UNIVERSIDAD VERACRUZANA

Unidad de Ingeniera y Ciencias Qumicas PRACTICA No 2 TINCIONES DE GRAM Y ZIEHL-NEELSEN

OBJETIVO:
El alumno adquirir la habilidad en la realizacin de los principales mtodos de tincin y de preparacin de medios de cultivo que se utilizan para identificar la morfologa y fisiologa de las bacterias.

FUNDAMENTO:
TINCION DE GRAM Esta tincin es capaz de diferenciar dos grandes grupos de eubacterias: Gram (+) y Gram (-) y requiere de cuatro soluciones: Primer colorante: Es un colorante bsico que en contacto con las clulas cargadas negativamente, reacciona con ella colorendola. El ms utilizado es el cristal violeta. Solucin mordiente: Fija las tinciones y aumenta la afinidad entre el colorante y las clulas. Los fijadores empleados suelen ser sales metlicas, cidos o bases, como por ejemplo, una solucin diluida de yodo. Agente colorante: Es un disolvente orgnico, por ejemplo, alcohol-acetona (1:1). Colorante de contraste: Es un colorante bsico de distinto color que el primer colorante, como por ejemplo, la safranina. Las bacterias Gram (+) se teirn de azul por el cristal violeta y no perdern esta coloracin durante los pasos sucesivos. Las bacterias Gram (-) perdern la

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
Unidad de Ingeniera y Ciencias Qumicas
coloracin inicial del cristal violeta en los siguientes pasos y se teirn de rosa debido a la safranina. TINCIN DE ZIEHL.-NEELSEN Tambin llamada Tincin cido-alcohol resistente. Demuestra la capacidad que tienen algunas bacterias teidas de resistir a la decoloracin por cidos y alcoholes. Esta tincin requiere de tres colorantes: Mezcla en fucsina-fenol Capaz de teir las clulas en caliente. El fenol facilita la penetracin de la fucsina en la envoltura celular. Decolorante orgnico: Mezcla de cido y alcohol. Colorante de contraste: Azul de metileno. Las bacterias cido-alcohol resistentes, tras la unin de la fucsina, resisten el tratamiento orgnico y se vern teidas de rosa. El resto de las bacterias se decolorarn y se contrastarn con azul de metileno.

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
Unidad de Ingeniera y Ciencias Qumicas

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
Unidad de Ingeniera y Ciencias Qumicas

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
Unidad de Ingeniera y Ciencias Qumicas
DIAGRAMAS

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
Unidad de Ingeniera y Ciencias Qumicas
Tincin de GRAM Se coloco una gota se sol. de salina y una gota con el asa esterilizada de la bacteria que se iba a observar. Escherichia coli y Staphylococcus aureus. -Se fija con metanol la laminilla por un min. -Lavar con agua corriente y dejar secar. -Observar con objetivo de 100x (con aceite de inmersin). -Lavar con agua corriente. -Teir con safranina de 25 a 30 segundos. -Lavar con agua corriente. - Decolorar con alcohol-acetona por 30 segundos

-Los frotis se tien con cristal violeta durante un min.

- Lavar con agua corriente. -Teir con lugol 30 segundos.

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
Unidad de Ingeniera y Ciencias Qumicas
Tincin de ZiehlNeelsen Se coloco una gota se sol. de salina y una gota con el asa esterilizada de la bacteria que se iba a observar. Mycobacterium tuberculosis -Se cubre con fucsina. -Se calienta con lmpara de alcohol hasta que haya emisin de vapores por 5 min. -Enjuagar con agua corriente. - Decolorar con alcohol-cido por 30 segundos.

-Observar en objetivo de 10x y inmediatamente pasar a inmersin (100x) -Lavar con agua corriente y dejar secar

-Lavar con agua corriente. -Teir con Azul de metileno por 30 seg.

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
Unidad de Ingeniera y Ciencias Qumicas

Cadena de cocos gram positivos clulas epiteliales. Posiblemente Streptococcus pneumoniae CONLUSIONES: Como pudimos observa cada tincin tiene su propsito ya que gracias a estas podemos diferenciar entre una bacteria Gram (+) de una Gram (-), su morfologa y pues tambin observar en que cantidad estn. Por lo que podemos concluir que esta prctica nos enseo a que las tinciones son muy valiosas para determinar bacterias y as tener un menor margen de error al entregar un diagnostico al medico.