BIOQUMICA FORENSE

En la biologa forense se trata el estudio cientfico relacionado con la inclinacin del individuo a la comisin de delitos, derivada de sus condiciones morfolgicas y fisiolgicas. La biologa forense segn la clasificacin de los pronunciamientos periciales se divide en 7 ramas, que son: Hematologa forense Espermatologia forense Tricologa forense Microbiologa e inmunologa forense Entomologia Anlisis especiales Identificacin por el ADN Vamos a centrarnos en las pruebas forenses que se realizan en las reas de hematologa, espermatologa, tricologa e identificacin por el ADN. HEMATOLOGA FORENSE Se realizan pruebas de muchos tipos, desde la bsqueda de sangre hasta el anlisis de la misma en caso de ser hallada. El estudio pericial de las manchas de sangre exige una sistemtica obligada: o Reacciones de probabilidad u orientativas: si su resultado es negativo, se concluye que no hay sangre. Si el resultado es positivo, se pasa a las reacciones de certeza. o Reacciones de certeza (diagnostico genrico) permiten asegurar que la muestra es de sangre una vez esto averiguar mediante el diagnstico especfico si es humana o animal, si es humana concluir con el diagnstico individual Pruebas de orientacin o de probabilidad: Intentan poner de manifiesto las peroxidasas de la sangre. Las peroxidasas son enzimas que tiene la sangre y su funcin es catalizar la descomposicin del agua oxigenada. La bsqueda de restos sanguneos se puede llevar a cabo con diferentes pruebas, como pueden ser: o Reaccin de Van Der Velden o Schobein (prueba del perxido de hidrgeno) o Reaccin de Adler (Bencidina) o Reaccin de Kastle-Meyer (fenolftaleina) o Luminol (quimioluminiscencia)

Diagnostico genrico: pruebas de certeza: o Pruebas histolgicas: poner de manifiesto las clulas sanguneas a travs del microscopio ptico o Pruebas cristalogrficas o microqumicas: Obtener sustancias derivadas de la hemoglobina, que forman unos cristales caractersticos visibles con el microscopio ptico. o Pruebas espectroscpicas: se trata de obtener el espectro de absorcin de la hemoglobina y de sus derivados. Las tcnicas espectroscpicas no son muy empleadas. o Pruebas cromatogrficas: Para la sangre se suele utilizar la cromatografa en capa fina (TLC), o la cromatografa sobre papel. Tambin se debe determinar si procede de un ser humano o un animal, la procedencia de la misma (menstrual, epistaxis, etc) y si pertenece a hombre o mujer. Diagnostico individual de la sangre humana y la animal: el antgeno se obtiene del macerado de la mancha problema, y el anticuerpo es suero especifico, preparado en el laboratorio segn la especie animal que se desee investigar (antihumano, antiovino, antiequino, etc.). Las reacciones positivas segn el mtodo empleado, se revelan por fenmenos de precipitacin (opalescencia) o de hemlisis (dilucin). Son pruebas de notable valor medico-legal, dada su extrema sensibilidad. Diagnostico individual de la huella sangrienta: demostrada la naturaleza hemtica de la huella y su procedencia humana, el diagnostico individual por la determinacin del grupo sanguneo correspondiente es el necesario complemento en toda investigacin criminal. Regin del cuerpo donde procede la sangre: El diagnostico grupal es la primera prueba de orientacin que se realiza, despus se verifican microscpicamente, los elementos caractersticos que pueden indicar el sitio del cuerpo del cual procede. o Sangre nasal (epistaxis) o Sangre proveniente del aparato respiratorio (hemoptisis) o Sangre procedente del aparato digestivo emitida por la boca(hematemesis) o Sangre proveniente del aparato digestivo emitida por el ano (melena) o Sangre menstrual o Sangre no menstrual procedente de violencia sexual o Sangre proveniente de un parto o su interrupcin

ESPERMATOLOGA FORENSE

Su funcin es la identificacin del esperma, para lo cual debemos conocer su morfologa y bioqumica. La importancia del examen espermatolgico se basa en la bsqueda de evidencia biolgica (espermatozoides) en muestras que pueden ser de contenido vaginal, ropa interior, regin perianal y otras superficies. Para su identificacin existen dos tipos de pruebas de orientacin y las de certeza. Pueden surgir dificultades cuando hay azoospermia (ausencia de espermatozoides en el semen) produce una dificultad, pero se puede utilizar la prueba de fosfatasa cida como prueba de certeza ya que la presencia de fosfatasa cida, es ms especfica de contacto sexual en vista de encontrarse normalmente secreciones prostticas que dan resultados en unidades de millones. No es del todo conocido si la fosfatasa cida se encuentra presente en las secreciones vaginales y urinarias de la mujer en periodo de pubertad, ahora, si se sabe que est presente ya en bajos niveles en las secreciones prostticas del varn adolescente tenga o no tenga azoospermia. La prueba irrefutable es el hallazgo del espermatozoide entero; tambin puede ser captado lavando con suero fisiolgico la cavidad vaginal o rectal. La supervivencia del espermatozoide en el medio varia, segn la opinin de diversos autores entre 6, 8, 12 y 24 horas. Lo mas frecuente es hallar el esperma desecado, el aspecto microscpico de la mancha depender del soporte del cual asienta y de la data de la emisin. Forma sobre la piel pelculas brillantes; en las telas absorbentes, toma el aspecto bien conocido del mapa geogrfico, coloracin blanco-griscea o amarillenta, y consistencia acartonada. En los tejidos no absorbentes aparece en forma de escamas brillantes, semejantes a los rastros que dejan los caracoles a su paso. Se aprovecha una propiedad natural del semen, el color azulado que adquiere la mancha y la fluorescencia blanco-amarillenta que emite en la oscuridad cuando se lo somete a la accin de la luz de Wood (ultravioleta). Hay secreciones tisulares (orina, mucus vaginal esputos), capaces de producir fenmenos semejantes, pero tambin muchos otros elementos y no necesariamente orgnicos, que carecen de fluorescencia.

Pruebas de orientacin:

El extracto de la mancha unido a determinados reactivos, produce la formacin de microcristales, originados por la colina y la espermita, que son productos de descomposicin del esperma. Estos derivados faltan en el esperma fresco y en el muy antiguo. Pruebas de presuncin: Estn representadas por el test de la fosfata cida. Pruebas de certeza: El objetivo es hallar un espermatozoide completo; la observacin de cabezas o colas aisladas no tiene significado diagnostico de valor medico-legal, porque existen elementos contaminantes, como fibras, hongos, esporos, glbulos rojos, etc. que se asemejan unas a otras. El esperma contiene aglutininas y aglutingenos que se corresponden exactamente con el grupo sanguneo del individuo. TRICOLOGA FORENSE Es importante detallar cuales son los pasos a seguir cuando el pelo es recolectado como evidencia desde un escena del crimen y como se debe proceder en cuanto al resguardo de esta evidencia, as como el resguardo de la cadena de custodia que debe preceder a la muestra desde su recoleccin hasta su anlisis en el laboratorio forense. Los anlisis periciales a los cuales debe someterse el cabello son los siguientes: Examen microscpico Este anlisis consta de dos etapas. Primero se procede a la identificacin del pelo (si es de origen animal o humano) y luego se le compara con pelos de origen conocido. La comparacin se hace mediante la utilizacin de dos microscopios compuestos conectados a un puente ptico, lo que permite visualizar el pelo de origen desconocido al mismo tiempo que el pelo de referencia. Este tipo de estudio es particularmente til en crmenes violentos, como los homicidios, ataques sexuales o robos, donde el contacto fsico entre los individuos y la recuperacin de artculos de ropa desde la escena del crimen pueden contener cabellos tiles a la hora de identificar al sospechoso. Examen de la anatoma Es importante verificar las caractersticas microscpicas del pelo para poder conocer a que regin del cuerpo pertenece. Adems es til observar si es un cabello rasgado o arrancado o si corresponde a un cabello que se ha cado naturalmente. La morfologa bsica de los cabellos humanos es compartida por cada individuo, sin embargo el arreglo, la distribucin y la apariencia de las caractersticas microscpicas de los cabellos de cada individuo en las diferentes reas del cuerpo no escapan a un examinador experto en la materia.

a) Comparacin de cabellos b) Cabello arrancado c) Arrancado a la fuerza d) Naturalmente cado Determinacin racial

Es tambin posible determinar a que raza corresponde el cabello analizado. As es posible diferenciar los cabellos provenientes de un sospechoso de origen caucsico, asitico o de raza negra (Figuras 4 a, b y c).

a) Pelo caucsico b) Pelo asitico c) Pelo negroide Anlisis de ADN La determinacin del sexo del sospechoso se puede realizar en cabellos gracias a que en la zona proximal o bulbo, el pelo presenta clulas nucleadas totalmente activas que contienen ADN. Aun as, no todos los pelos con bulbo pueden ser usados para el anlisis de ADN. Las mejores muestras son las que estn en fase anagnica y luego en la catagnica. Los cabellos en fase Telognica son desechados si se quiere hacer un estudio de ADN nuclear. La determinacin definitiva puede ser conseguida a travs del teido de la cromatina sexual encontrada en las clulas del tejido folicular de la fibra de pelo. Bsqueda de Drogas de Abuso Debido a que las drogas y sus metabolitos quedan atrapados en el pelo, ste es una muy buena muestra para determinar si el consumo ha sido crnico o corresponde a un consumo reciente. En el caso de asaltos sexuales donde la vctima ha sido drogada, un anlisis de pelo es suplementario a los anlisis realizados en orina o sangre. Es decir, se toman 3 cm. de pelo de la vctima y se analiza cada centmetro por separado. Si la parte que est mas prxima a la cabeza es positiva y el resto es negativo para cualquier droga de abuso, significa que el consumo ha sido reciente comprobndose la versin de la vctima. Cabe destacar, que existen muchos casos donde los sospechosos creen poder burlar a la polica, rapndose todo el pelo de la cabeza, pero aqu radica la verdadera ventaja del anlisis de pelo ya que cualquier fibra de cabello puede ser usada, es decir pueden usarse las cejas y pestaas, vello pbico o axilar e incluso el pelo de los brazos y piernas. Existen tres rutas de incorporacin de las drogas a la fibra del pelo: mediante el torrente sanguneo, las secreciones sebceas y mediante contaminacin externa. Las drogas depositadas directamente desde el torrente sanguneo pueden ser correlacionadas con el tiempo de ingestin, sin embargo hay que tener cierto cuidado al analizar el cabello debido a los lavados a los que se le tiene que someter antes del anlisis mismo de drogas (para descartar la contaminacin exgena de la muestra y remover los restos de grasa) pues se ha demostrado que algunas drogas pueden penetrar a las capas internas de la zona superficial. Bsqueda de metales A diferencia del anlisis de drogas y drogas de abuso en pelo, la bsqueda de metales en este tipo de muestras es ms aceptado por la comunidad cientfica y es til a la hora de evaluar la exposicin medioambiental y ocupacional de la poblacin a estos metales. La adsorcin de muchos metales en el pelo depende de la acidez de ste o del medio en el cual es sumergido, lo que sugiere que el pelo acta como un intercambiador inico. Muchos metales pesados tienen una gran afinidad por los grupos sulfhidrilos de la queratina, por lo que son fcilmente incorporados al pelo.

Las concentraciones de metales en pelo son el resultado de la incorporacin biolgica a travs de la exposicin digestiva, pulmonar y cutnea adems de la exposicin externa Los mtodos instrumentales mas usados en este tipo de anlisis son la Espectrometra de Absorcin Atmica por Horno de Grafito, el anlisis por Activacin Neutrnica y la Espectrometra de plasma inductivamente acoplado (ICP-MS). Esta ltima es la ms usada por su rapidez y confiabilidad adems de que en una sola medicin es posible realizar un anlisis multi-elemental con una determinacin analtica de alta sensibilidad y con la capacidad de medir en un amplio intervalo de concentraciones. Como se ha visto, la gran mayora de los anlisis de metales en pelo no forman parte de los estudios forenses. Sin embargo existen casos particulares donde este tipo de estudios ayuda a dilucidar la causa de muerte y dan una mano a la toxicologa post-mortem. Ejemplos de estos casos son el presunto envenenamiento por Arsnico de Napolen y el envenenamiento por Plomo de Beethoven. IDENTIFICACIN POR EL ADN Todos los organismos estn conformados por clulas. El ser humano promedio tiene aproximadamente 100 billones de clulas. Todas las clulas excepto los glbulos rojos contienen material gentico conocido como cido desoxirribonucleico (ADN). El ADN de una persona es el mismo en la sangre, la saliva, los tejidos, el cabello, el semen y otros materiales biolgicos. Los materiales biolgicos pueden estar presentes el escenario de un delito aunque no se puedan ver a simple vista. En las pruebas forenses de identidad de ADN, se usan tanto el ADN nuclear como el ADN mitocondrial (mtADN). El ADN nuclear se encuentra en el ncleo de la clula. El ADN mitocondrial se encuentra en el citoplasma de la clula. El anlisis del ADN mitocondrial (ADNmt) es til en los casos forenses en los que el ADN nuclear es insuficiente para la tipificacin de repeticiones cortas en tndem (STR). Los cabellos cados del cuerpo, cabeza y pbicos sin material celular (folculo piloso) conectado al bulbo de la raz y los restos esquelticos de cierta edad son las muestras ms comnmente analizadas en busca de ADNmt porque el ADN nuclear no es recuperable en estos tejidos. Una vez se va a investigar un delito, los lmites del escenario se establecen identificando el punto focal del escenario y extendindose hacia afuera. Puede usarse cualquier tipo de barrera fsica para separar el rea. Debe llevarse un registro de todas las personas que tuvieron acceso al escenario. Esto dar informacin importante para evaluar la necesidad de tener muestras de eliminacin de dichas personas. La documentacin del escenario del delito es un recurso importante para la evaluacin de la integridad y las condiciones de las pruebas. El ADN se transfiere a un elemento de prueba mediante la transferencia fsica de material biolgico, como son la sangre o la saliva. An cuando se puede analizar satisfactoriamente el ADN de material biolgico debidamente recolectado, empaquetado y almacenado muchos aos despus de la comisin de un delito, en ocasiones hay factores medioambientales o de otro tipo que pueden degradar el ADN y que pueden afectar negativamente los resultados de los anlisis de ADN.

La exposicin prolongada al calor o la humedad ocasiona la degradacin de la evidencia biolgica. Para reducir esta amenaza, los elementos empaquetados del escenario del delito deben trasladarse a instalaciones de almacenamiento adecuadas tan pronto como sea posible. Las muestras lquidas deben transportarse en recipientes refrigerados o aislados. La evidencia debe almacenarse en un entorno con temperatura controlada. Los entornos frescos son preferibles, aunque las investigaciones han demostrado que la temperatura ambiente es adecuada para almacenar manchas secas, siempre que la humedad est controlada.

Los avances recientes en la tecnologa forense de ADN han permitido a los cientficos analizar con xito muestras biolgicas ms pequeas, limitadas, degradadas y mezcladas. Por tanto, cualquier otra muestra biolgica que sea adecuada por otra parte y que an exista, sin importar su edad, puede tomarse en consideracin para el anlisis de ADN. Por ejemplo, cabellos cados que antes slo se examinaban microscpicamente pueden ahora someterse a anlisis de ADN mitocondrial.