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Banco de Sangre
Validacin y consecuencias
Introduccin
La capacidad de un individuo para
mantenerse libre de infeccin depende
Inmunidad especfica
Toda sustancia extraa que se introduce en el organismo produce una respuesta RI. No es inmediata:
Linfocitos activados Produccin de Ab,
Antgeno
Aquel material, propio o extrao, soluble
o particulado, que puede ser o no capaz de despertar una respuesta inmunitaria en un individuo inmunolgicamente
competente
Antgenos
Naturales (material nativo)
Artificiales (modificacin qumica) Sintticos (sntesis qumica)
Inmungeno
Aquellos antgenos que en dosis adecuada
administrados por la va pertinente capaz de inducir una respuesta inmune
Hapteno
Substancia de bajo peso molecular en unin
covalente con una protena o a otros
Naturaleza Qumica
Protenas
Lpidos
A n t i g e n i c i d a d
Carbohidratos
cidos Nuclicos
Determinantes antignicos
Secuenciales Conformacionales Inmunodominantes Inmunosilenciosos
Ocultos (Cripticos)
Condiciones de Inmunogenicidad
Complejidad
estructural
Tamao Molecular Heterogeneidad estructural Carga elctrica
Condiciones de Inmunogenicidad
Accesibilidad de los determinantes
antignicos
Conformacin Estrica
Configuracin ptica
Estado fsico
ANTIGENOS ERITROCITARIOS
La cantidad de sitios antignicos, muestran diferencias substanciales para cada sistema eritrocitario as como su expresin en funcin de la edad
SABO/ ANTIGENOS A1 ADULTO A1 NEONATO A2 ADULTO A2 NEONATO A1B ADULTO A2B ADULTO B ADULTO B NEONATO SITIOS ANTIGENICOS x 103 800 1170 250 370 240 140 460 850 140 750 200 320
Potencial zeta
eritrocito
25 nm
35 nm
IgM
AGLUTINACIN
A N T
PROZONA
EQUIVALENCIA
POSTZONA
I
C U E R P O
ANTIGENO
HEMOLISIS INTRAVASCULAR
Complejos antigeno-anticuerpo en vasos sanguneos
Cascada de complemento activada La cantidad de clulas sensibilizadas sobrepasa los
HEMOLISIS EXTRAVASCULAR
Los eritrocitos son recubiertos con IgG o C3b
La cantidad de clulas sensibilizadas no es suficiente para la destruccin dentro de circulacin
Introduccin
Con el inicio del siglo XX la transfusin de un humano a otro se hace tcnicamente posible:
La descripcin del Sistema ABO por Landsteiner La introduccin del Citrato de Sodio como anticoagulante (1915) por Lewisohn
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Introduccin
1907 Hektoen propone una forma de prueba cruzada. Crile propone una prueba de hemolinas Otros prefieren el ensayo biolgico: 5-20 ml de sangre del donador son inyectados como preludio a l transfusin. 1908 Ottenberg Kaliski: realiza la primer prueba cruzada (10-15 ml en capsulas de 6-7 cm de longitud, con extremos de 4mm de dimetro en cada extremo, Pipeta pasteur solucin de eritrocitos del donador ms suero del receptor 2 h/37C)
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Prueba cruzada
Aparicin de dos escuelas:
Seleccin del Donador slo por grupo (prueba indirecta) Seleccin del Donador mediante prueba cruzada (prueba directa)
Minot: grupo a pacientes 1917: Lee; donador y receptor con grupos compatibles aunque no idnticos. Establece prueba cruzada: una gota de suero del receptor con una gota de eritrocitos del donador
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Prueba cruzada
1921 Karsner: Observa dos pacientes transfundidos con aparente sangre compatible. Reaccin hemoltica. Establece el peligro de realizar unicamente la prueba cruzada directa, as como el no tener reactivos estandarizados que revelen discrepancias ABO. Levine & Mabee: prueba cruzada directa y grupo 1er Guerra mundial: inyeccin de 15-20 ml (prueba de compatibilidad) 34
Prueba cruzada
1931 Bordeley, DeGowin & Baldrigde sospechan la existencia de otro elemento que escapa a la observacin en la metodologa existente, requerida para explicar algunas reacciones transfusionales mediatas y tardias con aparente compatibilidad en grupo
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Prueba cruzada
1940 El nmero de sistemas se incrementa: ABO, MN, P & Rh. Las pruebas serolgicas no podan demostrar aglutininas Rh 1921 Thalhimer reconocia la importancia de realizar pruebas de compatibilidad en cada transfusin a pesar de que fuese el mismo donador y el mismo receptor (Aglutininas parciales)
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Prueba cruzada
Levine se impresiona con el nmero de accidentes transfusionales en el embarazo: la presencia en la sangre de la madre de aglutininas intragrupo Relacionando el 90% de ellos al factor Rh.
Establece que son aglutininas caliente o aglutinias Rh. Modifica la prueba cruzada: Prueba directa con suero del paciente y suspencin de eritrocitos del donador, incubar 30 min/37C y centrifugar suavemente por 1 minuto (500 rpm)
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Prueba cruzada
1944 Race & Wiener, establecen el concepto de anticuerpos incompletos o bloqueadores (Rh)
Diamon y Abelson introducen el uso de albmina bovina en la realizacin de la prueba cruzada.
1945 Introduccin del empleo del suero de Coombs, facilitando el descubrimiento de los sistemas Kell, Duffy y Kidd
1951 Mollison no inclua la prueba de antiglobulina en la prueba cruzada, a menos que: paciente con transfusin o embarazo previo.
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Introduccin
1939: Levine & Stetson; mujer con reaccin ransfusional severa. Su suero aglutinaba con el 80% de la sangre ABO compatibles. 1939 Landstainer y Wiener: suero de conejos inmunizados con eritrocitos de Macacus rhesus aglutinan el 85% de las muestras . Se denomina como Rh al considerarse como antgeno comn entre Humanos y monos.
Coombs
Coombs Indirecto: Deteccin de anticuerpos recubriendo a eritrocitos sensibilizados in vitro.
Una ao despus:
Coombs Directo: Deteccin de anticuerpos en un recin nacido que padeca EHRN recubriendo eritrocitos sensibilizados in vivo
Coombs indirecto
Eritrocitos no sensibilizados
Suero fresco
Mezclar e incubar
Aglutinacin
Coombs indirecto
Diseado para demostrar in vitro reacciones entre eritrocitos y anticuerpos sensibilizantes
Aplicaciones:
Tipificacin de antgenos Rastreo e identificacin de anticuerpos Pruebas de compatibilidad Establecer presencia del D dbil
Pruebas de Compatibilidad
Las pruebas de compatibilidad consisten en una serie de procedimientos a realizar antes de una transfusin sangunea para la mejor seleccin de sangre para el paciente y detectar anticuerpos irregulares que pudieran ocasionar una reaccin adversa durante o despus de la transfusin.
La mayor causa de fatalidades asociadas a transfusin son los errores clericales, dando como resultado incorrecta tipificacin del Sistema ABO. 48% de las muertes por transfusin se deben a estos errores
Sazama 1998
Nombre completo del Paciente Nmero de registro y cama Edad (fecha de nacimiento) Sexo Hemoglobina y/o hematocrito Antecedentes transfusionales Antecedentes ginecolgicos Productos requeridos Firma del Mdico Responsable
Pruebas de Compatibildad
Estudios que la conforman
Revisin de antecedentes transfusionales y ginecolgicos del paciente Tipificacin ABO y Rh del donador y del receptor Busqueda de Anticuerpos Irregulares en el donador y en el receptor Pruebas cruzadas
AABB 1998
Pruebas Cruzadas
El 99% de los anticuerpos clnicamente significativos pueden ser detectados mediante el panel. Cal es la importancia de realizar las pruebas cruzadas?
Pruebas Cruzadas
Funciones
Brinda la oportunidad de detectar compatibilidad ABO entre el receptor y el donador. Puede detectar la presencia de un anticuerpo en el suero del paciente que reaccione con antgenos de los GR del donador, pero que no fue detectado en el panel porque el antgeno correspondiente no est contenido en las clulas del panel.
AABB
NOM 003-SSA2-1993
10 Hemocompatibilidad y Receptores
10.15. Las pruebas cruzadas de compatibilidad sangunea, debern incluir aqullas que permitan demostrar la ausencia de anticuerpos especficos regulares o irregulares de importancia clnica en el suero del receptor, contra los eritrocitos del disponente (prueba mayor)...
NOM 003-SSA2-1993
... as mismo, es recomendable demostrar la ausencia de anticuerpos irregulares de importancia clnica en el suero del disponente, contra los eritrocitos del receptor (prueba menor)...
NOM 003-SSA2-1993
Las pruebas cruzadas incluirn pruebas de aglutinacin en medio salino, as como, en algn medio facilitador de la reaccin, rutinariamente se emplear la prueba de antiglobulina humana (prueba de Coombs)... Las pruebas cruzadas debern incluir un control que permita detectar la presencia de autoanticuerpos. A manera de control del procedimiento y del reactivo, en cada prueba de Coombs interpretada como negativa, es recomendable agregar clulas sensibilizadas con inmunoglobulina G.
Pruebas cruzadas
Fases
Fase salina. T.A., centrifugacin inmediata. Detecta incompatibilidad en ABO y otros anticuerpos IgM.
Fase albmina a 37oC. Detecta anticuerpos de la clase IgG. Fase Coombs. (Prueba de efectividad albminaCoombs). Detecta anticuerpos de la clase IgG.
Pruebas Cruzadas
R
Prueba Menor
D
Prueba Mayor
AC
Autocontrol
GR donador
+ Suero receptor
GR receptor
+ Suero receptor
La ausencia de hemlisis o aglutinacin en todas las fases de reaccin, puede ser interpretada como no reactiva, o compatible y stas unidades pueden ser consideradas aceptables para ser transfundidas.
M. Stoe 1999
NOM 003-SSA2-1993
10 Hemocompatibilidad y Receptores 10.23. De presentarse una reaccin transfusional inmediata, el banco de sangre o, en su caso, el servicio de transfusin, deber llevar a cabo simultanea y comparativamente los procedimientos de pruebas de laboratorio que se indican a continuacin: a) En las muestras pre y postransfusin: Se observar si el suero o plasma presentan hemlisis; Se repetir la determinacin de su grupo ABO y Rho (D); Se realizar la prueba de Coombs directa
Se investigar la presencia de anticuerpos irregulares, en el propio establecimiento o en otro con la capacidad tcnica suficiente para efecto;
Introduccin:
REGLA DE LANDSTAINER
"los antgenos y anticuerpos correspondientes no pueden fisiolgicamente coexistir en el mismo individuo"
anti A
A
A
Anti A
A A
O O
Aglutinacin
anti B
(Landstainer 1900)
O
O
B B B B
Anti B
Sistema ABO
ANTICUERPOS
Riesgo de EHRN, en madres 0 > que en madres A o B Se intensifica la reaccin con enzimas (IgG, IgM), con
disminucin de temperatura (IgM), se inhibe con antgenos solubles (IgM).
Fenotipo A
ANTICUERPOS
anti- A presente en B y 0
Ig M
Ig G
Ig A
Ig E
Ig D
Gal Nac GlcGlcNac Fuc Gal GlcNac Fuc Nac Gal GlcGal Gal
Grupo O ohne
Antgeno A
Antgeno B
AB
Anti A Anti B
Anti B
Anti A
anticuerpos naturales
Fenotipo A
Subgrupos A1 80% A2 20%
Substancia precursora tipo 2 # sitios antignicos en el 850 000 240 000 Anticuerpo presente en el suero
Cadenas H1 H2 H3 H4 Cadenas H1 H2
Anti B
A3 1: 1000 Doble poblacin al reaccionar con anti-A Ax Am Aend Subgrupos dbiles, podran confundirse con 0 Ael A Finn
O
A
O O O
A anti A receptor
donador
ANTIGENOS Rh
Genes Rh RhD Rh neg
1a3%
RhCE
Rh c e
Su funcin puede estar involucrada con el transporte de amonio y la integridad de la membrana eritrocitaria
RhAG haplotipo Rh
Dce +
DcE + dCD -
SISTEMA Rh
R2
R0
cDE
cDe
c,D,E
c,D,e
r
r
Ce
cE
C,e
c, E
Rz
ry
CDE
CE
C,D,E
C,E
SISTEMA Rh
Haplotipos Combinacion de genes R1R1 R1 r R1R2 R1R0 R1r R1r CDe CDcee CcDEe CcDe CDe CcDE
Haplotipos Combinacion Especificidad de genes antigenica R2r R2R0 R2R2 R0r rr rr DcEe cDeE cDE CcDe Ce CcEe D,c,E,e c,D,e,E c,D,E C,c,D,e C,e C,c, E,e
R1Rz
R1ry
CDEe
CDEe
C,D,E,e
C,D,E,e
rRz
rry
CcDEe
CcEe
C,c,D,E,e
C,c,E,e
rr
ce
c,e
R0r
cDe
c,D,e
SISTEMA Rh
Anticuerpos naturales (anti E, anti C).
La mayora son por embarazo o por transfusin.
Anticuerpo IgG.
Frecuente desarrollo de anticuerpos complejos.
Sistema Rh
Ig M
Ig G
Ig A
Ig E
Ig D
ANTIGENOS ERITROCITARIOS
ABO
Hh MNS Kell
Rh
Diego
Kidd
Duffy
N
= N glyan
= GPI
C9
H20
Hb
H20
Hb
Substancias tromboplsticas
- citoquinas: FNT
- enzimas: triptasa
C4a C4
C9
Periodos de reaccin
Enzima L.I.S.S.
Coombs indirecto
Diseado para demostrar in vitro reacciones entre eritrocitos y anticuerpos sensibilizantes
Aplicaciones:
Tipificacin de antgenos Rastreo e identificacin de anticuerpos Pruebas de compatibilidad Establecer presencia del D dbil
Introduccin
Deteccin de anticuerpos inesperados Diferentes a los asociados al sistema ABO Se definen como inesperados por que slo el 0.3 al 2.0 % presentan un rastreo positivo. Generalmente son aloanticuerpos Se clasifican como calientes o frios
Introduccin
Se clasifican como:
Naturales: ABO, Hh, Ii, Lewis, P Inmunes: transfusin y/o embarazo
Anticuerpos inmunes
Aparecen despus de estmulos antignicos por
embarazo o transfusin sangunea incompatible Pueden ser tambin los Anticuerpos Irregulares con
actividad a 37o C
Algunos pueden ser fijadores de complemento y dar una reaccin hemoltica intravascular muy severa: Kidd, Duffy Lewis
Introduccin
Existe una dificultad natural para el rastreo de anticuerpos:
Politransfundidos Anticuerpos lbiles: 42% se ha reportado que desaparece a los 5 aos y puede reaparecer tiempo despus.
Lectura
La especificidad de cada anticuerpo se debe investigar por
separado en cada paso de la tcnica Buscar similitudes y discrepancias entre las tcnicas usadas Diferenciar entre los anticuerpos inocuos y los peligrosos en la transfusin de componentes sanguneos Diferenciar los auto anticuerpos de los alo inmunes Aplicar criterios basados en el mtodo cientfico y de acuerdo a los datos del expediente clnico para clasificar los anticuerpos encontrados
INTERPRETACION
1. En que fase reacciona?
Salina rpida: IgM (baja temperatura)
Anti-N, anti-P, anti-I Anti-Rh; Anti-Kell; Anti-Kidd; Anti-Duffy
INTERPRETACION
1. Auto positivo/ auto negativo
RabiFSABO positivo; AT negativo: aloab AT positvo: autoab / medicamentos
INTERPRETACION
Aglutinacin real o Roleaux?
Apilamiento de monedas en microscopia Roleaux no interfiere con la fase Coombs (se ha eliminado todo el suero) A diferencia de la aglutinacin real, el Roleaux desaparece por adicin de 1-3 gotas de solucin salina al tubo
Limitaciones
El RabiFSABO estn diseados para la deteccin de anticuerpos significativos. Los anticuerpos de baja incidencia (menos del 10%: Cw,Lua,Kpa) generalmente sus antgenos no se representan en los paneles. Los anticuerpos disminuyen con el tiempo:
RabiFABO y Prueba cruzada: negativo
Algo ms?
Existe suficiente evidencia para establecer la identificacin como tal?
Desafiar el suero contra 3 clulas antgeno negativo y con 3 antgeno positivo
Algo ms?
Proveer una unidad compatible:
Cruzar a fenotipo AABB: establece que no es necesario confirmar compatibilidad cuando el anticuerpo es anti-M, antiN, anti-P, anti-Lea, Leb . Realizar pruebas de compatibilidad cuando el anticuerpo detectado es clnicamente significativo para confirmar que tenemos una unidad antgeno negativo Importancia de conocer la frecuencia de la distribucin antgenos en nuestra poblacin
MEZCLA DE ANTICUERPOS
La presencia de una mezcla de anticuerpos puede ser considerada cuando una o ms de las siguientes premisas se cumple:
1. 2. 3. El patrn de reactividad no encuadra para un solo anticuerpo Variaciones en la fuerza de reaccin que no pueden ser explicadas basados en dosis antignica. Panels de clulas diferentes reaccionan en diferentes fases, o el efecto del tratamiento enzimtico de estas clulas es variable. Resultados inesperados son obtenidos cuando se intenta hacer la confirmacin de la especificidad de un solo anticuerpo
4.
Anti A
4+
Anti AB
4+
Anti B
4+
AT
4+
A1
4+
A2
4+
B
3+
O
-
No desaparece
cruzar Lectinas CD poli especfico Adsorcin Stroma de conejo CD especifico Eludo negativo Cruzar a fenotipo Identificacin RAbi FSABO Titulacin
Repetir grupo
Anti A
4+
Anti AB
4+
Anti B
4+
AT
4+
A1
4+
A2
4+
B
3+
O
4+
RAbi FSABO
Desaparece
Cruzar a fenotipo
CELULAS DE FENOTIPO
ANTISUEROS
CONOCIDO
A 4+
AB 4+
B 4+
AT 4+
Rh 4+
CRh 4+
A1 4+
A2 4+
B 4+
A 4+
COOMBS DIRECTO
ADSORCION
ELUIDOS
Patrones de reactividad Fase de reactividad Caractersticas de aglutinacin Historia clnica del paciente
Patrones de reactividad
Uniforme: un solo anticuerpo Variable: posible mezcla
Fenomeno de dosis? Variacin en fuerza antgenica?---P1
Fases de reactividad
T.A. anti-M, N, Lea, Leb, P1, I 37C: IgM o IgG: anti-E; anti-K Coombs: Rh, Kell, Kidd, Duffy, Ss,
T.A. anti-M, N, Lea, Leb, P1, I 37C: IgM o IgG: anti-E; anti-K Coombs: Rh, Kell, Kidd, Duffy, Ss,
Ejemplo: Problema: Se muestra las aglutinaciones observadas al desafiar un suero problema contra un panel de 10 clulas:
Al sobreponer la lectura del problema contra la lectura presenta en la carta panel se muestra dos alternativas posibles: un Anti-E y un Anti Lea La especificidad de cada anticuerpo se debe investigar por separado en cada paso de la tcnica. Buscar similitudes y discrepancias entre las tcnicas usadas. Diferenciar entre los anticuerpos inocuos y los peligrosos en la transfusin de componentes sanguneos. Diferenciar los auto anticuerpos de los alo inmunes
NOM 003-SSA2-1993
10 Hemocompatibilidad y Receptores 10.23. De presentarse una reaccin transfusional inmediata, el banco de sangre o, en su caso, el servicio de transfusin, deber llevar a cabo simultanea y comparativamente los procedimientos de pruebas de laboratorio que se indican a continuacin: En las muestras pre y postransfusin:
Se observar si el suero o plasma presentan hemlisis; Se repetir la determinacin de su grupo ABO y Rho (D); Se realizar la prueba de Coombs directa Se investigar la presencia de anticuerpos irregulares, en el propio
a)
NOM 003-SSA2-1993
10 Hemocompatibilidad y Receptores
b) Con el remanente de la unidad implicad en la reaccin transfusional y en la muestra de ella que fue empleada para la realizacin de las pruebas de compatibilidad, se deber repetir la determinacin del grupo ABO y Rho (D), as como, las pruebas de compatibilidad con muestras pre y postransfusionales del receptor.
NOM 003-SSA2-1993
10 Hemocompatibilidad y Receptores 10.24. La existencia de ttulos bajos de anticuerpos en el suero del receptor, contra antgenos eritrocitarios del disponente, pudieran no detectarse en las pruebas de compatibilidad. La transfusin de tales eritrocitos producir un rpido incremento en la sntesis de anticuerpos, generndose una reaccin hemoltica tarda. En tales casos, se deber investigar en el receptor si su suero o plasma presenta hemlisis, se ratificar su grupo ABO y Rho (D), se har una prueba de Coombs directo y se investigar la presencia de anticuerpos irregulares y su especificidad. De conservarse muestras pretransfusionales de los disponentes y del receptor se repetirn las pruebas de compatibilidad.
NOM 003-SSA2-1993
10 Hemocompatibilidad y Receptores
10.25. En caso que el banco de sangre o el servicio de transfusin detecte o sea notificado de una reaccin transfusional posiblemente secundaria a contaminacin bacteriana de una unidad de sangre o de sus componentes, deber enviar la unidad implicada junto con una muestra del receptor para bacterioscopia y cultivo. En este caso y de haberse preparado ms de un componente a partir de la misma unidad, se evitar la utilizacin de stos hasta comprobar la ausencia de contaminacin.
NOM 003-SSA2-1993 10 Hemocompatibilidad y Receptores 10.26. A cualquier unidad o remanente de ella involucrada en una reaccin transfusional, se le deber dar destino final, una vez concluidos los estudios a que hacen referencia los apartados 10.23 al 10.25 de este Norma
Pensamiento Kaizen
fetca@prodigy.net.mx
www.ammt.org
CUESTIONES?
1. QUE IMPLICA COMPATIBILIDAD?
a) b) c) AFINIDAD DE CARACTERES SELECCIONAR EL MEJOR PRODUCTO PARA EL PACIENTE PROCEDIMIENTOS A REALIZAR ANTES DE LA TRANSFUSION PARA LA MEJOR SELECCIN DE LASANGRE
2.
3.
4.
CUESTIONES?
5. LA REGLA DE LANSDSTAINER IMPLICA QUE:
a) b) c) COHEXISTENCIA DE ANTICUERPO Y ANTIGENO ANTITETICO NO SE PERMITE LA COHEXISTENCIA DEL ANTIGENO Y EL ANTICUERPO ANTITETICO EL INCISO (a) y (b) SON FALSOS
6.
7.
CUESTIONES?
8. ES OBLIGATORIA LA PRUEBA CRUZADA MAYOR Y LA PRUEBA CRUZADA MENOR?
a) b) c) SI SOLO LA MAYOR NINGUNA DE ELLAS
9.