EXPERINCIA 01 - DETERMINAO DA CONSTANTE DE DISSOCIAO DE UM INDICADOR POR ESPECTROFOTOMETRIA. Objetivos: Analisar o comportamento de indicadores na presena de solues de pH variados.

. Utilizar um espectrofotmetro para determinar a constante de dissociao de um indicador. I. Teoria Denomina-se indicador ( HIn ) uma substncia cuja cor depende do pH do meio. Geralmente caracteriza-se por ser um base ou cido orgnico fraco, que se ioniza na forma:

HIn
(Cor A)

H+ + In (Cor B)

A constante de ionizao (K) do indicador dada por:

[H + ].[In ] K= [HIn]
(1)

ou

pK = pH log

[In ] [HIn]

Segundo o princpio de Le Chatelier-Braun, pode-se concluir que, se o indicador se encontra em solues de pH's abaixo do pK In, sua cor ser a da forma no ionizada HIn (Cor A) e se acima do pKIn, ser da forma ionizada In (Cor B). Isto quer dizer que fazendo-se vrias solues de concentrao conhecida a diferentes pH's tem-se uma escala de cores que vai da cor A at a cor B. Assim tendo-se solues de pH conhecido ser possvel conhecer suas cores. Como pode ser observado na tabela 1, existem indicadores muito especficos em relao ao seu ponto de viragem. Tabela 1: Exemplo de indicadores cujo pH de viragem conhecido*. Indicadores pKIn Faixa de Cor A Cor B viragem (transio de cor) Alaranjado de metila 3,7 2,9 4,6 Vermelho Alaranjado Azul de bromofenol 4,1 2,8 4,6 Amarelo Azul Vermelho de metila 5,0 4,2 6,3 Vermelho Amarelo Bromocresol prpura 6,1 5,2 6,8 Amarelo Prpura Azul de bromotimol 7,1 6,0 7,6 Amarelo Azul Vermelho de cresol 8,2 7,2 8,8 Amarelo Vermelho (bsico) Prpura de cresol 8,3 7,4 9,0 Amarelo Prpura Fenoftalena 9,6 8,3 10,0 Incolor Rosa *Voguel Anlise qumica quantitativa 5 Ed.

Em funo de suas cores, a constante de dissociao dos indicadores pode ser estudada utilizando-se um aparelho chamado de espectrofotmetro na regio da luz visvel. A teoria baseia-se no fato de que um feixe de luz de intensidade inicial Io ao atravessar uma soluo lquida pode ser absorvido em parte por uma substncia, de tal modo que sua intensidade transmitida ser I . A variao da intensidade funo da natureza da soluo e depende do coeficiente de absortividade molar ( ), do caminho tico (b) e da concentrao da soluo (C). A relao entre I e Io dada pela equao de Lambert-Beer equao 2.

log(I Io ) = . b.C = A

(2)

Intencidade Intencidade inicial (I o) Medidor Transmitida (I) Lmpada Amostra

O fator log(I Io ) = A a absorbncia a um comprimento de onda particular que depende da substncia (indicador). Para a dissociao de um indicador as concentraes das espcies presentes podem ser relacionadas com a absorbncia atravs das relaes 3 e 4:
[ In ] = ( A) ( AHIn ) e (3)
2.0

[ HIn ] = ( AIn ) ( A)
(4)

Abs

2 3

Desta forma, substituindo na equao 1 tem-se;

pK = pH log
( A) ( A ) HIn ( A ) ( A) In

1.0 4 5 6

(5)
0 400

520

Fig-2- Espectros de Hin em sol. Tampes de diferentes pH.

Comprimento de onda

600

Conhecendo-se as absorbncias (A, AHin e AIn-) a vrios pH's, pode-se determinar o valor de pK e do K usando a equao 5. Conforme figura 2, a absorbncia AHin corresponde a curva 1 e a Absorbncia AIn- corresponde a curva 6. As outras curvas so as absorbncias (A) das outras amostras. Desta forma determina-se 4 valores de pK cuja mdia ser o valor experimental do pK da experincia. Outra forma de calcular o pK atravs de um grfico de pH versus log Neste caso o coeficiente linear ser o pK.
7

A AHIn . AIn A

II. Material -2 buretas de 10 mL; 1 pipeta graduada de 0,2 mL -1 pipeta volumtrica de 5 mL - 1 bquer de 250 mL, 2 de 50 mL - 12 tubos de ensaio mdios - 100 mL de fosfato de sdio 0,2 mol L-1 (Na2HPO4.x H2O) - 100 mL de cido ctrico 0,1 mol L-1.

coef. linear 5,02

5

pH
4

-1,0

-0,5

0,0

0,5

1,0

1,5

2,0

log (A - A(HIn) ) / (A (In-) - (A)

III. Procedimento experimental

Figu ra 3- Indicador vermelho de metila

1. (Parte 1) Prepare 15 mL de soluo tampo (srie McIlvaine ) conforme tabela 2, em 6 tubos de ensaio numerados de 1 a 6. Tabela 2: Srie McIlvaine obtido pela mistura de hidrognio fosfatodissdico e cido ctrico. Sol. No 01 02 03 04 05 06 PH terico 3,0 4,0 5,0 6,0 7,0 8,0 Na2HPO4 ; 0,2M 3,09 mL 5,79 mL 7,73 mL 9,48 mL 12,36 mL 14,60 mL cido Citrico ; 0,1 M 11,91 mL 9,21 mL 7,27 mL 5,52 mL 2,64 mL 0,41 mL Volume final 15 mL 15 mL 15 mL 15 mL 15 mL 15 mL

OBS: Os volumes devem ser medidos com preciso. 2.Transfira 5 mL (pipeta volumtrica) das sol. de cada tubo para uma nova srie de 6 tubos numerados, reserve-os para executar a parte 2. 3. Calibre o pH-metro com padre de pH 7,0 e 4,0 e mea o pH das solues da 1 a srie de 6 tubos (complete os dados da tabela 3), em seguida adicione uma gota de cada indicador conforme Tabela 3, de acordo com o pH respectivo. 4. Parte 2- Adicionar 0,2 mL de Vermelho de Metila diludo a cada tubo contendo os 5 mL das solues da 2a srie de 6 tubos de ensaio. 5. Mea as absorbncias ( A ) de cada soluo contendo os 0,2 mL de vermelho de metila diludo (2a srie) variando o comprimento de onda de 400 nm a 600 nm. Para usar o espectrofotmetro pea ajuda ao professor. Assuma que o valor da absorbncia em pH=3 corresponde a AHIn e em pH=8 a AIn . Tabela 3: Determinao do pH aparente
Srie McIlvaine PH 3,0 PH 4,0 PH 5,0 PH 6,0 PH 7,0 PH 8,0 Indicador Alaranjado de metila Azul de bromofenol Vermelho de metila Bromocresol prpura Azul de bromotimol Vermelho de fenol Colorao da soluo pH Medido

IV. Questionrio e clculos 1.Com os dados de absorbncia extrados dos espectros, determine pK e a constante de dissociao (K) do indicador utilizando a equao 5 (Figura 2). Obs: Os valores de absorbncia para os clculos devero ser obtidos do grfico em 520 nm

(aproximadamente). A constante de dissociao corresponde a mdia aritmtica dos quatro valores encontrados. 2. Faa um grfico conforme figura 3 e calcule o pK. Compare o pK do indicador calculado algebricamente (questo 1) e atravs do grfico, discuta os resultados. 3. Obtenha na literatura o valor terico do pK do indicador e calcule o erro experimental. 4. possvel observar a existncia de ponto isosbstico nos espectros de absorbncia que voc obteve ? O que ponto isosbstico ? Quando isto acontece? 5. Voc usou um espectrofotmetro na regio do visvel para verificar a dissociao de um indicador cido-base. Porque isso foi possvel ? Explique. 6. Atravs de espectrofotometria pode-se determinar o pK de aminocidos e protenas. Explique. 7. O que so espectros de absoro? Explique. (Voguel pg. 542) 8. Que tipo de molculas apresentam absoro no ultra violeta e/ou no visvel? 9. Que tipo de resduos qumicos foram gerados neste experimento e como foram tratados ou armazenados. Explique. 10.O pH um dos fatores mais importantes no processo de formulao. Duas reas de grande importncia so os efeitos do pH sobre a solubilidade e a estabilidade. O efeito sobre a solubilidade crtico em formas farmacuticas lquidas, desde as solues orais e tpicas, at as solues e misturas intravenosas. Procure na literatura perfis de pH versus solubilidade para um frmaco. (ou dados de solubilidade de saturao do cido livre e solubilidade de saturao do sal para um frmaco) 11.Descreva um outro mtodo que poderia ser usado para determinar o pKa. 12. Relacione situaes que exemplifique a importncia do controle do pH na rea farmacutica.

V. Bibliografia 1. Garret Morris, Fsico-Qumica para Bilogos. 2. N.Baccan, J.C. de Andrade, E.S. Godinho e J.S. Barone, Qumica Analtica Quantitativa Elemetar. 2o Ed. 1992. 3. Voguel, Anlise Qumica Quantitativa, 5 o Ed., LTC - Livros Tcnicos e Cientficos Editora S.A., R.J., 1992. 4. Bueno, W. A. e Degrve, L. Manual de Laboratrio de Fs.-Qumica, McGraw-Hill, 1980. 5. H. D. Crockford, J. W. Nowell, " Laboratory Manual of Physical Chemistry", John Wiley & Sons, New York, 1976. 6. R. Chang, Physical Chem. Whit Appllic. To Biol. Systems. 2 o Ed. 1981. 7. E. A. Rawlins. Textbook of Pharmaceutics. 8a Ed. 1977. Baillire Tindall. London. 8. A. T. Florence, Physicochemical Principles of Pharmacy. Third Edition. M&F Academic Book Services. 1998.