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UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS Y RECURSOS NATURALES ESCUELA DE INGENIERA EN CIENCIAS AGRICOLAS PROGRAMA DE INGENIERIA AGRONOMICA 2011
Cultivo de Tejidos
Cultivo de rganos
Totipotencialidad
TOTIPOTENCIALIDAD CELULAR
La
totipotencia es la capacidad que tiene una clula somtica de regenerar un planta completa e igual a la planta madre.
TOTIPOTENCIA CELULAR
1. AMBIENTE QUMICO Composicin del medio de cultivo PH 2. AMBIENTE FSICO Temperatura Luz y fotoperodo Humedad
Dentro del proceso de micropropagacin diferenciamos varias fases o etapas: 0: Seleccin y Preparacin de la planta madre 1: Desinfeccin de las yemas de la planta y/o desinfeccin de semillas 2: introduccin del material seleccionado in vitro 3: Multiplicacin de brotes 4: Enraizamiento 5: Aclimatacin
EXPLANTE
Los explantes son de diversa naturaleza, pueden ser porciones de tejido, clulas sueltas, protoplastos, esporas, granos de polen o semillas (Fossard,1999). El tipo de explante a usarse en los procesos de micropropagacin depende de la especie con la que se est trabajando y de los objetivos que se persigan.. Explantes como los meristemos apicales y las yemas axilares son genticamente muy estables, este tipo de explantes sirve para reproducir mltiples clones de una forma o variedad con caractersticas especiales que se desea mantener en el cultivo.
Obtener explantes con buen nivel nutricional. Grado de desarrollo adecuado. Planta madre meses antes en invernadero bajo condiciones controladas. Condiciones sanitarias ptimas, libres de enfermedades
Se requiere desinfectar superficialmente el explante escogido para evitar que en el medio de cultivo crezcan microorganismos, principalmente bacterias y hongos, que competirn ventajosamente con el explante. La desinfeccin del material se realiza con hipoclorito de sodio (agua clorada comercial), pura o diluda durante un perodo de 5 a 15 minutos, seguido por 3 a 4 enjuagues en agua esterilizada.
FASE 4: ENRAIZAMIENTO
formacin de races con el fin de convertir los brotes o embriones somticos en plntulas completas. Los brotes se transfieren a medios que contengan hormonas del tipo auxinas. Algunas especies no pasan por esta etapa y emiten sus races en el mismo medio de cultivo en donde se desarrollan las yemas.
FASE 5 : ACLIMATIZACIN
Adaptacin de las plantas in vitro a las condiciones ambientales. Explantes poco adaptados se han enraizado y crecido en ambientes con humedad relativa muy alta y tienen estomas poco funcionales. Falta de una cutcula con cera bien desarrollada, que evite a prdida de agua.
In vitro No realiza fotosntesis Crecimiento en condiciones controladas Crecimiento en condiciones de asepsia Alta humedad relativa Estomas no funcionales Ausencia de pelos radiculares Ausencia de cera en la cutcula In vivo Realiza fotosntesis Crecimiento en condiciones no controladas Exposicin a los patgenos y grmenes del ambiente Humedad relativa variable Estomas funcionales Presencia de pelos radiculares Presencia de cera en la cutcula
EQUIPOS LABORATORIO
Genera condiciones de esterilidad. Hacen circular aire filtrado y estril, protegiendo la muestra que se trabaja.
INCUBADOR DE CO2
Esto son equipos que mantienen la temperatura, adems poseen un sistema de inyeccin de CO2 generalmente entre 4-7%, y finalmente controlan la humedad ambiente
MICROSCOPIOS
- Control microscpico del cultivo. - Evaluacin de crecimiento normal de estructuras
CONGELADORES Y EQUIPOS DE CRIOGENIA Frigorficos de almacenados medios o tampones. 4C: para mantener
Congeladores de -20C: para mantener suero, aditivos y enzimas. Congeladores de -80C: para mantener a largo plazo aditivos del medio de cultivo y para sustancias muy sensibles como enzimas, inductores, factores de crecimiento, etc. Unidad de almacenamiento en nitrgeno lquido (-196C): para el almacenamiento de lneas celulares
Esterilizacin de recipientes e instrumentos de trabajo. El mtodo ms utilizado es la autoclave (aproximadamente 121C, 1.0 bar, 15min). Esterilizacin con irradiacin con rayos gamma o rayos X, usando gases como xido de etileno o formaldehdo luz ultravioleta
Otros instrumentos
Aplicaciones del cultivo Aplicaciones del cultivo de tejidos vegetales de tejidos vegetales
Rescate y cultivo de Rescate y cultivo de embriones somticos embriones somticos Cultivo de microesp. Cultivo de microesp. y anteras y anteras Hibridacin somtica Hibridacin somtica
APLICACIONES DEL CULTIVO IN VITRO Obtencin de metabolitos secundarios Produccin de nuevos hbridos Mejora gentica de plantas (incluyendo obtencin de plantas transgnicas) Germinacin de semillas. Produccin de haploides. Estudios fisiolgicos diversos.
DESVENTAJAS DEL CULTIVO IN VITRO 1. Cancelacin de todas las ventajas fotosintticas de la planta. 2. Los costos son altos. 3. En el proceso de aclimatizacin se puede perder mucho material. 4. Variacin somaclonal
PREGUNTAS E INQUIETUDES