Sntese de Protenas

Jonas Contiero - 2006

Traduzindo a Menssagem
Como a sequncia de mRNA traduzida na sequncia de uma protena? O que o cdigo gentico? Como se traduz o cdigo de 4 letras" do mRNA no cdigo de 20-letras" das protenas? E como so os mecanismos caractersticos? No h afinidade qumica bvia entre as bases purinas e pirimidinas e os aminocidos que constituem a protena. Como sada" deste dilema, Crick props molculas adaptadas" - so elas os tRNAs!

A Colinearidade do Gene e Estruturas de Protenas

Estrutra de Watson e Crick's para o DNA, junto com Sanger's demonstraram que as seqncias de protenas so nicas e especficas, dando a impresso de que a seqncia de DNA detalha a seqncia de protena Yanofsky provou melhor a evidncia em 1964: ele mostrou que as distncias relativas entre mutaes no DNA eram proporcionais as distncias entre susbtituies de aminocidos em E. coli na sntese de triptofano

Elucidando o Cdigo Gentico

Como o cdigo de DNA para 20 aminocidos diferentes? Cdigo de 2 letras pode permitir apenas 16 combinaes possveis. Cdigo 4 letras permite 256 combinaes possveis. Cdigo de 3 letras permite 64 combinaes diferentes O cdigo sobreposto? O cdigo pontual?

A Natureza do Cdigo Gentico

Um grupo de 3 cdigos de basees para um aminocido O cdigo no sobreposto A seqncia de bases escrita de um ponto inicial fixo, com nenhuma pontuao O cdigo degenerado (em muitos casos, cada aminocido pode ser designado por qualquer das vrias trplices)

Como o cdigo foi quebrado

A designao de "cdons" para seus respectivos aminocidos foi alcanada pela bioqumica in vitro Marshall Nirenberg e Heinrich Matthaei mostraram que poli-U produzem polifenlalanina na clula livre em soluo de

E. coli

Poli-A origina polilisina Poli-C origina poliprolina Poli-G origina poliglicina Mas qual dos outros?

Obtendo o Resto do Cdigo

Trabalhos com copolmeros nucleotdeo (poli (A,C), etc.), revelou alguns dos cdigos Mas Marshall Nirenberg e Philip Leder desvendaram o vcdigo inteiro em 1964 Eles mostraram que trinucleotdeos pulam para ribossomos e podem dirigir-se ligando ao aminoacil-tRNAs especfico Utilizando C-14 marcado aminocidos com todos os possveis cdigos de trinucleotdeos, eles elucidaram todos os 64 correspondentes no cdigo

Caractersticas do Cdigo Gentico

Todos os cdons tem significado: 61 aminocidos especficos, e os outros 3 so "no essenciais" ou "stop" cdons O cdigo unambiguous - apenas 1 aminocido indicado por cada 1 dos 61 cdons O cdigo degenerativo - exceto pela Tre e Met, cada aminocido codificado por dois ou mais cdons Primeiro 2 cdons de triplces so muitas vezes suficientes para aminocido especfico. Terceira posio difere Cdons representando o mesmo ou aminocidos similares so similares na seqncia (Glu e Asp)

tRNAs
tRNAs so intrpretes do cdigo gentico Comprimento = 73 95 bases Tem 2o estrutura extensa Brao Aceptor posicionado onde aminocido ligado Anticdon complementariedade ao mRNA Vrias bases modificadas covalentemente Bases cinzas so conservadas entre tRNAs

tRNAs:

vs

Estrutura

Terceira-Base Degenerada
Cdon-anticdon pareados a caracterstica crucial da escrita do cdigo" Mas o que conta para a "degenerabilidade": H 61 anticdons diferentes, ou pode voc se manter com menos do que 61, devido falta de especificidade na terceira posio? Hiptese de Crick's Wobble contesta a segunda possibilidade - a primeira base do anticdon (a qual emparelha com a terceira base do cdon) referida como posio wobble"

A Hiptese de Wobble
As duas primeiras bases do cdon faze ligao normal com H- pareado com as segunda e terceira bases do anticdon Na posio remanescente, menos cdigos escassos concentrados e pares no-cannicos podem ocorrer As regras: primeira base U pode reconhecer A ou G, primeira base G pode reconhecer U ou C, e primeira base I pode reconhcer U, C ou A (I provm da deaminao de A) Vantagem de wobble: dissociao de tRNA de mRNA rpida e a snteza de protenas tambm

 Cdons so reconhecidos por aminoacil-tRNAs

Ativao de AA por sntese de protenas

Maioria das bases pareadas permite ao tRNA trazer seu aminocido particular ao ribossomo Mas aminoacil-tRNAs fazem alguma coisa seno: ativar o aminocido para transferir ao peptdeo Aminoacil-tRNA sintetase faz o trabalho crtico - ligando o aminocido correto com tRNA "cognato Dois nveis de especificidade - um formando o aminoacil adenilato e um em ligao ao tRNA

Aminoacil-tRNA Sintetase
Aminocido + tRNA + ATP aminoacil-tRNA + AMP + PPi Maioria das espcies tem ao menos 20 aminoacil-tRNA sintetases diferentes. Tipicamente uma enzima hbil para reconhecer mltiplos anticdons codificados para um nico aminocido (p.e serina, 6 anticdons diferentes e apenas uma sintetase) Dois passos no processo: 1) Ativao do aminocido para aminoaciladenilato 2) Formao de amino-acil-tRNA

NH2 N

Formao de Aminoaciladenilato
N O H H OH O N O C CH NH2 H H OH H N N O H H OH O C CH NH2 H O P O ON O P OO O P OO O P ONH2 OO H H OH

PPi
O

Aminoacil-tRNA Sintetase Rxn

NH2 N N N N O H H OH H H OH O O 5' tRNA O P O H C CH H NH3+ 5' tRNA O H H O O C CH H NH3+ OO H O H N N O H H OH O H H OH NH2 N N N N NH2 N N

AMP

Especificidade de Aminoacil-tRNA Sintetases

Anticdon e estrutura caractersticas do brao aceptor dos tRNAs especficos so importantes no reconhceimento da enzima Sintetases so altamente especficas para substratos, mas Ile-tRNA sintetase tem taxa de erro de 1%. Algumas vezes incorporadas a Val. Ile-tRNA tem funo escrita prova. Tm atividade de deacilase que "edita" e hidroliza aminoacil-tRNAs misacilado