Arthrobacter, Penicillum, Aspergillus, Fusarium, Phanerocheate Staphlococcus, Bacillus, Pseudomonas, Citrobacter, Klebsiella, Rhodococcus Escherichia, Pseudomonas Alcaligenes, Pseudomonas Thiobacillus Pseudomonas, Proteus, Bacillus, Penicillum, Cunninghamella

Cdmio Cobre Cromo Enxofre Petrleo

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Boa sorte

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