PROTEINE

Sunt substante organice macromoleculare alcatuite din lanturi simple sau complexe de aminoacizi, fiind prezente in celulele tuturor organismelor vii . Proteinele sunt polimeri ai aminoacizilor, iar fiecare proteina are secventa ei unica datorita aminoacizilor . Proprietati electrochimice: Proteinele sunt afoliti macromoleculari care cuprind un numar diferit de grupari acide si bazice . Proprietatile chimice ale proteinelor se concretizeaza prin pH-ul izoelectric ( pH-ul la care suprafata moleculei nu are sarcina electrica, iar solubilitatea este minima) . Ca si aminoacizii, proteinele in solutie exercita efecte tampon . La pH acid toate gruparile si cedeaza protoni devenind cationi, iar la pH alcalin toate guparile COOH si primesc protoni, moleculele devenind un anion. Sub forma de anioni sau cationi, proteinele migreaza in campuri electrice, proprietate care sta la baza metodelor de electroforeza. Pentru fiecare proteina este caracteristic un pH la care poliamfionii cuprind un numar egal de sarcini (-) si (+). Acesta se numeste pH izoelectric sau punctul izoelectric (pI) . Solubilitatea proteinelor in apa este puternic influentata de pH-ul mediului. De asemenea, diverse saruri ale metalelor usoare -NaCl, , Mg influenteaza considerabil solubilitatea proteinelor.

Factorii denturarii - temperatura: este recomandat sa se mentina in timpul operatiilor de extractie, izolare, purificare, o temperatura apropiata de temperatura solventului de dizolvare. - pH-ul: proteinele sunt denaturate la pH acid (sub 4) sau bazic (peste 9). - solventii nepolari: toti solventii nepolari care se dizolva cu apa denatureaza proteinele. - agitarea: actiunea indelungata a acestui proces asupra solutiei de proteine antreneaza denaturarea.

Factorii chimici denaturanti: pentru izolarea si purificarea proteinelor se foloseste o gama larga de metode, iar alegerea metodei se face in fuctie de tipul proteinei si gradul de purificare. Precipitarea: una dintre cele mai raspandite metode de purificare si izolare a proteinelor este precipitarea cu saruri neutre. Datorita acestei proprietati, proteinele se pot clasifica in doua mari categorii: albumine si globuline . Datorita radicalului hidrofil care este orientat in afara lantului polipeptidic, moleculele de apa adera mai usor determinand hidratarea lor. Crescand concentratia salina peste o anumita limita, solubilitatea scade, deci proteinele se precipita. Prin urmare, precipitarea proteinelor este datorata moleculelor de sare adaugata, deshidratand proteina. Procesul este reversibil, iar la adaugarea de

apa, precipitatul se redizolva, ceea ce arata ca nu s-a produs nici o denaturare a structurii proteinelor. Pentru alegerea unei substante saline optime pentru precipitarea unei proteine se impun urmatoarele conditii: - sa nu modifice pH-ul solutiei in care se dizolva - solubilitatea sa nu aiba o variatie mare cu temperatura - sa aiba o solubilitate mare pentru a permite realizarea unei forte ionice mari - sa nu reactioneze chimic cu proteina - sa poata fi separata usor de proteina

Numai trei agenti de precipitare indeplinesc satisfacator toate cerintele: 1. sulfatul de amoniu ( unei forte ionice foarte mari ) 2. sulfatul de sodiu 3. fosfatul monopotasic + fosfatul dipotasic (are cea mai mare solubilitate in apa cea ce permite realizarea

Dializa: Metoda de separare si purificare a substantelor macromoleculare si solutiilor coloidale de substante micromoleculare cu ajutorul membranelor semipermeabile. Dializa este un proces de difuzie in masa si se supune legilor lui Fick. In general, membranele sunt permeabile in grade diferite in functie de diferiti solventi. Proteinele avand greutati moleculare mari si dimensiuni mari nu au cum sa strabata porii membranei semipermeabile si pot fi purificate de substante cu molecula mica si de electroliti. Reactia de precipitare a proteinelor: Sub actiunea diversilor factori chimici, fizici si fizico-chimici proteinele precipita devenind insolubile.

Reactia de precipitare este de doua feluri : - Reactie de precipitare reversibila - Reactie de precipitare ireversibila

Reactia de precipitare reversibila: - proteinele existente in solutie trec sub forma de precipitat fara sa-si modifice structura si proprietatile chimice si biologice. Dupa inlaturarea agentului de precipitare, proteinele isi revin la starea lor nativa. La precipitarea reversibila sunt afectate structurile secundare, respectiv fortele electrostatice si legaturile de hidrogen . - in prezenta unor saruri solubile (salifierea proteinelor), sarurile de sodiu, amoniu, bariu, magneziu au o pronuntata afinitate de hidratare, astfel actionand ca agenti de deshidratare pentru proteine, care astfel se aglomereaza si precipita. - precipitarea proteinelor cu solventi nepolari: acetona, alcool etilic, cloroform, eter etilic . Reactia de precipitare ireversibila: se produc modificari majore in conformatia si organizarea spatiala a proteinelor insotite de pierderea proprietatilor fizice, chimice si biologice.

Consecintele denaturarii proteinelor sunt urmatoarele : - diminuarea solubilitatii - cresterea numarului de grupari SH libere - pierderea activitatii biologice - pierde abilitata de a se combina cu apa - modifica vascozitatea si presiunea osmotica

Principalii agenti care provoaca denaturarea proteinelor sunt: - agenti chimici: acizi organici, minerali, saruri de metale grele - agenti fizici: caldura, ultrasunete, agitare, UV Agentii denaturarii actioneaza diferit asupra proteinelor: - acizii minerali si organici - sarurile de metale grele (Cu,Ag,Pb,Fe) datorita formarii de saruri greu solubile - reactivii alcaloizi au o afinitate mare pentru gruparile azotate din molecula proteinei. - precipitarea termica: sub actiunea caldurii, in prezenta unor electroliti si in mediu acid, proteinele precipita din cauza dezorganizarii structurii spatiale. La pct. izoelectric, precipitarea proteinelor este maxima .

Reactii de culoare a proteinelor: - proteinele au diverse reactii care ajuta la identificarea lor. Unele din aceste reactii sunt comune tuturor proteinelor. Intensitatea acestor reactii de culoare variaza de la o proteina la alta .