INTRODUO VIROLOGIA

Vrus:
- Agentes infecciosos muito pequenos (agentes filtrveis) - So parasitas intracelulares obrigatrios - Tm capacidade de infectar virtualmente todos os outros organismos vivos (animais, plantas, bactrias, fungos, ) - Receptores especficos expressos nas clulas a infectar - Zonas vricas de ligao s clulas a infectar (determinantes antignicos ou epitopos)

Bactrias Parasitas intracelulares Diviso binria DNA e RNA Ribossomas Metabolismo prprio A maioria no Sim Sim Sim Sim

Vrus Todos No No No No

ESTRUTURA VIRAL: VIRAL:

Nucleocpside : Cpside VIRIO Genoma (DNA ou RNA) Invlucro (camada fosfolipidica com origem na estrutura da clula hospedeira)

GENOMA: GENOMA:
DNA ou RNA (nunca ambos) Informao para as protenas virais (estruturais, reguladoras da replicao, enzimas necessrias para a replicao, )
Vrus DNA
Cadeia Simples Cadeia Parcialmente dupla Cadeia Dupla

Vrus RNA

Cadeia Simples
Segmentado
Polaridade Negativa

Cadeia Dupla

No segmentado
Polaridade negativa Polaridade Positiva

Linear

Circular

Linear

Circular
Orthomyxoviridae Arenaviridae Paramyxoviridae Rhabdoviridae Filoviridae Bunyaviridae Coronaviridae Retroviridae Picornaviridae Togaviridae Flaviviridae Calciviridae Reoviridae

Parvoviridae

Hepadnaviridae

Poxviridae Herpesviridae Adenoviridae

Papovaviridae

CPSIDE: CPSIDE:
Estrutura proteica simtrica que envolve o cido nucleico viral Responsvel pela forma e estrutura simtrica do vrus Proteco do genoma Responsvel pela adsoro do vrus s clulas alvo e determinante das caractersticas antignicas (vrus ns)

INVLUCRO:

Constituio Lpidos, protenas e glicoprotenas

Estrutura

Semelhante das membranas celulares Parte lipdica e glucdica: estruturas da clula

Origem

do hospedeiro Parte proteica: viral Proteco do vrus As glicoprotenas promovem: - Ligao do vrus clula alvo - Induo da resposta imune

Funes

INVLUCRO:
Em que medida que a presena ou a ausncia do invlucro pode influenciar a epidemiologia e o modo de transmisso dos vrus?

Para se manter vivel o vrus tem de manter intacto o invlucro

Vrus ns Mais resistentes Estveis a pH cido e alcalino Resistentes a detergentes Transmisso por via fecal-oral

Vrus com invlucro Mais sensveis Sensveis a pH cido e alcalino Sensveis a detergentes Transmisso por via sangunea

REPLICAO VIRAL: VIRAL:

Adsoro Penetrao Descapsidao Sntese: replicao do genoma e sntese proteica Formao dos viries Libertao No separador Ferramentas de Imagens | Formatar, pode criar as suas prprias molduras e fazer correces s imagens, como ajustar o contraste e a luminosidade ou recortar a imagem para obter o aspecto pretendido.

ADSORO: ADSORO:
Processo de reconhecimento entre o vrus e a clula alvo

Vrus Glicoprotenas do invlucro Protenas da cpside

Clula alvo Protenas, glicoprotenas, hidratos de carbono, glicolpidos

ADSORO: ADSORO:
Em que medida que a adsoro vai influenciar o tropismo viral?

PENETRAO:

Endossoma Fuso com a membrana citoplasmtica

REPLICAO DO GENOMA E SINTESE DAS PROTENAS VIRAIS :

varivel dependendo de o vrus ser DNA ou RNA Os vrus DNA so geralmente replicados e montados no ncleo Os vrus RNA so geralmente replicados e montados no citoplasma

Sntese de protenas necessrias replicao viral

Replicao do genoma viral

Sntese das protenas estruturais do vrus

VRUS DNA:

A replicao do DNA viral segue as mesmas regras da replicao do DNA celular: - semi-conservativa - requer uma sequncia iniciadora (primer) - ocorre por aco de uma DNA polimerase A replicao regulada por protenas celulares que se vo ligar a regies especficas do genoma viral, constituindo assim um factor que determina o tropismo dos vrus para determinados tecidos do hospedeiro.

VRUS RNA: RNA:

Vrus RNA de polaridade positiva:

O genoma viral sozinho suficiente para iniciar a infeco. O genoma viral funciona como mRNA, liga-se aos ribossomas, permitindo a sntese das suas protenas incluindo a RNA polimerase. Ocorre a formao de um intermedirio de polaridade negativa para a replicao do genoma.

VRUS RNA: RNA:

Vrus RNA de polaridade negativa:

O genoma viral tem que ter associada uma RNA polimerase para iniciar a infeco Cada RNA de polaridade negativa, codifica vrios mRNA, levando sntese de diferentes protenas Ocorre a formao de um intermedirio de polaridade positiva para a replicao do genoma

VRUS RNA: RNA:

Retrovirus:

Ocorre a formao de um intermedirio DNA de cadeia dupla que integrado no genoma da clula hospeira A sintese das protenas virais e a formao das novas cadeias do RNA viral ocorrem durante o processo normal da sntese proteica da clula hospedeira

MONTAGEM DOS VIRIES: VIRIES:

Comea quando todas as estruturas necessrias foram sintetizadas, e a sua concentrao suficiente para iniciar o processo de montagem.

Montagem da cpside:
As cpsides podem ser

montadas como estruturas vazias (pr-cpsides) ou

podem ser montadas volta do genoma

MONTAGEM DOS VIRIES: VIRIES:

Aquisio do invlucro:
-Membrana citoplasmtica -Membrana nuclear -Complexo de Golgi -Reticulo endoplasmtico

LIBERTAO DOS VIRIES: VIRIES:

Pode ocorrer por:
-Evaginao ou gemulao ocorre nos virus que adquirem o invlucro na membrana celular - Exocitose pode ocorrer nos vrus ns ou nos vrus que adquirem o invlucro em estruturas do interior da clula. - Lise celular - pode ocorrer nos vrus ns ou nos vrus que adquirem o invlucro em estruturas do interior da clula.

TAXONOMIA VIRAL: VIRAL:

Famlia Primeira letra maiscula, em itlico ou sublinhado e tem a terminao viridae. Subfamlia Primeira letra maiscula, em itlico ou sublinhado e tem a terminao virinae Gnero Primeira letra maiscula, em itlico ou sublinhado e tem a terminao virus Espcie nome comum, em portugus, escrito em letra minscula, excepto quando se trata do nome de uma localidade ou de uma pessoa.

PATOGNESE DA INFECO VIRAL: VIRAL:

Perodo de incubao* (Assintomtico) Sintomas Inespecficos (prdromos) Disseminao Sintomas especficos

Inoculao Entrada do vrus no organismo: Pele e mucosas, via respiratria, via digestiva, via sexual, via transplacentria

Replicao

Replicao nos pelo organismo: rgos alvo (leso dos tecidos) Corrente sangunea Resposta imune (virmia) Sistema linftico Sistema nervoso

INFECO VIRAL
Periodo de incubao assintomtico ou de sintomas no especficos (PRODROME) Sintomas da infeco leso teciduar e efeitos sistmicos causados pelo vrus e SI Covalescena sintomas podem permanecer Pele no contnua; membranas mucoepiteliais; inalao (via mais comum de transmisso viral) Vrus replicam nas clulas com receptores virais e que possuem a maquinaria biossinttica Podem repicar e permanecer no local inicial da infeco ou disseminar via sangunea (viremia), ou sistema mononuclear fagocitrio ou via nervosa

INFECO VIRAL
Infeco produtiva: ciclo ltico em clulas permissivas; lise das clulas para libertao dos viries; Efeito citopatognico (corpos de incluso) Infeco abortiva: no completa o ciclo de replicao (defesa celular, vrus sofrem mutaes, interferncia com outros vrus) Infeco persistente: material gentico do vrus integra o DNA celular; transformao celular (clulas malignas); infeco persistente/infeco crnica

PATOGNESE DA INFECO VIRAL: VIRAL:

Diagnstico em virologia

Ser possvel observar vrus ao microscpio ptico como fazemos com as bactrias?

Conseguiremos isolar vrus recorrendo aos mesmos meios de cultura usados na bacteriologia?

Mtodos de diagnstico:
Diagnstico directo Isolamento em cultura celular Serologia

Microscopia electrnica

Microscopia electrnica
Principais utilizaes

Diagnstico de gastroenterites viricas atravs da deteco dos vrus nas fezes (ex.:rotavirus, adenovirus, astrovirus, calcivirus) Deteco de vrus em leses da pele (ex.: herpesvirus e papilomavirus) Elevado preo do equipamento e da sua manuteno Necessidade de um observador altamente treinado Baixa sensibilidade

Desvantagens

EXAMES CITOLGICOS: CITOLGICOS:

Vacolos Alterao da forma da clula

(Ex. CMV)

Sinccios
(Ex. VSR)

Corpos de incluso
(Ex. CMV, Vrus da raiva)

Lise celular

EXAMES CITOLGICOS: CITOLGICOS:

CMV

Vrus da Raiva

VSR

DETECO DE ANTIGNIOS IMUNOFLUORESCNCIA:

Antigenmia (CMV)

Pesquisa de vrus Respiratrios

MTODOS DE BIOLOGIA MOLECULAR - PCR

DNA ou RNA extrados Tampo da reaco Nucletidos (dNTPs) Primers DNA polimerase

ISOLAMENTO E MULTIPLICAO VIRAL: PRINCIPAIS MTODOS

CULTURA CELULAR MTODO CLSSICO

CULTURA CELULAR - MTODO DE SHELL VIAL

CULTURA CELULAR - MTODO DE SHELL VIAL

CULTURA CELULAR - MTODO DE SHELL VIAL

CULTURA CELULAR - PRINCIPAIS LIMITAES:

um mtodo muito lento, podendo a resposta demorar semanas Para que possa crescer em cultura celular, o vrus tem que se manter vivel, o que implica condies especiais de transporte ao laboratrio As clulas so muito susceptveis a contaminao fngica e bacteriana, bem como a substncias txicas presentes na amostra Alguns vrus no podem ser cultivados em cultura celular. Ex.: HBV, HCV, Parvovirus B19

SEROLOGIA: SEROLOGIA:
Os mtodos serolgicos so os mtodos mais utilizados em laboratrios de rotina. Qual ser o motivo?
Possibilidade de automatizao Baratos Rpidos No requerem pessoal altamente treinado nem equipamentos dispendiosos como alguns dos mtodos anteriores

SEROLOGIA - PRINCIPAIS LIMITAES:

Resultado positivo Doena (Porqu?) Negativos no perodo inicial da infeco e em caso de imunossupresso Pouco especficos Normalmente no tem significado em crianas recm nascidas. (Porqu?)

SEROLOGIA - TESTES DE AGLUTINAO:

SEROLOGIA - IMUNOFLUORESCNCIA: IMUNOFLUORESCNCIA:

SEROLOGIA - TESTES IMUNOENZIMTICOS: IMUNOENZIMTICOS:

DETECO DE ANTIGNIOS MTODOS IMUNOENZIMTICOS:

Principais utilizaes: Antignio HBs e Antignio HBe do vrus da hepatite B Antignio do vrus da hepatite C

SEROLOGIA WESTERN BLOT:

SEROLOGIA - OUTROS MTODOS:

Quimioluminiscncia Electroquimioluminiscncia Radioimunoensaios