BASES BIOQUMICAS E MOLECULARES DA DOENA GENTICA

1. TEORIA UM GENE UMA ENZIMA UM GENE UMA PROTENA UM CISTRON UM POLIPEPTDEO

MUTAOPROTENA ALTERADAFUNO ANORMALDOENA

- So conhecidas cerca de 500 doenas cujas bases bioqumicas esto determinadas. - H um grande nmero de doenas cujas bases bioqumicas no so conhecidas.

2. CLASSES FUNCIONAIS DAS PROTENAS E SUAS DOENAS (Alguns exemplos):

FUNO TIPO DE AO
Aminocidos

PROTENA DOENA HERANA ALTERADA

Fenilalanina- FENILCET Hidroxilase ONRIA CFTR (transp. de Cl-) DISTROFINA FIBROSE CSTICA DMP Duchenne AR

Enzimas

Transporte

Membrana Epitelial Membrana Clula Muscular Receptor de Membrana

AR

Estrutura de Clulas e rgos Metab. Inter-Celular

LXR

RECEPTOR da LDL

HIPERCOL EST FAMILIAL

AD

3. FENILCETONRIA
3.1- Quadro Clnico:

varivel intra- e extra-familial. caracterizado por Deficincia Mental, Epilepsia, Pele, Olhos e Cabelos Claros, Sensibilidade da Pele luz solar com eritema e eczema crnico, Leso Piramidal, Cheiro caracterstico (urina de rato).

3.2- Bases Metablicas: FENILALANINA ----/-- TIROSINA

Fenilalanina HIDROXILASE ----- Gene localizado em 12q 22-24 ( Herana = Autossmica Recessiva).
Como a fenilalanina no degradada por pacientes com PKU ela acumula nos fluidos corporais lesando o SNC em desenvolvimento. Uma parte da fenilalanina transformada em cidos orgnicos tipo o cido fenilpirvico e excretada na urina. O diagnstico realizado ou pelo teste do cloreto frrico na urina ou pela dosagem da fenilalanina no sangue.

3.3- Triagem Neonatal e Tratamento:

Em virtude de haver tratamento efetivo a triagem neonatal realizada em muitas regies do mundo, inclusive algumas do Brasil; pode ser feita pelo teste bacteriolgico de Guthrie ou pela dosagem da fenilalanina no sangue (valor normal at 4 mg%). A freqncia varivel, sendo de 1/5000 a 1/60000; no Brasil parece ser de 1/20000. O teste deve ser realizado com no mnimo dois dias de vida em dieta normal e resultados anormais devem ser investigados para fazer-se o diferencial com as Hiperfenilalaninemias Benignas.

O tratamento consiste em restrio diettica durante toda a vida; h leites especiais pobres em fenilalanina.

3.4- Gentica Molecular da Fenilcetonria: O Gene da FENILALANINAHIDROXILASE Nas populaes do Norte da Europa 4 alelos ( 4 mutaes ) so responsveis por 90% dos casos de Fenilcetonria: 1o) Mutao mais comum ( 38% ) = Mutao do stio de SPLICE do xon 12 GT > AT Forma CLSSICA ( GRAVE, atividade enzimtica residual abaixo de 1% ) de Fenilcetonria. 2o) Mutao Missence na Posio 408 da Enzima ( 20% ) = Substituio de Arg..> Trip Forma Clssica de Fenilcetonria.

3o) Mutao Missence na Posio 261 da Enzima ( 18% ) = Substituio de Arg > Gln Forma BENIGNA ( atividade enzimtica residual em torno de 5%, compatvel com fentipo normal )
4o) Mutao Missence na Posio 158 da Enzima ( 14% ) = Substituio de Arg > Gln Forma Leve de Fenilcetonria. Nas outras populaes, inclusive as do Brasil, h considervel HETEROGENEIDADE GENTICA sendo que a maioria dos afetados so COMPOSTOS GENTICOS, ou seja, possuem 2 alelos anormais diferentes; isto explica a Heterogeneidade Fenotpica.

3.5- DIAGNSTICO PR-NATAL

Antes das tcnicas da Gentica Molecular no era possvel o diagnstico intra-tero da PKU pois a Fenilalanina-Hidroxilase (FAH) no possvel de ser dosada em amnicitos ou vilosidades coriais; hoje possvel este diagnstico ou pelo estudo dos Hapltipos de RFLP da FAH ou pelo estudo direto das mutaes por sequenciamento nas famlias.

4. FIBROSE CSTICA

4.1- Quadro Clnico:

uma doena gentica (autossmica recessiva) mais comum em caucasianos = 1/2000 recm-nascidos; heterozigotos = 1/22. Quadro de doena pulmonar crnica, obstrutiva, devido a alterao do muco ( espesso ) e infeces recorrentes; e a Insuficincia Pancretica, devido alterao da secreo das enzimas lipase, tripsina e quimiotripsina, o que leva a quadro de diarria crnica. H dois tipos da doena sendo uns SUFICIENTES PANCRETICOS ( cerca de 15%) e outros com INSUFICINCIA, sendo o quadro dos primeiros mais leve; estes sub-tipos deve-se a diferentes mutaes. Outro tecido atingido o genital sendo que mais de 95% dos homens afetados que so infrteis, por causa de ausncia ou obstruo de vasos deferentes e somente 10% das mulheres que so frteis. O diagnstico confirmado pelos nveis elevados de CLORO no suor ( acima de 60 mEq/L); menos de 2% dos pacientes tpicos possuem este exame normal.

4.2- Bases Metablicas:

O defeito bsico em uma protena transmembranar de 170 kilodaltons, a qual chamada de CFTR. Esta protena forma canais de cloreto e sdio e, regula o transporte destes ons atravs das membranas das clulas epiteliais; a alterao desta protena resulta em desequilbrios de sal, depletando as clulas de gua e produzindo muco espessado que obstruem os pulmes, o pncreas, o intestino ( leo meconial ) e os vasos deferentes e, impede a reabsoro do cloro ao nvel das glndulas sudorparas. Isto leva a fibrose, infiltrao de gordura e destruio do parnquima. A protena CFTR formada por duas partes principais (NBF 1 e 2), que so os locais de ligao de ATP envolvidos na hidrlise necessria para o transporte de ons ( um canal de cloreto mediado por AMP cclico) e, que cada um envia um segmento para a membrana que a atravessa 6 vezes; entre estas partes principais fica uma regio citoplasmtica o domnio R.

4.3- Gentica Molecular da Fibrose Cstica: O gene CF foi mapeado na regio 7q31 e clonado; um gene grande com 250 kb e 27 xons. A principal, mais freqente ( cerca de 70% dos alelos) e primeira mutao descrita foi a deleo de trs bases que resulta na perda de fenilalanina na posio 508(^F508)localizada no NBF1; hoje so conhecidas mais de 700 mutaes, concentradas nos dois domnios de ligao de AT ( o NBF 1 tem cerca de 6 vezes mais mutaes que o NBF2); todos os tipos de mutaes tem sido descritas, incluindo pequenas delees , inserses, e mutaes de ponto; no foram descritas grandes delees ou rearranjos. Correlao Gentipo- Fentipo: A forma mais grave dos homozigotos ^F508/^F508 (52% entre caucasianos) que apresentam-se com Insuf. Pancretica (I.P.) em 99% dos casos e idade de deteco de 1.8 +/- 3.3 anos; os homozigotos com um alelo ^F508e outro alelo (40%) apresentam-se com I.P. em 72% dos casos e idade de deteco de 4.4 +/- 5.9 anos e, os homozigotos para dois alelos que no o ^F508(8%) apresentam I.P. em somente 36% dos casos e idade de deteco de 8.4+/- 8.3 anos. Em geral h uma razovel correlao entre o gentipo e a funo pancretica e uma menor correlao entre o gentipo e a funo pulmonar.

4.4- DIAGNSTICO PR-NATAL E PR-IMPLANTAO:

possvel ambos atravs dos estudos do gene CF.

5. DISTROFIA MUSCULAR PROGRESSIVA (DMP) TIPO DUCHENNE

5.1- Quadro Clnico: Como a herana ligada ao X recessiva os afetados so os homens; estes so normais at 1o. ou 2 o ano de vida; entre 3 e 5 anos inicia quadro de fraqueza muscular o qual leva a criana a cadeiras de roda entre 10-12 anos e a morte at os 20 anos( por insuficincia respiratria e/ou cardaca). Os nveis sricos da enzima muscular CPK (Creatina fosfoquinase) esto muito elevados ( 50 a 100 vezes) desde os estgios prclnicos.

5.2- Aspectos Genticos: Incidncia de 1/3300 recm-nascidos do sexo masculino. A taxa de mutao calculada em 10 4, ou seja, considerando-se que um homem produz 80 milhes de espermatozides por dia, ele produz um gene mutante a cada 10 a 11 segundos. Entre os afetados se considera que i/3 dos casos sejam mutaes novas e em 2/3 dos caos a me seja portadora (heterozigota). Cerca de 8% das portadoras apresentam alguns sinais clnicos de fraqueza muscular.

5.3- Gentica Molecular da DMPD: O que mais chama a ateno do gene de DMPD o seu tamanho so 2300 kb, representando 1,5% do cromossomo X, com no mnimo 79 xons e o RNAm de 14 kb, o qual codifica uma protena chamada DISTROFINA, de 400 kilodalton, com 3.685 aminocidos. A distrofina est na parte interna da membrana da clula muscular e envolvida com a manuteno da integridade da membrana; ela se liga pela parte amino-terminal a F-actina e pela parte carboxi a glicoprotenas importantes para o citoesqueleto (complexo distroglicana-sarcoglicana); na ausncia da distrofina a clula muscular degenera .A distrofina presente nos msculos esquelticos e cardacos e no SNC ( numa forma bioquimicamente um pouco diferente). Anlise das Mutaes da DMDP: Mais d e 60% so delees de tamanho varivel, desde 1 xon at todo o gene; estas delees possuem uma distribuio em duas regies preferenciais, sendo uma parte na metade 5 do gene e outra parte na parte central do gene. Cerca de 6 a 7% dos pacientes so duplicaes parciais do gene e raramente uma sndrome de deleo de genes contguos. Os pacientes com DMPD no possuem DISTROFINA muscular no msculo.

5.4- DIAGNSTICO PR-NATAL E DETECO DE HETEROZIGOTOS:

Nas famlias em que a mutao por deleo ou por duplicao possvel o diagnstico pr-natal atravs das tcnicas de DNA de Southern e PCR. possvel a identificao se uma mulher parente de um afetado ou no portadora em 75% dos casos usando mtodos de DNA e medidas de CPK srica.

6. HIPERCOLESTEROLEMIA FAMILIAL
6.1- Quadro Clnico e Gentica Clssica:

o tipo II das HIPERLIPOPROTEINEMIAS, que so caracterizadas por aumento de Lipdeos plasmticos e das lipoprotenas, no caso aumento do Colesterol e da LDL (lipoprotena de baixa densidade). Estas doenas so muito importantes porque so relacionadas ao Infarto do Miocrdio, uma doena Autossmica Dominante. Tanto os Homozigotos como os Heterozigotos desenvolvem depsitos de LDL-colesterol na ntima das artrias coronrias (Ateromas), xantomas (depsitos na pele e tendes) e arcus corneae (depsitos na periferia da crnea). Os homozigotos (1/1000.000) so muito mais afetados com nveis de colesterol que variam de 600 a 1200 mg/dl, sendo que a maioria tem infartos antes dos 20 anos, sendo que poucos vivem alm dos 30 anos de idade; os heterozigotos (1 em cada 500 indivduos) apresentam nveis de colesterol entre 300-400 mg/dl, sendo que cerca de 50% dos homens e 15% das mulheres tem infarto at os 60 anos.

6.2- Bases Metablicas:

As clulas normais obtem o colesterol (componente da membrana celular, dos esterides e dos sais biliares) por sntese de novo ou por captarem do LDL-colesterol exgeno do plasma. O processo de captao mediado pelo RECEPTOR de LDL( o qual reconhece a apoprotena B-100, a parte protica do LDL). O receptor de LDL capta o LDL-colesterol e o transfere para dentro da clula por invaginao (endocitose), sendo ento levados para os lissosomos aonde so hidrolisados liberando COLESTEROL LIVRE. Este aumento de colesterol livre inibe o processo de sntese endgena tanto de colesterol (pela inibio da enzima HMG Co A redutase) como do receptor de LDL. A doena devida a reduo do nmero de receptores de LDL na superfcie celular, o que diminui a captao do colesterol e leva seu aumento plasmtico.

6.3- Gentica Molecular:

O gene foi mapeado no cromosssomo 19, possui 45 kb e consiste de 18 xons e 17 introns, que codifica um RNAm de 5,3 kb e uma protena de 839 aminocidos. Mais de 150 mutaes diferentes j foram descritas, sendo mutaes de ponto, inseres e delees. Estas mutaes so divididas em 5 classes, dependendo do nvel do metabolismo que elas interferem: a) classe I so as que produzem alelos nulos que no promovem a sntese de nenhuma quantidade de receptor; elas so geralmente delees. Nas outras classes o receptor sintetizado, mas tem suas funes alteradas na classe II o receptor sintetizado mas no consegue ser transportado do R.E. para o complexo de Golgi e deste para a superfcie celular; na classe III o receptor atinge a superfcie celular mas so incapazes de ligarem-se com a LDL; na classe IV o receptor normal mas no se posicionam corretamente na superfcie celular e no promovem a internalizao do LDL; na classe V o receptor quando entra ligado com o LDL na clula no consegue se desligar no retornado para a superfcie celular, sendo degradado.