Aspectos bsicos del proceso analtico

El proceso analtico
Problema de resolucin analtica
Es potable el agua?

Esa materia prima cumple con las especificaciones ?

El producto fue elaborado segn la legislacin para ser exportado? Funciona correctamente la planta de tratamientos de efluentes? La muerte pudo producirse por envenenamiento?

Resultado

Proceso analtico

Valor (unidades Incertidumbre de medida

adecuadas)

Definiciones (muy bsicas)

Parte representativa del material a analizar (agua, alimento, materias primas, efluentes, etc)
Analito: Especie qumica a determinar en el anlisis.

Matriz: Entorno que contiene al analito.

Interferencia(s): Especies presentes en la matriz que causan resultados errneos en la determinacin del analito.

Mtodo analtico: Secuencia fija de acciones que se llevan a cabo en un procedimiento analtico.

Ejemplo: determinacin de Ca en leche

Composicin de la leche (incompleta)
leche
Agua (87%) Extracto seco total (13%) Extracto seco no graso

Matrz

Grasa (3,9%)

Minerales (0.7%) K Na Ca fe

Hidratos de carbono (lactosa) (4,6%)

Protenas (3.2%)

Casenas (2.6%)

Protenas del suero (0.6%)

Analito

EL PROCESO ANALTICO
Se presenta un problema de resolucin analtica 1. 2. Seleccin del mtodo analtico Muestreo

3.
4.

Preparacin de la muestra
Anlisis (proceso de medicin qumica)
4.a. Puesta a punto de la metodolgica analtica 4.b. Medicin de las muestras 4.c. Tratamiento de datos: Reducir los datos a una respuesta numrica

5.

Informe e interpretacin

1.

Seleccin del mtodo analtico

1. Cual es el analito a determinar? 2. Qu exactitud y precisin se requieren? 3. De que metodologas analticas se dispone para su determinacin? 4. Cul es la muestra en que se encuentra el analito? De cuanta muestra se dispone? Cul es el intervalo de concentraciones en que puede encontrarse del analito en la muestra? Qu componentes de la muestra interferirn en la determinacin? Cules son las propiedades fsicas y qumicas de la matriz de la muestra? 6. Cuntas muestras deben analizarse?

Tambin debe considerarse:

Costo y disponibilidad de equipos Costo por muestra Tiempo requerido para el anlisis Complejidad del mtodo Habilidad del operador

Mtodos Analticos

Mtodos qumicos por va hmeda

Mtodos instrumentales
S Canalito

Se obtiene una seal:

Gravimetra

Anlisis volumtrico

Electroqumicos

Separacin

Opticos

Precipitacin
Pesada

Titulacin

Potenciomtrico Emisin Cromatogrfico Conductimtrico Absorcin

Clasificacin de mtodos analticos Mtodos oficiales

Son aquellos requeridos por ley o reglamento para las agencias gubernamentales, o bien para la industria regulada por una agencia gubernamental. Ej la FDA ha designado al official methods of analysis de la AOAC como los mtodos que la agencia exige para anlisis regulatorio de productos. Son aquellos que fueron validados y probados atravs de estudios colaborativos. Se utilizan como mtodo de referencia para la evaluacin de otras metodologas Rpida resolucin y bajo costo. Sus resultados positivos deben confirmarse por un mtodo ms excto (alto valor predictivo negativo, pero escasa probabilidad de falsos positivos)

Mtodos de referencia
Mtodos de screening

Mtodos de rutina
Mtodos automatizados Mtodos modificados o in House
Requieren ser validados para comprobar su idoneidad analtica

2.

Muestreo (toma de muestra)

Objetivo: Seleccin de una o varias porciones o alcuotas del material a ensayar, como primera parte de un

procedimiento analtico .. El mtodo de muestreo y la preparacin de la muestra estn intimamente relacionados con el procedimiento analtico a realizar.
La estrategia se basa en el balance entre el nmero de muestras a analizar y los costos que esto implica, es decir: se debe compatibilizar el mximo nivel de exactitud y precisin deseadas, minimizando el nmero de muestras a tomar .

Definimos como Plan de Muestreo a la estrategia a seguir para garantizar que los resultados obtenidos reflejen la realidad del material analizado.

Debe distinguirse entre dos tipos de materiales: En "pilas" con contenidos sin subdivisiones o unidades. En lotes que pueden ser especificados como unidades de muestreo.

Muestreo
Una muestra adecuada debe ser representativa del material a analizar.
Adems la muestra a analizar debe ser homognea, lo que significa que debe ser igual en todas sus partes. En la medida que esto se logra el error de muestreo se reduce. Muchas veces el muestreo es el factor limitante en la precisin y en la exactitud de los resultados obtenidos.
Muestra

REPRESENTATIVA

HOMOGNEA

Heterogeneidad
La problemtica principal del muestreo se origina en la heterogeneidad del material a analizar. La heterogeneidad siempre existe y podemos considerarla como espacial, temporal o ambas.

Heterogeneidad

Espacial

Temporal

Espacial/Temporal

Heterogeneidad
Espacial: significa que el material es diferente en extencin, profundidad, etc. Ej: una lmina de acero, una pila de un mineral extrado de una mina o un contenedor colmado de cereales. Temporal: el material presenta cambios a lo largo del tiempo. Pueden ser continuos o discontinuos. Ej: el incremento de una especie en particular en un reactor industrial o cambios accidentales que se producen en el tiempo, son ejemplos de cambios continuos. Tabletas farmacuticas en una cinta de produccin/embalaje es un ejemplo de cambios discontinuos. Espacial/Temporal: es cuando el material vara simultneamente en espacio y tiempo. Ej: un ro cambia desde su nacimiento hasta su desembocadura y adems en las distintas pocas del ao.

Tipos de muestreo
Al Azar

Regular

Estratificado

Intuitivo
Estadstico

Dirigido De protocolo

Tipos de muestreo
Al azar: consiste en un procedimiento de muestreo para el anlisis de materiales que se presentan como unidades uniformes, por ejemplo pastillas, botellas de agua mineral, etc. Las unidades para el anlisis son escogidas totalmente al azar. Muestreo regular: se eligen al azar un nmero determinado de unidades a analizar del total, donde cada una tiene la misma probabilidad de ser elegida. Muestreo estratificado: se eligen dentro de las unidades de muestreo, estratos o subdivisiones del total y se toman aleatoriamente las unidades a analizar. Intuitivo: se selecciona por decisin personal la porcin del material a analizar, por ejemplo debido a un cambio textural o cromtico de la sustancia a analizar, o cuando se observa alguna alteracin puntual en un proceso productivo, etc. Estadstico: la seleccin se basa en reglas estadsticas. Se calcula el nmero mnimo de muestras suponiendo distribucin gaussiana de la composicin del material. Dirigido: el problema analtico exige un tipo especfico de informacin, por ejemplo el anlisis de trazas de metales en las partculas en suspensin en un agua natural. De protocolo: cuando se debe seguir un procedimiento de muestreo detallado en una norma, mtodo estndar, publicacin oficial, etc.

2.

Muestreo (almacenamiento de muestras)

La muestra puede estar sometida a los siguientes riesgos: DESHIDRATACION HIDRATACION OXIDACION EVAPORACION CONTAMINACION

Los requisitos para un correcto almacenamiento de una muestra son: ENVASE ADECUADO ETIQUETADO CORRECTO CONDICIONES ADECUADAS DE CONSERVACIN ( TEMPERATURA, HUMEDAD, EXPOSICN A LA LUZ)

3.

Preparacin de la muestra

Son escasos los problemas que se resuelven sin necesidad de tratamiento de la muestra.
Lo habitual, es que la muestra necesite algn tipo de tratamiento, con el fin de: Preparar la muestra en la forma, tamao y concentracin adecuada del analito(s), ms conforme al mtodo (tcnica) seleccionado

Eliminar interferencias

Esto requiere que se deben tener en cuenta los cinco principios generales:
1) La preparacin de la muestra debe llevarse a cabo sin la prdida de analito(s) (mxima recuperacin). 2) Se debe transformar el analito en la mejor forma qumica para el mtodo de ensayo a utilizar. 3) Se debe incluir, si es necesario, la eliminacin de interferencias de la matriz (mayor selectividad). 4) No se deben introducir nuevas interferencias (contaminacin cruzada).

5) Debe considerar la dilucin o concentracin del analito, de manera que est dentro del intervalo de concentraciones optimas del mtodo seleccionado.

Tipos de tratamientos ms frecuentes

Disolucin simple con disolventes o asistida (ultrasonidos) Digestin simple cida, alcalina, oxidante, etc

Disgregacin
Extraccin

Vaporizacin

4.

Anlisis (proceso de medicin qumica)

4.a. Puesta a punto de la metodolgica analtica 1 calibracin instrumental 2 calibracin metodolgica analtica 3 validacin metodolgica analtica 4 control de calidad interno y externo. 4.b. Medicin de las muestras 4.c. Tratamiento de datos: Reducir los datos a una respuesta numrica

4.a.
1.

Puesta a punto del mtodo analtico

Calibracin Instrumental

Es el proceso mediante el cual se asegura que un equipo es apropiado para ser utilizado en el proceso de medicin que se desea realizar y que se desempea de acuerdo con las especificaciones del fabricante. En la calibracin instrumental se utilizan estndares reconocidos, por esto, la misma aplicada en intervalos regulares, asegura que los parmetros medidos por un instrumento en particular son trazables a estndares reconocidos

Ambas buscan detectar desvos en la medicin realizada por el equipo, mediante la utilizacin de estndares calibrados. Se diferencian en que la verificacin solo detecta corrimientos, mientras que la calibracin los detecta y los corrige

Calibracin vs verificacin

Ejemplos de Calibracin y/o verificacin Instrumental

Balanza Analtica

Pesas calibradas frente a patrones de masa

Las medidas realizadas con la balanza calibrada son trazables al patrn internacional utilizado para la calibracin de las pesas.

El Prototipo Internacional del Kilogramo se encuentra en el BIPM (Oficina Internacional de Pesos y Medidas) en Francia.

Otro ejemplo determinacin de la exactitud de la longitud de onda con filtros de oxido de holmio

4.a.
2

Puesta a punto del mtodo analtico

calibracin metodolgica analtica

Consiste en determinar un factor de proporcionalidad o ecuacin entre la seal (S) generada y la concentracin del analito presente en una muestra patrn o estndar.

S Canalito
Los mtodos de calibracin ms utilizados son: 1) Estndar Externo

2) Agregado de Estndar o patrn

3) Estndar Interno

1) Estndar Externo
Se construye una curva de calibracin con patrones o estndares de concentracin conocida. Se cuantifica la concentracin del analito en la muestra por comparacin de la seal obtenida con la de los estndares. Todas las tcnicas instrumentales requieren calibracin

S S1 S2 (C)analito C1estndar

S = f (C)analito
Las Soluciones Patrn son soluciones preparadas a partir del analito a determinar. Solo sirven para realizar calibraciones ya que no se encuentran presentes los componentes de la matriz que acompaan al analito en las muestras.

C2estndar

Cmuestra

2) Agregado de Patrn o Estndar

El estndar es agregado a las muestras a analizar, se relaciona la seal obtenida en muestras con patrn con aquellas a las que no fue agregado el estndar.

Utilidad:
Cuando la matriz de una muestra sea, o bien desconocida o tan compleja que no podra emplearse un estndar externo con suficiente garanta.

concentracin
Concentracin de la muestra

Cuando el proceso de preparacin de la muestra o la tcnica de ensayo sea compleja o muy variable. Cuando la medida dependa de condiciones instrumentales muy precisas y difcilmente controlables

3) Estndar Interno
Se utiliza como estndar una sustancia distinta del analito y que frente al mtodo analtico utilizado genera seales que pueden ser correlacionadas con la concentracin y posteriormente referidas al analito en cuestin. El patrn debe ser adicionado a la muestra y a la solucin blanco. Previo al empleo del mtodo se debe demostrar que las respuestas del analito y del estndar interno estn relacionadas. La mejor calibracin tiene lugar cuando se relacionan segn una proporcin fija.

4.a. Puesta a punto de la metodolgica analtica 3 validacin metodolgica analtica

Validar implica demostrar formal y experimentalmente, que un proceso de medicin qumica o una parte del proceso (por ejemplo el muestreo) funciona como se espera de l y lo hace a lo largo del tiempo. Tiene dos objetivos fundamentales:
1. Definir y asegurar la calidad de la informacin analtica generada. Una validacin intrnseca que consiste en caracterizar un proceso de medicin qumica a travs de las propiedades o caractersticas de desempeo del mismo.

2. Garantizar la coherencia entre la informacin analtica generada y las necesidades informativas planteadas por la sociedad, industria, comercio, ciencia y tecnologa, en un proceso denominado validacin extrnseca del proceso analtico. La validacin intrnseca puede hacerse de 2 maneras generales: Validacin por etapas. Se validan instrumento, muestreo, datos, etc. Validacin global del proceso de medicin qumica.

Validacin intrnseca
Caractersticas de Desempeo de un Mtodo Analtico Especificidad Exactitud - Bias Precisin Repetitividad Reproducibilidad Sensibilidad Lmite de deteccin Lmite de cuantificacin Linealidad Rango dinmico lineal Robustez
Todos los procesos de validacin tienen en comn la necesidad de referencias, porque validar implica bsicamente comparar. Para realizar esa comparacin se utilizan materiales de referencia bien caracterizados de pureza adecuada y debidamente documentada.

Validacin metodolgica analtica: Caractersticas de desempeo de un mtodo analtico

ESPECIFICIDAD - SELECTIVIDAD
Capacidad del mtodo analtico para determinar un analito en particular en una mezcla compleja sin interferencia de otros componentes que puedan encontrarse presentes. Para determinar la especificidad puede recurrirse a: Anlisis de blancos Anlisis de muestras sin fortificar y fortificadas con el analito de inters en un intervalo de concentraciones ( prueba de recuperacin)
% Recuperacin= ( cant. Determ. en muestra fortificada cant. Determ. en muestra sin fortificar) *100 Cantidad adicionada

Anlisis materiales de referencia certificados.

Validacin metodolgica analtica: Caractersticas de desempeo de un mtodo analtico EXACTITUD - BIAS

Grado de concordancia entre el resultado de una determinacin (xi) o la media de n resultados y el valor verdadero del analito en la muestra en cuestin.
Se caracteriza por el error sistemtico que es una diferencia con un signo fijo; por exceso o por defecto. Es un parmetro importante en la determinacin de la incertidumbre de medicin Se determina mediante el anlisis de MRC o por comparacin de los resultados con aquellos obtenidos por mtodos validados, debido a que es necesario conocer la concentracin del analito en las muestras. Puede expresarse en forma absoluta(Eabs) o relativa (Er%).

Eabs = x

Er (%) = (x )*100/

Donde: x es el valor hallado, o promedio de valores determinados valor verdadero ( del certificado del MRC o obtenido de mtodo de referencia)

Validacin metodolgica analtica: Caractersticas de desempeo de un mtodo analtico PRECISIN

Grado de concordancia entre resultados de ensayos independientes entre s y generalmente se expresa en trminos de desviacin estndar. Se materializa en los errores aleatorios o indeterminados debidos al azar La precisin es un componente de incertidumbre en la medicin

Se denomina de manera diferente acorde a de las condiciones en que se determina: Repetitividad: precisin determinada cuando las mediciones se realizan en condiciones repetibles, es decir: el mismo mtodo, mismo material, mismo operador, mismo laboratorio; perodo de tiempo limitado. Reproducibilidad:precisin determinada cuando las mediciones son realizadas en condiciones reproducibles, es decir: el mismo mtodo; diferentes operadores; diferentes laboratorios, equipos diferentes; largo perodo de tiempo.

Validacin metodolgica analtica: Caractersticas de desempeo de un mtodo analtico

SENSIBILIDAD
Lmite de deteccin Es la concentracin de analito CLD que corresponde a una seal Xld que pueda distinguirse estadsticamente de una seal blanco ( xB ) y que se concreta matemticamente en la expresin: Xld = xb + 3b Siendo xb la media de n > 30 blancos y b su desviacin estndar. Lmite de cuantificacin Se define como la menor concentracin del analito que puede ser determinada con un nivel de incertidumbre aceptable. Generalmente se considera el lmite inferior del rango dinmico lineal. Su expresin matemtica se basa en el estudio estadstico de blancos: Xlc = xb + 10b

seal sanalitio

S medida = S analito + S blanco Nota importante: El LC es una concentracin, no una seal. Debe calcularse utilizando una recta de calibracin!!!

Sblanco tiempo

Validacin metodolgica analtica: Caractersticas de desempeo de un mtodo analtico

LINEALIDAD Capacidad del mtodo de producir resultados que son directamente proporcionales a la concentracin del analito en la muestra. RANGO DINMICO LINEAL Intervalo entre las concentraciones mxima y mnima del analito para las que se ha demostrado que el mtodo tiene niveles aceptables de precisin, exactitud y linealidad

Seal (X)

M= x y

XLC (10 B) XLD (3 B) RANGO DINAMICO LINEAL

XBlanco ROBUSTEZ Es una medida de la capacidad del mtodo para no ser afectado por pequeos cambios deliberados en sus parmetros y provee una indicacin de su confiabilidad durante su uso normal.

Ld Lc

concentracin

5. Informe e interpretacin de los resultados

Determinacin analtica sobre la muestra tratamiento de datos
La seal medida al realizar el anlisis de la muestra debe interpretarse de acuerdo con la relacin de la misma con la concentracin del analito, determinada en la calibracin metodolgica analtica: S = f(C) Se busca obtener resultados de buena calidad analtica, es decir resultados que resulten de utilidad para resolver el problema de necesidad analtica que los gener. Como mnimo, es necesario que el resultado de una determinacin analtica sea representativo de la concentracin del analito en la muestra analizada

Error experimental:
Como se mencion anteriormente, medir es comparar y toda comparacin experimental est sujeta a error. Los errores pueden clasificarse como:

Determinados o sistemticos
Causas posibles:

Afectan los resultados de toda una serie analtica. Deben ser detectados y eliminados
1. Errores instrumentales 2. Errores de procedimiento 3. Errores personales

Indeterminados o aleatorios

Se presentan en forma azarosa. Las fuentes de error ms difcilmente evaluables debido a las variables implicadas en ellos, por ese motivo no pueden eliminarse pero deben minimizarse.

Un proceso analtico bajo control, es aquel que fue satisfactoriamente validado y donde el error sistemtico fue eliminado y el aleatorio minimizado. En estas condiciones, los resultados obtenidos tienen buena calidad analtica

Expresin de los resultados

Debido al error aleatorio, un resultado no puede ser expresado como un valor nico, sino como un intervalo de valores donde se existe determinada probabilidad de encontrar el resultado verdadero. Se informa as el resultado de la determinacin su incertidumbre.

Cada medida experimental realizada en la determinacin contribuye a la incertidumbre del mtodo, y todas as fuentes de incertidumbre deben ser consideradas en el clculo.

Ejemplo:
Muestra: de agua de perforacin Informe de resultados: Arsnico total
Metodologa: Absorcin atmica con generador de hidruros

0,008 mg/L 0,003 mg/L

Si el lmite legal impuesto por el CAA para As total en agua de bebida es de 0,01 mg/L. Es potable el agua analizada?

Bibliografa
GUIDE TO QUALITY IN ANALYTICAL CHEMISTRY. An Aid to Accreditation. CITAC (The Cooperation on International Traceability in Analytical Chemistry) and EURACHEM (A Focus for Analytical Chemistry in Europe) . Edition 2002 Principios de garanta de calidad para laboratorios analticos. Frederick M Garfield. Ed. Espaola AOAC International. 1993 Principios de Qumica Analtica. M Valcarcel. Ed Springer-Verlag Ibrica. Barcelona 1999. Draft EURACHEM/CITAC Guide Quantifying Uncertainty in Analytical Measuremant. Second Edition. Eurachem workshop, Helsinsky 1999. Junio 1999. Calidad en Laboratorios de Alimentos. Liliana Castro. Programa de metrologa en Qumica. INTI. Congreso Internacional de Ciencia y Tecnolga de Alimentos. Cordoba. Arg. Nov. 2004. Anlisis Instrumental. Kenneth Rubinson and Judith F Rubinson. Editorial Prentice Hall. 2001 Quality in the analytical chemistry laboratory.. Analytical Chemistry by Open Learning. Neil T Crosby, John A Day y otros. Published on behalf of ACOL (University of Greenwich). ISBN 0-471-95470-5