UNIVERSIDADE FEDERALDO RIO GANDE DO NORTE CENTRO DE BIOCINCIAS DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA E PARASITOLOGIA

Coprocultura, Urinocultura e Cultura de secrees

Prof. Dr. Renato Motta Neto

TCNICA DE CULTURA PARA SECREES

INTRODUO: O exame bacteriolgico de secrees envolve o exudato amigdaliano, secrees de orofaringe, conjuntival, nasal, ouvido mdio, escarro e outras provenientes de leses abertas ou fechadas; j as leses superficiais envolvem furnculo, abscessos e feridas cirrgicas.

CULTURA DE OROFARINGE
MICROBIOTA: Diversificada(Estreptocos alfahemolticos,Beta-hemolticos no pertencentes ao Gr. A,Neisserias saprfitas, Estafilococos , difterides, algumas enterobactrias e bactrias anaerobias, etc..); FOCO: Pesquisa de Streptococcus pyogens Gr. A, N.meningitidis (portadores), S.aureus e Corynebacterium diphtheriae (mt. Especiais).

CULTURA DE OROFARINGE
MTODO: 1) Coleta do material (no realizar asseio bucal); 2) Bacterioscopia; 3) Cultura.

COLETA

2 Swabs No caso de semeio No imediato, acondiciona-lo em meio Para tranporte

BACTERIOSCOPIA
PRIMEIRO PASSO: Faz-se um esfregao em lmina (GRAM); Informaes importantes: Presena de PMN (>25 PMN e < 10 cl); Descrio da microbiota (Gram positiva e ou Gram negativa relatar o predomnio); Arranjos celulares.

CULTURA
Semeio (tcnica: em quadrantes); MEIOS: ASA (cortes com a ala -padro hemoltico) ; Mc. Conkey; gar sal manitol (melhor isolamento de estafilococos).

ENTENDENDO O GNERO ESTREPTOCOCOS

CLASSIFICAO SEGUNDO LANCEFIELD Grupo A (beta-hemolticos):(impetigo, f.escarlatina,f.reumtica e GNDA); Grupo B (beta-hemoltico):septicemia puerperal, infeces recm-nascidos, hidrlise do hipurato e CAMP; Grupo D(alpha ou beta): enterococos,CAMP (+), bile esculina (+), caldo hiper (+); Grupo viridans (Alpha); Steptococcus pneumoniae (alpha):pneumonia, otite e meningite, optoquina (sensvel), bile (solvel).

Streptococcus pyogens (Beta-hemoltico Gr. A)

BETA-HEMLISE

Sensvel a Bacitracina

ENTENDENDO O GNERO ESTAFILOCOCO

ESPCIES INTERESSE MDICO: Staphylococcus aureus (abcessos, intoxicaoalimentar, sndrome do ch. Txico); Staphylococcus epidermidis (infeces de prteses, encontrado na pele); Staphylococcus saprophyticus (infeco tr.urinrio)

PROVA DA CATALASE
INTRODUO: Diferencia as espcies de estafilocos (+), dos estreptococos(- ).

PROVA COAGULASE
INTRODUO: Diferencia a espcie S.aureus

Fator clumping Coagulase ligada a clula

Coagulase livre

S. epidermidis x S.saprophyticcus

S.epidermidis Sensvel -Novobiocina

S.Saprophyticcus Resistente -Novobiocina

ESCARRO
INTRODUO: O exame microbiolgico do escarro realizado na identificao de patgenos que podem estar associados a infeces pulmonares considerando-se que o escarro reflete qualquer infeco que possa estar ativa na rvore brnquica e pulmes.

ESCARRO
MICROBIOTA PATOGENICA: Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, staphylococcus aureus, Enterobacteriaceae, bacilos Gram-negativos no fermentadores, Legionella spp, Micoplasma pneumoniae e outros.

ESCARRO
OBJETIVO: 1) Diagnstico de pneumonias bacterianas; 2) Diagnstico de casos suspeitos de tuberculose. MTODO: Bacterioscopia; Cultura.

Diagnstico das pneumonias bacterianas

FOCO: Streptococcus pneumoniae Mtodo: amostra realizar asseio bucal, escolher a poro mais purulenta do escarro e semear em: ASA; GAR CHOCOLATE (fastidiosos); GAR MAC.CONKEY.

Diagnstico das pneumonias bacterianas

BACTERIOSCOPIA: (GRAM) Amostra adequada: < 10 clulas epiteliais/campo e > 25 PMN/campo Amostra inadequada: > 10 clulas epitelilais/campo e <25 PMN/campo

Streptococcus pneumoniae (Alpha-hemoltico)

SENSVEL A OPTOQUINA

REAO DE QUELLUNG POSITIVO SOLVEL BILE

COPROCULTURA
INTRODUO: As culturas de fezes so largamente utilizadas no diagnstico de gastroenterites inespecficas e demais infeces do trato intestinal. FOCO: Salmonella sp (febre tifide, febres entricas...invasividade seu principal f. Virulncia);

COPROCULTURA
FOCO: Shigella sp: menor freqncia (disiteria bacilar); E.Coli: enterites (crianas-principal)- tipos: EPEC,ETEC, EIEC e EHEC(til classificao sorolgica-epidemiologia); Y. Enterocolitica/C.jejuni: no pesq na rotina.

COPROCULTURA
Dose Infectante: Shigella 10-100 UFC/mL C.jejuni 100-1.000 UFC/mL Salmonella 100.000 UFC/mL E. Coli 100.000.000 UFC/mL

COPROCULTURA
AMOSTRA: Obteno na fase aguda (se possvel coletar antes da quimioterapia); Remeter ao laboratrio (2h); Meio transporte : Cary-Blair ou Stuart.

COPROCULTURA
ISOLAMENTO PRIMRIO: gar MacConkey, EMB:no seletivos entre os G(-) entricos; SS: bom para salmonella, podendo inibir Shigella XLD:salmonella e shigella HE: salmonella e shigella gar sulfito de bismuto: seletivo para S.typhi VB:seletivo para Salmonella spp, no indicativo para S.typhi e S.paratyphi

COPROCULTURA

Lac (-):incolor; Lac (+): rosa

Lac(+): laranja

Lac (-):incolor c/s pigmento

ENTENDENDO AS PROVAS BIOQUMICAS

ENTENDENDO AS PROVAS BIOQUMICAS

Vm &Vp
Uria Fenil alanina

Descarboxilao aa Pseudomonas spp Parafenilenodiamina

Citrato

URINOCULTURA
INTRODUO: A urinocultura um dos exames microbiolgicos, no qual indispensvel quantificao dos MO, para que o resultado tenha valor diagnstico definitivo. MTODO: 1)Ala calibrada; 2) Cultivo em lmina (semi-quantitativo); 3) Mtodo das diluies (mais exato).

URINOCULTURA
ALA CALIBRADA
FATOR DILUIO: 1L:n col x 1.000UFC/mL 10L:ncol x 100 UFC/mL

SEMEIO: CLED; MAC.CONKEY

HEMOCULTURA
INTRODUO: O sangue normalmente isento de qualquer tipo de MO, e uma vez que bactrias penetram na corrente circulatria, desenvolve-se necessariamente uma bacteremia.

HEMOCULTURA
AMOSTRA: Coletar 2-3 amostras antes do acesso febril (24h); Volume: 10mL (ADULTO), 1-5 mL (CRIANA); MEIO: Caldo BHI + SPS (inativa leuccitos).

HEMOCULTURA
ISOLAMENTO E IDENTIFICAO: Incubao (35-37C)..INSPEO DIRIA; EVIDNCIAS DE CRESCIMENTO: Turvao do meio; Colniascrescendo na camada de sangue sedimentada; Evidncia de hemlise; Produo de gs.

HEMOCULTURA
SUBCULTIVOS: Realizar aps 48 h (frasco inicial); A cada 48h (permanecerem negativas); Perodo mximo: 7 dias

AES AULA PRTICA

Urinocultura 1) Semeio com ala calibrada no meio cled Coprocultura 1) Semeio Mac.Conkey, SS Secrees 1) Semeio ASA, BHI, Gram